Validacion de Limpieza Betalactamicos

Universidad Austral de Chile Facultad de Ciencias

Escuela de Qumica y Farmacia

PROFESOR PATROCINANTE: Marco Reyes M.

INSTITUCIN: Laboratorios Centrovet Ltda.

PROFESOR CO-PATROCINANTE: Alejandro Jerez M.

INSTITUTO: Farmacia

FACULTAD: Ciencias

ESTUDIO DE LAS NECESIDADES Y PROPUESTAS PARA LA OBTENCIN DE CONDICIONES PARA LLEVAR A CABO LA VALIDACIN DE LIMPIEZA DEL

REA DE BETALACTMICOS

Internado presentado como parte

de los requisitos para optar al

Ttulo de Qumico Farmacutico.

RODRIGO ANDRS BARRA SANHUEZA

VALDIVIA CHILE

2012

2

I want to believe

3

AGRADECIMIENTOS

A mis padres y hermanos, por su apoyo incondicional, confianza y aliento entregados

durante toda mi vida.

A Laboratorios Centrovet, por la oportunidad de realizar mi internado. Entregndome

herramientas para mejorar el desempeo profesional. Al departamento de Produccin

Frmacos por el apoyo recibido durante la ejecucin de este estudio, a mi tutor Q.F.

Marco Reyes por la oportunidad entregada para demostrar mis capacidades y poner en

prctica las enseanzas adquiridas durante el periodo universitario.

A m querida Escuela de Qumica y Farmacia por el apoyo recibido durante toda mi

carrera universitaria y a todos los docentes que han participado directa o indirectamente

en mi formacin profesional.

A todos mis amigos y conocidos creados durante la Universidad, todos ustedes sin

darse cuenta han sido fundamentales en mi desarrollo personal.

A mi querida, adorada y admirada compaera, Victoria, por el apoyo incondicional,

cario y consejos entregados.

4

NDICE DE CONTENIDOS

ESTUDIO PARA LA VALIDACIN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIN EN PLANTA DE

PRODUCTOS BETALACTMICOS. ............................................................................... 9

GLOSARIO ................................................................................................................... 9

ABREVIATURAS ........................................................................................................ 12

RESUMEN .................................................................................................................. 13

SUMMARY .................................................................................................................. 14

1.- INTRODUCCIN ................................................................................................... 15

2.- OBJETIVOS ........................................................................................................... 19

2.1.- OBJETIVO GENERAL ..................................................................................... 19

2.3.- OBJETIVOS ESPECFICOS ........................................................................... 19

3.- MATERIALES Y MTODOS .................................................................................. 20

3.1.- MATERIALES .................................................................................................. 20

3.1.1.- EQUIPAMIENTO ....................................................................................... 20

3.2.- MTODOS ...................................................................................................... 22

3.2.1.- DESCRIPCIN DEL REA DE ESTUDIO ................................................ 22

3.2.2.- DESCRIPCIN DE PROCESOS INVOLUCRADOS DE INTERS EN EL

ESTUDIO.............................................................................................................. 22

3.2.3.- EVALUACIN DE LA DOCUMENTACIN INVOLUCRADA EN EL

PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA. ....................................................................... 34

5

3.2.4.- DETERMINACIN DE PUNTOS CRTICOS DE LIMPIEZA PARA LA

GENERACIN DE PROTOCOLO DE VALIDACIN. .......................................... 35

3.2.5.- PERSONAL Y CAPACITACIN ................................................................ 37

4.- RESULTADOS ....................................................................................................... 38

4.1.- RESULTADOS DEL REA DE ESTUDIO ....................................................... 38

4.1.1.- PRINCIPIO ACTIVO TRAZADOR Y LMITES DE ACEPTACIN. ............ 38

4.1.2.- REQUISITOS PREVIOS ........................................................................... 41

4.2.- EVALUACIN Y ACTUALIZACIN DE DOCUMENTACIN .......................... 43

4.3.- EVALUACIN DE PUNTOS CRTICOS .......................................................... 44

4.3.1.- ANLISIS DE DETERGENTE POR CONDUCTIVIDAD Y pH. ................. 44

4.3.2.- MTODO DE MUESTREO DE ACTIVO TRAZADOR PROPUESTO. ...... 46

4.3.3.- ANLISIS MICROBIOLGICOS PROPUESTOS. .................................... 49

5.- DISCUSIN ........................................................................................................... 52

6.- CONCLUSIONES .................................................................................................. 62

7.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ....................................................................... 63

8.- ANEXOS ................................................................................................................ 66

ANEXO N1: PLANO DEL REA DE PRODUCCIN DE PRODUCTOS

BETALACTMICOS.... 66

ANEXO N2: POS DE LIMPIEZA Y SANITIZACIN UTILIZADO EN EL

REA DE BETALACTMICOS........ 67

6

ANEXO N3: LISTA DE CHEQUEO SEGN NORMAS DEL ISP Y LAS

GMP DE LA FDA. 68

ANEXO N4: PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR EL PORCENTAJE

DE RECUPERACIN DEL MTODO DE MUESTREO POR

HISOPADO... 70

ANEXO N5: DETERMINACIN DE LINEALIDAD DEL DETERGENTE

DIVERFLOW 156.... 73

ANEXO N6: CODIFICACIN DE MUESTRAS DE PRINCIPIO ACTIVO

PARA LQUIDOS INYECTABLES Y DETERMINACIN DE

CONCENTRACIONES ACEPTADAS DE AGENTE

TRAZADOR.. 79

ANEXO N7: PROCEDIMIENTO RECUENTO DE MICROORGANISMOS

EN SUSPENSIN POR TORUNDA EN

SUPERFICIE............................................... 82

ANEXO N8: CODIFICACIN DE MUESTRAS MICROBIOLGICAS EN

MOLINO COLOIDAL... 88

7

NDICE DE FIGURAS

FIGURA N1: Reactor de fabricacin de lquidos inyectables. 23

FIGURA N2: Molino coloidal y sistema de recirculacin. 24

FIGURA N3: Dosificadora peristltica Watson Marlow modelo 505-di. 25

FIGURA N4: Mezclador tipo pantaln de uso exclusivo para amoxicilina 26

FIGURA N5: Hisopo estril disponible utilizado en los procesos de muestreo de

p.a. y microbiolgico.. 47

FIGURA N6: Esquematizacin de direcciones en las que se debe pasar el hisopo

estril 48

FIGURA N7: Etiqueta de mantencin de equipo.. 56

NDICE DE TABLAS

TABLA N1: Factor de toxicidad T en funcin de la DL50... 29

TABLA N2: Factor de ocupacin O 29

TABLA N3: Factor de dificultad D... 29

TABLA N4: Factor de solubilidad en agua S, en ppm. 30

TABLA N5: Productos y especificaciones requeridas para seleccin de peor caso 39

TABLA N6: Puntos obtenidos de acuerdo a metodologa de Barbosa de Alencar.. 39

TABLA N7: P.a. involucrados y estados de validacin de metodologas analticas. 41

TABLA N8: Equipamiento involucrado y estado de calificacin.. 42

TABLA N9: Estados de calificacin y calibracin de instrumentos y equipos de 42

8

anlisis..

TABLA N10: Sistemas de apoyo para ejecucin de POS de limpieza y sanitizacin 43

TABLA N11: Documentos revisados y actualizados 43

TABLA N12: Lmites recomendados de la contaminacin microbiana. 60

NDICE DE ECUACIONES

ECUACIN N1: Determinacin del p.a. peor caso. 28

ECUACIN N2: Criterio de las dosis. 31

ECUACIN N3: Criterio de las 10 ppm. 32

9

ESTUDIO PARA LA VALIDACIN DE LIMPIEZA Y SANITIZACIN EN PLANTA DE

PRODUCTOS BETALACTMICOS.

GLOSARIO

Agua desionizada: Agua obtenida mediante un proceso de intercambio de iones en el

que los iones contaminantes se reemplazan con iones H+ u OH-, usada principalmente

como disolvente para preparacin de reactivos, limpieza de aparatos de prueba, etc.

Acero inoxidable 316L: Este tipo de acero es especialmente recomendado para la

industria farmacutica gracias a sus propiedades de resistencia a la corrosin, adems,

posee un excelente factor de higiene/limpieza, son fciles de transformar, presentan

excelente soldabilidad, no se endurecen por tratamiento trmico y se pueden utilizar a

temperaturas criognicas como a elevadas temperaturas (Gamboa, 2011).

Calificacin: Accin de comprobar y documentar que cualquier instalacin, sistema y

equipo est instalado apropiadamente, funciona correctamente y conduce a los

resultados esperados.

Desorcin: Es la eliminacin de sustancias desde un medio adsorbente, usualmente

para recuperar dicha sustancia.

Dosis letal 50 (DL50): Es la dosis de un frmaco que produce una mortalidad del 50%

en una poblacin animal en estudio por una va de administracin determinada.

Hisopo, torunda trula: Dispositivo empleado para obtener muestras de superficies

irregulares o regulares a fin de establecer un residuo determinado. Consiste

10

generalmente en un material desechable con un extremo absorbente, que se humedece

previo al muestreo.

Informe de validacin: Documento en el cual se renen y sintetizan los registros,

resultados y la evaluacin de un programa de validacin finalizado. Puede contener

adems, propuestas para el mejoramiento de los procesos o equipamiento.

Peor caso: Condicin o conjunto de condiciones que abarca los limites superiores e

inferiores de un proceso, para parmetros y circunstancias de operacin, incluidas en

los procedimientos operativos estndar, que tienen la mayor probabilidad de fallar en un

producto o proceso al ser comparado con las condiciones ideales. Tales condiciones no

incluyen necesariamente fallas en el producto o en el proceso.

Placas RODAC: Placas de contacto de 55-60 mm de dimetro cubiertas con medio de

cultivo hasta obtener una superficie convexa que sobresale de la placa. Generalmente

utilizadas para determinar la calidad microbiolgica de superficies planas.

Plan maestro de validacin (PMV): Documento de alto nivel que establece un plan de

validacin global para el proyecto completo y resume la filosofa y el enfoque general a

ser usado por el laboratorio para establecer un desempeo adecuado. Este provee la

informacin del programa de trabajo de validacin del laboratorio y define los detalles y

cronograma para el trabajo de validacin a ser ejecutado, incluyendo una declaracin

de responsabilidades de aquellos que implementan el plan.

Procedimiento operativo estndar (POE, POS SOP): Documento escrito,

autorizado por el departamento de aseguramiento de la calidad, que indica

11

instrucciones de carcter mandatorio para el desarrollo de un proceso. Algunos

procedimientos operativos estndares pueden ser usados para complementar la

documentacin de produccin de un lote maestro de un producto especfico.

Proceso: Conjunto de recursos y actividades interrelacionados por los cuales los

insumos se transforman en productos.

Protocolo de validacin: Documento que describe las actividades a ser desarrolladas

en una validacin, incluyendo el criterio de aceptacin para la aprobacin de un proceso

de fabricacin (o parte de este) para uso rutinario.

Validacin: Accin de comprobar y documentar que cualquier proceso, procedimiento o

mtodo, conduce efectiva y consistentemente a los resultados esperados.

Validacin de limpieza: Evidencia documentada que establece que los procedimientos

de limpieza estn eliminando residuos hasta niveles predeterminados de aceptabilidad,

tomando en consideracin factores tales como tamao de lote, dosificacin, toxicologa

y tamao de equipo.

12

ABREVIATURAS

APC: Del ingls Agar plate count.

API: Del ingls Active Pharmaceutical Ingredient.

FDA: Del ingls Food and Drug Administration.

GMP: Del ingls Good Manufacturing Practice traducido al espaol como Buenas

Prcticas de Manufactura (BPM) o Prcticas Adecuadas de Fabricacin (PAF).

HPLC: Del ingls High Performance Liquid Chromatography traducido al espaol

como Cromatografa Lquida de Alta Eficacia.

ISPCh: Instituto de Salud Pblica de Chile.

OMS: Organizacin Mundial de la Salud.

p.a.: Principio activo.

R.O.D.A.C.: Del ingls, Replicate Organism Detection and Counting.

S.A.G.: Servicio Agrcola y Ganadero.

U.F.C.: Unidades Formadoras de Colonias; Colony Forming Units (CUF).

W.C.I.: Del ingls Worst Case Index traducido al espaol como Clasificacin de Peor

Caso.

13

RESUMEN

Validacin de limpieza es el proceso en el cual se establece una evidencia

documentada de que, un determinado proceso de limpieza reduce de manera constante

los residuos de alguna superficie, a un nivel aceptable preestablecido. El objetivo de

este trabajo fu determinar las condiciones necesarias para una futura ejecucin de la

validacin de limpieza y sanitizacin en el rea de betalactmicos del laboratorio

Centrovet. Primero se debe contar con la validacin de las tcnicas analticas de los

p.a. trazadores y la validacin de los sistemas de apoyo del POS de limpieza, los cuales

son aire y agua. Se debe calificar el equipamiento involucrado en la fabricacin de la

lnea de lquidos inyectables y polvos betalactmicos.

Se determinaron los puntos crticos de limpieza, siendo estos; linealidad de la

cuantificacin del detergente, mtodo de seleccin del p.a. peor caso y seleccin de

puntos de muestreo para anlisis qumico y microbiolgico. Para el detergente se

obtuvo que una solucin de 10 ppm tiene una conductividad de 13,4 S,

establecindolo como valor lmite. Como p.a. trazador se seleccionaron a ceftiofur y

amoxicilina, para inyectables y polvo respectivamente. Como lmite para ceftiofur se

obtuvo que no ms de 1.880mg del activo puedan ser encontrados en la sumatoria de

los residuos analizados en las superficies de los equipos que estn en contacto directo

con el producto. Para amoxicilina no se establece lmite ya que se fabrica de forma

exclusiva en ese equipamiento, por lo tanto, slo se analizan trazas de detergente y

desarrollo microbiolgico. De esta manera se determinaron las condiciones ptimas y

necesarias para preparar el rea de fabricacin para una futura validacin de la

limpieza y sanitizacin.

14

SUMMARY

Cleaning validation is the process which provides documentary evidence that a

particular cleaning process steadily reduces the residues on the surface to a

predetermined acceptable level. The purpose of this study was to determine the

conditions required for a future implementation of cleaning validation in beta-lactam area

on Centrovet laboratory. First, the analytical methods validation for API tracers and

validation of SOP systems support cleaning like air and water, must be done. The

involved equipment in the manufacturing process, as in injectable line as powder line,

must be qualified.

Critical cleaning points were determined, being these, linearity of the detergent

quantification, API Worst case method selection and, sampling points for chemical and

microbiological analysis. For the detergent was obtained a 10 ppm solution has a

conductivity of 13.4 S, establishing it as the limit value. As API tracer, were selected

ceftiofur and amoxicillin for injection and powder respectively. As limit for ceftiofur was

obtained that not more than 1.880mg of the API can be found in the sum of all residues

analyzed in equipment surfaces that has been direct contact with the product.

Amoxicillin limit is not set, because it is produced on dedicated equipment, therefore,

only detergent traces and microbiological growth are analyzed. Thus the optimum

conditions were determined and necessary to prepare the area for a future

manufacturing cleaning validation and sanitization.

15

1.- INTRODUCCIN

Durante el proceso de elaboracin de productos farmacuticos se debe cumplir con

ciertas normas que rigen la fabricacin, las cuales, permitan asegurar la eficacia,

calidad y seguridad del producto final. En Chile, estas son reguladas y controladas por

organismos como el Instituto de Salud Pblica (ISP) y el Servicio Agrcola y Ganadero

(SAG), para el desarrollo de productos farmacuticos humanos y veterinarios,

respectivamente. As tambin, a nivel internacional encontramos entidades como la

Organizacin Mundial de la Salud (OMS) y la Food and Drug Administration (FDA) en

Estados Unidos, las cuales, regulan las normas de buenas prcticas de manufactura

(GMP) ms importantes a nivel mundial. En Chile, la normativa que rige la industria

farmacutica humana y veterinaria, es principalmente la dictada por el 32 informe del

comit de expertos en especificaciones para las preparaciones farmacuticas de la

OMS.

Las normas GMP son una herramienta bsica para la obtencin de productos

farmacuticos seguros para el consumo humano y animal, centrndose en la higiene y

forma de manipulacin. Son tiles para el diseo, funcionamiento de los

establecimientos y para el desarrollo de procesos y productos relacionados con la

industria farmacutica. Adems, contribuyen a asegurar la produccin de medicamentos

seguros, saludables e inocuos para el consumo humano (AEMPS, 2009).

Esta herramienta permite a las diferentes entidades generar el marco regulatorio

necesario para la correcta fabricacin de productos farmacuticos. As, bajo este marco

16

regulatorio, encontramos tres principios bsicos que permiten generar garantas de

calidad como; 1) La calidad, inocuidad y efectividad deben ser diseadas y construidas

en el producto. 2) La calidad no puede ser inspeccionada o ensayada en el producto

terminado. 3) Cada paso del proceso de manufactura debe ser controlado de manera

de maximizar la probabilidad de que el producto cumpla con todas las especificaciones

de calidad y de diseo (OMS , 2002).

Para el cumplimiento de estos principios bsicos, los laboratorios de produccin

farmacutica nacional, bajo el alero de las normativas exigidas tanto por el ISP y que

son compartidas por el SAG, en el caso de laboratorios farmacuticos veterinarios,

realizan la validacin de sus procesos. Esto es, el acto documentado de probar que

cualquier procedimiento, proceso, equipo, material, actividad o sistema conduce

realmente a los resultados esperados (WHO, 1992).

La validacin otorga a las autoridades, la seguridad de que los laboratorios de

produccin farmacutica poseen polticas de calidad competentes que permiten la

fabricacin de productos farmacuticos bajo estrictos estndares de seguridad.

Existen productos farmacuticos en una amplia gama de formas y dosificaciones,

dentro de los cuales encontramos productos semislidos, lquidos, aerosoles y

formulaciones parenterales. A menudo un gran nmero de productos de diferentes

presentaciones se fabrican en un laboratorio, por ello, es necesario el uso de

precauciones especiales para evitar que exista contaminacin cruzada. Una de las

estrategias diseadas para prevenir la contaminacin cruzada es la limpieza, pero el

nmero de procedimientos de limpieza y la cantidad de equipos utilizados en los

17

procesos de fabricacin generalmente son difciles de manejar, si a esto le sumamos

que el uso de equipos no dedicados es una prctica comn en las industrias

farmacuticas nos damos cuenta de la imperiosa necesidad de generar un programa de

validacin de limpieza (Imtiaz, 2010).

El principio de la validacin de limpieza consiste en que productos farmacuticos y p.a.

pueden ser contaminados por otros p.a., por agentes de limpieza, microorganismos o

por otro material (por ejemplo, lubricantes, polvo, etc.). En muchos casos el mismo

equipamiento puede ser usado para la fabricacin de diferentes productos y para evitar

la contaminacin del siguiente producto, es esencial contar con adecuados

procedimientos de limpieza. Estos deben ser establecidos cuidadosamente y sus

mtodos de ejecucin deben ser validados, para lograr reducir los niveles de

contaminacin a niveles aceptables. De esta manera, una adecuada validacin de

limpieza permite asegurar que una posible contaminacin por el producto que le

precede, residuos del agente de limpieza y contaminacin microbiolgica se encuentran

controlados, asegurando la calidad del producto final (Pharmaceutical Inspection

Convention, 2007).

Actualmente existen mltiples publicaciones de agencias regulatorias que permiten

realizar la validacin de limpieza de los equipos crticos ms fcilmente, si bien, esta

actividad es un requerimiento regulatorio designado formalmente y bien reconocido,

validar la limpieza contina siendo un problema para muchos fabricantes e inspectores.

Es una exigencia compleja, ya que, requiere de una comprensin profunda del proceso,

materiales y los productos qumicos involucrados en la limpieza (ISP, 2010).

18

Laboratorio Centrovet ha integrado dentro de sus polticas de calidad el cumplimiento

cabal de las normas GMP, esto lo llev a obtener autorizacin GMP por parte del

Servicio Agrcola y Ganadero (SAG), durante el ao 2008. Si bien, ha sido un

importante logro para la empresa farmacutica veterinaria nacional, obliga,

implcitamente, a mantener una poltica interna de mejora contnua. Dentro de las

mejoras contnuas en las cuales se encuentra trabajando la empresa, se contempla el

desarrollo de validaciones de limpieza en aquellas reas crticas de produccin

farmacutica. Estas reas, son zonas donde se requieren, para su correcto

funcionamiento, controles de parmetros como es la cantidad de partculas, nmero de

renovaciones de aire, presin, temperatura y humedad, entre las que se encuentra el

rea de produccin farmacutica de betalactmicos.

En el trabajo realizado en el laboratorio farmacutico veterinario Centrovet, se realiz

los estudios preliminares, fijndose la metodologa a seguir y determinndose las

condiciones ptimas que debe cumplir el rea de fabricacin de productos

betalactmicos, para que posteriormente se realice la validacin de limpieza.

19

2.- OBJETIVOS

2.1.- OBJETIVO GENERAL

Determinar las condiciones ptimas para preparar el rea de fabricacin de

productos betalactmicos del laboratorio Centrovet Ltda. para una posterior

validacin de limpieza y sanitizacin.

2.2.- OBJETIVOS ESPECFICOS

Estudiar las reas, equipos y utensilios involucrados en el proceso de fabricacin

de productos betalactmicos y determinar los requisitos previos para la ejecucin

de la validacin de limpieza.

Revisar y actualizar la documentacin involucrada en el proceso de limpieza,

utilizados en el rea de fabricacin de productos betalactmicos.

Determinar los puntos crticos de la limpieza para la confeccin de un protocolo

de validacin de limpieza y sanitizacin del rea de productos betalactmicos, en

el cual se determine:

o Linealidad de la cuantificacin de detergente para descartar trazas

posteriores al proceso de limpieza.

o Mtodo de seleccin del principio activo peor caso para el proceso de

validacin de limpieza y sanitizacin, definir sus lmites de aceptacin.

20

o Puntos de muestreo y la tcnica utilizada para realizar el anlisis

microbiolgico en las superficies del rea en estudio.

Capacitar de manera personalizada a los operarios y supervisores de calidad a

cargo del rea de produccin de betalactmicos y realizar medicin de impacto

de estas capacitaciones.

3.- MATERIALES Y MTODOS

3.1.- MATERIALES

rea de fabricacin de productos betalactmicos.

Documentacin de aseguramiento de la calidad, relacionada al rea y a los

procedimientos de limpieza y sanitizacin.

Detergente Diverflow 156 (JohnsonDiversey Ind. y Com. de Chile Ltda.)

Sanitizante Alcohol 70 (Oxiquim Ltda.)

3.1.1.- EQUIPAMIENTO

Tanto en la lnea de produccin de inyectables como en la lnea de produccin de

polvo, participan equipos de gran capacidad. Los equipos existentes en ambas reas y

destinados al proceso de fabricacin corresponden a:

Reactor de fabricacin de lquidos 250 L. de capacidad.

21

Bombona de acero inoxidable.

Molino coloidal

Bomba dosificadora peristltica Watson-Marlow modelo: 505-di

Mezclador tipo pantaln 300 Kg

Mientras que el equipamiento necesario para llevar a cabo el correcto proceso de

limpieza y sanitizacin de las reas corresponde a:

Hidrolavadora, modelo Karsen 7LM

pH-metro, modelo Hanna HI-8424.

Conductivimetro, modelo Hanna PWT HI-98308.

Mopa de fibra.

Balde de limpieza.

Esponjas abrasivas.

Paos de secado libres de pelusas.

22

3.2.- MTODOS

3.2.1.- DESCRIPCIN DEL REA DE ESTUDIO

El rea en estudio corresponde a la planta de elaboracin de productos betalactmicos

del laboratorio Centrovet Ltda.

sta se encuentra dividida en tres lneas de fabricacin; fabricacin de polvos

betalactmicos, lquidos orales y lquidos inyectables betalactmicos. Actualmente no

se encuentra operativa la lnea de fabricacin de productos lquidos orales

betalactmicos, por lo que, su estudio y anlisis no ser incluido en el presente informe.

En el ANEXO N1 se encuentra el diagrama del rea de fabricacin de productos

betalactmicos indicando las lneas de produccin y las subdivisiones de sta.

3.2.2.- DESCRIPCIN DE PROCESOS INVOLUCRADOS DE INTERS EN EL

ESTUDIO.

3.2.2.1.- CARACTERSTICAS DE ELABORACIN DE INYECTABLES.

En la lnea de fabricacin de lquidos inyectables se realizan las operaciones de

mezclado, molienda, dosificado, etiquetado y embalado de los productos. El proceso de

mezclado, molienda y dosificado se realiza en la cmara de fabricacin, mientras que el

proceso de etiquetado y embalado se realiza en una sala contigua destinada

exclusivamente para el acondicionamiento de los productos (ANEXO N1).

23

El proceso de mezclado se realiza en un reactor de fabricacin nacional con capacidad

para 250 litros (Figura N1) construido ntegramente en acero inoxidable de calidad

316L. Este reactor posee un agitador mecnico de doble aspa y un sistema de tuberas

que le permite optimizar los procesos de recirculacin de producto.

Figura N1: Reactor de fabricacin de lquidos inyectables.

24

La molienda de la suspensin se realiza con un molino coloidal de fabricacin

Argentina, con una tolva de capacidad de aproximadamente 30 litros. Est construido

de acero inoxidable calidad 316L (Figura N2).

Figura N2: Molino coloidal y sistema de recirculacin.

El proceso de dosificado se realiza de manera semiautomtica, con dosificadora

peristltica Watson Marlow modelo: 505-di (Figura N3). La velocidad de llenado de los

productos se determina de acuerdo a las habilidades de cada uno de los operarios

encargados de la dosificacin.

25

Figura N3 Dosificadora peristltica Watson Marlow modelo 505-di.

Finalmente, los procesos de etiquetado y embalado se realizan en una sala contigua a

la sala de fabricacin, conectada a travs de un transfer de salida de producto

dosificado.

3.2.2.2.- CARACTERSTICAS DE ELABORACIN DE POLVOS.

En la lnea de fabricacin de mezclas de polvo se realizan las operaciones de

mezclado, dosificado, etiquetado y embalado. El proceso de mezclado se realiza en una

sala de aproximadamente 20 m2, mientras que el proceso de dosificado se realiza en

una sala contigua de manera manual (ANEXO N1).

El proceso de mezclado de polvo se realiza en un mezclador tipo pantaln de

fabricacin nacional de aproximadamente 300 L, construido en acero inoxidable tipo

316L (Figura N4).

26

Figura N4: Mezclador tipo pantaln de uso exclusivo para amoxicilina.

El dosificado de productos en polvo se realiza de manera manual, por personal

capacitado en normativa GMP, en bolsas de polipropileno de diferentes dimensiones las

cuales dependen de la orden de produccin.

El proceso de etiquetado se desarrolla de manera manual en una sala contigua a la

sala de dosificado. Lo desarrolla personal capacitado en normativa GMP. Esta sala

cuenta con aproximadamente 20 m2 destinados para el proceso de etiquetado y 15 m2

destinados al proceso de embalado, donde el personal embala el producto en

contenedores secundarios que permiten su despacho.

27

3.2.2.3.- PRODUCTOS

De acuerdo a la reglamentacin vigente, los principios activos derivados de complejos

penicilnicos y cefalospornicos deben ser fabricados en instalaciones exclusivas o

separadas, con sistema independiente de aire (Servicio Nacional de Sanidad y Calidad

Agroalimentaria, 2002), es por esto, que laboratorio Centrovet cuenta con un rea

destinada exclusivamente a la fabricacin de productos betalactmicos.

En la lnea de fabricacin de productos en polvo se encuentra el producto Primavet 50%

(amoxicilina), mientras que en la lnea de produccin de productos lquidos inyectables

encontramos la fabricacin de los productos Sefamax 15% (cefalexina) y Clinexin 5%

(ceftiofur clorhidrato).

28

3.2.2.3.1.- SELECCIN DEL PRINCIPIO ACTIVO TRAZADOR

Como estrategia para la seleccin del principio activo peor caso o trazador, se utilizar

como base la metodologa propuesta por Barbosa de Alencar (Alencar, 2006). En la

cual se analizan cuatro puntos clave, los cuales son:

T =Toxicidad del frmaco expresado en dosis letal (LD50) (TABLA N1).

O =Factor de ocupacin de un determinado medicamento en la lnea de

produccin (TABLA N2).

D = Factor que representa el grado de dificultad de limpieza de los equipos

(TABLA N 3).

S = La solubilidad de un frmaco en agua, expresado en ppm (TABLA N4).

Para cada uno de estos factores, se atribuy una escala de puntos en funcin de la

magnitud del factor y su repercusin en el ndice del riesgo final, al cual llamaron WCI

(Worst Case Index) cuya magnitud del nmero obtenido, representa cuando un

determinado producto puede representar, en la validacin de limpieza, a un

determinado grupo de productos fabricados en una unidad multipropsito.

De esta manera se determina el peor caso desarrollando la siguiente ecuacin:

( )

Ecuacin N1

29

TABLA N1: Factor de toxicidad T en funcin de la DL50

Factor de toxicidad T en funcin de la DL50

LD50 oral-ratas mg/kg Clasificacin Puntos T

LD50 < 200 Alta toxicidad 3

200 < LD50 < 2000 Toxicidad moderada 2

LD50 > 2000 Baja toxicidad 1

TABLA N2: Factor de ocupacin O

Factor de ocupacin O

Cantidad (lotes /ao) Puntos O

Arriba de 200 lotes 5

Entre 151 y 200 lotes 4



Debajo de 50 lotes 1

TABLA N3: Factor de dificultad D.

Factor de dificultad D

Dificultad de limpiar Puntos D

Muy difcil de limpiar 4

Difcil de limpiar 3

Dificultad media para limpiar 2

Fcil de limpiar 1

30

TABLA N4: Factor de solubilidad en agua S, en ppm.

3.2.2.3.2.- DETERMINACIN DE LMITES DE CONTAMINACIN DEL P.A.

TRAZADOR

Para establecer los lmites de aceptacin del principio activo trazador presente en las

superficies de los equipos que estn en contacto directo con el producto, se utilizarn

los mtodos mencionados en la gua de inspeccin para la validacin de los procesos

de limpieza de la FDA (LeBlanc, 1999).

Factor de solubilidad en agua S, en ppm

Trmino descriptivo

Solubilidad (S) en agua (en ppm)

Clasificacin Puntos S

Muy soluble S > 1,000,000

Alta solubilidad 3 Fcilmente soluble 100,000 < S < 1,000,000

Soluble 33,000 < S < 100,000

Ligeramente soluble 10,000 < S < 33,000 Solubilidad moderada 2

Poco soluble 1,000 < S < 10,000

Muy poco soluble 100 < 1,000 Baja solubilidad 1

Prcticamente insoluble o insoluble

S < 100

31

3.2.2.3.2.1.- Criterio de las dosis

Determina que no ms de 0,001 partes de la dosis de cualquier producto aparecer en

la dosis mxima de otro producto.

Este valor explica la presencia de 3 factores de 10, el primero se relaciona con que los

medicamentos son considerados no activos en la fraccin 0,1 de su normal dosis

prescrita, el segundo es un factor de seguridad y el tercero corresponde a que el

programa de validacin debe ser robusto (LeBlanc, 1999).

Este lmite se obtiene aplicando la siguiente frmula:

Ecuacin N2

Dnde:

L1: Cantidad en mg de p.a. del producto (A), permitidos como lmite en el equipamiento

luego de su limpieza final.

I: Menor dosis del producto (A) expresada como mg de p.a. de (A)/da.

K: Nmero de dosis por lotes presentes en la mezcla final del producto

subsecuentemente fabricado (B).

J: Dosis mxima diaria del producto farmacutico B (en unidades).

El producto (A) es aquel elegido como trazador, mientras que el producto (B) es aquel

fabricado subsecuentemente al producto (A).

32

3.2.2.3.2.2.- Criterio de las 10 ppm

Determina que no ms de 10ppm del producto trazador aparecer en otro producto

(LeBlanc, 1999). La razn por la cual se aplica este criterio tiene su origen en las

regulaciones establecidas en los productos alimenticios.

El lmite se obtiene aplicando la siguiente frmula:

Ecuacin N3

Dnde:

L2: Cantidad en mg de principio activo (p.a.) del producto (A), permitidos como lmite en

el equipamiento luego de su limpieza final.

R: 10mg de p.a. (A) / Kg de producto (B).

S: Nmero de Kg por lote de mezcla final del producto (B).

El producto (A) es aquel elegido como trazador, mientras que el producto (B) es aquel

fabricado subsecuentemente al producto (A).

3.2.2.3.2.3.- Criterio Visual

Este criterio dice que no deben permanecer residuos visibles en los equipos despus

de aplicados los procedimientos de limpieza descritos. Se utiliza como parmetro

preliminar del proceso de limpieza, el cual le otorga la posibilidad al operario, determinar

fcilmente si el equipo se encuentra completamente limpio (Prabu, 2010).

33

3.2.2.4.- DETERMINACIN DE REQUISITOS PREVIOS

Segn lo establecido en la gua de validaciones del Instituto de Salud Pblica de Chile,

la validacin y la calificacin son componentes esenciales del mismo concepto. El

trmino calificacin, es normalmente usado para equipos, servicios y sistemas, mientras

que validacin es normalmente usado para procesos, procedimientos y mtodos. De

acuerdo a esto, se observa que como requisito previo a la validacin de limpieza y

sanitizacin de un rea, se debe contar con la calificacin vigente de los equipos

presentes en sta. Adems, deben estar validados los sistemas de apoyo para la

ejecucin de los procedimientos de limpieza, como son, el sistema de aire (H.V.A.C.) y

agua de la planta.

Para la ejecucin de las diferentes determinaciones, los instrumentos utilizados en

estas pruebas deben estar calibrados con el fin de obtener mediciones precisas y

reproducibles.

En un nivel de limpieza apropiado, las metodologas seleccionadas deben detectar

residuos de contaminantes especficos de la sustancia que se est analizando, por lo

tanto, la metodologa analtica del principio activo en estudio debe estar validada

establecindose en ella, (ISP, 2010):

Precisin, linealidad y selectividad (este ltimo si se buscan determinados

analitos);

Lmite de deteccin (debe ser lo suficientemente sensible para detectar el nivel

detectable establecido de residuos o contaminantes);

Lmite de cuantificacin;

34

Recuperacin, adicionando el analito; y

Reproducibilidad.

3.2.3.- EVALUACIN DE LA DOCUMENTACIN INVOLUCRADA EN EL

PROCEDIMIENTO DE LIMPIEZA.

3.2.3.1.- PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTNDAR DE LIMPIEZA.

Generalmente los mtodos de limpieza en la industria farmacutica pueden ser

clasificados como: mtodos de limpieza manual, semiautomticos y automticos (Berry,

1993).

La limpieza que se realiza en el rea es de caracterstica manual, con apoyo de

equipamiento semiautomtico, es aplicada en forma diaria a los equipos y superficies

(vidrios, paredes, mesas y pisos) despus de cada fabricacin de lotes de igual o

distinto producto.

Los procedimientos de limpieza aplicados a cada equipo estn descritos en

documentos internos del laboratorio (procedimientos operativos estndar de limpieza y

sanitizacin), donde cada operario debe cumplir con los puntos detallados logrando una

limpieza adecuada y reproducible (ANEXO N2).

35

3.2.3.2.- EVALUACIN Y ACTUALIZACIN DE LA DOCUMENTACIN.

El cumplimiento de los procedimientos escritos o procedimientos operativos estndares

(POS) fueron evaluados del siguiente modo:

a) Comparacin del contenido de cada uno de los POS y/o instructivos con lo

realizado en forma prctica por los operadores. Se deben actualizar y/o modificar

aquellos (POS) con diferencias entre lo aplicado por cada operario y lo

establecido en el documento.

b) Comparacin de cada uno de los procedimientos escritos con lo establecido en

la normativa GMP, mediante el uso de una lista de chequeo (checklist) indicando

los puntos que en estos POS se debe considerar (ANEXO N3).

3.2.4.- DETERMINACIN DE PUNTOS CRTICOS DE LIMPIEZA PARA LA

GENERACIN DE PROTOCOLO DE VALIDACIN.

Para el estudio de los puntos crticos de limpieza se realizan tres tipos de

determinaciones:

3.2.4.1.- DETERMINACIN RESIDUAL DEL DETERGENTE

El objetivo es evaluar la eficacia del enjuague determinando cuantitativamente los

residuos de detergente que permanecen en los equipos y utensilios, ya que, los

detergentes tambin se consideran un tipo de contaminacin que puede alterar la

calidad, seguridad o eficacia de un producto farmacutico.

36

5.2.4.2.- DETERMINACIN DE CONTAMINACIN POR P.A.

Es la medicin cuantitativa de los residuos del principio activo elegido como trazador

que permanecen en los equipos involucrados en la fabricacin de los productos luego

de la etapa de lavado (Jenkins, 1994).

5.3.3.- DETERMINACIN DE CONTAMINACIN MICROBIOLGICA

La fabricacin de productos estriles est sujeta a requisitos especiales para minimizar

los riesgos de contaminacin microbiana, de partculas y de pirgenos. La garanta de

esterilidad y de otros aspectos de calidad de los medicamentos no puede depender

nicamente de los ensayos realizados al final del proceso o sobre el producto

terminado. La fabricacin de estos productos debe realizarse en zonas con un nivel de

limpieza adecuada, con personal capacitado en la correcta fabricacin de productos

estriles, as como lo referido a higiene personal y limpieza, y con materias primas que

cumplan con las especificaciones establecidas. Dado lo anterior, los muestreos de

superficies del equipamiento deben realizarse durante las operaciones normales de

limpieza y sanitizacin (Procedimiento monitoreo microbiolgico en frmacos

inyectables, propiedad intelectual Centrovet, 2011).

Esto permite determinar la presencia, identificacin y cantidad de microorganismos

patgenos presentes en una superficie muestreada, los datos obtenidos son indicativos

de la calidad del procedimiento de limpieza y sanitizacin que ha recibido el

equipamiento, para ello, se realiza determinacin microbiolgica en equipos, utensilios y

superficies (muros, pisos, vidrios, rejillas de extraccin y mesas).

37

3.2.5.- PERSONAL Y CAPACITACIN

El personal a cargo, tanto del proceso de fabricacin, como del procedimiento de

limpieza y sanitizacin de las diferentes lneas de produccin, recibe constantemente

capacitaciones de normativa GMP, estas son llevadas a cabo por personal del

departamento de Aseguramiento de la Calidad del laboratorio.

Estas capacitaciones permiten minimizar los errores durante la ejecucin de los

diferentes procesos, adems, de la correcta reproducibilidad de estos mismos.

Las disposiciones legales presentes en Chile, indican expresamente la entrega de

implementos de seguridad personal a cada trabajador por parte de la empresa. As

encontramos el artculo N69 de la ley 16.744 que indica que las empresas debern

proporcionar a sus trabajadores, los equipos e implementos de proteccin personal

necesarios, para desarrollar sus actividades libre de algn riesgo en el cual se puedan

ver expuestos, mientras que el cdigo del trabajador expresa en su artculo N184 que

el empleador estar obligado a tomar todas las medidas necesarias para proteger

eficazmente la vida y salud de los trabajadores, manteniendo las condiciones

adecuadas de higiene y seguridad en las faenas, como tambin los implementos

necesarios para prevenir accidentes de trabajo y enfermedades profesionales.

38

4.- RESULTADOS

A continuacin se presentan los requerimientos necesarios para proceder con la

ejecucin de la validacin de limpieza y sanitizacin.

4.1.- RESULTADOS DEL REA DE ESTUDIO

De acuerdo a la reglamentacin vigente, los principios activos derivados de complejos

penicilnicos y cefalospornicos deben ser fabricados en instalaciones exclusivas o

separadas, con sistema independiente de aire, laboratorio Centrovet, cuenta con un

rea destinada exclusivamente a la fabricacin de productos betalactmicos que cuenta

con sistema de aire independiente.

4.1.1.- PRINCIPIO ACTIVO TRAZADOR Y LMITES DE ACEPTACIN.

Se realiz la determinacin del principio activo peor caso mediante la tcnica descrita

por Barbosa de Alencar (Punto 3.2.2.3.1), determinando como peor caso a ceftiofur

clorhidrato para la lnea de productos lquidos inyectables y amoxicilina para la lnea de

productos en polvo. (TABLA N 5 y TABLA N6).

39

TABLA N5: Productos y especificaciones requeridas para seleccin de peor caso.

Producto Forma

Farmacutica

Lnea de Produccin

Toxicidad LD50 Solubilidad Dificultad Ocupacin

(ratas mg/Kg) (en agua) Limpieza (N

lotes/ao)

amoxicilina Polvo oral Polvo >15000 mg/Kg

(1) 3439ppm Dificultad

Media Entre

151 y 200

cefalexina Suspensin Inyectable

Inyectable 3700 mg/Kg (2) 297ppm

Muy difcil Entre

51 y 100

ceftiofur Suspensin Inyectable

Inyectable 1250 mg/Kg (3) Insoluble

Difcil Entre

51 y 100

(1).- (Veterinary Medicines Directorate, 2010)

(2).- (EAEMP, 1999)

(3).- (EAEMP, 2009)

TABLA N6: Puntos obtenidos de acuerdo a metodologa de Barbosa de Alencar

Producto fT fO fD fS WCI

amoxicilina 1 4 2 2 4

cefalexina 1 2 4 1 8

ceftiofur 2 2 3 1 12

De esta manera, para determinar los lmites de contaminacin permitidos para los

principios activos trazadores, de acuerdo a la metodologa descrita por LeBlanc, se

obtiene que para el rea de lquidos inyectables betalactmicos:

Segn la ecuacin del punto 3.2.2.3.2.1 de criterio de las dosis, los valores de los

parmetros indicados son los siguientes:

L1: Lmite residual (mg) permitidos de ceftiofur clorhidrato, como contaminacin de

equipos y utensilios despus de aplicarse el procedimiento de lavado.

I: 45 mg del producto A (trazador) / da.

40

L: 200.000 dosis / lote de mezcla final del producto B.

J: 1 dosis del producto B/da.

Por lo tanto, no ms de 9.000 mg de ceftiofur clorhidrato sern aceptados como la

sumatoria de los residuos encontrados en las superficies de equipos que estn en

contacto directo con el producto.

Ahora, segn el punto 3.2.2.3.2.2 donde se estipula el criterio de los 10 ppm los valores

de los parmetros indicados son;

L2: Cantidad en mg de ceftiofur clorhidrato, permitidos como lmite en el equipamiento

luego de su limpieza final.

R: 10 mg de ceftiofur clorhidrato / Kg de cefalexina.

S: 188 Kg por lote de mezcla final de cefalexina.

41

Por lo tanto, no ms que 1.880 mg de ceftiofur clorhidrato sern aceptados como la

sumatoria de los residuos encontrados en las superficies de equipos que estn en

contacto directo con el producto.

4.1.2.- REQUISITOS PREVIOS

Los resultados obtenidos para los requisitos previos a la validacin de limpieza del rea

en estudio son:

TABLA N7: P.a. involucrados y estados de validacin de metodologas analticas.

Principio activo

Estado validacin de metodologa analtica

Si No En proceso

Ceftiofur clorhidrato. X

Amoxicilina trihidrato. X

42

TABLA N8: Equipamiento involucrado y estado de calificacin.

Equipamiento Estado de calificaciones*

Si No En proceso

Reactor de fabricacin de lquidos X

Bombona de acero inoxidable. X

Molino coloidal

X

Bomba dosificadora peristltica Watson-Marlow

X

Mezclador tipo pantaln

X

(*) Calificacin de instalacin, desempeo y operacin.

TABLA N9: Estados de calificacin y calibracin de instrumentos y equipos de anlisis.

Instrumentos y equipos Estado de calificaciones/calibracin

Si No En proceso

pH-metro, modelo Hanna HI-8424.

X

Conductivmetro, modelo Hanna PWT HI-98308

X

Horno MEMERT UM-400 (b 404.0269) X

Shimadzu modelo Prominence 20A X

Merck Hitachi modelo Elite LaChrom X

43

TABLA N10: Sistemas de apoyo para ejecucin de POS de limpieza y sanitizacin.

Sistema Estado de validacin

Si No En proceso

Agua X

Aire X

4.2.- EVALUACIN Y ACTUALIZACIN DE DOCUMENTACIN

Se revisaron y actualizaron los siguientes documentos:

TABLA N11: Documentos revisados y actualizados.

N Tipo de

documento Nombre

Actualizacin

SI NO

1 Procedimiento Procedimiento de calibracin de balanzas X

2 Procedimiento Procedimiento operativo estndar fabricacin productos inyectables

X

3 Procedimiento Procedimiento operativo estndar polvos betalactmicos

X

4 Procedimiento Procedimiento general de produccin inyectables

X

5 Procedimiento Procedimiento de acondicionado de productos lquidos inyectables

X

6 Procedimiento Procedimiento ingreso materiales a cmara dosificado inyectable

X

7 Procedimiento Procedimiento de lavado de material lquidos inyectables y orales

X

8 Procedimiento Procedimiento operativo estndar planta de agua inyectables

X

9 Procedimiento Procedimiento de monitoreo de aire X

10 Procedimiento Procedimiento de fabricacin de Alcohol 70 X

11 Procedimiento Procedimiento de limpieza y sanitizacin de inyectables betalactmicos

X

12 Procedimiento Procedimiento de uso y dilucin de Diverflow X

44

156

13 Procedimiento Procedimiento operativo estndar lquidos betalactmicos

X

14 Instructivo Instructivo de limpieza y sanitizacin rea polvos betalactmicos

X

15 Instructivo Instructivo verificacin calibracin pH metro X

16 Instructivo Instructivo de limpieza y sanitizacin drenajes X

17 Planilla Instructivo de ingreso y salido reas productivas

X

18 Planilla Instructivo montaje de molino coloidal X

19 Planilla Planilla de registro de humedad y temperatura produccin

X

20 Planilla Planilla ingreso personas rea produccin betalactmicos

X

21 Planilla Planilla regeneracin desmineralizador X

22 Planilla Planilla registro esterilizacin rea inyectables

X

23 Planilla Planilla registro ingreso materiales a cmara inyectable

X

4.3.- EVALUACIN DE PUNTOS CRTICOS

4.3.1.- ANLISIS DE DETERGENTE POR CONDUCTIVIDAD Y pH.

Este mtodo permite evaluar, mediante la determinacin de pH y conductividad, la

concentracin de detergente presente en una solucin de enjuague. Consiste en

determinar la conductividad y pH de soluciones detergente de concentracin conocida,

obteniendo resultados que son directamente proporcionales entre ambas variables

(ANEXO N5). Esto permitir realizar anlisis de agua de enjuague in situ durante el

procedimiento de limpieza, obteniendo un valor indicativo de la calidad del enjuague

realizado.

45

4.3.1.1.- Procedimiento de anlisis de conductividad.

Verificar que el conductivmetro se encuentre dentro de su periodo de calibracin

trimestral vigente.

Luego de finalizado el ltimo enjuague del procedimiento de limpieza del

equipamiento, llenar un vaso precipitado de 500 mL limpio y seco con agua

destilada, enjuagar la parte del equipamiento a la cual se le quiere determinar el

la conductividad de agua de enjuague. Recuperar aproximadamente 200 mL de

esta agua de enjuague obtenida y determinar el valor de conductividad.

Verificar el valor de conductividad obtenido, con la Tabla N2 del ANEXO N5.

Si la conductividad obtenida es mayor al indicado para una concentracin de

10 ppm, debe realizar nuevamente el proceso de enjuague del equipamiento.

Repetir hasta que el valor de conductividad sea menor o igual al expuesto para

10 ppm.

4.3.1.2.- Procedimiento de anlisis de pH.

Verificar que el pH-metro se encuentre dentro de su perodo de calibracin

vigente (semanal).

Luego de finalizado el ltimo enjuague del procedimiento de limpieza. Llenar un

vaso precipitado de 500 mL limpio y seco con agua destilada, enjuagar la parte

del equipamiento a la cual se le quiere determinar el pH de agua de enjuague.

Recuperar aproximadamente 200 mL de esta agua de enjuague obtenida y

determinar el valor de pH.

46

Verificar el valor de pH obtenido, con la Tabla N2 del ANEXO N5.

Si el pH obtenido es mayor al indicado para una concentracin de 10 ppm, debe

realizarse nuevamente el proceso de enjuague del equipamiento.

Repetir hasta que el valor de pH sea menor o igual al expuesto para 10 ppm.

4.3.2.- MTODO DE MUESTREO DE ACTIVO TRAZADOR PROPUESTO.

4.3.2.1.- Anlisis de p.a. por hisopado.

Es utilizado para muestrear las superficies del rea (ej.: muros, pisos, vidrios, rejillas de

extraccin, etc.) en un rea medida o partes completas de equipos (ej.: eje del reactor,

cuchillos y ejes del molino) (Ruey, 1997).

El dispositivo a utilizar (Figura N5) consiste en un tubo de ensayo plstico y estril

provisto de una trula de algodn hidrfilo, al cual se le agregan 5 mL de solvente

utilizado en el anlisis qumico del p.a. seleccionado como peor caso. Posee un sistema

de cierre que evita la evaporacin del solvente o contaminacin de la muestra a analizar

tanto por material orgnico como inorgnico.

47

Figura N5: Hisopo estril disponible utilizado en los procesos de muestreo de p.a. y

microbiolgico.

Para esta tcnica es necesario calcular el porcentaje de recuperacin siendo este

generalmente menor al 50% (LeBlanc, 1999).

En el ANEXO N4, se describe el mtodo a seguir para realizar el clculo del porcentaje

de recuperacin de principio activo por la tcnica del hisopado.

4.3.2.1.- Procedimiento del mtodo de muestreo por hisopado para equipos y utensilios.

Abrir el hisopo estril.

Agregar 5 mL del solvente de arrastre utilizado en el proceso de anlisis qumico

a travs de HPLC al tubo contenedor.

Humedecer el hisopo y eliminar el exceso de solvente.

Posicionar el marco de acero inoxidable de 25 cm2 en el lugar a ser muestreado.

48

Pasar el hisopo en las direcciones indicadas en la Figura N6.

Si la superficie a muestrear es irregular, se debe realizar la determinacin

aproximada de 25 cm2 para realizar el proceso de muestreo.

Mientras est realizando el punto anterior, entre cada una de las direcciones,

debe realizar el proceso de enjuague del hisopo al interior del solvente. Esto

evita saturacin del p.a. en el algodn.

Al finalizar se debe cerrar y rotular la muestra con la codificacin indicada para el

punto. Envolver con papel aluminio y refrigerar hasta el desarrollo del anlisis.

FIGURA N6: Esquematizacin de direcciones en las que se debe pasar el hisopo

estril (Kalelkar, 2010).

49

4.3.2.2.- Procedimiento para la preparacin de las muestras por hisopado.

En un bao de ultrasonido sonicar por 15 minutos a potencia y desgasificacin

media el dispositivo que contiene el hisopado.

En un matraz aforado de 10 mL trasvasijar en forma cuantitativa el hisopado

(presionando en las paredes del tubo).

Agregar al tubo 2 mL del solvente de arrastre y llevarlo a bao de ultrasonido

por 10 minutos en las mismas condiciones que el punto anterior.

Luego trasvasijar el contenido al matraz aforado (presionando la trula por las

paredes del tubo).

Agregar 2 mL del solvente de arrastre por las paredes del tubo y traspasar al

matraz.

Aforar el matraz de 10 mL con el solvente de arrastre utilizado en el anlisis

qumico del principio activo, con una jeringa sacar 5 mL y filtrar a travs de una

carcasa tipo Millex provista de un filtro Millipore 0,22m.

Cargar a un vial para HPLC rotulado.

4.3.3.- ANLISIS MICROBIOLGICOS PROPUESTOS.

Los anlisis propuestos sern mediante la tcnica de placa por contacto y la tcnica del

hisopado o trula. El mtodo de placa es aplicable slo a superficies planas. El mtodo

de hisopo o trula puede ser usado tanto en superficies planas como irregulares. Los

50

resultados deben expresarse en UFC/cm2 de superficie muestreada. Despus del

muestreo, si es necesario, la superficie debe ser limpiada y desinfectada.

4.3.3.1.- Procedimiento de muestreo por placa de contacto.

Para el mtodo de contacto con placa de agar, se utilizan en cada localizacin de

muestreo, pequeas placas RODAC de un dimetro interior de 55 mm con neutralizante

Agar Sabouraud y Agar Plate Count, los cuales permiten el recuento de hongos y de

bacterias totales respectivamente (Monitoreo microbiolgico de superficies y operarios,

propiedad intelectual Centrovet, 2011).

Para determinar la carga microbiolgica de una superficie se debe:

Usar guantes estriles.

Sacar la placa de agar Plate Count o Sabouraud de su envase.

Abrir la placa y presionar el agar sobre la superficie a muestrear por un mnimo

de 10 segundos.

Cierre inmediatamente la placa, sellar con parafilm y trasladar al laboratorio en

un mximo de 4 horas desde la toma de muestra.

Una vez en el laboratorio proceder a realizar la incubacin.

Retirar el film de las placas.

Incubar las placas de Sabouraud invertidas en estufa de cultivo a 25 1 C, por

7 das.

Incubar las placas de Agar Plate Count invertidas a 30 1 C, por 72 horas (3

das).

51

Para obtener los resultados, contar el nmero de unidades formadoras de

colonias desarrolladas en las superficies de las placas de agar y registrar los

resultados.

4.3.3.2.- Procedimiento de muestreo por tcnica de hisopado.

El objetivo de este mtodo de muestreo es conocer la carga microbiana en una

superficie determinada en un volumen conocido de lquido. Se desarrollar de acuerdo

al procedimiento de recuento de microrganismos por trula desarrollado por el ISP (ISP,

2008).

El detalle de los materiales, reactivo y medios de cultivo se detalla en el ANEXO N7.

4.4.- PERSONAL Y CAPACITACIN

Se observa que el personal recibe constantemente capacitaciones, las cuales, son

dictadas por personal de Aseguramiento de la calidad. Adems, se verifica la correcta

distribucin de materiales o implementos de seguridad personal.

52

5.- DISCUSIN

El rea de estudio se ubica de manera independiente en la planta de produccin, esto

es, con sistema de aire y agua propios, lo cual, disminuye las probabilidades de que

exista algn suceso de contaminacin cruzada.

La calidad de los materiales con los que estn elaborados los equipamientos

corresponden a acero inoxidable tipo 316 y 316L, los cuales, son los recomendados

tanto para la industria farmacutica humana como veterinaria e industria alimentaria

(Newson, 2000). Los utensilios utilizados en la fabricacin de los productos no

presentan desviaciones al cumplimiento de las normas de calidad. En general, tanto las

reas, como el equipamiento y utensilios, tienen la forma adecuada para realizar un

correcto desarrollo de limpieza y sanitizacin, disminuyendo la cantidad de puntos

crticos, que sean de difcil alcance para el desarrollo de este procedimiento. A

excepcin del molino coloidal utilizado en la fabricacin, por lo que realiz un

procedimiento de montaje y limpieza, permitiendo as, un correcto desarrollo de la

actividad por parte del operario encargado.

Para un futuro desarrollo de la validacin de limpieza y sanitizacin en el rea de

lquidos inyectables betalactmicos se seleccion, de acuerdo a la metodologa

propuesta por Barbosa de Alencar, el principio activo ceftiofur clorhidrato, como peor

caso en la lnea de fabricacin de productos lquidos betalactmicos debido a que ste

presentaba el mayor ndice WCI de los p.a. estudiados, esto, debido a que presenta

una toxicidad moderada, es muy difcil de limpiar y es prcticamente insoluble en agua.

53

De esta manera se procedi a realizar la determinacin del lmite residual,

seleccionando el criterio de las 10 ppm por ser el ms estricto de los dos estudiados. De

esta manera, el muestreo del principio activo trazador no podr presentar ms de 1.880

mg de ceftiofur clorhidrato como la sumatoria de los residuos encontrados en las

superficies de equipos que estn en contacto directo con el producto.

Debido a que el rea de polvos betalactmicos actualmente es de caractersticas

exclusivas para la fabricacin, dosificacin y acondicionamiento de amoxicilina, se

determin sta como principio activo trazador. Sin embargo, no se encontr bibliografa

que exprese de qu manera se puede determinar el lmite mximo de residuos de este

p.a. Es por esto que, se determin que el desarrollo ms importante de este estudio, se

debe centrar en la ausencia de residuos visibles as como de trazas de detergente y

microorganismos.

Para poder realizar un proceso de validacin de limpieza y sanitizacin exitoso para el

rea de betalactmicos, se deber cumplir con ciertos requisitos previos que exige la

normativa, los cuales son:

1. Calificacin de HPLC Shimadzu modelo Prominence 20A y Merck modelo Elite

LaChrom.

2. Calificacin del equipamiento de produccin involucrado en el proceso de

fabricacin (reactor de fabricacin, bombona de acero inoxidable, molino

coloidal, bomba dosificadora peristltica Watson Marlow, mezclador pantaln)

3. Validacin del sistema de agua destilada y de las metodologas analticas para

los p.a.

54

Actualmente se encuentran en proceso de calificacin los equipos de HPLC y en

proceso de validacin de metodologa analtica, amoxicilina trihidrato y ceftiofur

clorhidrato, adems de la validacin del sistema de aire de la planta.

Se realiz una completa revisin de los diferentes documentos que hacen alusin al

rea en estudio, determinndose que algunos de ellos requeran actualizacin. La

limpieza que se lleva a cabo, tanto en la lnea de produccin de lquidos inyectables

como en la lnea de produccin de polvos del rea, corresponde a un mtodo manual

con ayuda de equipamiento semiautomtico, que le permite adquirir mayor capacidad

de remocin de contaminantes. Esta limpieza, de acuerdo a los protocolos propios del

laboratorio, se desarrolla posterior al proceso de fabricacin y puede tener una duracin

mxima de 1 da. Este valor, se ha determinado como factor de seguridad interno, lo

que permite disminuir la posibilidad de que exista crecimiento microbiolgico.

Existen procedimientos de limpieza desarrollados para las necesidades de cada una de

las lneas de fabricacin, los cuales, detallan y especifican el desarrollo del

procedimiento de limpieza de los equipamientos presentes en estas. Se realiz la

comparacin entre la metodologa expuesta en el POS de limpieza y las actividades

prcticas reales, desarrolladas por los operarios. Se encontr que existan diferencias

menores entre estas prcticas, por lo que se realizaron modificaciones para que el POS

de limpieza y sanitizacin del rea quede ejecutado correctamente.

Se desarroll un chequeo comparativo entre los requerimientos solicitados por la FDA y

el ISP para el correcto desarrollo de los procedimientos de limpieza y sanitizacin para

industria farmacutica. Si bien, no se encontr bibliografa especifica para la industria

55

farmacutica veterinaria, se entiende implcitamente que esta ltima debe regirse bajo

los mismos criterios de la industria farmacutica humana. Siguiendo este razonamiento,

se evaluaron los puntos descritos en el ANEXO N3, arrojando resultados de los que se

puede detallar:

1. Existen procedimientos escritos de limpieza con formato POS para equipos y

superficies del rea (vidrios, muros, pisos y rejillas de extraccin). Sin embargo,

existen utensilios que no tienen POS de limpieza, como las esptulas y poruas.

Se debe trabajar en la evaluacin de elaboracin de dichos procedimientos.

2. El responsable de la limpieza es el operario encargado de la fabricacin, el

mantenimiento de los diferentes equipamientos es responsabilidad del

departamento de mantencin del laboratorio. Estos dos puntos estn claramente

definidos en los procedimientos de limpieza.

3. El procedimiento de limpieza y sanitizacin de ambas lneas de fabricacin indica

el orden en el cul se debe realizar el proceso de limpieza, esto es, pre-enjuague

con agua potable (que permite eliminar la suciedad grosera), lavado con

detergente, enjuague con agua potable, enjuague con agua desmineralizada y

enjuague con agua calidad inyectable. No se especificaba el uso de la

hidrolavadora semiautomtica, por lo que se incluy en ambos procedimientos.

4. En todos los procedimientos escritos de limpieza se menciona la frecuencia de

limpieza del equipo despus de terminar la fabricacin de cada producto. Esta

frecuencia, por polticas de la empresa, indica que se debe ejecutar el

procedimiento de limpieza inmediatamente despus de finalizado el proceso de

fabricacin y hasta 24 horas posteriores como mximo.

56

5. Existen procedimientos de armado y desarmado del equipamiento, de manera

independiente al procedimiento de limpieza. Estos procedimientos no se incluyen

en el POS de limpieza, ya que, esto generara un POS de limpieza muy extenso,

que en la prctica el operario no est dispuesto a leer.

6. En ambos procedimientos se establece la remocin de la etiqueta indicadora de

produccin y etiquetado del estado actual del equipamiento (FIGURA N7). Esta

ltima indica el N de reactor, el estado de la etiqueta, la ltima fecha de aseo y

el personal encargado. No se solicita la presencia de nombre y serie del ltimo

producto en esta etiqueta, ya que, se utiliza una planilla bitcora donde se

registra el uso diario del equipamiento, la cual debe ser verificada frente a cada

uso de la sala.

FIGURA N7: Etiqueta de mantencin de equipo

57

7. En los procedimientos no se especifica que se debe cubrir el equipo o utensilios

con film plstico despus de terminado el proceso de limpieza. Para un mejor

cumplimiento, se agrega este punto a los procedimientos.

Para la determinacin de la eficacia del enjuague se midi por conductividad la cantidad

de detergente que permanece despus de aplicar los procedimientos de limpieza al

equipamiento y utensilios. En bibliografa no se establecen lmites de contaminacin de

detergente para equipos y utensilios, por lo tanto, se considera el lmite establecido

para cualquier contaminante segn la OMS, ya que, el detergente es considerado como

contaminante para el proceso de fabricacin subsecuente al procedimiento de limpieza.

Por lo tanto, se aplicar el criterio de las 10 ppm. El anlisis del detergente se realiza in

situ, durante el procedimiento de limpieza y sanitizacin, lo cual, minimiza la posibilidad

de que permanezcan residuos del detergente que puedan afectar el proceso de

fabricacin del producto siguiente, ya que se puede determinar rpidamente si la

conductividad obtenida con el enjuague realizado supera el lmite establecido, de ser

as, es indicativo de que se debe realizar el ltimo enjuague nuevamente.

Para la determinacin de la eficacia del enjuague se midi por conductividad la cantidad

de detergente que permanece despus de aplicar los procedimientos de limpieza al

equipamiento y utensilios. Para su cuantificacin se desarroll la Tabla N2 del ANEXO

N5 que determina la conductividad media de una solucin de agua destilada con

residuos de detergente. Por lo tanto, se estipul que la conductividad mxima

encontrada en los residuos de enjuague debe poseer una conductividad menor o igual a

13,40 S promedio.

58

De esta manera, de forma rpida y eficiente, se podr determinar la calidad del

enjuague posterior al proceso de limpieza con el detergente Diverflow 156, permitiendo

asegurar que la cantidad de detergente analizado en una muestra determinada no

supera las 10 ppm. Este procedimiento debe ser utilizado, tanto, para la limpieza de las

lneas de lquidos inyectables como de polvo.

El mtodo de muestreo a utilizar para la determinacin de p.a. para el rea de lquidos

inyectables betalactmicos se mencion en el punto 4.3.2.1, este es: mtodo de

hisopado para p.a. Para realizar un adecuado muestreo de p.a. se codific de manera

detallada los diferentes puntos de muestreo de los equipamientos que estn en

contacto con el principio activo trazador. A su vez, se confeccion una tabla de registro

de datos, detallada en el ANEXO N7, que permite realizar de manera prctica y

ordenada la toma de muestras y llevar los registros de los resultados.

En el mtodo de hisopado se necesita calcular un porcentaje de recuperacin del

trazador desde el hisopo. El desarrollo de este mtodo se detalla en el ANEXO N4. Si,

al momento de realizar el estudio de recuperacin del p.a., se obtienen resultados

inferiores al 50%, la literatura recomienda, realizar el anlisis por duplicado, esto es,

analizar la misma rea de muestreo con dos hisopos diferentes, para posteriormente,

sumar las recuperaciones obtenidas.

Se determin la cantidad mxima aceptable como residuo de principio activo en las

superficies del equipamiento, para ello, se realiz el clculo de las superficies en

contacto con el p.a. trazador (ANEXO N6, Tabla N1), el cual se relaciona directamente

con el lmite de contaminacin seleccionado. Los resultados se expresan en la Tabla

59

N2 del ANEXO N6. Se puede observar que los lmites permitidos varan de acuerdo a

la superficie del equipo.

Se defini la codificacin de los puntos de muestreo para el p.a. y se gener una tabla

de registro. Esto, permite tener un orden adecuado en la toma de datos y una mayor

facilidad para realizar los clculos de los lmites establecidos. (ANEXO N6, Tabla N3).

Los mtodos microbiolgicos recomendados para realizar en un futuro proceso de

validacin de limpieza, segn el punto 4.3.3., son: por la tcnica del hisopado y por

placa RODAC. El mtodo de preparacin, uso y aplicacin para la tcnica del hisopado

se describe en el ANEXO N7. La toma de muestra, preparacin y anlisis de

resultados para la tcnica por placa RODAC se realizar de acuerdo al procedimiento

interno utilizado en el rea de microbiologa.

De acuerdo a la poltica utilizada en la empresa, sta, deber cumplir los requisitos

exigidos en la normativa GMP Europea, la cual, indica que en superficies de contacto

para aproximadamente 25 cm2, el recuento microbiolgico para el rea de lquidos

inyectables betalactmicos debe ser menor a 1 UFC/25cm2 y para el rea de polvos

betalactmicos debe ser menor a 50 UFC/25cm2 (Tabla N12).

60

TABLA N12: Lmites recomendados de la contaminacin microbiana. (AEMPS, 2009)

Lmites recomendados de la contaminacin microbiana

Grado

Muestra de

aire

UFC/cm3

Placas de

sedimentacin

(dimetro

90mm)

ufc/4horas

Placas de

contacto

(dimetro

55mm)

ufc/placa

Impresin de

guantes 5

dedos

ufc/*guante

A < 1 < 1 < 1 < 1

B 10 5 5 5

C 100 50 25 -

D 200 100 50 -

Para llevar a cabo un correcto desarrollo de toma de muestras microbiolgicas y

obtener una cantidad representativa del rea de muestreo, se establecieron y

codificaron los puntos a muestrear por equipo. Adems, se elabor una tabla de

resultados microbiolgicos para mantener de manera ordenada y detallada el resultado

de los anlisis desarrollados (ANEXO N8).

La utilizacin de estos mtodos se limita al anlisis de superficies limpias, desinfectadas

y secas. Ya que, pueden permanecer trazas de nutrientes derivados del procedimiento

de muestreo. Cuando se espera encontrar residuos de desinfectantes, deben

adicionarse los neutralizantes apropiados a los lquidos de dilucin y al medio usado en

las placas de contacto, con el fin de prevenir el efecto inhibitorio de los desinfectantes

sobre el crecimiento de los microorganismos (SAG, 2010).

Para el correcto desarrollo de un proceso de limpieza y sanitizacin es necesario que el

personal cuente con capacitaciones peridicas, dictadas por personal calificado.

Adems, es requisito la entrega de elementos de proteccin personal, debido a los

61

grandes volmenes de sustancias cidas o bsicas con las que trabajan. Es por esto,

que al personal involucrado, tanto en los procesos de fabricacin como en los procesos

de limpieza, se les hace entrega de overoles, guantes de ltex y PVC resistentes a

cidos y bases, cofias desechables, botas de goma y zapatos de seguridad, mscaras

de rostro completo modelo 3M 6800 con cartuchos de filtracin 3M 7093 P-100, que

permiten trabajar en presencia de polvos, humos, neblinas, gases y vapores (Instructivo

de entrega de implementos de seguridad, propiedad intelectual Centrovet, 2011). Se

estima la necesidad de realizar capacitaciones previas a la ejecucin de la validacin,

con el fin de asegurar la correcta realizacin de los POS de limpieza. Estas

capacitaciones deben quedar registradas. Se propone medir la efectividad de estas

capacitaciones mediante anlisis de trazas en el producto subsecuente, en ensayos

trimestrales, realizados por personal de aseguramiento de la calidad y sin el

conocimiento previo por parte del encargado de ejecucin del POS de limpieza y

sanitizacin.

62

6.- CONCLUSIONES

Se estudiaron las reas, equipos y utensilios involucrados en el proceso de

fabricacin de productos betalactmicos, determinndose los requisitos previos,

necesarios y exigidos por la normativa vigente para la futura ejecucin de la

validacin de limpieza en el rea.

Se revis y actualiz la documentacin existente en el rea de estudio,

involucrada en el proceso de limpieza.

Se determinaron los aspectos crticos, asociado a la eficacia de la limpieza, los

cuales son: linealidad del detergente, seleccin del principio activo,

determinacin de puntos de muestreo y tcnicas de anlisis microbiolgico,

establecindose para cada uno de ellos los lmites de aceptacin, con el fin de

una futura confeccin del protocolo para la validacin de limpieza.

Se capacit el personal a cargo de la ejecucin del procedimiento de limpieza y

sanitizacin y se propuso, al departamento de Aseguramiento de calidad, un

mtodo para la medicin del impacto de la capacitacin realizada.

Finalmente se determinaron las condiciones ptimas y necesarias para preparar

el rea de fabricacin de productos betalactmicos para una futura validacin de

la limpieza y sanitizacin.

63

7.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Agencia espaola de medicamentos y productos sanitarios (AEMPS) (2009), Gua

de normas de correcta fabricacin de medicamentos de uso humano y veterinario,

Madrid, Espaa.

Alencar, B., (2006), Cleaning validation of equipment in medicine industry: strategy

to select the "worst case", Revista Brasilea de Farmacia, Vol. 87(1):13-18.

Berry, I., Nash, R. (1993), Pharmaceutical Process Validation, 2da Edicin, Vol.57,

319-349.

European Agency for the Evaluation of Medicinal Products (EAEMP) (1999),

Summary Report for Cefalexin, visitado en www.ema.europa.eu con fecha 26-11-

2012

European Agency for the Evaluation of Medicinal Products (EAEMP) (2009),

Summary Report for Ceftiofur, visitado en www.ema.europa.eu con fecha 26-11-

2012

Gamboa, E., Alvarez, R. (2011), Acero inoxidable 316 y 316L propiedades y

caracteristicas. Fundacin Universitaria los Libertadores, pg. 10.

Imtiaz, S., Syed, E. (2010), Cleaning Validation Manual - A Comprehensive Guide

for the Pharmaceutical and Biotechnology Industries. Ed. CRC Press.

Instituto de Salud Pblica de Chile (2010), Gua de inspeccin de buenas prcticas

de manufactura (GMP) para la industria de productos farmacuticos, captulo

validacin, anexo 3.

Instituto de Salud Pblica de Chile (2008), Procedimiento de recuento de

microorganismos en suspensin por mtodo de torunda en superficie, pg. 1-8.

64

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Pharmaceutical Technology, Vol.18:60-73.

Kalelkar, S., (2010), Why The Swab Matters in Cleaning Validations, visitado en

www.texwipe.com con fecha 26-11-2012.

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justificados para la validacin de limpieza, Pharmaceutical Technology, Vol.3(1),

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Newson, T., (2000), Stainless Steel for Hygienic Aplications, visitado en

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Organizacin Mundial de la Salud (2002), Mdulos adicionales de la capacitacin

sobre GMP.

Pharmaceutical Inspection Convention (2007), visitado en www.picscheme.org con

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Prabu, L., Suryaprakash, T., (2010), Cleaning validation and its importance in

Pharmaceutical Industry, Pharma Times, Vol. 42(7),21-25.

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2012.

Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (2002), visitado en

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Veterinary Medicines Directorate (2010), Publicy Available Assessment Report for

a Veterinary Medical Product, pg. 9.

65

World Health Organization (1992), Good manufacturing practices for

pharmaceutical products. 32 informe, pg. 28.

66

8.- ANEXOS

ANEXO N1: PLANO DEL REA DE PRODUCCIN DE PRODUCTOS

BETALACTMICOS

67

ANEXO N2: POS DE LIMPIEZA Y SANITIZACIN UTILIZADO EN EL REA DE

BETALACTMICOS.

Debido a los derechos de confidencialidad de la empresa, no se pueden anexar los

documentos en su totalidad.

68

ANEXO N3: LISTA DE CHEQUEO SEGN NORMAS DEL ISP Y LAS GMP DE LA

FDA.

Se utiliza la lista de chequeo del Instituto de Salud Pblica (ISP), ya que es la

recomendada por el SAG, para evaluar la limpieza de un rea.

PREGUNTAS SEGN GMP DE LA FDA SI NO

1 Existen procedimientos escritos (POS), para la mantencin de la

limpieza de equipos y utensilios?

2 Este POS:

2.1 Indica responsables en la limpieza y mantencin de equipos?

2.2 Describe en forma detallada los mtodos, equipos, materiales y

servicios, usados en las operaciones de limpieza y mantenimiento?

2.3 Seala el mtodo de armado y desarmado de los equipos para su

limpieza?

2.4 Indica el momento en que se debe realizar la limpieza del rea, equipo

o utensilio, o, si es apropiado, un programa de limpieza y sanitizacin?

2.5 Especifica la remocin de los sistemas de identificacin de la serie de

producto una vez terminada su fabricacin?

2.6 Establece que los equipos y utensilios sean protegidos de

contaminacin previo a su uso?

2.7 Establece identificar el equipo como limpio despus de su limpieza?

(colocar la etiqueta de limpieza en el equipo y en el cubculo)

2.8 Establece la inspeccin visual del equipo limpio antes de su uso?

69

PREGUNTAS SEGN ISP

3 El POS incluye:

Nmina de productos a usar

Modo de usar

Con qu se lava, enjuaga y sanitiza?

4 Al comparar el procedimiento escrito con el realizado en la prctica

se realizan las etapas exactamente como estn descritas? Si no es

as Cmo se llevan a cabo?

5 En este POS:

Se encuentran en orden real las etapas descritas en el

procedimiento? Si no es as cul es el orden real?

Existen etapas que se realizan, pero no estn descritas? Cules?

Existen etapas que no se realizan, pero estn descritas? Cules?

6 Se seala si existe un detergente alternativo al de uso habitual?

7 Se sealan los tiempos de lavado y enjuagues? Si no es as Cules

son los tiempos?

70

ANEXO N4: PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR EL PORCENTAJE DE

RECUPERACIN DEL MTODO DE MUESTREO POR HISOPADO.

Las muestras que se realizan por el mtodo de hisopado deben ajustarse a un factor de

recuperacin, esto significa la cantidad de principio activo recuperado del hisopo. Para

esto se debe realizar el siguiente procedimiento.

1) Preparar una solucin estndar del principio activo trazador en estudio. De

aproximadamente 250 g/mL.

2) Realizar la medicin de su concentracin real en HPLC por triplicado. Dejar este

valor promedio expresado en g/mL.

3) En una placa laminar de acero inoxidable de calidad 316, demarcar 5 reas de

25cm2 (5 x 5 cm)

4) Agregar un volumen de 500L de la solucin preparada en el punto 1), a cada

una de las reas demarcadas sin que el producto salga del rea delimitada.

5) Dejar evaporar el solvente.

6) Realizar tcnica de muestreo descrita en el punto 4.3.2.1 y preparar las muestras

como se indica en el punto 4.3.2.2.

7) Analizar cada una de las 5 muestras obtenidas por triplicado en HPLC.

8) Informar datos en tabla modelo de clculo de porcentaje de recuperacin (Tabla

N1)

9) Calcular el porcentaje de recuperacin del mtodo de muestreo.

71

Tabla N1: Clculo de porcentaje de recuperacin

N de Muestra

Concentracin

encontrada de p.a.

trazador.

(g/mL)

Concentracin

promedio

encontrada de p.a.

trazador x muestra

(g/mL)

% de recuperacin CV (%)

1

1)

2)

3)

2

1)

2)

3)

3

1)

2)

3)

4

1)

2)

3)

5

1)

2)

3)

Promedio

72

De esta manera, finalmente se obtendr el valor promedio de p.a. obtenido en las

muestras, el cual se relaciona con el valor real de la muestra analizada obteniendo el

valor del porcentaje de recuperacin del hisopo mediante la siguiente frmula.

( )

( )

73

ANEXO N5: DETERMINACIN DE LINEALIDAD DEL DETERGENTE DIVERFLOW

156

Para realizar la determinacin de la linealidad del detergente se prepar, de acuerdo a

las especificaciones del proveedor, la concentracin sugerida de 2% p/p de Diverflow

156. De la siguiente manera:

Procedimiento para la preparacin de detergente.

Sobre una balanza tarar el envase donde se preparar la solucin final.

Una vez realizado el proceso de tarado, pesar 20 g de detergente diverflow 156

concentrado.

Posteriormente, con agua desmineralizada, completar el volumen hasta que la

balanza marque 1000g.

Agitar suavemente por 2 minutos con varilla de agitacin.

Para verificar la concentracin real de la solucin preparada se toma una muestra de

25mL de la solucin, se agregan 2 gotas de fenolftalena y se titula con HCl 1N. Esta se

analiza por triplicado Tabla N1

74

Aplicando la siguiente formula entregada por el proveedor obtenemos la concentracin

de Diverflow 156 existente en la solucin preparada.

( )

Donde:

A = Cantidad de mL HCl 1N gastados en muestra.

B = Cantidad de mL HCL 1N gastados en blanco.

0,48 = Factor de conversin entregado por el proveedor.

Tabla N1: Anlisis por triplicado, para determinacin de concentracin de detergente.

N de Muestra Cantidad de

muestra

Gotas de

fenolftalena

agregadas

Cantidad de HCl

1N gastados

1 25mL 2 gotas 4,7 mL



Promedio 4,7 mL

Blanco Agua

desmineralizada 25mL 2 gotas 0,0 mL

( )

75

A partir de la solucin analizada (2,26% p/p Diverflow 156) se procede a preparar

1000mL de soluciones de 10ppm, 20ppm, 30ppm, 40ppm y 50ppm de detergente de la

siguiente manera:

1000mL de solucin de 10ppm

Preparacin: En matraz aforado de 1000mL, agregar 442L de detergente

Diverflow 156 2,26% p/p y aforar con agua destilada. Realizar por triplicado.



Diverflow 156 2,26% p/p y aforar con agua destilada. Realizar por triplicado



76








Una vez preparadas todas las soluciones se procede a realizar medicin de

conductividad, pH y temperatura. Tabla N2

77

Tabla N2: Anlisis por triplicado para determinacin de conductividad, pH y

temperatura de muestras de concentracin conocida.

Concentracin Nmero

Muestra S

S

Promedio pH

pH

Promedio

Temperatura

(C)

Temperatura

Promedio

10ppm

1 13,1

13,40

9,28

9,23

21,6

21,6 2 13,5 9,30 21,6

3 13,6 9,12 21,6

20ppm

1 29,2

29,17

9,77

9,81

21,6

21,7 2 29,8 9,86 21,7

3 28,5 9,82 21,7

30ppm

1 45,5

45,63

10,06

10,06

21,7

21,7 2 45,8 10,09 21,7

3 45,6 10,03 21,7

40ppm

1 60,7

60,60

10,16

10,15

21,7

21,7 2 60,7 10,15 21,7

3 60,4 10,15 21,7

50ppm

1 76,3

76,23

10,26

10,27

21,7

21,7 2 75,3 10,27 21,7

3 77,1 10,28 21,7

Blanco 1 1,7 1,7 5,58 5,58 21,7 21,7

78

A partir de los datos obtenidos se comprueba la linealidad del detergente, esto permite

realizar pruebas in situ durante el proceso de limpieza del equipamiento, midiendo la

conductividad de muestras de enjuague, lo que permite determinar el grado de

detergente residual restante en el equipamiento. De esta manera, y de acuerdo al lmite

de concentracin de detergente permitido, se estipula que no se puede obtener un valor

mayor a 13,20 S/cm/21,7C ya que sera indicativo de que existe ms de 10ppm de

residuos de detergente en el equipamiento.

Grfico N1 Concentracin / S Promedio de detergente Diverflow 156

r 2= 0,9999

a = -2,121

b = 1,571

0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

70,00

80,00

90,00

0 10 20 30 40 50 60

(S/cm/21,7C) valor promedio

(ppm)

Lineal

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