Poruchy krvetvorby a krve Seminář

Poruchy krvetvorby a krve Seminář

Karel Šulc, Pavel Klener

Ústav patologické fyziologie1. LF UK

Obrázky krevních buněk a jejich změn k doplnění textu naleznete např. na této webové stránce:

- neoficiální verze pro studenty

Hemoglobin

Určení v objemové jednotce krve, tj. v erytrocytech i v plazmě.

Normální hodnotyženy: 125 – 155 g / 1 litr 12,5 – 15,5 g / 100 mlmuži: 135 – 175 g / 1 litr 13,5 – 17,5 g / 100 ml

Zvýšení: polycytémie, dehydratace

Snížení: anemie, hyperhydratace


Počet erytrocytů

udáván v množství x 1012/ 1 litr nebo x 109/ 1 ml nebox 106 / 1 μl

Normální hodnotyženy: 3,8 – 5,2 x 1012 / 1 litr muži: 4,2 – 5,8 x 1012 / 1 litr

Snížení: anemie, expanze ECT



Hematokrit

HTK udává procentuelní zastoupení formovaných krev-ních elementů v objemové jednotce krve

Normální hodnotyženy: 0,35 – 0,46 35 - 46 % muži: 0,38 – 0,49 38 – 49 %po narození: až 0,60 pak pokles, na počátku puberty0,39, na konci puberty návrat k normálním hodnotám

Snížení: anemie, expanze ECT



MCV – střední objem erytrocytu

Normální hodnota = 87,5 fl (80-96fl)

MCV je změněn u různých anomálií erytrocytů (srpkovitáanemie, poikilocytóza, anisocytóza a další). Je využívánk rozlišení normo-, mikro- a makrocytárních anemií

Výpočet: hematokrit x 103 / počet ery ( x 1012/ 1 litr)

Pozn.: téměř vždy je MCV určen analyzátorem


MCH - obsah hemoglobinu v 1 erytrocytu

Norma: 29 pg (28-33pg), 18 fmol

zvýšení: makrocytární anemie, snížení: mikrocytární anemie

Výpočet: MCH=Hb (v g / 100 ml krve) / ery (x 1012 / 1 litr)


MCHC = střední koncentrace Hb v erytrocytech

Norma = 34 +- 2 %

zvýšení: hereditární sférocytózanorma až mírné snížení: makrocytární anemiesnížení: mikrocytární anemie

Výpočet: MCHC = Hb (v g /100 ml krve)x 100 / hematokrit


Počet retikulocytů

je udáván v % všech buněk červené řady v krvi.

Norma: ženy i muži 0,5 – 1,5 %a) při intravitálním barvení (brilantkresylová modř) je podíl

RTC stanoven z nátěru b) stanovením průtokovou cytometrií jsou udány absolutní

hodnoty

Zvýšení: krvácení, hemolýza (kompenzační činnost dřeně)

Snížení až vymizení: útlum erytropoézy, útlum dřeně


Vyšetření kostní dřeně

Sternální punkce: z manubria sterniaspirace dřeňové krve umožňuje pouze provést cytologický rozbor (např. cytogenetika, FACS, molekulární biologie)

Trepanobiopsie: ze spina iliaca superior posterior: umožňuje kromě aspirace dřeňové krve též získat vzorek kostní tkáně- nezbytné pro provedení histologického rozboru kostní tkáně


Vyšetření kostní dřeně: hodnocení

• normo-, hypo-, hypercelularita, dysplazie kostní dřeně

• množství blastů, normálních a patologických sideroblastů

• rozlišení normálních a leukemických blastů (průkazenzymatických aktivit, chromozomových změn, membrá-nových diferenciačních znaků, onkogenů a další)


Stanovení erytropoetinu

Určení: metodou ELISA nebo RIA v séru nebo v plazmě

Snížená hladina (produkce): onemocnění ledvin, anemiez nedostatku erytropoetinu, karence proteinů, zvýšení

paO2, polycythaemia vera

Zvýšená hladina (produkce): sekundární polycytémie,snížení paO2, sideropenické a některé hemolytické anemie


Železo I.

Volné železo je pro organismus toxické. V přítomnosti vol-ného Fe vznikají volné kyslíkové radikály. Pokud vznikvolných radikálů přestane být řízen, vzniká oxidativní stres.

Obsah železa v těle = 50 – 70 mmolů, tj. 3 – 4 g.

Hemoglobin obsahuje 65 – 75 % Fe, myoglobin 3 – 5 %,enzymy s hemovou skupinou 0,2 %. V plazmě je 0,1 % vá-zaného na transferin, ve feritinu a hemosiderinu je 15 – 20 %železa.


Železo II.

Resorpce: duodenum, horní část tenkého střeva. Denní resorpce:asi 18 μmolů Fe (1 mg), jsou tak uhrazeny denní ztráty.

Výdej: není regulován.

Resorpce závisí na 1) erytropoetické aktivitě kostní dřeně, 2) na stavuželeza v zásobárnáchZtráty závisejí na obsahu feritinu v deskvamovaných buňkách.

Jakmile je železo resorbováno, stane se součástí uzavřeného systémuplazma – kostní dřeň – erytrocyty – zásobárny.

Zásobní železo je uloženo ve formě feritinu a hemosiderinu


Stanovení Fe v séru

Tranzitní pool Fe je stanovován jako sérové železo (veškeré železo je vázáno na transferin) a jako TIBC (celková vazebná kapacita železa).

Norma:

novorozenci 17,90 – 44,75 μmol / 1 litrděti 8,95 – 21,48 μmol / 1 litrženy 7,16 – 26,85 μmol / 1 litrmuži 8,95 – 28,64 μmol / 1 litr


TIBC (celková vazebná kapacita železa)

Norma:

44,75 – 71,60 μmol / 1 litr

Zvýšené hodnoty TIBC jsou při sníženém Fe v séru (více neobsazeného transferinu).


% saturace trasferinu(někdy se udává jako % saturace Fe)

Výpočet:hladina sérového železa : TIBC

Norma:

20 – 55 %

Snížené hodnoty při deficitu Fe. Snížení saturace transferinu spolu s nízkými hodnotami TIBC: hemochromatóza, hemosideróza, onem. jater


Feritin v séru

Hodnota slouží k posouzení stavu zásob železa v organismu.

Norma: μg / 1 litr nebo ng / mlnovorozenec25 – 2001. měsíc 200 – 6006. měsíc – 15 let 7 – 140ženy 12 – 150muži 15 – 150 Snížení: lze detekovat již v počátečních stadiích sideropenické anemieZvýšení: u anémií chronických chorob či nádorů


Sérový (solubilní) transferinový receptor (sTfR

Hladina je stanovovována pomocí ELISA nebo firemníchkitů.

Zvýšení: deficit železa, intenzivní erytropoéza (hemolytickéanemie, β-thalasemie, polycytémie) = zvýšená exprese TfRna buněčných membránách

Snížení: útlum kostní dřeně, chronické selhání ledvin

Pozn.: sTfR vzniká proteolýzou TfR na specifickém místě extracelulár-ní domény, vznikne monomer detekovatelný v plazmě nebo v séru. Mezi TfR a sTfR je konstantní vztah, sTfR je nepřímým ukazatelemexprese TfR v organismu.


Počet leukocytů

Udává se v množství x 109 / 1 litr; x 106 / ml; x 103 / μl

LeukocytózaFyziologická: zvýšená tělesná námaha, gravidita, novoro-zenciOstatní příčiny:akutní infekce, nekróza tkáně, krvácení, zvýšená produkceACTH a glukokortikoidů (i po podání), leukemoidní reakce,stres, intoxikace

Leukopenieodsun zejm. granulocytů do okrajové hotovosti, inefektivnígranulopoéza, hypersplenismus, protilátky proti leukocytům,útlum kostní dřeně


Rozpočet bílých krvinek (diferenciální krevní obraz)Zjišťuje se zastoupení buněk bílé řady (PMNC i MNC) v nátěru.

Granulocytóza - neutrofilní granulocyty

Eozinofilie – zejm. u alergických stavů, při onemocněnípojiva („kolagenózy“), u kožních onemocnění (pemphigusvulgaris, dermatitis exfoliativa), u parazitárních onemocnění Eozinopenie – zvýšená produkce ACTH a glukokortikoidů,začátek těžkých infekcí

Bazofilie – při CML, Hodgkinově nemoci, pravé polycyté-mii, diabetes, hypertyreózaBazopenie – zvýšená produkce ACTH a glukokortikoidů


Změny množství lymfocytů

Lymfocytóza

zejm. virové infekce

infekční mononukleóza

inf. cytomegalovirové

ALL, CLL

Lymfopenie

zvýšení ACTH

ozáření

cytostatika

lymfangiektazie v GIT

drenáž dct. thoracicus(porušení stěny nádorem)


Stanovení některých enzymatických aktivit I.

Alkalická fosfatáza (ALP)

normální (nízká) aktivita - v normálních blastech a granulo-cytech

zvýšená aktivita – stres, zvýšení glukokortikoidů, gravidita,polycythaemia vera

snížená až nulová aktivita – CML, PNH, MDS


Stanovení některých enzymatických aktivit II.

Kyselá fosfatáza

nulová aktivita – normální blastynízká aktivita – AML, CLLzvýšená aktivita – CML

Peroxidázová aktivita

nulové hodnoty – normální blastyzvýšené až vysoké hodnoty – MDS, AML


Stanovení některých enzymatických aktivit III.

Aktivita nespecifických esteráz

charakteristická pro monocyty(umožnění přesnější diagnostiky leukemií s monocytárnímirysy)

nulová aktivita = monocytoblasty


Průtoková cytometrie (flow cytometry) a FACS

Průtoková cytometrie – technika umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzo-vat částice – buňky – v suspenzi. Pomocí definovaných parametrů dovolujecíleně separovat buňky na základě jejich fyzikálních a chemických vlastností (např.obsahu DNA, množství granul, pH ICT apod.) a po obsazení povrchu buněk mono-klonální protilátkou studium povrchových molekul diferenciačních antigenů, intra-celulárních molekul včetně cytokinů apod.

FACS (Fluorescence-activated-cell-sorting) je jednou ze základních aplikací průto-kové cytometrie umožňující třídění buněčné suspenze do dvou i více frakcí. Tříděníje založeno na odlišném rozptylu světla a fluorescenční charakteristice jednotlivébuňky v suspenzi.

Užití v hematologii:Průtoková cytometrie umožňuje provádět analýzu vybrané buněčné populace např.určení membránových diferenciačních znaků, expresi leukocytárních markerů vprůběhu hematopoetické diferenciace, imunofenotypizaci při myeloproliferativníchonemocněních, analýzu DNA apod.


Průtoková cytometrie - FACS

Rozdělení buněčných populacípomocí FACS


Některé membránové diferenciační znaky

• CD3 – T-lymfocyty, TCR (T-cell receptor)

• CD4 – pomocné T-lymfocyty

• CD7 – T-lymfocyty, NK buňky

• CD8 – cytotoxické/supresorové T-lymfocyty, NK buňky, thymocyty

• CD21, CD22 – prekursory a zralé B-lymfocyty

• CD34 – prekursory krvetvorných buněk

• CD50 – granulocyty

• CD52 – eozinofilní granulocyty

• CD61 – trombocyty, megakaryocyty

• CD70 – Reedové-Sternbergovy buňky, aktivované B- a T-lymfocyty

• CD77 – buňky Burkittova lymfomu, aktivované B-lymfocyty


Poruchy krvetvorby a krve Seminář

Documents

Transcript of Poruchy krvetvorby a krve Seminář