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UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

CARRERA QUIMICO BIOLOGO PRCTICA NMERO 1

PLAN DE ESTUDIOS 2011 2012

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA LABORATORIO DE HEMATOLOGA I DURACIN

NOMBRE DE LA PRCTICA BIOSEGURIDAD

1 INTRODUCCIN Son todos los procedimientos y acciones que garantizan una mejor calidad de vida, tanto del profesional, del paciente y del medio ambiente. METODOS DE BARRERA

Bata Guantes Cubrebocas Gorro Gafas Careta Peto

CONSIDERACIONES PARA SU PROTECCIN PERSONAL Todas las muestras de especmenes biolgicos deben considerarse potencialmente infecciosas. Vacunarse contra los principales agentes infecciosos. Procurar no producir "salpicaduras" con la muestra obtenida. Debe limpiarse y desinfectarse cualquier superficie contaminada por algn espcimen biolgico. Lavarse las manos correctamente, despus de haber tenido contacto con cada paciente y al concluir cualquier procedimiento. No deben ingerirse comidas, bebidas, goma de mascar o fumar durante los diferentes procedimientos en el Laboratorio.

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Vigile que los elementos de trabajo estn en perfectas condiciones fsicas. Algn elemento en mal estado, podra causarle una herida. ESTERILIZACIN Proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida de los microorganismos de un objeto o de una sustancia para evitar su reproduccin. ASEPSIA: Libre de microorganismos. MTODOS DE ESTERILIZACIN Comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos y preferentemente qumicos, que se emplean para destruir grmenes patgenos. A travs de esta, los materiales quirrgicos y la piel del enfermo alcanzan un estado de desinfeccin que evita la contaminacin operatoria. Hay varias formas de esterilizar como: MTODOS QUMICOS Estos mtodos provocan la prdida de viabilidad de los microorganismos. Hipoclorito de Sodio: Es el ms utilizado por su fcil adquisicin y por su efectividad en la desinfeccin. Vida media 20 minutos. xido de etileno: Destruye todos los microorganismos incluso virus. Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas. Estos compuestos destruyen las esporas. Glutaraldehdo: Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Formaldehdo: Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 horas. Gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma. Alcohol: Esteriliza superficies, pero se evapora fcilmente. MTODOS FSICOS Calor: La utilizacin de este mtodo y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los

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microorganismos. Calor Hmedo: El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Autoclave Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de Chamberland. Esteriliza a 121 C, 15Lb de presin, por 20 minutos. Calor seco: El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txico por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estufas -Hornos Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Radiaciones: Su accin depende de:

El tipo de radiacin El tiempo de exposicin La dosis

Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos. Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Filtracin: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra.

2

OBJETIVOS

El alumno adquirir y aplicar los conocimientos necesarios en bioseguridad en el laboratorio de Hematologa tiles para su seguridad y la de los dems y el medio ambiente.

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3

FUNDAMENTO

4 A

PROCEDIMIENTO EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO Bata Guantes Tapabocas Gorro Gafas Careta Alcohol Torundas Agujas vacutainer Jeringas Ligaduras Tubos con tapn morado Tubos con tapn rojo DESARROLLO DE LA PRCTICA CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

B C

5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES El elemento clave para prevenir las infecciones adquiridas, los incidentes y los accidentes en el laboratorio es un personal preocupado por la seguridad tanto propio como la de los dems, as como del medio ambiente en el cual nos desarrollamos. Es importante estar bien informado sobre la manera de reconocer y combatir los peligros

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que entraa nuestro trabajo en el laboratorio de Hematologa. Debemos aplicar en todo momento las medidas de Bioseguridad aqu expuestas, ya que de ello depende nuestro bienestar.

6

ANEXOS

1.- Qu es la Bioseguridad? 2.- Menciona que significa cada una de las siguientes siglas RPBI 3.- Menciona las normas de seguridad en el laboratorio de Hematologa. 4.- En donde se desecha todo el material que se utiliza en el laboratorio?. 5.- Menciona si conoces la forma de esterilizar los materiales del laboratorio.

7

REFERENCIAS

http://www.mografias.com/trabajos13/manubio.shtml http://capra.iespana.es/capra/bioseguradad/bioseguridad.html http://www.qb.fcen.uba.ar/microinumo/higieneyseguridad.htm Koneman, E. Diagnostico microbiolgico, Editorial mdico panamericana, 110 - 111.

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CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGOPRCTICA NMERO

2011 2012

HEMATOLOGIA IFECHA DURACIN Y

NOMBRE DE LA PRCTICA

2 1

PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION INTRODUCCIN

Para una gran cantidad de estudios que requieren muestras sanguneas, se deben conservar condiciones de ayuno. En algunos casos, el ayuno debe prolongarse como mnimo seis horas y en ocasiones durante doce horas. Finalmente, muchos estudios de laboratorio clnico no requieren de estas condiciones y pueden practicarse en cualquier momento. Otros estudios, necesitan adaptarse a ciertos tiempos de recoleccin de especimenes. En cualquiera de los casos, deben seguirse las siguientes indicaciones generales, a saber: La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plstico estriles (preferiblemente tubos al vaco). En caso de recolectar la sangre con jeringa y agujas estriles, deben llenarse los tubos con precisin y agilidad, evitando en todo momento realizar procedimientos bruscos que puedan producir rompimiento de las clulas sanguneas (hemlisis). En otro tipo de estudios, la sangre no se deposita en tubos, sino en otro tipo de recipientes (p.ej., frascos de hemocultivo ). Al recolectar la sangre, debe permitirse que se coagule, si es el caso, o someter los tubos con la muestra a ciertas maniobras recomendadas para evitar su coagulacin. En otras ocasiones, tan solo se colocan unas pequeas gotas de sangre en lminas portaobjetos de vidrio, (extendidos de sangre perifrica), en capilares de vidrio o en placas de vidrio o plstico de origen comercial para la realizacin de algunos estudios.

2 OBJETIVOS El alumno tendr la capacidad de aprender y practicar la obtencin de sangre perifrica por medio de puncin venosa y puncin capilar.

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO 3 fundamento Una buena toma y recoleccin de la muestra nos permite brindar resultados confiables al paciente.

4 a

procedimiento equipo, material y reactivos necesarios torniquete jeringas vacutainer lancetas torundas ligaduras de hule isodine alcohol tubos de ensaye porta objetos

material de apoyo

B

DESARROLLO DE LA PRCTICA

PUNCION DE LA PIEL: Se refiere sangre de los capilares para frotamiento de la sangre perifrica. 1.- la sangre capilar se obtiene de: a) en los adultos, de la punta de un dedo o del lbulo auricular. b) en los lactantes, del dedo grueso del pie o del taln. c) en nios de mas de un ao de edad, de la punta de un dedo. el sitio de la puncin se lava con algodn desinfectante (alcohol al 70%), se seca con una gasa estril y se punciona la piel a una profundidad no mayor de 2 mm con una lanceta desechable estril. si se usa providona-yodo se deja secar para que sea eficaz. la primera gota de sangre se enjuaga con una gasa estril y las gotas subsiguientes se recogen en un microtubo y en lminas portaobjetos. Alerta clnica. Evite exprimir la extremidad para obtener sangre, porque al hacerlo puede alterar la composicin de la sangre. Venipuntura. La venipuntura o puncin venosa es un procedimiento necesario para la mayor parte de las pruebas que

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO requieren anticuagulacion y grandes cantidades de sangre. Es la puncin de una vena con una aguja adaptada a una jeringa. 1.- La sangre venosa se obtiene generalmente de la vena anticubital, aunque tambin de otras venas. No hay variacin en los valores sanguneos si las muestras proceden de venas diferentes. 2.-Se coloca un torniquete y se ajusta sobre el brazo para causar congestin venosa y evitar retorno de la sangre. 3.- Se pide al paciente que cierre el puo y abra y cierre su mano varias veces. 4.- Se limpia el sitio de puncin con alcohol al 70% y se seca con gasa estril. 5.- La vena se punciona limpiamente, sea con una aguja estril adaptada a una jeringa o con un sistema vacutainer. Nota: las dimensiones de la aguja y la jeringa dependen de la cantidad que se necesita as como el tamao e integridad de la vena que se usa. Adems en muchos hospitales se utiliza vacutainer por ser el mas barato, dicho sistema consiste en un tubo al vaci, un manco y una aguja recolectora de muestras mltiples. 6.- Despus que se ha entrado a la vena, la sangre llenar los tubos vacos del sistema vacutainer. Sin embargo si se usa una aguja y jeringa se necesita una ligera succin con esta para obtener la muestra. Una succin excesiva suele causar colapso de la vena. 7.- Quite la aguja y aplique gasa estril con presin para detener el sangrado. Cubra la puncin con una cinta adhesiva. 8.- El anticoagulante necesario depende de la prueba que vaya a realizarse. En general en la mayor parte de las pruebas hematolgicas se utiliza cido etilendiaminotetraactico (EDTA) como anticoagulante. Las pruebas se hacen en sangre entera bien mezclada. Aun ligeramente coagulada la sangre, la prueba carece de valor.

C

CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

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5

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

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ANEXOS

CUESTIONARIO 1. Mencione tres ventajas y tres de una puncin capilar. 2. Mencione tres ventajas y tres desventajas de una puncin venosa. 3. Cuales son los tipos de eleccin para llevar acabo una puncin capilar y una puncin en nios? 4. Que determinaciones hematolgicas se efectan en un frotis sanguneo? 5. Mencione cinco tipos de anticoagulantes empleados en hematologa? 6. Cuantos tipos de tubos vacutainer existen y que indica el color del tapn?

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REFERENCIAS

1. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.2. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 3. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 4. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 5. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

8 MECANISMO DE EVALUACIN Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin. La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

10

MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

11

DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGOPRCTICA NMERO

2011 2012

HEMATOLOGIA IFECHA DURACIN Y

NOMBRE DE LA PRCTICA

3 1

BIOMETRIA HEMATICA CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA SANGUINEA POR EL METODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA. INTRODUCCIN

La hemoglobina es el componente primordial de los eritrocitos, es una protena conjugada, constituida por cuatro molculas de globina y un grupo hemo llevndose a cabo las siguientes funciones: 1.- la hemoglobina es el responsable de llevar a cabo el intercambio gaseoso de oxigeno y bixido de carbono manteniendo as la importante funcin de la respiracin celular en el organismo. 2.- la hemoglobina participa adems en el equilibrio acido bsico y en la regulacin del ph. se utilizan diferentes mtodos para la cuantificacin de hemoglobina, entre los que podemos citar: a) Mtodos gasomtricos: en los que cuantifica la capacidad de oxigenacin de la sangre, mide solamente la hemoglobina funcional, por lo que resulta inexacto ya que del 2 12 % de la hemoglobina del adulto normal puede encontrarse inactiva ( es decir, incapaz de combinarse con el oxigeno) la cual puede ser regenerada y por lo tanto medida, adems resulta complicado para el trabajo rutinario del laboratorio. b) Mtodos qumicos: se cuantifica el contenido de hierro en la sangre ya que se considera que esta unido en su totalidad a la hemoglobina, aunque existe un cierto margen de error al no considerar el hierro srico. c) Mtodos colorimtricos: hay varios mtodos que se emplean para la determinacin de hemoglobina basada en la comparacin visual o fotocolorimtrica de la intensidad de color del problema estndar, entre los que podemos citar: mtodos directos de compatibilidad, mtodo de la hematina acida, mtodo de la oxihemoglobina y mtodo de la cianometahemoglobina.

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO El mtodo de la cianometahemoglobina es el de eleccin ya que a diferencia de otras tcnicas permite determinar todas las variedades de hemoglobina con la visin de un solo reactivo, el reactivo de Drabkin que al reaccionar con oxihemoglobina carboxihemoglobina, hemoglobina reducida, con excepcin de la sulfametohemoglobina da como resultado la formacin de cianometahemoglobina.

2

OBJETIVOS

Efectuar una de las tcnicas mas utilizadas dentro de los laboratorios de diagnostico clnico en la cuantificacin de hemoglobina sangunea auxilindose para ello de una curva de calibracin.

3

FUNDAMENTO

La hemoglobina reacciona con el ferricianuro y forma metahemoglobina, la cual con el cianuro de potasio da lugar a la formacin de cianometahemoglobina, compuesto colorido muy estable que se lee fotoelctricamente.

4 A

PROCEDIMIENTO EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS pipeta de sahli pipeta volumtrica ( 5 ml) tubos de 13 x100 ligadura con boquilla gradilla metlica espectrofotmetro

MATERIAL DE APOYO

Reactivos: reactivo de drabkin estndar de hemoglobina Muestra biolgica:

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO sangre con anticoagulante

B

DESARROLLO DE LA PRCTICA

PROCEDIMIENTO PARA LA CURVA DE CALIBRACIN Etiquetar una serie de tubos de ensaye o cubetas como sigue: b (blanco), 4, 8, 16, 20. pipetear los siguientes volmenes de la solucin valorada de cianometahemoglobina (sol. estndar) y del diluyente reactivo de drabkin) dentro de los tubos correspondientes y mezclar bien, de acuerdo a la tabla que a continuacin se presenta.

CONC. Hb GR % 4 grs 8 grs 12 grs 16 grs 20 grs

mL DILUYENTE 4 3 2 1 0

mL ESTNDAR 1 2 3 4 5

dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente. leer en espectrofotmetro a 540 nm. usando reactivo de drabkin como blanco tubo b. graficar en papel milimtrico la absorbancia de cada solucin valorada en el eje de las ordenadas (y), contra las concentraciones, en el eje de las abscisas (x). procedimiento para la muestra problema 1. obtener sangre venosa y mezclar perfectamente con un anticoagulante. 2. llenar la pipeta de sahli con la sangre as tratada hasta la marca de 20, equivalente a 0.20 ml (20 microlitos) 3. depositar la sangre en un tubo de ensaye que contenga 5 ml de reactivo de drabkin. 4. homogeneizar mediante burbujeo, dejar reposar 10 minutos a temperatura ambiente. 5. leer en espectrofotmetro a 540 nm. 6. interpolar la lectura de absorbancia (a) del problema en la curva tipo, para conocer la concentracin de la hemoglobina 7. la concentracin de hemoglobina en el problema tambin puede conocerse mediante el uso de la formula. D.O PROBLEMA X CONC. DELESTANDAR (g %)

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO CONCENTRACION DEL PROBLEMA, g % =-----------------------------------------------------------------------D.O ESTANDAR C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

REPORTE a. anotar el nombre de la persona a quien se hizo la determinacin b. cifras de Hb obtenidas en la muestra problema, expresadas en g/ 100ml. c. sacar un promedio de los valores obtenidos para hombres y un valor promedio para mujeres del grupo. d. anexar la grafica de la curva tipo obtenido e. realice el calculo de las concentraciones utilizadas para la curva de calibracin (4, 8, 12, 16 y 20 g/dl).si su estndar primario es de 80 mg/dl (frasco de 17 ml)

5

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

6

ANEXOS

CUESTIONARIO 1.-Mencione las ventajas y desventajas de la tcnica de la cianometahemoglobina 2.-Diga cuantos tipos de hemoglobina se pueden determinar? 3.-Describa como se lleva a cabo la formacin de hemoglobina y su destruccin y eliminacin del organismo.

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REFERENCIAS

6. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.7. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000.

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO 8. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 9. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 10. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

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MECANISMO DE EVALUACIN

Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin. La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGO

2011 2012

HEMATOLOGIA I

PRCTICA NMERO

NOMBRE DE LA PRCTICA

FECHA DURACIN

Y

BIOMETRIA HEMATICA, DETERMINACION DE HEMATOCRITO Y DE VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR 1 INTRODUCCIN Una de las determinaciones que incluye una biometra hemtica es el hematocrito que se lleva a cabo para medir el volumen celular despus de haber centrifugado la sangre y puede emplearse como una prueba simple para el diagnostico de anemias. El hematcrito es el volumen de eritrocitos expresado como un porcentaje del volumen de sangre total. Los mtodos ms usuales son el macromtodo con tubos de Wintrobe y microhematcrito con tubos capilares. Otra determinacin muy importante que se lleva a cabo dentro del grupo de anlisis que forman parte de una biometra hemtica es la velocidad de sedimentacin globular que esta basada en la tendencia que tienen los glbulos rojos a sedimentarse con mayor rapidez en algunos estados patolgicos, por lo general se encuentra alterada en procesos inflamatorios, pero en realidad suele estar relacionada con una gran variedad de alteraciones orgnicas sobre todo en aquellas que implican alteracin sistemtica. Esta determinacin tiene algunas limitaciones, como son su inespecificidad y su inconsistencia pero en algunos casos puede tener un alto valor diagnostico y pronostico. Adems es importante considerar los estados en las cuales las VSG presenta una aceleracin que puede considerarse fisiolgicamente normal como el embarazo desde el segundo o tercer mes, en el puerperio, en el lactante de pocos meses, en la vejes, e incluso despus de un bao excesivamente caliente. 4

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2 OBJETIVOS El alumno va determinar en el laboratorio el hematocrito y la velocidad de sedimentacin globular, parmetros de una biometra hemtica que proporcionan datos muy importantes para orientar a un diagnostico determinado.

3

FUNDAMENTO

4 A

PROCEDIMIENTO EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS tubos de wintrobe tubos capilares tubos de hemlisis con anticoagulante pipeta pasteur o cnula metlica. bulbo de hule gradilla de plastilina gradilla de sedimentacin microcentrfuga macrocentrfuga

MATERIAL DE APOYO

B

DESARROLLO DE LA PRCTICA

HEMATOCRITO (HTO) MACROMETODO: METODO DE WINTROBE. a) Se obtiene sangre venosa, se coloca en un tubo con anticoagulante y se mezcla por inversin. b) se llena el tubo de hematocrito de una sola vez hasta la marca de 10 evitando la formacin de

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO burbujas. c) Se centrifuga a 3000 rpm durante 30 minutos. d) la altura de la columna de glbulos rojos se toma como valor hematocrito y se multiplica por 100 para expresarlo en valor porcentual. micromtodo: se utilizan tubos capilares de 1 mm de dimetro interno y 75 mm de longitud. a) la sangre sube por capilaridad en el tubo y se lleva hasta las dos terceras partes dejando sin llenar aproximadamente 15 mm del capilar. b) el extremo seco del capilar se cierra con plastilina o ala llama de un mechero. c) se centrifuga en microcentrfuga durante 5 minutos a 10 000 rpm. d) se lee el valor del hematocrito en una escala directa, en algn dispositivo diseado para esta lectura omitiendo y empleado la siguiente formula (regla de tres). VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG) a) Se llena el tubo de wintrobe hasta la marca de 10 cm. b) Dejar reposar en posicin vertical a temperatura ambiente durante 60 minutos. c) Hacer lectura cada 15 minutos hasta completar los 60 minutos. d) El valor se expresa en mm/hr. VALORES NORMALES HTO: MUJERES 37 47 % HOMBRES 42 52 % VSG : MUJERES 0 20 mm/hr HOMBRES 0 9 mm/hr C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

5

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

Un valor bajo del hematcrito (HCT) suele ser signo del padecimiento de una anemia. Sin embargo, hay falsos descensos del HCT ocasionados por hemodilucin (por ejemplo, el de la hidremia* del embarazo).

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Paradjicamente, el HCT suele ser normal en la fase ms temprana de las hemorragias agudas, pues en stas se pierden clulas y plasma en la misma proporcin. Un valor alto del HCT suele ser signo del padecimiento de una poliglobulina. Sin embargo, tambin hay engaosos ascensos del HCT producidos por hemoconcentracin (por ejemplo, el de la deshidratacin). La VSG, fisiolgicamente, en determinadas circunstancias. As pues, es ms alta en la mujer, y aumenta en la vejez y a partir del tercer mes del embarazo. En esta ltima circunstancia, sus valores vuelven a la normalidad, un mes despus del parto. El aumento de las protenas (sobre todo el del fibringeno y el de las globulinas 2, y ) produce una alteracin en las propiedades fisicoqumicas del plasma que conlleva un bloque de las cargas elctricas negativas de los hemates. Este bloqueo acarrea un apilamiento de los eritrocitos y, por tanto, una formacin de agregados de glbulos rojos. Los agregados hemticos, al ser ms pesados y al tener un rea superficial ms baja (en comparacin con su volumen) que los hemates aislados, descienden ms fcilmente mientras el plasma asciende.6 ANEXOS

1. Cual es la importancia de la determinacin de hematocrito, desde el punto de vista de 2. 3. 4. 5. 6. 7.diagnostico clnico? Indique otros mtodos para calcular el valor del hematocrito. Que ventajas y desventajas tienen el microhematcrito con respecto al macrohematcrito? Enumere tres padecimientos en los cuales se encuentra alterado el hematocrito. A que se deben los cambios en la sedimentacin de los glbulos rojos? Mencione 5 padecimientos en los que sed encuentra elevada la VSG. Como se realiza la correccin de la VSG en padecimientos con anemia.

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REFERENCIAS

11. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.12. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 13. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 14. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 15. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

8 MECANISMO DE EVALUACIN Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin. La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGO

2011 2012

HEMATOLOGIA I

PRCTICA NMERO

NOMBRE DE LA PRCTICA

FECHA DURACIN

Y

5 RECUENTO DE RETICULOCITOS 1 INTRODUCCIN El reticulocito es la forma que antecede al eritrocito en el proceso de produccin y desarrollo denominado eritropoyesis que tiene lugar en la mdula sea. Los reticulocitos son mayores que los eritrocitos maduros y son viscosos, por lo que permanecen en la

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO medula dos o cuatro das antes de ser liberados a la sangre, donde continan su proceso de maduracin para dar origen a los eritrocitos. En una extensin sangunea teido con azul de cresilo o nuevo azul de metileno, el acido ribonucleico residual contenido en el reticulocito aparece como una delicada red azul de fibrillas y puntos. El recuento de reticulocitos o eritrocitos jvenes es de gran valor para estudiar la capacidad de regeneracin medular en algunos casos de anemia y puede revelar la liberacin prematura desde la medula a la sangre, de eritrocitos jvenes denominados reticulocitos desviados, que se identifica fcilmente en el frotis sanguneo por su mayor tamao y la coloracin azulada del citoplasma, la presencia de este tipo de clulas esta relacionada en forma importante con problemas de anemia muy intensa. 2 OBJETIVOS El objetivo de esta prctica es que el alumno logre conocer, identificar y cuantificar los reticulocitos en el laboratorio, empleando una tcnica especial de coloracin. Para evaluar indirectamente la eritropoyesis. 3 FUNDAMENTO

4 A

PROCEDIMIENTO EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS

MATERIAL DE APOYO

tubos 1 de 13 x 100 con anticoagulante pipeta pasteur reactivo para teir reticulocitos ( nuevo azul de metileno) microscopio porta objetos MUESTRA BIOLOGICA: sangre con anticoagulante B DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Poner 6 gotas del colorante para reticulocitos en un tubo de 13 x 100. aadir 6 gotas de sangre

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO venosa o capilar y mezclar. 2. mezclar e incubar 15 minutos a 37 grados centgrados. 3. Decantar el sabrenadante y hacer frotis con el sedimento. 4. Dejar secar el frotis observar a 100x x y contar el numero de reticulocitos en 500 clulas. OPCIONAL: Teir el frotis con el mtodo de Wright y contar el nmero de reticulocitos por cada 100 eritrocitos.

C

CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

VALORES NORMALES R.N. 2.5 6.5 % (SEGUNDA SEMANA DE VIDA) ADULTOS 0.5 1.5 % VALOR ABSOLUTOI : 24 000 84 000 RETICULOCITOS / MICROLITRO. CALCULOS RETICULOCITOS (%) = RETICULOCITOS CONTADOS X 100/5 00 % DE RETICULOCITOS X NUM. G.R / mm 3 RECUENTO RETICULOCITARIO ABSOLUTO= ---------------------------------------------------------------100

% DE RETICULOCITOS X HTO DEL PACIENTE PORCENTAJE ABSOLUTO = ------------------------------------------------------------------HTO. NORMAL ( 45 % )

PORCENTAJE ABSOLUTO DE RETICULOCITOS RECUENTO CORREGIDO DE RETICULOCITOS = -------------------------------------------------------------------TIEMPO DE MADURACION( 2 DIAS )

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5

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

6 ANEXOS CUESTIONARIO 1. Cual es el fundamento de la tcnica de coloracin del nuevo azul de metileno para reticulocitos. 2. Como se prepara el reactivo para coloracin de reticulocitos ( nuevo azul de metileno) 3. Mencione tres casos en los que se encuentre elevado el porcentaje de reticulocitos y tres casos en los que se encuentre disminuido 4. Como se realiza la correccin del porcentaje de reticulocitos y como se calcula el numero total de reticulocitos 5. Indique otro reactivo para teir reticulocitos y su mtodo de preparacin. 6. Porque se utilizan estos colorantes, explicar.

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REFERENCIAS

16. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.17. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 18. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 19. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 20. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

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MECANISMO DE EVALUACIN

Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin.

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

10

MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

11

DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGO

2011 2012

HEMATOLOGIA I

PRCTICA NMERO

NOMBRE DE LA PRCTICA

FECHA DURACIN

Y

6 1

BIOMETRIA HEMATICA, RECUENTO DE ERITROCITOS Y DETERMINACION DE CONSTANTES HEMATOLOGICAS. INTRODUCCIN

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO Dada la importante funcin en el organismo al llevar a cabo el intercambio gaseoso que permite mantener el equilibrio dinmico la respiracin celular y as mismo favorecer las funciones metablicas del organismo, su cuantificacin en el laboratorio permite correlacionar sus alteraciones con diversas patologas, sobre todo en el caso de anemias y policitemias en donde es muy importante conocer el numero d eritrocitos por mm3, que presenta el paciente. Adems del nmero de eritrocitos por mm3, el valor hematocrito la cuantificacin de la hemoglobina, las constantes hematolgicas denominadas tambin constantes de wintrobe, son parmetros que nos van a ayudar en la diferenciacin de los distintos tipos de anemias, por lo que es muy importante su determinacin. 2 OBJETIVOS Determinar el numero de eritrocitos por mm3 y las constantes hematolgicas, parmetros muy importantes, para el diagnostico de anemias. 3 FUNDAMENTO

4 A

B

PROCEDIMIENTO EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS tubos de wintrobe; 13 x 100 con anticoagulante pipeta de Thoma para glbulos rojos liquido diluyente (Hayem o Gower) tubo de gama con boquilla agitador de pipetas Thoma cmara de Neubauer o hematmetro cubrehematimetro microscopio DESARROLLO DE LA PRCTICA

MATERIAL DE APOYO

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1. Si se trata de sangre venosa debe utilizarse perfectamente mezclada con anticoagulante pero sies sangre capilar, se toma directamente dejando que fluya libremente en la pipeta de Thoma para glbulos rojos. 2. Se aspira con la pipeta de Thoma para glbulos rojos hasta la marca de 0.5 si se pretende hacer una dilucin 1:200 y hasta la marca de 1 volumen si se desea obtener una dilucin final de 1:100) el llenado hasta la marca debe ser exacto y debe estar libre de burbujas, si se excede ligeramente del volumen que se pretende obtener, se puede eliminar el exceso con pequeos golpecitos sobre una gasa seca. 3. Se limpia perfectamente la sangre adherida a la parte externa de la pipeta antes de introducirla en el lquido diluyente, para aspirarlo hasta de 101, es en esta fase donde se obtiene la dilucin 1:200 o 1:100 dependiendo de la cantidad de sangre utilizada. NOTA: Si al hacer la dilucin se forman burbujas en la ampolla de la pipeta o se excede de la marca 101, debe desecharse todo el contenido y repetir la dilucin en una pipeta limpia y seca. es mas frecuente utilizar la dilucin, de 1:200) con excepcin de anemias muy severas en las que es necesario hacer dilucin 1:100 para mejores resultados. 4.-Se tapan ambos extremos de la pipeta y se agita durante 30 segundos para facilitarse la mezcla inicial, si la sangre es capilar y se ha tomado directamente deben hacerse rpido estas maniobras. Para evitar que la sangre se coagule antes de mezclarse con el liquido diluyente. 5.-En un dispositivo diseado exclusivamente para agitar las pipetas de Thoma, se coloca esta en posicin horizontal y se agita durante 2 o 3 minutos. 6.- se eliminan las tres o cuatro primeras gotas ya que constituyen solo lquido de dilucin sin clulas. 7.- se procede al llenado de la cmara de Neubauer cuidando que el lquido llene por completo el espacio situado por debajo del cubrehematimetro sin que ninguna porcin se haya deslizado al foso central y sin que se formen burbujas. 8.- Se dejan sedimentar las clulas durante algunos minutos pero evitando que haya evaporaciones hace la observacin microscpica en objetivo de bajo aumento para demostrar una distribucin homognea de las clulas en la cuadricula. 9.-Se hace el recuento de los eritrocitos en cinco de los 25 cuadros centrales que tiene a su vez 16 cuadrados mas pequeos tomando en cuenta que o para evitar confusiones al contar las clulas sobre las lneas superior e izquierda estas deben considerarse como si estuvieran dentro de los cuadrados pero las lneas derecha e inferior del cuadrado no deben contarse, de esta forma, se evitan contar dos veces a una misma clula.

C

CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

CALCULOS: si se contaron 5 cuadros de los 25 num. g.r/ mm3 = num. g.r x 1000

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VALORES NORMALES MUJERES 4 200 000 5 500 000 G.R/ mm3 HOMBRES 4 500 000 6 000 000 G.R / mm3 CONSTANTES HEMATOLOGICAS O DE WINTROBE: VGM= EL VGM ES EL VOLUMEN MEDIO DE LOS ERITROCITOS INDIVIDUALES. HEMATOCRITO % X 10 VGM = --------------------------------------NUM. G.R/ mm3 VALOR DE REFERENCIA VGM= 80 94 mm3 HCM = EL HCM ES EL CONTENIDO DE HEMOGLOBINA EN UN ERITROCITO INDIVIDUAL. HEMOGLOBINA ( g/dl) X 10 HCM = ------------------------------------------------NUM. G.R /mm3 VALOR DE REFERENCIA HCM = 27 32 pg CMHC = LA CMHC ES LA CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR POR 100 ml DE ERITROCITOS CONCENTRADOS. Hb (g%) X 100 CMHC = -------------------------HTO (%) VALOR DE REFERENCIA CMHC = 32 37 % NOTA: Es muy importante la observacin morfolgica de los eritrocitos en un frotis sanguneo para compararla con los ndices de las constantes de wintrobe con el fin de lograr mayor precisin y exactitud en las valoraciones hematolgicas.

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5

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

6 ANEXOS EJERCICIO: INDIQUE 3 CASOS EN LOS QUE SE OBTENGAN VALORES DE VGM, CMHB, HbCM PARA CLASIFICAR UNA ANEMIA: a) microcitica hipocromica b) normocitica monocromica c) normocitica hipocromica d) MACROCITICA CUESTIONARIO 1.- Mencione la composicin qumica de los tres lquidos empleados en la cuantificacin de glbulos rojos. 2.- Esquematice la cuadricula de la cmara de neubauer donde se realiza el recuento de eritrocitos. 3.- Explique como se obtiene el factor de 10 000 de los glbulos rojos. 4.- Cual seria el factor si realiza un recuento en a) los 25 cuadros, b) un cuadro? 5.- Como realiza el calculo de eritrocitos si realiza una dilucin de 400 en lugar de 200?

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REFERENCIAS

21. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.22. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 23. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 24. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998.

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO 25. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

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MECANISMO DE EVALUACIN

Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin. La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

11

DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGOPRCTICA NMERO

2011 2012

HEMATOLOGIA I

NOMBRE DE LA PRCTICA

DURACIN

7

FRAGILIDAD OSMOTICA DE LOS ERITROCITOS

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1 INTRODUCCIN En las anemias hemolticas existe una elevada tendencia a la destruccin de los glbulos rojos. La clasificacin de estas anemias se basa en la localizacin del factor causante de la hemlisis que puede ser: 1. Factores hereditarios o intracorpusculares. 2. Factores adquiridos o extracorpusculares. Se ha estudiado el lmite de tonicidad de los eritrocitos, y se ha visto que la fragilidad osmtica est aumentada en la esferocitosis hereditaria, en algunas ocasiones en la anemia hemoltica autoinmune, en la enfermedad hemoltica del recin nacido (por anti-A y con menos frecuencia con anti Rh) y en la anemia hemoltica por envenenamiento qumico o por quemaduras graves. Se ha observado mayor resistencia globular en soluciones hipotnicas en la talasemia, anemia de eritrocitos falciformes(drepanocitosis) y en otros trastornos en los que aparecen eritrocitos de escaso espesor( blanco de tiro o dianocitos)

2

OBJETIVOS

El alumno efectuar e interpretar la prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos frente a las soluciones salinas hipotnicas. 3 FUNDAMENTO Cuando los eritrocitos se ponen en contacto con soluciones hipotnicas el agua entra osmticamente a travs de la membrana. Una vez que la clula alcanza su volumen crtico, la membrana empieza a permitir el paso de molculas de gran tamao como la hemoglobina. La liberacin de esta en el lquido sobrenadante se mide colorimtricamente.

4 PROCEDIMIENTO A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL BIOLOGICO 5-6 mL de sangre desfibrinada estril del problema y de un normal. REACTIVO Solucin Stock: NaCl al 10% Solucin de trabajo: NaCl al 1%

MATERIAL DE APOYO

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Jeringas de 10 mL estril Matraces Erlenmeyer 125 mL estriles Perlas de vidrio de 3-4 mm, con tapn de rosca estriles Tubos de ensaye de 13x 100 mm Pipetas serolgicas de 5 mL Pipetas serolgicas de 1 mL B DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. En un matraz Erlenmeyer de 125 mL. Que contenga de 10-15 perlas de vidrio (estriles) se vierten de 5-6 mL de sangre. 2. Agitar suavemente hasta que no se escuche el sonido de las perlas de vidrio contenidas en el matraz o bien colocar dicho matraz en un agitador mecnico durante 10 minutos. 3. Decantar 2 mL de sangre desfibrinada a un tubo de cultivo estril. Incubar 24 horas a 37 grados centgrados. 4. Con la sangre restante hacer la prueba de fragilidad osmtica de 30 minutos. Usando tubos de 13x 100 mm de la siguiente manera: CONCENTRACIO N % NaCl 0.09 0.85 0.80 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.20 0.10 0.00 SOLUCION DE TRABAJO AL 1% 4.50 4.25 4.00 3.75 3.50 3.25 3.00 2.75 2.50 2.25 2.00 1.75 1.50 1.00 0.50 0.00 AGUA DESTILADA 0.50 1.00 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 5.00 SANGRE DESFIBRINADA 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05

No. TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

5. Mezclar bien las soluciones antes de agregar la sangre desfibrinada y al agregar esta, mezclarlo

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO por inversin usando papel parafilm. 6. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente. 7. Centrifugar 5 minutos a 2000 r.p.m. 8. Leer el sobrenadante en el espectrofotmetro a 540 m. Haciendo diluciones apropiadas si es necesario (1:2 o 1:5). 9. Determinar el porcentaje de hemlisis en cada celdilla aplicando la formula: %hemlisis= D.O TUBOS 1-15 X 100 D.O TUBO 16 10. Graficar en papel milimtrico (abscisas- concentracin de NaCl) ordenada % de hemlisis). 11. Correr un testigo normal. Simultneamente al problema. 12. Para fragilidad de 24 horas se procede de igual manera. C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS INFORME DE RESULTADOS 30 min 24 Hrs Fragilidad osmtica: Paciente ------------------------% NaCl Paciente --------------------------%NaCl DADA EN 50% Hemlisis normal ----------------- -----% NaCl Paciente --------------------------%NaCl

5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES VALORES DE REFERENCIA 30 Min 24 Hrs 0.4000-0.445 % NaCl 0.465-0.590 % NaCl

6

ANEXOS 1. 2. 3. 4. Qu sucede con los eritrocitos cuando se exponen a soluciones hipotnicas de NaCl? Qu indica la fragilidad aumentada? Indique 5 casos en los cuales se encuentra aumentada la fragilidad osmtica. indique 5 casos en los cuales se encuentra disminuida la fragilidad osmtica.

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REFERENCIAS

26. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.27. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 28. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 29. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 30. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

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MECANISMO DE EVALUACIN

Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin. La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

UNIVERSIDAD AUTNOMA BENITO JUREZ DE OAXACA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGOPRCTICA NMERO

2011 2012

HEMATOLOGIA I

NOMBRE DE LA PRCTICA

DURACIN

8 1 INTRODUCCIN

INDUCCION DE DREPANOCITOS

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2 OBJETIVOS Identificar clulas falciformes en pacientes con sospecha diagnostica de anemia drepanoctica (Hb S/S) con rasgo drepanoctico (Hb A/S) con el empleo de un agente reductor (metabisulfito de sodio) o la privacin de oxgeno a los eritrocitos. 3 FUNDAMENTO Cuando la Hb se encuentra desoxigenada presenta caracteristicas de solubilidad distinta a las de la Hb A normal y consiste en que perdida importante de la misma y la tendencia a formar polimeros de desoxi Hb, que deforman intensamente los eritrocitos. 4 PROCEDIMIENTO A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO MATERIAL BIOLOGICO 3 mL de sangre con anticoagulante(EDTA) REACTIVOS Metabisulfito de sodio al 2% Aplicadores de madera Portaobjetos Cubreobjetos B DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Colocar una gota de sangre (pequea) en un portaobjeto. 2. Agregar de 1-2 gotas de la solucion de metabisulfito de sodio al 2%. Mezclar bien con un aplicador de madera. 3. Cubrir con un portaobjetos limpiando el exceso de sangre con papel filtro y sellar con parafina. 4. Observar al microscopio con el objetivo seco, a los 15 minutos, 1 hora y 24horas. C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS Induccin de drepanocitosis positiva o negativa 5 6 1. 2. 3. 4. 5. 7 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES ANEXOS Cmo es el desplazamiento electrofortico de la Hb A, Hb S y Hb F? Qu ocurre con los eritrocitos al agregar metabisulfito de sodio? Cul es el rasgo de la clula falciforme? Cuantos tipos de anemia de clulas falciformes existen? A que situaciones no debe exponerse una persona con anemia drepanoctica? REFERENCIAS

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31. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.32. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 33. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 34. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 35. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

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MECANISMO DE EVALUACIN

Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin. La destreza para la realizacin de la misma. La bitcora de registro de la prctica. Reporte

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

11

DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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CARRERA

PLAN DE ESTUDIOS

CLAVE DE LA ASIGNATURA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA

QUIMICO BIOLOGOPRCTICA NMERO

2011 2012

HEMATOLOGIA I

NOMBRE DE LA PRCTICA

DURACIN

9 1 INTRODUCCIN

INDUCCION DE CUERPO DE HEINZ

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2 OBJETIVOS Hacer evidente la presencia de cuerpo de Heinz en eritrocitos de pacientes con deficiencia de glucosa-6fosfato deshidrogenada, anemias hemolticas, Coombs negativo o pacientes que han estado expuestos a medicamentos o compuestos qumicos como cloratos, fenilhidrazina o primaquina. 3 FUNDAMENTO Cuando disminuye la concentracin eritrocitaria de GSH (glutation eritrocitario en estado reducido), el exceso de peroxido de hidrogeno no detoxificado facilita la desnaturalizacin de la Hb, dando lugar a la formacin de precipitados intraeritrocitarios llamados cuerpos de Heinz. 4 PROCEDIMIENTO A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO MATERIAL BIOLOGICO 3 -5 mL de sangre fresca heparinizada del problema. 3 -5 mL de sangre fresca heparinizada de un sujeto normal. REACTIVOS Fosfato monobsico de potasio 0.067M Fosfato dibsico de sodio 0.067M Glucosa Solucin de acetlfenilhidrazina Cristal violeta al 1% Cloruro de sodio al 0.73% Tubos de ensaye de 12x75 mm Pipetas serolgicas de 0.1 mL Portaobjetos Cubreobjetos Papel filtro B DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Las muestras de sangre se debern estudiar en la primera hora despus de la extraccin. 2. Marcar dos tubos de 12x75 mm uno como P( problema) y otro con T (testigo). 3. Colocar en cada uno 2 mL de solucin de acetilfenilhidrazina. 4. Agregar 0.1 mL de sangre previamente agitada suavemente en el tubo respectivo, burbujeando pequeas cantidades de aire a travs de la pipeta que se deja dentro del tubo. 5. Incubar a 37 grados centgrados por dos horas. 6. Al final de las dos hora, mezclar de nuevo con la pipeta, poner una gota en el cubreobjeto e invertir en un portaobjeto en el cual ha sido puesta una gota mas grande de la solucin de cristal violeta.

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7. Esperar 5-10 minutos y luego usando la lente de inmersin buscar los cuerpos de Heinz eneritrocitos intactos no distorsionados. 8. Contar las clulas que contengan 5 o mas cuerpos de Heinz en 500 clulas para obtener el % de positividad. C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS INFORME DE RESULTADOS Induccin de cuerpos de Heinz -----------------------------%

5

INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES

6

ANEXOS 1. Qu son los cuerpos de Heinz? 2. Mencione 5 casos en los cuales se observan los cuerpos de Heinz. 3. Indique 5 frmacos que induzcan la formacin de cuerpos de Heinz. 4. Esquematice como se observan los cuerpos de Heinz.

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REFERENCIAS

36. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.37. Ruiz Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico. 2000. 38. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995. 39. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico. 1998. 40. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa. 1998.

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MECANISMO DE EVALUACIN

Asistencia y puntualidad Preguntas relacionadas con la prctica al comienzo de la misma. Comportamiento durante la sesin.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

Se trabaja con mediadas de bioseguridad de nivel 1. Con medidas de bioseguridad de barreras: Bata, guantes, cubrebocas, gogles y gorro.

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MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

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DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS.

Todas las muestras RPBI se destinan a contenedores y a bolsas especiales. Y posterior mente se tratan. 12 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL