Bacilos Gram Positivo Aerobicos / Facultativos · Cuando estudiar una cepa de Corineforme?...
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Bacilos Gram PositivoAerobicos / Facultativos
MarMaríía Teresa Ulloa Floresa Teresa Ulloa FloresPrograma de MicrobiologPrograma de Microbiolog íía y Micologa y Micolog ííaa
ICBMICBM--Facultad de MedicinaFacultad de MedicinaUniversidad de ChileUniversidad de Chile
20082008
TTóópicospicos
Clasificación filogenética de los seres vivos en base al 16S rRNA
Bacilos Gram positivo aerobios/facultativos
Diagnostico de laboratorio de :CorynebacteriumArchanobacterium haemolyticumArchanobacterium haemolyticumRhodococcus equiRhodococcus equi
• Plantea hipótesis de evolución (determinarelaciones de parentesco entre las especies)
• Compara la secuencia de moléculas (cronómetros evolutivos) y establece la relación entre ellas
• Las secuencias de las moléculas son el registro histórico de la evolución
CLASIFICACIÓN FILOGÉNETICA
Clasificación filogenética de los seres vivos en base al 16S rRNA
Corynebacterium MycobacterimNocardiaRhodococcus
Clasificación filogenética de los seres vivos en base al 16S rRNA
Corynebacterium y “Coryneformes “ pertenecen a ordenes y familias distintas
Bacilos G+ Irregulares lados
curvos y no paralelos
Arcanobacterium haemolyticumCatalasa negativaB-hemolítico
Corynebacterium Catalasa positiveaNo-hemolíticos
Corineformes
Morfología : Tinción de Gram
Erysipelothrix rhusiopathiae No-hemolítica, catalasa negativa
Bacilos G+ regulares lados paralelos
Listeria monocytogenes B-hemolitico catalasa positiva
Bacillus Esporulados catalasa positiva
Nocardia
Rhodococcus
Bacilos G+ Irregulares lados curvos y no paralelosa veces ramificaciones
Corynebacterium
•DNA de alto nivel de contenido G+C amplio rango (46-74 mol%) indicando gran diversida d genética
•Pared celular contiene ácidos micólicos, 22 – 36 átomos de carbono (grupo C M N)
•Corynebacterium no es ácido alcohol - resistente
59 especies 36 Especies clinicamente relevante
Muestra respiratoria especialmente faringea
En heridas de piel especalmente de viajeros
Si es predominate en un sitio normalmente estéril, herida, absceso o esputo purulento
Aislamiento en hemocultivos seriados
Recuento de 10 4 UFC/ml en cultivo puro en orina
Otras muestras con aislamiento predominante y respuesta inflamatoria en la Tinción de Gram directa
Cuando estudiar una cepa de Corineforme?
•Baterías bioquímicas tradicionales (CDC)
•API Coyneform bacteria•Remel•Cristal BBL
•Patrón de ácidos grasos de pared celular (CFA) Sherlock system (MIDI Inc., Newark, Del.) perfil de 140 ácidos grasos de 180 géneros bacterianos. Se compara con una base de datos de + de 700 bacterias.
•Biolog system (Biolog, Hazelwood,Calif) : Perfil metabólico de 95 fuentes de carbono. Se compara con una base de datos de + de 700bacterias.
•Biología Molecular de Corynebacterium análisis de 16S rDNA
DIAGNOSTICO DE CORYNEBACTERIUM
Evaluation of API Coryne System, version 2.0, for d iphteroid Gram-positive rods identification with clinical relevanc e
178 cepas de Bacilos Gram-positivo. 1995 and 2004.
78 cepas de Corynebacterium 100 cepas de géneros relacionados
La identificación fué hecha en base a los esquemas de Von Graevenitz y Funke.
162/ 178 cepas (91%) correctamente identificados a nivel de género y especie (IC95 = 85.6-94.6),
44 cepas (24.7%) : pruebas adicionales.
16 cepas s (9%)mal identificadas
Corynebacterium jeikeiumCorynebacterium urealyticumCorynebacterium striatumCorynebacterium pseudodiphtheriticumCorynebacterium amycolatum Arcanobacterium haemolyticum
Rev Argent Microbiol. 2006 Oct-Dec;38(4):197-201.
I. Microbiología Médica, Zurich.JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Sept. 2003, p. 4134–4140 Vol. 41, No. 9
DiagnDiagnóósticostico
¿¿Que podemos hacer Que podemos hacer en el lab. de rutina?en el lab. de rutina?
Fermentativo
C. diphtheriae C ulceransC.pseudotuberculosisC. xerosis C. amycolatumC. striatum
C. minutissimumC.glucuronolyticumC. argentoratense C. matruchotii
Corynebacterium
C. jeikeium C. urealyticumC. afermentans subsp. Lipophilum C. accolens C. macginleyiCDC coryneform groups F-1 and GC. bovis
No fermentativo
C. afermentans subsp. afermentans C. aurisC. pseudodiphtheriticumC. propinquum
NO LIPOFILICOS LIPOFILICOS
Crecimiento estimulado por la presencia de lípidos
Test DetecciTest Deteccióón de cepas Lipofn de cepas Lipofíílicaslicas
Especies Patógenas de Corynebacterium
Corynebacterium diphtheriaeC. ulceransC. pseudotuberculosis
Productoras de Toxina diftérica: Difteria
A. Tinsdale A. Sangre-Telurito A. Sangre
Corynebacterium oportunistas
Varias especies microbiota normalDe la piel
C. jeikeiumC. amycolatumC. urealyticumC. xerosis
AdemásC. jeikeium y C . amycolatum
Se encuentran en el ambiente intrahospitalario
Resistant a penicilina y otros B- lactámicos Sensible a vancomicin
Desde la piel puede ser introducidos
Sistematicamente de cateres en pacientes debilitado s
Hospitalización prolongada
Tratamiento antimicrobiano neutropénicos
Colonias de Corynebacterium en agar sangre
C diphtheriae
C xerosisC. amycolatum
C jeikeiumC.urealyticum
Biochemical characteristics of Corynebacterium spp.
Corynebacterium urealyticum
Bacilo Gram-positivo Crecimiento lentoinfecciones asociadas
EndocarditisBacteriemiaNeumonía
Patógeno urinario. Frecuencia de aislamiento en urocultivos : 0,025-0,32%
Commensal uretra anterior
C. urealyticumCrece en agar sangre 35 ºC durante 48-72 h.
A las 48 h las colonias pequeñas, blancas, lisas, convexas y no hemolíticas.
Puede crecer en agar chocolate
Se han desarrollado medios selectivos para aislar esta bacteria,No está recomendado su uso
La bacteria es aerobia estricta y lipofílica.
La tinción de Gram suele mostrar cocobacilos (a veces con una morfología más cocoide que bacilar)
Gram positivos frecuentemente agrupados.
Identificación CatalasaNitratasa Ureasa (+ en el medio de Christensen en pocos minutos).
¿Cuándo sospechar la existencia de una infección por C. urealyticum?.
Características de la orina: 1.Piuria-hematuria, 2.PH alcalino 3. Presencia de cristales de estruvita (fosfato amónico magnésico).
No siempre se dan estos tres signos y la integridad de los leucocitos se ve muy afectada por la alcalinidad del medio.
En otro tipo de infecciones, la presencia de leucocitos, polimorfonucleares y organismos diftermorfos sugieren infección.
Cultivos negativos a las 24 h, prolongar la incubación, especialmente si hay información clínica o datos de laboratorio que apoyen la existencia de una infección bacteriana
Cuidado con considerar como "contaminante" a un organismo sobre la base de su identidad.
La valoración del significado del aislamiento solo puede hacerse dentro del contexto clínico.
Resistance:Some species of Corynebacterium may exhibit resistance to multiple drug classes.
Reasons for Testing/Not Testing:Testing of isolates from normally sterile sources (blood cultures, deep tissue, implanted prosthetic devices) may be warranted, especially in immunodeficient patients.
Derivation of Interpretive Criteria :Interpretive criteria for penicillin and erythromycin are based primarily on MIC distributions following testing of a large number of isolates. Cephalosporin interpretive criteria are adapted from those for Streptococcus spp.; linezolid interpretive criteria are adapted from those for Enterococcus spp.; remaining interpretive criteria are adapted from those forStaphylococcus spp. as published in the current edition of CLSI document M100.
Testing Notes:Resistant results can be reported at 24 hours. Isolates demonstrating susceptible results for beta-lactams should be reincubated and results reported at 48 hours.
Table 5. Corynebacterium spp. (Including C. diphtheriae )—Information and Interpretive Criteria for Broth Microdilution Susceptibility Testing. CLS I M45-P Vol. 25 No. 26
Table 5. Corynebacterium spp. (Including C. diphtheriae )—Information and Interpretive Criteria for Broth Microdilution Susceptibility Testing. CLS I M45-P Vol. 25 No. 26
Archanobacterium haemolyticium
Relevancia clRelevancia clíínicanica
Faringoamigdalitis indistinguible de la estreptocFaringoamigdalitis indistinguible de la estreptocóócica cica con exudado en mcon exudado en máás del 70 % de los casoss del 70 % de los casos
55% de los pacientes presentan plurito, rash 55% de los pacientes presentan plurito, rash escarlatiniforme 1escarlatiniforme 1--4 d4 díías antes de presentar la as antes de presentar la faringitis.faringitis.
Faringoamigdalitis en adolescentes y adultos jFaringoamigdalitis en adolescentes y adultos jóóvenes. venes. 90 % de los pacientes tienen entre 10 y 30 90 % de los pacientes tienen entre 10 y 30 aañños, os, 80 % se concentra entre los 11 y los 20 a80 % se concentra entre los 11 y los 20 aññosos
Menos frecuenteMenos frecuenteAbcesosAbcesosSepsisSepsisMenos frecuentes causando: OMA, sinusitis, Menos frecuentes causando: OMA, sinusitis,
endocarditis y osteomelitisendocarditis y osteomelitis
CULTIVO
•Comparison of different culture media and growth co nditions for recognition of Arcanobacterium haemolyticum.47 isolates of A. haemolyticum was studied. After 4 8 h of incubation, trypticase soy agar with 5% horse blood in 5% CO(2) was the bestmedium. Diagn Microbiol Infect Dis. 2008 Mar 4.
•Medios selectivos con Inhibidores MupirocinaAztreonamAnfotericina BAcido nalidíxicoColistina
NaCl al 3,5% inhibe Streptococcus del grupo viridans, Neisseria, y otros Streptococcus
cultivocultivo
Crecimiento Crecimiento óóptimo a 37ptimo a 37ººC en ambiente C en ambiente capnofcapnofíílico(3lico(3--5 % Co2) 5 % Co2)
Las colonias a las 24 horas son pequeLas colonias a las 24 horas son pequeññas, circulares as, circulares y blancas.y blancas.
Las colonias a las 48 horas en el centro son negras, Las colonias a las 48 horas en el centro son negras, observado una vez removidas desde el agar.observado una vez removidas desde el agar.
DiagnDiagnóóstico de laboratoriostico de laboratorioBacilo Gram (+)Bacilo Gram (+)Catalasa (Catalasa (--))Beta hemolBeta hemolííticoticoInmInmóóvilvilUreasa (Ureasa (--))En cultivo a las 24horas se En cultivo a las 24horas se pueden observar los bacilos**pueden observar los bacilos**Fermentan CHFermentan CHglucosa, glucosa, lactosa lactosa maltosamaltosa
No fermentan manitol y xilosaNo fermentan manitol y xilosaNo reduce nitratos No reduce nitratos
Test de CAMP reverso (+)Test de CAMP reverso (+)Fosfolipasa D de A haemolyticum inhibe la Beta hemolisina de Fosfolipasa D de A haemolyticum inhibe la Beta hemolisina de S. aereus.S. aereus.
DiagnDiagnóóstico stico Gram concordanteGram concordante
Test de CAMP INVERSO +Test de CAMP INVERSO +
InhibiciInhibicióón de B hemolisina de n de B hemolisina de S. S. aereusaereus
Pruebas bioquPruebas bioquíímicas concordantes.micas concordantes.
Archanobacterium haemolyticumArchanobacterium haemolyticum
Otros exOtros exáámenes de labmenes de lab……
Leucocitos: 7.100Leucocitos: 7.100--23.000 c23.000 céélulas/ml lulas/ml
TTíítulos del Ac antistreptolisina O (tulos del Ac antistreptolisina O (--) a menos ) a menos que la infeccique la infeccióón concomitante estn concomitante estéépresente.presente.
Los kits que identifican Los kits que identifican A. haemolyticumA. haemolyticum , , presentan buen rendimiento.presentan buen rendimiento.
Archanobacterium haemolyticumArchanobacterium haemolyticumSensibilidad a antibiSensibilidad a antibióóticosticos
Resistencia variable a penicilina, gentamicina y Resistencia variable a penicilina, gentamicina y tobramicina.tobramicina.
Resistentes generalmente a sulfonamidas y Resistentes generalmente a sulfonamidas y áácido cido nalidixico.nalidixico.
Sensible a Sensible a eritromicinaeritromicina, cloramfenicol, doxiciclina, , cloramfenicol, doxiciclina, claritromicina, azitromicina, tetraciclina, etc.claritromicina, azitromicina, tetraciclina, etc.
In vitro suceptibilidad a BIn vitro suceptibilidad a B-- lactlactáámicos, pero in vivo no micos, pero in vivo no ocurre**.ocurre**.
Rhodococcus equiRhodococcus equiPreviamente como Previamente como Corynebacterium equiCorynebacterium equi
Descrito Descrito en patologen patologíía veterinaria desde 1923a veterinaria desde 1923
Microorganismo productor de zoonosis, causante de Microorganismo productor de zoonosis, causante de neumonneumoníía granulomatosa y absceso de pulma granulomatosa y absceso de pulmóón en n en potros.potros.
En humanos, es un patEn humanos, es un patóógeno intracelular oportunista que geno intracelular oportunista que infecta macrinfecta macróófagos y polimorfonucleares, especialmente fagos y polimorfonucleares, especialmente en pacientes con alteracien pacientes con alteracióón de la inmunidad celular.n de la inmunidad celular.
ClasificaciClasificacióónn
Dominio: BacteriaDominio: Bacteria
Reino: BacteriaReino: Bacteria
DivisiDivisióón: Actinobacterian: Actinobacteria
Clase:ActinobacteriaClase:Actinobacteria
Orden: ActinomicetalesOrden: Actinomicetales
Familia: Familia: NocardiaceaeNocardiaceae
Genero: Genero: RhodococcusRhodococcus
EspecieEspecie Aislada en Aislada en humanoshumanos
R. coprohilusR. coprohilus NENE
R. equi R. equi ++
R. erythropolisR. erythropolis ++
R. fasciansR. fascians ++
R. globerulusR. globerulus NENE
R. R. marinonascensmarinonascens
NENE
R. rhodniiR. rhodnii NENE
R. rhodochrousR. rhodochrous ++
R. ruberR. ruber NENE
12 Especies
EpidemiologEpidemiologííaa
Ubicuo : aire, agua y la tierra
Se recupera de deposiciones de bovinos, porcinos y equinos
Mecanismo de transmisión: Inhalación Inoculación en heridas o membranas mucosasIngestión de alimentos contaminados
La mayoría de los casos en pacientes con inmunodeficiencia celular
La mortalidad asociada a la infección varia según condición del paciente:
Inmunocompetentes 11%Inmunodeprimidos no VIH 20-25%
SIDA 50- 55%
Patogenia Patogenia
R. equiR. equi persiste en macrpersiste en macróófagos.fagos.Evita la fusiEvita la fusióón fagosoman fagosoma-- lisosoma. lisosoma. ConstituciConstitucióón de la pared celular (n de la pared celular (áácidos cidos
micmicóólicos con cadenas largas de carbono) licos con cadenas largas de carbono)
Factores de virulenciaFactores de virulenciaEnzimas: colesterolEnzimas: colesterol--oxidasa, oxidasa, colinocolino--fosfohidrolasa y fosfohidrolasa y exoenzima fosfolipasa C ("equi factor"). exoenzima fosfolipasa C ("equi factor").
Bacteria Intracelular facultativa
Cuadros ClCuadros Clíínicosnicos
Muestras respiratoriasMuestras respiratorias
-- ExpectoraciExpectoracióón, n,
-- cepillado bronquial,cepillado bronquial,
-- puncipuncióón aspirativa transn aspirativa trans--tortoráácica y cica y hemocultivo (50% en SIDA). hemocultivo (50% en SIDA).
MicrobiologMicrobiologíía a Morfologia: Bacilos, Cocobacilo, Cocos Morfologia: Bacilos, Cocobacilo, Cocos
pleomorfico pleomorfico
Gram (+).Gram (+).
Aerobio estricto.Aerobio estricto.
Posee una cPosee una cáápsula polisacpsula polisacáárida. rida.
Presencia de Presencia de áácido micolico en su pared.cido micolico en su pared.
Alcohol Alcohol –– áácido resistente cido resistente
Intracelular facultativo.Intracelular facultativo.
DiagnosticoDiagnostico de Laboratorio.de Laboratorio.
Organismo Organismo áácido alcohol cido alcohol resistente con la tinciresistente con la tincióón de n de Kinyoun.Kinyoun.
Cambio morfolCambio morfolóógico de las 6 y 24 horas de incubacigico de las 6 y 24 horas de incubacióón.n.
Aislamiento en medios de cultivo no selectivos.Aislamiento en medios de cultivo no selectivos.
Crece a 37Crece a 37°°C (48C (48--72 hrs.)72 hrs.)
Con el objeto de eliminar la microbiota comensal:Con el objeto de eliminar la microbiota comensal:
Medios selectivos con antibiMedios selectivos con antibióóticos. ticos.
El pigmento caracteristico (Rhodo: rojo) .El pigmento caracteristico (Rhodo: rojo) .
Las colonias pueden aparecer de color salmLas colonias pueden aparecer de color salmóón. n.
DiagnDiagnóóstico de Laboratorio.stico de Laboratorio.
Catalasa +
Indol (-)Ureasa +
Reacciones hemolReacciones hemolííticas cooperativas (y antagticas cooperativas (y antagóónicas) en nicas) en Agar sangre de corderoAgar sangre de cordero
1.Rhodococcus equi1.Rhodococcus equi, y , y Arcanobacterium haemolyticum: +Arcanobacterium haemolyticum: +2.Rhodococcus equi2.Rhodococcus equi y y Staphylococcus aureus: +Staphylococcus aureus: +3.Arcanobacterium haemolyticum y 3.Arcanobacterium haemolyticum y S. aureus : S. aureus : --
1 2
3
Sensibilidad Sensibilidad in vitroin vitro
Generalmente resistente a Generalmente resistente a ββ lactlactáámicos.micos.En pacientes inmunocompetentes:combinaciEn pacientes inmunocompetentes:combinacióón de n de farmacos. farmacos. esquema prolongado, esquema prolongado,
Durante el tratamiento realizar cultivos seriados con Durante el tratamiento realizar cultivos seriados con antibiogramaantibiograma
Considerar tratamiento quirConsiderar tratamiento quirúúrgico en pacientes con rgico en pacientes con infecciinfeccióón pulmonar crn pulmonar cróónica. nica.
Gracias