94371545 BAB I Kromatografi Kolom Vakum

8/10/2019 94371545 BAB I Kromatografi Kolom Vakum

1/25

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Kromatografi digunakan untuk memisahkan substansi campuran menjadi

komponen-komponen molekular (1). Seluruh bentuk kromatografi berkerja

berdasarkan prinsip ini. Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat

berupa padatan, atau kombinasi cairan-padatan) danfase gerak (berupa cairan

atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-

komponen ang terdapat dalam campuran. Komponen-komponen ang

berbeda bergerak pada laju ang berbeda.

Kromatografi juga merupakan pemisahan camuran senawa menjadi

senawa murnina dan mengetahui kuantitasna. !ntuk itu, kemurnian bahan

atau komposisi campuran dengan kandungan ang berbeda dapat dianalisis

dengan benar. "idak hana kontrol kualitas, analisis bahan makanan dan

lingkungan, tetapi juga kontrol dan optimasi reaksi kimia dan proses

berdasarkan penentuan analitik dari kuantitas material. "eknologi ang

penting untuk analisis dan pemisahan preparatif pada campuran bahan adalah

prinsip dasar kromatografi. #emisahan senawa biasana menggunakan

beberapa tekhnik kromatografi. #emilihan teknik kromatografi sebagian besar

bergantung pada sifat kelarutan senawa ang akan dipisahkan. Semua

kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan, atau kombin asi

cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerak mengalir

melalui fase diam dan membawa komponen-komponen ang terdapat dalamcampuran. Komponen-komponen ang berbeda bergerak pada laju ang

berbeda ($).

Kromatografi ini dikembangkan menjadi beberapa jenis, aitu

kromatografi lapis tipis, kromatografi kertas, kromatografi gas dan

kromatografi kolom. %amun pada laporan kali ini akan dibahas mengenai

kromatografi kolom khususna kromatografi kolom &akum. baik dari definisi

kromatografi kolom &akum, prinsip kerja, pelaksanaan, prosedur kerja, hasil

1


2/25

fraksi-fraksi senawa ang terkandung dalam ektrak kunit (Curcuma

domestica ') setelah difraksionasi menggunakan kromatografi kolom &akum,

serta identifikasi senawa ang terkandung dalam kunit (Curcuma

domestica ') dengan menggunakan kromatografi lapis tipis.

I.2 Maksud dan Tujuan Percobaan

I.2.1 Maksud Percobaan

aksud dari percobaan ini agar mahasiswa dapat memahami cara

mendapatkan dan memisahkan kandungan senawa dalam tanaman dengan

menggunakan metode kromatografi kolom &akum (KK) dan kromatografi

lapis tipis (K'").

I.2.2 Tujuan Percobaan

*dapun tujuan dari percobaan ini aitu +

1. !ntuk mengetahui prinsip kerja dari kromatografi kolom &akum (KK).

2. !ntuk memisahkan kandungan kimia dalam rimpang kunit (Curcuma

domestica ') dengan menggunakan kromatografi kolom &akum.

. !ntuk mengidentifikasi kandungan kimia ang telah difraksionasi

dengan menggunakan metode K'".

BAB II

$


3/25

TINAUAN PU!TA"A

II.1 Teor# U$u$

II.1.1 "ro$atogra%#

Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan molekulberdasarkan

perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk

memisahkan komponen (berupa molekul) ang berada pada larutan ().

Kromatografi juga merupakan pemisahan campuran senawa menjadi

senawa murnina dan mengetahui kuantitasna. !ntuk itu, kemurnian

bahan atau komposisi campuran dengan kandungan ang berbeda dapat

dianalisis dengan benar. "idak hana kontrol kualitas, analisis bahan

makanan dan lingkungan, tetapi juga kontrol dan optimasi reaksi kimia dan

proses berdasarkan penentuan analitik dari kuantitas material. "eknologi

ang penting untuk analisis dan pemisahan preparatif pada campuran bahan

adalah prinsip dasar kromatografi. #emisahan senawa biasana

menggunakan beberapa tekhnik kromatografi. #emilihan teknik

kromatografi sebagian besar bergantung pada sifat kelarutan senawa ang

akan dipisahkan ().

Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan, atau

kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase

gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen ang

terdapat dalam campuran. Komponen-komponen ang berbeda bergerak

pada laju ang berbeda. Fase diam cenderung menahan komponen

campuran, sedangkan fase gerak cenderung menghanutka-nna.erdasarkan terikatna suatu komponen pada fase diam dan perbedaan

kelarutanna dalam fase gerak, komponen-komponen suatu campuran dapat

dipisahkan. Komponen ang kurang larut dalam fase gerak atau ang lebih

kuat terserap atau terabsorpsi pada fase diam akan tertinggal, sedangkan

komponen ang lebih larut atau kurang terserap akan bergerak lebih cepat

(/).

II.1.2 "ro$atogra%# "olo$ &aku$
http://id.wikipedia.org/wiki/Molekulhttp://id.wikipedia.org/wiki/Molekul


4/25

II.1.2.1 Pengert#an "ro$atogra%# "olo$ &aku$

Kromatografi kolom &akum (KK) adalah kromatografi ang

dilakukan untuk memisahkan senawa dengan menggunakan silika gel

sebagai adsorben dan berbagai perbandingan pelarut (elusi gradien) dan

menggunakan pompa &akum untuk memudahkan penarikan eluen (0).

Kromatografi kolom &akum sama dengan kromatografi cair &akum.

Karena kromatografi cair &akum merupakan salah satu jenis dari

kromatografi kolom. Kromatografi kolom merupakan suatu metode

pemisahan campuran larutan dengan perbandingan pelarut dan kerapatan

dengan menggunakan bahan kolom. Kromatografi kolom laim digunakan

untuk pemisahan dan pemurnian senawa (2).

Kromatografi kolom &akum3kromatografi cair &akum merupakan

kromatografi kolom ang dipercepat dan bekerja pada kondisi &akum, fase

gerak digerakkan dengan kondisi &akum sehingga prosesna berlangsung

cepat. Kolom kromatografi dikemas kering dalam keadaan &akum agar

diperoleh kerapatan maksimum. *lat ang digunakan terdiri dari corong

4-, sumbat karet, pengisap ang dihubungkan dengan pompa &akum

serta wadah penampung fraksi. 5alaupun KK3K6 memerlukan jumlah

sampel ang lebih banak dari pada kromatografi lapis tipis (K'"),

KK3K6 tetap ekonomis dalam sisi biaa (7).

Kromatografi cair &akum (K6) pertama kali diperkenalkan oleh para

ilmuwan dari *ustralia untuk mengatasi lamana waktu ang dibutuhkan

untuk separasi menggunakan kolom kromatografi klasik. #ada dasarna

metode ini adalah kromatografi lapis tipis preparatif ang berbentuk

kolom. *liran fase gerak dalam metode ini diaktifkan dengan bantuan

kondisi &akum. Kromatografi cair &akum pada awalna digunakan untuk

separasi senawaan steroid dan produk-produk natural dari laut.

Kromatografi cair &akum terdiri dari suatu corong uchner ang memiliki

kaca masir. 6orong uchner ini diiisi dengan fase diam ang tingkat

kehalusanna seperti ang umumna dipakai dalam kromatografi lapis

tipis (28-$8 mesh). 6orong uchner ang berisi fase diam ini


5/25

digunakan dalam kondisi &akum3bertekanan, ang berakibat pada

kemampuan ang dihasilkan olehkromatografi cair &akum akan sama

dengan kromatografi gra&itasi namundiperlukan waktu ang lebih singkat.

6ara asli ang diperkenalkan oleh 6oll menggunakan corong uchner

kaca masir atau kolom pendek, sedangkan "argett menggunakan kolom

ang lebih panjang untukmeningkatkan daa pisah (9).

'a$bar 1. "ro$atogra%# "olo$ &aku$

II.1.2.2 Pr#ns#( "ro$atogra%# "olo$ &aku$

#rinsip kerja dari kromatografi kolom &akum adalah adsorpsi atau

serapan, sedangkan pemisahanna didasarkan pada senawa-senawa angakan dipisahkan terdistribusi di antara fasa diam dan fasa gerak dalam

perbandingan ang berbeda-beda. :imana mekanisme adsorpsina aitu

mengadsorbsi ion-ion dan molekul-molekul senawa pada fase diam dan

pemisahannna berdasarkan kelarutan senawa dengan eluen ang

digunakan (18).

II.1.2.) "euntungan dan "erug#an "ro$atogra%# "olo$ &aku$

Kromatografi kolom &akum mempunai keuntungan (11)+

/


6/25

1. empunai biaa ekonomis

$. *dana aliran fase gerak lebih cepat

. #engerjaannna sederhana

. 6uplikan ang dipisahkan lebih banak

Kerugian kromatografi kolom &akum (1$)+

1. embutuhkan waktu ang cukup lama

$. Sampel ang digunakan banak jika dibandingkan dengan K'" dan

terbatas jika dibandingkan dengan kromatografi kon&ensional

II.1.2.* Perbedaan "ro$atogra%# "olo$ &aku$ dengan "ro$atogra%# "olo$

"on+ens#onal

*dapun perbedaan kromatografi kolom &akum dengan kromatografi

kolom kon&ensional aitu (1) +

1. Konsumsi fase gerak K6 hana 78; atau lebih kecil disbanding

dengan kolom kon&ensional karena pada kolom mikrobor kecepatan

alir fase gerak lebih lambat (18-188leh karena itu, Kromatografi 6air akum

menggunakan tekanan ang rendah untuk meningkatkan lajua aliran fase

0


7/25

gerak. Kolom dihisap perlahan-lahan ke dalam wadah penampung fraksi

sampai kering dengan cara mem&akumkanna (7).

!rutan pelarut ang digunakan adalah sebagai berikut (7)+

Fraksi #elarut Komposisi olume (ml)

1 ?eksana 188 188

$ ?eksana-etil asetat /8+/8 188

=til asetat 188 188

=til asetat-metanol 2/+$/ 188

/ =til asetat-metanol /8+/8 188

0 =til asetat-metanol $/+2/ 188

2 etanol 188 188

*tau digunakan urutan pelarut sebagai berikut +

Fraksi #elarut Komposisi olume (ml)

1 ?eksana 188 188

$ ?eksana-etil asetat 78+$8 188

?eksana-etil asetat 08+8 188

?eksana-etil asetat 8+08 188

/ ?eksana-etil asetat $8+78 188

0 =til asetat 188 188

2 etanol 188 188

II.1.* en#s,jen#s "ro$atogra%# "olo$ &aku$

@enis-jenis kromatografi kolom &akum aitu (9) +

*. Suction 6olomn

Asolasi komponen kimia dalam jumlah ang banak, berdasarkan

absorpsi dan partisi, dimana kolom diisi dengan fase diam di&akumkan

dengan suatu pompa &akum agar eluen dapat turun mengelusi

komponen kimia ang selanjutna keluar sebagai fraksi-fraksi.

2


8/25

. Bapid-Sigel

Asolasi komponen kimia dalam jumlah ang sedikit berdasarkan

absorpsi dan partisi, dimana kolom diisi dengan fase diam di&akumkan

dengan suatu pompa &akum agar eluen dapat turun mengelusi

komponenkimia ang selanjutna keluar sebagai fraksi-fraksi.

6. #ress 6olomn

Kromatografi kolom sederhana di mana fase gerak bergerakdengan

cepat karena penggunaan tekanan positif dari tabung nitrogren. !dara

ang ditekan mengandung >$ dan uap air ang dapat menebabkan

peruraian produk dari ekstrak dan berubah saat pemisahan

kromatografi.

II.2 Ura#an Ba-an

II.2.1 Ekstrak "un#t

%ama Besmi + Curcuma domestica extrac

; Bendamen + 18 ;

#emerian + =kstrak kering, berwarna kuning, berbau khas

kunit

Kelarutan + 'arut dalam metanol

#enimpanan + :isimpan dalam botol &ial ang tertutup rapat

II.2.2 Et#l Asetat /1*0

%ama resmi + =til *setat

Sinonim + -

erat molekul + 17,8$

Bumus molekul + 6?7>$

Bumus struktur +

7


9/25

#emerian + 6airan tidak berwarna, mudah menguap, sangat

mudah terbakar

Kelarutan + 'arut dalam 1/ bagian air, dapat bercampur

dengan etanol (9/;) # dan dengan eter #

#enimpanan + :isimpan dalam wadah ang tertutup baik

Kegunaan + Sebagai eluen

II.2.) Asa$ !ul%at /10

%ama resmi + Sulfat acid

Sinonim + *cid Sulfate

%omor 6*S + 200-9-9

erat molekul + 97,87

Bumus molekul + ?$S>

Bumus struktur +

Keasaman (pKa) +

iskositas + $0,2

#emerian + 6airan bening, tak bewarna, tak berbau

Kelarutan + praktis tidak larut dalam etanol, larut dalam air danlarut dalam asam mineral lainna.

#enimpanan + :isimpan dalam wadah ang tertutup rapat

Kegunaan + Sebagai penampak noda

II.2.* Metanol /1*0

%ama resmi + etanolum

Sinonim + etanol, etil-alkohol

erat molekul +

9


10/25

Bumus molekul + 6?>?

Bumus struktur +

#emerian + @ernih, mudah menguap, berbau khas

Kelarutan + Sangat larut dalam air, praktis tidak larut dalam

eter, heksana

#enimpanan + :isimpan dalam wadah ang tertutup rapat

Kegunaan + Sebagai pelarut

II.2. N,-eksana /1*0%ama resmi + ?eCaminum

Sinonim + ?eksamina

erat molekul + 18,89

Bumus molekul + 60?1$>

Bumus struktur +

18


11/25

#emerian + ?ablur mengkilap, tidak berwarna atau serbuk

hablur putih, tidak berbau, rasa membakar dan

manis kemudian agak pahit. @ika dipanaskan

dalam suhu D $08omenumblim

Kelarutan + 'arut dalam 1/ bagian air, dalam 1$,/ ml eranol

(9/;) # dan dalam lebih kurang 18 bagian

kloroform #


Kegunaan + Sebagai eluen

II.2. !#l#ka 'el /10

%ama resmi + Silica 4el

%omor 6*S + 0$1-02-

Bumus molekul + Si>$.C?$>

Bumus struktur +

#emerian + ?ablur mengkilap, tidak berwarna atau serbuk

hablur putih, tidak berbau.

Kelarutan + 'arut dalam air


Kegunaan + Sebagai adsorbent

II.) Prosedur "erja

#rosedur kerja dari kromatografi kolom &akum menggunakan alat bantu

ang berupa pompa &akum untuk mempercepat laju alir fasa gerak selama

proses pemindahan at terlarut. Kolom kromatografi dikemas kering

(biasana dengan penjerap mutu K'" 18-8


12/25

ditekan dengan batang pengaduk ang bersalut hingga menjadi padat dan

rapat. Setelah itu dimasukkan pelarut organik ang cocok untuk mencoba

apakah kolom telah sempurna. @ika kolom sempurna, pelarut tersebut akan

turun secara horiontal. :isamping itu ekstrak ditimbang sebanak $ gram

dan ditambahkan silika gel dengan berat ang sama dengan ekstrak.

Kemudian silika gel ang tersalut ekstrak tersebut digerus hingga homogen

dan halus kemudian diangin-anginkan beberapa saat agar campuran silika gel

dan ekstrak ang akan dimasukkan kedalam kolom dalam keadaan kering.

Setelah itu campuran ekstrak dan silika gel dimasukkan dalam kolom dan

diratakan kemudian dilapisi dengan kertas saring. #elarut dimasukkan dan

&akum dijalankan hinggga pelarut mengelusi komponen kimia dan kering

didalam kolom, setelah kering &akum dimatikan. Selanjutna dimasukkan

pelarut lain ang tingkat kepolaranna lebih tinggi dari pelarut pertama dan

&akum dijalankan kembali. egitu seterusna hingga pelarut ang digunakan

itu memiliki tingkat kepolaran ang tinggi ang dapat mengelusi semua

komponen kimia dalam ekstrak. :imana hasil fraksi iu ditampung dalam

cawan porselin dan diuapkan dalam rota&apor.

1$


13/25

BAB III

MET3DE "E4A

III.1 Alat dan Ba-an

III.1.1 Alat

1. *lu

$. atang #engaduk

. atang #enotol

. otol ial

5. 6hamber

0. 4elas kaca

2. 4elas kimia7. 4unting

9. Kolom (6orong dan kolom uchner)

18. 'ap Kasar

11. 'ampu ! $/ nm dan 00 nm

1$. 'umpang

13. 'empeng Silika 4el

1. istar

1


14/25

1/. >&en

10. #ipet "etes

12. #ompa akum

III.1.2 Ba-an

1. *lmunium oil

2. =kstrak rimpang kunit (Curcuma domestica)

. =til *setat

4. ?$S>18 ;

/. Kapas

0. 'empeng K'"

2. Kertas saring

7. etanol

9. %-?eksana

18. "issue

III.2 5ara "erja

1. :isiapkan alat dan bahan

$. :ikombinasikan pelarut n-heCan, etil asetat, dan metanol diantarana+

a. %-heCan 188;

b. %-heCan-etil asetat 78+$8

c. %-heCan-etil asetat 08+8

d. %-heCan-etil asetat 8+08

e. %-heCan-etil asetat $8+78

f. =til asetat 188;

g. etanol 188;

3. :itimbang $ gram ekstrak kering kunit (Curcuma domestica)

4. :itimbang $ gram silika gel

/. :igerus ekstrak dengan silika gel hingga halus dan homogen

6. :itimbang 8 gram silika gel, kemudian dimasukkan dalam kolom

sambil menjalankan pompa &akum

7. :imasukkan metanol untuk mencoba kolom ang akan digunakan

1


15/25

8. :imasukkan campuran ekstrak kunit dan silika gel ke dalam kolom,

ratakan sedikit lalu ditutup dengan kertas saring

9. asukkan satu-persatu kombinasi pelarut kedalam kolom sambil

menjalankan pompa &akum

18. ?asil fraksi ditampung dalam cawan proselin kemudian diuapkan

11. :ikeluarkan ekstrak ang telah kering dan dimasukkan kedalam botol

&ial dan

1$. :iencerkan estrak dengan metanol

1. :itotolkan larutan ekstrak pada lempengan 18C18 cm

1. :imasukkan lempengan tersebut dalam chamber ang telah jenuh dengan

kombinasi pelarut

1/. :ikeluarkan lempengan kemudian diamati noda ang terlihat dengan

cahaa tampak, sinar ! $/-00, dan pentemprotan asam sulfat 18;

1/


16/25

BAB I&

HA!IL PEN'AMATAN dan PEMBAHA!AN

I&.1 Has#l Penga$atan

erdasarkan hasil percobaan diatas diperoleh 2 ekstrak kental ang

mengandung komponen kimia berdasarkan kelarutanna dengan eluen aitu

ekstrak kental heksana 188;, ektrak kental heksana-etil asetat 78+$8, ektrak

kental heksana-etil asetat 08+8, ektrak kental heksana-etil asetat 8+08,

ektrak kental heksana-etil asetat $8+78, ekstrak kental etil asetat dan ektrak

kental metanol.

'a$bar 2. Ekstrak kental n,-eksana sa$(el r#$(ang kun#t

4ambar diatas menunjukan ekstrak kental ang didapatkan dari hasil

penguapan fraksi n-heksana

10


17/25

'a$bar ). Ekstrak kental n,-eksana,et#l asetat 67827 sa$(el r#$(ang kun#t


penguapan fraksi n-heksana-etil asetat dengan perbandingan 78+$8

'a$bar *. Ekstrak kental n,-eksana,et#l asetat 78*7 sa$(el r#$(ang kun#t


penguapan fraksi n-heksana-etil asetat dengan perbandingan 08+8

'a$bar . Ekstrak kental n,-eksana,et#l asetat *787 sa$(el r#$(ang kun#t


penguapan fraksi n-heksana-etil asetat dengan perbandingan 8+08

12


18/25

'a$bar . Ekstrak kental n,-eksana,et#l asetat 27867 sa$(el r#$(ang kun#t

4ambar diatas menunjukan ekstrak kental ang didapatkan dari hasilpenguapan fraksi n-heksana-etil asetat dengan perbandingan $8+78

'a$bar 9. Ekstrak kental et#l asetat sa$(el r#$(ang kun#t


penguapan fraksi etil asetat

'a$bar 6. Ekstrak kental $etanol sa$(el r#$(ang kun#t


penguapan fraksi metanol

17


19/25

:engan percobaan diatas juga dapat dilihat penampakan noda hasil

identifikasi senawa dengan menggunakan K'".

'a$bar :. Pena$(akan noda secara ta$(ak (ada "LT

4ambar diatas menunjukan noda ang tampak secara kasat mata pada

lempeng K'"

'a$bar 17. Pena$(akan noda "LT (ada la$(u U& 2* n$

4ambar diatas menunjukan noda ang tampak pada lampu ! $/ nm

'a$bar 11. Pena$(akan noda "LT (ada la$(u U& ) n$

4ambar diatas menunjukan noda ang tampak pada lampu ! 00 nm

19


20/25

'a$bar 12. Pena$(akan noda "LT setela- d#se$(rot H2!3*

4ambar diatas menunjukan noda ang tampak setelah disemprot ?$S>

:ari beberapa gambar diatas dapat dilihat bahwa semua pelarut

memberikan penampakan noda dengan jarak ang sama sehingga jika diukur

akan memberikan Bf ang sama aitu aitu dengan Bf 1 sebesar 8,$/, Bf $

sebesar 8,2/, dan Bf sebesar 8,/.

I&.2 Pe$ba-asan

I&.2.1 "ro$atogra%# "olo$ &aku$

#ada percobaan ini dilakukan fraksionasi terhadap ekstrak kental ang

diperoleh dari ekstraksi tanaman kunit (Curcuma domestica) dengan

menggunakan kromatografi kolom &akum. ?al ini dilakukan dengan tujuan

agar mahasiswa dapat melakukan dan mengamati langsung proses

pemisahan senawa ang ada dalam ekstrak kental menjadi senawa ang

lebih spesifik dengan menggunakan kromatografi ang dilengkapi pompa

&akum untuk mempercepat laju alir dari eluen untuk mengelusi komponen

kimia ang ada dalam ekstrak. :imana ekstrak ang diperoleh akan

berperan dalam identifikasi senawa pada masing-masing sampel untuk uji

kromatogafi.

'angkah pertama ang dilakukan dalam percobaan ini adalah

meniapkan alat dan bahan ang digunakan. Selanjutna ekstrak kental

kunit (Curcuma domestica) ditimbang sebanak $ g, lalu dicampurkan

dengan silika gel ang bobotna $ gram pula. :alam hal ini bobot silika gel

dan bobot ekstrak berjumlah sama dengan tujuan agar ekstrak tersalutkan

$8


21/25

silika gel. Setelah itu campuran ekstrak dan silika gel digerus hingga

menjadi homogen dan halus.

'angkah selanjutna silika gel dengan berat 8 gram dimasukkan ke

dalam kolom dengan tinggi E dari tinggi kolom sambil menalakan pompa

&akum dan menekanna dengan botol &ial. #enggunaan botol &ial ini

dilakukan untuk mengganti tidak tersediana batang pengaduk bersalut.

*dana penekanan dari botol &ial dan penarikan dari pompa &akum

terhadap silika gel agar silika gel tersebut menjadi padat dan diperoleh

kerapatan ang maksimum.

Setelah silika gel menjadi padat dimasukkan pelarut organik ang

cocok aitu metanol untuk mencoba apakah kolom telah sempurna untuk

digunakan. @ika pelarut tersebut turun secara horiontal berarti kolom telah

sempurna. :alam hal ini ketika metanol dimasukkan dalam silika gel

metanol turun secara horiontal dan hal ini menandakan bahwa kolom telah

sempurna.

Setelah itu, campuran ekstrak dan silika gel ang telah homogen

dimasukkan ke dalam kolom sambil menalakan pompa &akum agar

campuran ekstrak dan silika gel terletak padat dan rapat dengan silika gel

kemudian dilapisi dengan kertas saring. ?al ini bertujuan untuk menghindari

percikan pada saat penambahan eluen.

Selanjutna dibuat eluen ang tingkat kepolaranna dimulai dari ang

rendah sampai ang tinggi hal ini berarti akan dibuat eluen ang bersifat non

polar hingga eluen bersifat polar. =luen ini dibuat dengan pelarut dan

perbandingan ang berbeda aitu n-heksana 188; n-heksana-etil asetat

78+$8, n-heksana-etil asetat 08+8, n-heksana-etil asetat 8+08, n-heksana-

etil asetat $8+78, etil asetat 188; dan metanol 188;. =luen ini kemudian

dimasukkan ke dalam kolom.

#enambahan eluen dimulai dari paling non polar kemudian ke eluen

polar. ?al ini bertujuan agar semua senawa ang bersifar non polar keluar

terlebih dahulu, jika digunakan eluen ang bersifat polar, bukan saja

senawa ang bersifat polar ang ditarik senawa non polar juga akan

$1


22/25

ditarik. =luen ditambahkan melalui dinding kolom dan pompa &akum

dinalakan sehingga eluen turun mengelusi komponen kimia dan

eluen ang keluar ditampung sebagai fraksi-fraksi pada wadah ang

berbeda. Fraksi-fraksi tersebut kemudian diuapkan diatas water batah untuk

mendapatkan ekstrak kental ang akan diidentifikasi menggunakan

kromatografi lapis tipis.

I&.2.2 "ro$atogra%# La(#s T#(#s

#ada percobaan ini dilakukan identifikasi senawa dalam 2 ekstrak

berbeda, hasil fraksionasi sebelumna. :alam uji K'" ini, digunakan

lempeng alumina sebagai adsorben (fase diam) dan eluenna (fase gerak),

aitu pelarut n-heksana dan etil asetat dengah perbandingan $1+1.

'angkah pertama ang dilakukan adalah melarutkan ekstrak kental

rimpang kunit dengan metanol. !ntuk pelarutan tersebut, ekstrak tidak

boleh terlalu kental dan tidak boleh terlalu cair. @ika terlalu kental, ekstrak

akan menumbat pipa kapiler dan akan susah keluar dari pipa tersebut.:an

jika terlalu encer maka totolan sebagian besar hana berupa pelarut,

sedangkan sampel ang akan di uji hana dalam jumlah ang kecil.

Selanjutna eluen di masukkan ke dalam chamber, dan ke dalam

chamber tersebut dimasukkan kertas saring. ?al ini bertujuan untuk

menjenuhkan eluen, ang mana jenuhna eluen tersebut ditandai dengan

basahna kertas saring tersebut secara keseluruhan. @ika eluen telah jenuh,

kertas saring dikeluarkan dan digantikan dengan lempeng alumina ang

sebelumna telah ditotolkan ekstrak. chamber ang ditempati lempeng dan

eluen harus tertutup rapat agar tidak terjadi penguapan dari eluen. 'empeng

tersebut dibiarkan dalam eluen selama beberapa menit hingga eluen

bergerak ke atas mencapai batas akhir ang telah ditentukan.

$$


23/25

Selanjutna lempeng diamati secara &isual. :imana pada saat

pengamatan, ditunjukkan bahwa lempeng tersebut menghasilkan bercak

noda berwarna kuning. %amun untuk ekstrak heksana tidak menampakkan

bercak noda secara jelas. ?al ini mungkin diakibatkan karena ekstrak ang

digunakan bening dan bersifat non polar sehingga ikatanna dengan fase

diam tidak terlalu kuat dan mudah dibawa oleh eluen sampai ke atas

lempeng.

!ntuk lebih menegaskan hasil uji ang didapatkan, maka dilakukan

deteksi bercak noda secara fisika maupun kimia terhadap lempeng. Secara

fisika, lempeng di amati dibawah sinar ! gelombang pendek (G $/ nm)

dan ! gelombang panjang (G 00 nm). :imana pada ! G$/ nm,

lempeng berfluoresensi terang dan bercak berwarna gelap. Sebalikna, pada

! G 00 nm lempeng berwarna gelap dan bercak berfluoresensi terang.

:ari hasil deteksi ini, didapatkan bahwa lempeng bercak hijau pada sinar

! $/ nm, sedangkan pada sinar ! 00 nm lempeng tersebut hana

menunjukkan warna coklat.

Selanjutna secara fisika, lempeng disemprot dengan pereaksi ?$S>

dan kemudian dipanaskan dalam o&en dengan suhu 8 o6 selama menit,

lalu lempeng diamati secara &isual. :ari hasil pengamatan menunjukkan

bercak noda ang ditampakkan oleh lempeng berubah. :imana bercak noda

ang berwarna kuning menjadi berwarna coklat. :an dengan adana

penemprotan ?$S> ini noda ang tidak tampak menggunakan sinar !baik $/ nm dan 00 nm menjadi tampak hal ini terbukti pada lempeng ini

dimana timbul bercak noda berwarna hijau dan ungu dengan jarak ang

berbeda.

:ari bercak ang dihasilkan kemudian dilakukan perhitungan Bf.

#erhitungan Bf pada lempeng ini menunjukkan Bf ang sama aitu dengan

Bf 1 sebesar 8,$/, Bf $ sebesar 8,2/, dan Bf sebesar 8,/. ?al ini

$


24/25

menunjukkan bahwa senawa ang di fraksionasi dari ekstrak kunit

bersifat polar karena semakin kecil nilai Bf ang dihasilkan, semakin polar

senawa tersebut.

BAB &"E!IMPULAN

&.1 "es#$(ulan

:ari percobaan ang dilakukan dapat disimpulkan bahwa +

1. #rinsip kerja kromatografi kolom &akum aitu adsorpsi atau serapan,

sedangkan pemisahanna didasarkan pada senawa-senawa ang akan

dipisahkan terdistribusi di antara fasa diam dan fasa gerak dalam

perbandingan ang berbeda-beda. :imana mekanisme adsorpsina aitu

$


25/25

mengadsorbsi ion-ion dan molekul-molekul senawa pada fase diam dan

pemisahannna berdasarkan kelarutan senawa dengan eluen ang

digunakan:iperoleh ekstra kental n-heksana ang mengandung senawa

non polar dan ekstrak kental metanol dan air ang mengandung senawa

polar.

$. :iperoleh 2 ekstrak kental ang mengandung komponen kimia

berdasarkan kelarutanna dengan eluen eluen aitu ekstrak kental

heksana 188;, ektrak kental heksana-etil asetat 78+$8, ektrak kental

heksana-etil asetat 08+8, ektrak kental heksana-etil asetat 8+08, ektrak

kental heksana-etil asetat $8+78, ekstrak kental etil asetat dan ektrak

kental metanol.

3. :iperoleh senawa dengan Bf ang sama aitu dengan Bf 1 sebesar 8,$/,

Bf $ sebesar 8,2/, dan Bf sebesar 8,/. ?al ini menunjukkan bahwa

senawa ang di fraksionasi dari ekstrak kunit bersifat polar karena

semakin kecil nilai Bf ang dihasilkan, semakin polar senawa tersebut.

&.2 !aran

:iharapkan agar alat-alat ang digunakan dalam praktikum, ditambah

jumlahna, terutama rota&apor.

$/

94371545 BAB I Kromatografi Kolom Vakum

Documents

Transcript of 94371545 BAB I Kromatografi Kolom Vakum