La qualità in IHC

“A SCANNER DARKLY”

Claudio Ceccarelli e Stefano Simonazzi U.O. Anatomia Patologica - Prof. G. N.

Martinelli

LA STANDARDIZZAZIONE DEL RISULTATO

A A

RISULTATO UGUALE A TEMPI DIVERSI - CON REAGENTI DIVERSI

CON STRUMENTI DIVERSI

02/05/2004

Ab XXX

Kit Meliorstain

AUTOMAT K

12/12/2012

Ab YZZ

Kit SuperColor

ROBOSTAINER

OUTPUT = qualità + PRODUTTIVITA’

STANDARDIZZATO TUTTO

QUELLO CHE VEDO E’ LA VERITA’ / LA REALTA’

UN OSCURO SCRUTARE

A

NON CI CHIEDIAMO MAI SE ESISTONO CONDIZIONI ALLE QUALI IL MATERIALE NON SI

PRESTA AD UNA STANDARDIZZAZIONE DEL

RISULTATO

BISOGNA PROCESSARE TUTTO

BISOGNA VALUTARE TUTTO

A

LA QUALITA’ MORFOLOGIA COME UNICO CRITERIO DI ADEGUATEZZA

LE TECNICHE IHC NON SONO QUANTITATIVE !

Utilizzo di IHC in algoritmi di diagnostica differenziale

(risposta qualitativa SI/NO)

PROGRAMMI DI VALUTAZIONE ESTERNA DI

QUALITA’

NordiQC

Cromogranina A, RUN 18, 2006 94 Lab.

30/94 OTTIMALE (32,0%)

36/94 BUONA (38,0%)

21/94 BORDERLINE (22,0%)

7/94 INSUFFICIENTE (8,0%)

CDX-2, RUN 22, 2008 56 Lab.

17/56 OTTIMALE (30,0%)

19/56 BUONA (34,0%)

14/56 BORDERLINE (25,0%)

6/56 INSUFFICIENTE (11,0%)

NON SONO NEMMENO COSI’ RIPRODUCIBILI

LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE

EPPUREGLI STESSI REAGENTI E PRINCIPI PER IL SAGGIO “ELISA” QUANTITATIVO

Il punto di vista dei reagenti

QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA FFPE

LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE

Il punto di vista dei materiali

Fresco = FFPE

ALLORA, A CERTE CONDIZIONI, IL RISULTATO DI UNA

COLORAZIONE IMMUNOISTOCHIMICA PUO’

ESSERE VALUTATO SECONDO CRITERI QUANTITATIVI

PERCHE’ DOBBIAMO PORCI QUESTO PROBLEMA?

VALUTAZIONE QUANTITATIVA DELLA

ESPRESSIONE DI PROTEINE MEDIANTE IHC

QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE

Qualsiasi intensità

I valori sono riportati in percentuale

esempio: ER = 100 %

USO DEI METODI AR

STANDARDIZZAZIONE

QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE

FALSO NEGATIVO ??

< 10 % Negativo

15 %

0 %

QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE

SCORE 0 +1 +2 +3 (% e Intensità)

Score +2 Score 0

APPLICAZIONE DEI CONCETTI DELLA MEDICINA DI LABORATORIO

CONCETTO DI

“TOTAL TEST APPROACH”

Aspetti del test considerati:

pre-analitici

analitici

post-analitici

Fattori analitici del test

REAGENTI

Anticorpi

Sistemi di rivelazione

Tamponi

PROTOCOLLI

Procedura IHC

(tempi e temperature)

AR

COMPRENDONO:

AUTOMAZIONE NUOVI AR ?

Fattori pre-analitici del test

COMPRENDONO:

PREPARAZIONE DEL CAMPIONE

Asportazione/Fissativo

Spessore/tipo di tessuto

Tempo di fissazione

Temperatura del processo

Processazione post-fissazione

Interazione fra diversi fattori del test

DALLA INTERAZIONE

FRA REAGENTI

Anticorpi

SISTEMI AR

E PRE-ANALITICA

CONDIZIONI DI VARIABILITA’

PRE-ANALITICHE

COMBINAZIONE DI QUESTE CON LA METODICA

IHC

PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC

SCARSA PRESERVAZIONE DEL

TESSUTO

> SENSIBILITA’ ALLA DEGRADAZIONE DELL’EPITOPO

PRESCELTO

CONDIZIONI DI VARIABILITA’

PRE-ANALITICHE

SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTO

PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC

SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTODEGRADAZIONE – MANCATA FISSAZIONE