La qualità in IHC “A SCANNER DARKLY”
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La qualità in IHC
“A SCANNER DARKLY”
Claudio Ceccarelli e Stefano Simonazzi U.O. Anatomia Patologica - Prof. G. N.
Martinelli
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LA STANDARDIZZAZIONE DEL RISULTATO
A A
RISULTATO UGUALE A TEMPI DIVERSI - CON REAGENTI DIVERSI
CON STRUMENTI DIVERSI
02/05/2004
Ab XXX
Kit Meliorstain
AUTOMAT K
12/12/2012
Ab YZZ
Kit SuperColor
ROBOSTAINER
OUTPUT = qualità + PRODUTTIVITA’
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STANDARDIZZATO TUTTO
QUELLO CHE VEDO E’ LA VERITA’ / LA REALTA’
UN OSCURO SCRUTARE
A
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NON CI CHIEDIAMO MAI SE ESISTONO CONDIZIONI ALLE QUALI IL MATERIALE NON SI
PRESTA AD UNA STANDARDIZZAZIONE DEL
RISULTATO
BISOGNA PROCESSARE TUTTO
BISOGNA VALUTARE TUTTO
A
LA QUALITA’ MORFOLOGIA COME UNICO CRITERIO DI ADEGUATEZZA
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LE TECNICHE IHC NON SONO QUANTITATIVE !
Utilizzo di IHC in algoritmi di diagnostica differenziale
(risposta qualitativa SI/NO)
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PROGRAMMI DI VALUTAZIONE ESTERNA DI
QUALITA’
NordiQC
Cromogranina A, RUN 18, 2006 94 Lab.
30/94 OTTIMALE (32,0%)
36/94 BUONA (38,0%)
21/94 BORDERLINE (22,0%)
7/94 INSUFFICIENTE (8,0%)
CDX-2, RUN 22, 2008 56 Lab.
17/56 OTTIMALE (30,0%)
19/56 BUONA (34,0%)
14/56 BORDERLINE (25,0%)
6/56 INSUFFICIENTE (11,0%)
NON SONO NEMMENO COSI’ RIPRODUCIBILI
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LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE
EPPUREGLI STESSI REAGENTI E PRINCIPI PER IL SAGGIO “ELISA” QUANTITATIVO
Il punto di vista dei reagenti
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QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA FFPE
LE TECNICHE IHC SONO “PER DEFINIZIONE” TECNICHE NON QUANTITATIVE
Il punto di vista dei materiali
Fresco = FFPE
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ALLORA, A CERTE CONDIZIONI, IL RISULTATO DI UNA
COLORAZIONE IMMUNOISTOCHIMICA PUO’
ESSERE VALUTATO SECONDO CRITERI QUANTITATIVI
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PERCHE’ DOBBIAMO PORCI QUESTO PROBLEMA?
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VALUTAZIONE QUANTITATIVA DELLA
ESPRESSIONE DI PROTEINE MEDIANTE IHC
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QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE
Qualsiasi intensità
I valori sono riportati in percentuale
esempio: ER = 100 %
USO DEI METODI AR
STANDARDIZZAZIONE
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QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE
FALSO NEGATIVO ??
< 10 % Negativo
15 %
0 %
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QUANTIFICAZIONE DELLE PROTEINE DA ROUTINE
SCORE 0 +1 +2 +3 (% e Intensità)
Score +2 Score 0
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APPLICAZIONE DEI CONCETTI DELLA MEDICINA DI LABORATORIO
CONCETTO DI
“TOTAL TEST APPROACH”
Aspetti del test considerati:
pre-analitici
analitici
post-analitici
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Fattori analitici del test
REAGENTI
Anticorpi
Sistemi di rivelazione
Tamponi
PROTOCOLLI
Procedura IHC
(tempi e temperature)
AR
COMPRENDONO:
AUTOMAZIONE NUOVI AR ?
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Fattori pre-analitici del test
COMPRENDONO:
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE
Asportazione/Fissativo
Spessore/tipo di tessuto
Tempo di fissazione
Temperatura del processo
Processazione post-fissazione
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Interazione fra diversi fattori del test
DALLA INTERAZIONE
FRA REAGENTI
Anticorpi
SISTEMI AR
E PRE-ANALITICA
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CONDIZIONI DI VARIABILITA’
PRE-ANALITICHE
COMBINAZIONE DI QUESTE CON LA METODICA
IHC
PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC
SCARSA PRESERVAZIONE DEL
TESSUTO
> SENSIBILITA’ ALLA DEGRADAZIONE DELL’EPITOPO
PRESCELTO
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CONDIZIONI DI VARIABILITA’
PRE-ANALITICHE
SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTO
PROBLEMA DI RIPRODUCIBILITA’ DELLE TECNICHE IHC
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SCARSA PRESERVAZIONE DEL TESSUTODEGRADAZIONE – MANCATA FISSAZIONE