Tanaman Stevia (Stevia rebaudiana) memiliki berbagai keunggulan namun

mengalami keterbatasan dalam perbanyakan bibit. Jenis ini mengandung senyawa steviosida

dengan tingkat kemanisan 300-400 kali dibandingkan gula tebu sukrosa (Geuns, 2003;

Megeji et al., 2005; Mousumi, 2008). Gula stevia bersifat nonkar-sinogenik dan rendah

kalori, sehingga cocok untuk penderita diabetes dan obesitas. Stevia juga dapat dimanfaatkan

sebagai pencegah timbulnya plak gigi dan menurunkan akumulasinya sebesar 57,82% (De

Slavutzky dan Blauth, 2010). Saat ini stevia telah banyak digunakan dalam campuran

makanan dan minuman di negara Amerika Selatan, Jepang, Cina dan Korea Selatan serta

negara-negara lain di Asia. Di Indonesia sendiri penggunaan stevia masih terbatas pada

industri jamu dalam negeri dan memenuhi permintaan pasar luar negeri dimana satu produsen

dapat memasok 50-70 ton daun stevia kering per bulan dengan harga jual sekitar Rp 23.000,-

sampai Rp 24.000,- per kg (http://www. ciputraenterpreneurship). Perbanyakan stevia secara

konvensional umumnya dilakukan dengan biji atau setek. Perbanyakan menggunakan biji

kurang efektif karena rendahnya perkecambahan dan keseragaman (Goettemoeller dan Ching,

1999). Perbanyakan stevia melalui setek menghasilkan benih yang seragam tetapi jumlahnya

terbatas. Perbanyakan menggunakan teknik kultur jaringan merupakan metode yang dapat

digunakan untuk menghasilkan benih seragam secara massal dan cepat. Multiplikasi tanaman

stevia telah dilakukan dalam berbagai penelitian, diantaranya perbanyakan stevia

menggunakan sumber eksplan pucuk dengan media Lismainer dan Skoog (Gunawan, 1992),

sementara Pratiwi (1995) telah memperoleh 10 tunas baru dalam waktu 50 hari pada

perbanyakan stevia dengan menggunakan teknik kultur jaringan. Kristina dan Syahid (2010)

telah melakukan perbanyakan dan penyimpanan Stevia dengan menggunakan media

Murashige dan Skoog (MS) dan penambahan Benzyl Amino Purine (BAP) 0,1 mg l-1 yang

menghasilkan sekitar 20 tunas per botol. Keberhasilan tersebut tentunya perlu didukung

dengan optimalisasi perakaran untuk meningkatkan keberhasilan aklimatisasi. Gunawan

(1992) telah melakukan inisiasi perakaran stevia dengan cara menginduksi stevia yang telah

dikulturkan selama 30 hari pada media Linsmainer dan Skoog yang ditambahkan dengan 0,1

mg l-1 NAA. Namun belum dilakukan studi lebih lanjut dengan menggunakan jenis auksin

lain pada berbagai konsentrasi untuk mendapatkan inisiasi perakaran yang optimum sabagai

protokol perbanyakan bibit secara in vitro.

Cahyadi (2006) mengemukakan bahwa jumlah kalori gula pasir sebebesar 3,94 kkal/g.

Menurut Raini dan Isnawati (2011) konsumsi gula tinggi dapat mengakibatkan tingginya

kadar gula dalam tubuh sehingga mengakibatkan diabetes, dapat menyebabkan gigi

berlubang, serta menyebabkan kegemukkan. Pemanis rendah kalori seperti stevia merupakan

jenis pemanis yang aman bagi orang yang cenderung mengurangi konsumsi gula sukrosa.

Maudy et al., (1992) dalam Buchori et al., (2004) mengungkapkan bahwa stevia memiliki

tingkat kemanisan 200-300 kali lebih manis dari sukrosa. Beberapa penelitian telah

menyebutkan bahwa steviosida mengandung kalori yang rendah sampai dengan nol kalori

(Thomas dan Glade, 2010). Selain rendah kalori, stevia yang berasal dari tanaman bersifat

non karsinogenik, aman, dan tidak menyebabkan carries gigi (Rukmana, 2003). Daryanti

(2012) dalam penelitiannya juga mengungkapkan bahwa ekstraksi stevia dengan

menggunakan pelarut air menghasilkan warna coklat gelap. Ghazi et al., (2013) menyatakan

bahwa timbulnya warna coklat ekstrak stevia dikarenakan adanya kandungan tanin.

Faktor yang menentukan mutu bahan pangan adalah pemanis dan pewarna (Pitojo,

2009). Pemanis alami yang popular di Indonesia adalah gula pasir yang dihasilkan oleh

tanaman tebu, mengandung kalori yang sangat tinggi. Hal tersebut dapat menyebabkan

penyakit diabetes dan obesitas. Bagi penderita penyakit tersebut, gula tebu merupakan

pantangan yang harus dihindari, padahal tanpa gula susu terasa tawar. Stevia diperoleh dari

tanaman maka penggunaannya lebih aman, nonkarsinogenik dan non kalori. Kadar

kemanisannya sekitar 200-300 kali lebih manis dibanding gula biasa. Keunggulan lainnya

adalah gula stevia tidak menyebabkan carries gigi, memiliki nilai kalori rendah yang cocok

bagi penderita diabetes, dan tidak menyebabkan kanker pada pemakaian jangka panjang

(Buchori, 2007). Kekurangannya adalah penambahan stevia sebagai pemanis dapat

menurunkan kandungan protain (Hsieh 2004 dalam Rani dan Isnawati 2011).

Faktor yang menentukan mutu bahan pangan adalah pemanis dan pewarna. Dalam

pembuatan yoghurt jenis pemanis yang popular di Indonesia adalah gula pasir (sukrosa) yang

memiliki kalori sangat tinggi. Hal tersebut dapat menyebabkan penyakit diabetes dan

obesitas. Menurut Suparmo dan Sudarmanto (1991), gula pasir berbentuk kristal berwarna

putih mempunyai rasa manis, dan mengandung sukrosa 97,1%, gula reduksi 1,24%, kadar air

0,61%, dan senyawa organik bukan gula 0,7%. Jenis pemanis gula stevia berasal dari daun

stevia (Stevia rebaudiana) yang telah mengalami proses ekstraksi dapat disubtitusikan

sebagai pengganti gula pasir. Gula stevia tidak menyebabkan carries gigi, rendah kalori

sehingga baik bagi penderita diabetes, dan tidak menyebabkan kanker pada pemakaian jangka

panjang (Buchori, 2007). Hasil penelitian Kusuma (2013), menunjukkan bahwa dalam

pembuatan susu organik dari biji keluwih dengan penambahan gula pasir 25 g memiliki rasa

sangat manis dan dengan penambahan ekstrak daun stevia 25 g memiliki rasa manis.

Kandungan utama gula stevia yang berasal dari ekstrak daun stevia adalah derivate steviol

terutama steviosid (4-15%), rebausid A (2-4%), dan C (1-2%) serta dulkosida. Selain itu, gula

stevia rendah kalori dan non-karsinogenik, sehingga aman digunakan bagi penderita diabetes

(Raini dan Isnawati, 2011). Gula pasir mengandung sukrosa yang memiliki sifat tidak

berwarna, tidak berbau, dan rasanya manis serta memiliki jumlah kalori yang tinggi, sehingga

tidak baik dikonsumsi para penderita diabetes (Gunawan dan Mulyani, 2004).

Stevia merupakan tanaman perdu famili Compositae asal Paraguay yang dapat

dijadikan pemanis pengganti gula tebu karena keunggulannya sebagai pemanis alami yang

tidak mengandung kalori dan 200-300 kali lebih manis daripada gula tebu (Mogra dan

Dashora dalam Sumaryono dan Sinta, 2011). Pemanis stevia memiliki indeks glikemat

hampir nol sehingga aman bagi penderita diabetes maupun bagi orang yang sedang menjalani

diet makanan untuk menurunkan berat badan (Gregesen et al., dalam Sumaryono dan Sinta,

2011). Stevia memiliki nilai ekonomis tinggi untuk dibudidayakan sehingga ketersediaan

bibit yang baik merupakan salah satu faktor penentu keberhasilan budidaya stevia.

Penyediaan bibit secara konvensional melalui biji memiliki tingkat keberhasilan yang rendah,

sedangkan perbanyakan dengan stek ujung apikal dan batang akan menghasilkan pertanaman

yang tidak seragam sehingga kualitas tanaman tidak dapat dipastikan. Perbanyakan secara

kultur jaringan lebih cepat, bibit yang dihasilkan lebih banyak dan seragam serta kualitas

tanaman lebih terjaga (Staba, 2000). Pada penelitian ini digunakan eksplan daun stevia karena

kultur kalus eksplan daun stevia dapat menghasilkan metabolit sekunder berupa steviosida

yang merupakan pemanis alam.

Tanaman stevia tumbuh baik di dataran tinggi, namun tumbuh kurang baik di dataran

rendah. Karena lahan pertanian pada dataran tinggi terbatas, maka untuk mengatasi

keterbatasan lahan produksi pemanis stevia dapat dilakukan di laboratorium dengan teknik

kultur jaringan agar diperoleh metabolit sekundernya. Dalam kultur jaringan diperlukan

medium nutrisi yang cocok agar hasil yang diperoleh sesuai dengan yang diinginkan.

Medium NP memiliki komposisi hampir sama dengan medium MS namun kandungan garam-

garam mineralnya lebih rendah dan telah terbukti dapat menginduksi kalus eksplan daun

stevia lebih cepat dibandingkan dengan medium MS. Zat pengatur tumbuh baik eksogen

maupun endogen juga sangat diperlukan untuk merangsang pembelahan sel dan

dediferensiasi eksplan agar membentuk kalus. Auksin menginduksi pembentangan sel

terutama dengan menaikkan kemungkinan pemanjangan dinding sel. Pada umumnya auksin

digunakan untuk menginduksi pembentukan kalus dengan memacu pemanjangan sel di dalam

jaringan tanaman (Davies, 2004). Zat pengatur tumbuh 2,4 D merupakan salah satu jenis

auksin yang memiliki peran inisiasi kalus pada jaringan tanaman (Flick, et al. dalam Lestari

2011).

Induksi kalus tercepat terjadi pada perlakuan 2,4 D 1,0 mg/l; 1,5 mg/l; dan 2,0 mg/l;

yaitu 8 hari. Induksi kalus terjadi karena pemberian 2,4 D eksogen pada medium NP yang

digunakan untuk menumbuhkan eksplan berpengaruh terhadap sel-sel eksplan stevia

sehingga terjadi pemanjangan sel (Hayati et al., 2010) untuk membentuk kalus sedangkan

pada kontrol tanpa penambahan 2,4 D (perlakuan 2,4 D 0 mg/l) kalus tidak terinduksi. Tidak

terbentuknya kalus pada perlakuan E dikarenakan sel-sel eksplan tidak kompeten untuk

mengekspresikan totipotensi sehingga tidak terjadi induksi kalus (Smith, 2013). Tekstur kalus

hampir semua perlakuan adalah kompak kecuali pada perlakuan 2,4 D 0 mg/l. Pada perlakuan

2,4 D 0 mg/l tidak terjadi induksi kalus, eksplan daun hanya menggulung hingga hari terakhir

pengamatan yaitu hari ke-40. Hartmann dan Kester menyebutkan bahwa tekstur kalus

kompak terbentuk karena pembelahan sel-sel eksplan stevia terjadi hanya pada bagian

meristematik yang terletak pada bagian luar sel perifer, tidak pada seluruh bagian eksplan

dikarenakan lapisan dalamnya terdiri dari sel mixoploid yang merupakan jaringan tua dan

tidak membelah lagi. Proses fisiologi dan genetik yang terjadi akan berbeda dengan lapisan

luar, kemudian pembelahan sel pada bagian luar eksplan berkurang sehingga kalus menjadi

kompak (Katuuk, 1989).

Kalus pada perlakuan 2,4 D 0,5 mg/l berwarna hijau, perlakuan 2,4 D 1,0 mg/l

berwarna hijau putih sedangkan pada perlakuan 2,4 D 1,5 mg/l; dan 2,4 D 2,0 mg/l; berwarna

kuning. Kalus yang berwarna hijau merupakan kalus yang di dalam sel-selnya masih

terkandung klorofil, kalus yang berwarna hijau ini didapat dari perlakuan dengan konsentrasi

2,4 D lebih rendah. Pada kalus yang berwarna kuning telah terjadi reduksi pembentukan

klorofil dihasilkan oleh perlakuan yang memiliki konsentrasi 2,4 D lebih tinggi daripada

kalus berwarna hijau. Menurut Katuuk (1989) 2,4 D yang ditambahkan dalam medium NP

sebagai auksin bersifat sebagai penghambat terhadap pembentukan klorofil, sesuai data hasil

yaitu kalus pada perlakuan 2,4 D 0,5 mg/l berwarna hijau, pada perlakuan 2,4 D 1,0 mg/l

berwarna hijau putih sedangkan pada perlakuan 2,4 D 1,5 mg/l; dan 2,4 D 2,0 mg/l; berwarna

kuning. Pada medium NP yang digunakan telah disubtitusi dengan air kelapa 20%. Menurut

Katuuk (1989) air kelapa mengandung kalori, protein dan mineral juga mengandung

sitokinin, keberadaan sitokinin dalam medium yang ditanami eksplan daun stevia mampu

bekerja secara sinergis dengan 2,4 D sehingga eksplan mengalami stres yang diarahkan

dalam peningkatan pembelahan sel secara terus menerus. Interaksi auksin dan sitokinin ini

selanjutnya akan menginisiasi kalus dari stevia. Peningkatan pembelahan sel ini akan

meningkatkan ukuran kalus sehingga biomassa kalus juga akan bertambah.

Gula sebagai pemanis banyak dikonsumsi oleh masyarakat sehari-hari, akan tetapi

bila terlalu banyak mengkonsumsi gula dapat menimbulkan efek yang merugikan kesehatan.

Pada tahun 1915, asupan gula perorang pertahun sekitar 17 pound.1 Secara dramatis,

kenaikan tersebut terjadi pada tahun 1980 menjadi 124 pound dan akhir-akhir ini konsumsi

gula sekitar 155 pound.1 Yang menarik, prevalensi penderita diabetes juga meningkat dari

13,6 orang per 100 penduduk pada tahun 1963 menjadi 54,5 per 1000 penduduk pada tahun

2005. Hubungan antara konsumsi gula dan penyakit diabetes adalah akibat asupan gula yang

tinggi membuat pankreas bekerja keras untuk memproduksi insulin yang dibutuhkan dalam

menormalkan kadar gula dalam darah. Produksi insulin yang berlebihan pada akhirnya dapat

menimbulkan kelelahan pankreas sehingga produksi insulin akan menurun.. Hal ini dapat

berakhir dengan tingginya kadar gula dalam tubuh dan akan mengakibatkan diabetes.

Diabetes akan membuat banyak komplikasi dalam tubuh.1,2,3

Konsumsi gula yang tinggi juga dapat menyebabkan gigi berlubang. Bakteri yang

berada di mulut, seperti Streptococci mutans akan memfermentasikan gula menjadi asam.

Asam ini menempel pada email gigi yang menyebabkan gigi berlubang. Kegemukan, juga

sering terjadi pada orang yang mengkonsumsi gula tinggi. Gula dapat mempengaruhi

keseimbangan hormonal yang mengakibatkan peningkatan selera makan dan

perkembangbiakan jaringan lemak dan selulit. Di samping itu, gula juga mempengaruhi

metabolisme kalsium dalam tubuh. Osteoporosis dapat timbul karena masalah adanya

asimilasi kalsium yang dihubungkan dengan konsumsi gula yang berlebihan. Selain itu,

konsumsi gula yang tinggi juga berdampak pada sintesa hormon yang berimplikasi langsung

pada koordinasi aktivitas sistem imunitas. Hal ini mengakibatkan imunitas rendah yang

dikarakterisasi dengan meningkatnya kemampuan penerimaan tubuh terhadap beberapa

penyakit seperti virus, cystitis, infeksi kulit. Penyakit lain yang ditimbulkan karena konsumsi

gula dalam jumlah besar adalah alergi, sklerosis, gastritis, kolitis, siklus menstruasi yang

tidak teratur, riketsia, anemia, sinusitis, rinitis, astenia.2,3

Stevia yang telah digunakan sebagai pemanis alami selama bertahun-tahun di berbagai

negara, antara lain di negara-negara Amerika Selatan dan Jepang. Pemanis stevia yang

berasal dari daun Stevia rebaudiana Bertoni merupakan tumbuhan perdu asli dari Paraguay.

Daun stevia mengandung pemanis alami non kalori dan mampu menghasilkan rasa manis 70-

400 kali dari manisnya gula tebu. Pada tahun 1887 peneliti ilmiah Amerika Antonio Bertoni

menemukan tanaman stevia dan menamakannya Eupatorium rebaudianum Bertoni,

kemudian dimasukkan dalam genus stevia pada tahun 1905. Diduga lebih dari 80 jenis

spesies stevia tumbuh liar di Amerika Utara dan 200 spesies alami di Amerika Selatan,

namun hanya Stevia rebaudiana yang diproduksi sebagai pemanis. Sejak tahun 1970, stevia

digunakan di Jepang. Ekstrak stevia menjadi sangat populer dan sekarang digunakan sebagai

pemanis secara komersial dengan pasar di atas 50%. Stevia digunakan sebagai pemanis mulai

dari saus kedelai, sayur–sayuran hingga minuman ringan. Sebagai pemanis tanpa kalori,

tanpa penambahan bahan kimia dan tanpa menimbulkan efek samping yang serius, stevia

cepat populer si seluruh dunia.4

Daun stevia mengandung: apigenin, austroinulin, avicularin, beta-sitosterol, caffeic

acid, kampesterol, kariofilen, sentaureidin, asam klorogenik, klorofil, kosmosiin, sinarosid,

daukosterol, glikosida diterpene, dulkosid A-B, funikulin, formic acid, gibberellic acid,

giberelin, indol-3-asetonitril, isokuersitrin, isosteviol, jihanol, kaempferol, kaurene, lupeol,

luteolin, polistakosid, kuersetin, kuersitrin, rebaudiosid A-F, skopoletin, sterebin A-H,

steviol, steviolbiosid, steviolmonosida, steviosid, steviosid a-3, stigmasterol, umbelliferon,

dan santofil (5). Kandungan utama daun stevia adalah derivat steviol terutama steviosid (4-

15%) ,rebausid A (2-4%) dan C (1-2%) serta dulkosida A (0,4-0,7%).6

Stevia yang ditanam di Indonesia berasal dari Jepang, Korea dan Cina. Bahan

tanaman tersebut berasal dari biji sehingga pertumbuhan tanaman stevia di lapangan sangat

beragam. Kualitas daun stevia dipengaruhi banyak faktor lingkungan seperti jenis tanah,

irigasi, penyinaran dan sirkulasi udara. Selain itu juga dipengaruhi oleh gangguan bakteri dan

jamur. Kualitas pemanis stevia didasarkan atas aroma, rasa, penampilan dan tingkat

kemanisannya. Tidak seperti pemanis lainnya, stevia tidak memberikan rasa pahit pada

akhirnya. Rahasia kemanisan stevia terletak pada molekul kompleksnya yang disebut

steviosid yang merupakan glikosida tersusun dari glukosa, sophorose dan steviol.7

Stevia menawarkan banyak keuntungan bagi kesehatan yang telah dibuktikan oleh

lebih dari 500 penelitian, diantaranya: Tidak mempengaruhi kadar gula darah, aman bagi

penderita diabetes, mencegah kerusakan gigi dengan menghambat pertumbuhan bakteri di

mulut, membantu memperbaiki pencernaan dan meredakan sakit perut. Baik untuk mengatur

berat badan, untuk membatasi makanan manis berkalori tinggi.8 Stevia juga tidak rusak pada

suhu tinggi seperti sakarin atau aspartam. Steviosid tahan pada pemanasan hingga 2000C

(3920 Fahrenheit), sehingga dapat digunakan pada hampir semua resep makanan.8

Meskipun demikian, Badan Pemeriksaan Obat dan Makanan (BPOM) belum

mengizinkan stevia sebagai pemanis pengganti gula karena belum ada kajian yang

membuktikan dampaknya. Pemanis pengganti gula dikenal di kalangan masyarakat sebagai

pemanis rendah kalori dan dikonsumsi penderita diabetes. Pemanis pengganti gula yang

beredar di pasaran umumnya berasal dari hasil sintesa kimia seperti: aspartame, sakarin,

siklamat, dll. Pemanis buatan ini mempunyai rasa manis kurang lebih 200-700 kali gula.

Selain itu pemanis ini banyak menimbulkan masalah bagi kesehatan dan diduga dapat

menimbulkan kanker, sehingga pemakaiannya dibatasi. Di Indonesia menurut Peraturan

Menteri Kesehatan RI No 722/Menkes/Per/1X/88 kadar maksimum asam siklamat yang

diperbolehkan dalam makanan berkalori rendah dan untuk penderita diabetes melitus adalah

3 g/kg sebagai bahan makanan/minuman dan WHO menetapkan batas konsumsi harian

siklamat yang aman (ADI) adalah 11 mg/kg berat badan.10 Untuk pemakaian sakarin

berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan RI No 208/Menkes/Per/1V/85 tentang pemanis

buatan dan Peraturan Menteri Kesehatan RI No 722/Menkes/Per/1X/88 tentang bahan

tambahan pangan, menyatakan bahwa pada makanan atau minuman olahan berkalori rendah

dan untuk penderita penyakit diabetes melitus kadar maksimum sakarin yang diperbolehkan

adalah 300 mg/kg.10 Oleh karena itu banyak ilmuwan mencari pemanis lain yang lebih alami

dengan harapan selain berkhasiat juga aman untuk dikonsumsi.

Farmakodinamik dan farmakokinetik Absorbsi, distribusi dan ekskresi

Steviosid dihidrolisa menjadi steviol, sebelum diabsorbsi pada usus halus. Absorpsi

steviosida dan rebausida A sangat rendah dengan koefisien permiabilitas 0,16. 10-6 dan 0,11.

10-6cm/detik, sedangkan steviol pada konsentrasi 100 mmol/l diabsorpsi lebih efektif dengan

koefisien permeabilitas yang sangat tinggi yaitu 44,5. 10-6cm/detik sedangkan di secretory

7,93. 10-6 cm/detik.11 Absorpsi aglikon steviol dalam bentuk tunggal (steviol) lebih baik

dibandingkan dalam bentuk campuran stevia (rebausida A, rebausida C, steviosida dan

dulkosida A), lebih dari 93% tersisa dalam cairan mukosal dan 76% steviol diabsorpsi pada

kedua duodenum-jejunum dan ileum.12 Penelitian yang dilakukan oleh Wang dkk, 2004,

menunjukkan steviol dengan kadar rendah ditemukan dalam plasma setelah 8 jam sejak

pemberian secara oral 0,5 g/kgbb steviosid (kemurnian 95%). Penelitian mengetahui bio-

transformasi steviosid dilakukan dengan menginkubasikan 50 mg/l steviosid (kemurnian

>96%) dalam limbah kotoran ayam (chicken excreta) dengan kondisi anaerob selama 24 jam,

hasilnya: 20% steviosid dihidrolisis menjadi steviol.14

Penelitian lain juga dilakukan dengan menginkubasikan 40 mg steviosid (kemurnian

85%) dan 40 mg rebausid A (kemurnian 90%) dalam feses yang berasal dari 11 sukarelawan

dengan kondisi anaerob selama 72 jam. Steviosid dihidrolisis menjadi aglikon steviol dalam

10 jam dan rebaudiosid dalam 12 jam. Steviol tetap tidak berubah selama 72 jam,

menunjukkan enzim bakteri tidak dapat memutuskan struktur steviol.15 Penelitian mengenai

metabolisme dari steviol pada tikus dan manusia dilakukan menggunakan preparat human

liver microsomal yang berasal dari 10 orang donor dan preparat liver microsomal tikus. Profil

metabolit yang didapat dari mikrosomal hati manusia serupa dengan tikus, analisis

spektrokopi masa menunjukkan adanya 2 dihidroksi metabolit dan 4 monohidroksi metabolit.

Satu tambahan monohidroksimetabolit terdapat pada preparat tikus. Liver microsomal

clerance dari steviol pada manusia 4 kali lebih rendah dibandingkan dengan tikus.13

Efek dan khasiat

Steviosid mempunyai efek antihiper-glikemik dengan meningkatkan respon insulin

dan menekan kadar glukagon dan antihipertensi, secara nyata menekan tekanan darah sistolik

dan diastolik pada hewan coba dan manusia. Efek antihiperglikemik ditunjukkan dengan

penelitian yang dilakukan Jeppesen dkk, 2000, steviosid (kemurnian 95%) dengan kadar 10-

9-10-3 mol/l dan steviol (kemurnian 90%) berefek meningkatkan sekresi insulin pada pulau-

pulau pankreas tikus dan dalam sel-sel B pankreas (INS-1). Efek maksimal terjadi pada 10-6

mol/l steviol dan steviosid 10-3 mol/l. Efek insulinotropik tergantung dari kadar glukosa

darah.16 Juga penelitian dengan menggunakan tikus diabetes tipe 2 Goto-Kakizaki yang

diberi steviosid (kemurnian 96%), dosis 200 mg/kgbb secara intra vena, menunjukkan bahwa

steviosid dapat menekan glukagon plasma, meningkatkan respon insulin.17

Mekanisme kerja steviosid sebagai antihiperglikemik ditunjukkan dengan penelitian

yang dilakukan oleh Jeppesen dkk, 2003. Steviosid bekerja dengan meningkatkan kandungan

insulin dalam sel INS-1, dengan menginduksi gene yang terlibat dalam glikolisis. Steviosid

mengatur ekspresi liver-jenis piruvat dan asetil koenzim A (CoA) karboksilase dan ekspresi

karnitin palmitoil transferase 1 (CPT-1), rantai panjang asil-CoA dehidrogenase, sistolik

epoksida hidrolase dan 3-oksoasil-CoAtiolase. Selain itu, steviosid juga memperbaiki

mekanisme nutrient sensing, meningkatkan rantai panjang sitolik fatty asil-CoA dan mengatur

bagian bawah fodfodiesterase 1 (PDE1). Steviol menunjukkan efek yang sama.18

Penelitian lain tentang efek steviosid terhadap glukosa dalam metabolisme insulin

dengan 2 model diabetes pada tikus dilakukan oleh Hsieh dkk, 2004. Tikus yang diinduksi

STZ diabetes dan NIDDM diabetes dengan pemberian makanan fruktosa. Steviosid dengan

kadar 0,5 mg/kg diberikan 2 kali sehari, penurunan kadar glukosa darah pada induksi STZ

lebih rendah, dibandingkan dengan NIDDM tikus diabetes. Steviosid tergantung dari dosis

yang diberikan menurunkan kadar protein dari fosfofenol piruvat karboksinase (PEPCK) dan

PEPCK mRNA setelah 15 hari pemberian. Steviosid juga mengurangi resistensi insulin pada

tikus diabetes seperti yang ditunjukkan penurunkan kadar glukosa oleh tolbutamid.19

Penelitian yang dilakukan Lailerd dkk, 2004, pada tikus Zucker tidak berlemak dan

tikus Zucker resisten insulin-obese, diberi 200 mg/kgbb dan 500 mg/kgbb steviosid secara

oral, hasilnya menunjukkan tidak ada efek pada glukosa plasma, insulin atau kadar asam

lemak bebas pada kedua kelompok. Pada dosis lebih tinggi, steviosid meningkatkan

sensitivitas insulin pada tikus tidak berlemak dan obese. Tidak ada efek yang teramati setelah

pemberian 200mg/kgbb steviosid.20

Penelitian yang dilakukan oleh Hsieh dkk, menunjukkan bahwa steviosid sebagai supplemen

makanan yang dikombinasikan dengan abalon, suatu protein kedele, isoflavon dan serat

kotiledon dapat menurunkan kadar glukosa darah pada tikus diabetes tipe 2 dan memperbaiki

sindrom metabolik. Kombinasi steviosid dan suplemen kedele nampaknya memiliki potensi

sebagai pengobatan efektif sejumlah penyakit dengan sindrom metabolik, yaitu hiperglikemi,

hipertensi, dan dislipidemia.19

Efek antihipertensi steviosid ditunjukkan dengan penelitian yang menggunakan tikus

diabetes tipe 2 Goto-Kakizaki yang diberi air minum mengandung 25 mg/kgbb steviosid

(kemurnian > 99,6%), setiap hari selama 6 minggu, menunjukkan efek antihiperglikemik

dengan meningkatkan respon insulin dan menekan kadar glukagon serta secara nyata

menekan tekanan darah sistolik dan diastolik.18 Penelitian lain yang bertujuan untuk

mengevaluasi efek antihipertensi steviosid pada tikus dengan strain yang berbeda

(Normotensive Wistar Kyoto (NTR), Sensitive Hypertensive Rats (SHR),

Deoxycorticosterone acette salt (DOCA-NaCl) sensitive Hypertensive Rats (DHR) dan Renal

Hypertensive Rats (RHR)). Steviosid dengan konsentrasi 50, 100 dan 200 mg/kg diberikan

secara intraperitoneal (ip) kepada tikus tersebut. Hasil penelitian menunjukkan bahwa

steviosid mempunyai efek hipotensi yang signifikan pada tikus dengan strain yang berbeda-

beda. Tekanan darah akan kembali pada nilai semula setelah obat dihentikan selama 2-3

hari.21

Steviosid secara signifikan juga menyebabkan efek hipotensi pada anjing. Hal ini

ditunjukkan dengan pemberian steviosid 200mg/kg secara nasogastrik akan menghasilkan

penurunan tekanan darah pada menit ke 60 dan kembali ke baseline setelah 180 menit.

Penurunan tekanan darah terjadi lebih cepat dan efektif setelah injeksi iv steviosid

50mg/kgbb, maksimum pada 5-10 menit (20). Rebausida A, suatu komponen yang diisolasi

dari daun tanaman Stevia rebaudiana Bertonii (SrB) menunjukkan efek yang sama dengan

steviosid.22

Efek steviosid pada manusia ditunjukkan oleh penelitian berikut ini

Penelitian uji toleransi glukosa dari ekstrak 5 gram daun stevia rebaudiana yang

diberikan setiap 6 jam selama 3 hari pada 16 sukarelawan, secara signifikan meningkatkan

toleransi glukosa, mengurangi kadar gula dalam plasma selama pengujian dan setelah puasa

semalam pada seluruh sukarelawan.23 Penelitian tentang suplementasi 1 gram steviosid

dalam makanan pada 12 pasien diabetes tipe 2 yang tergolong akut, menunjukkan adanya

penurunan kadar glukosa darah sesudah makan. Steviosid meningkatkan Indeks insulin

sekitar 40% dibandingkan dengan kontrol (P=0,01). Steviosid mengurangi kadar gula darah

setelah makan.24

Penelitian yang bertujuan untuk menentukan efek steviosid pada Left Ventricular

Mass Index (LVMI) dan Quality of Life (QOL), menggunakan metoda : multicenter, secara

acak, double-blind, placebo control trial di Cina. Penelitian ini dilakukan pada wanita dan

pria antara 20-75 tahun yang mengidap hipertensi ringan dengan tekanan darah sistolik 140-

159 mm Hg dan tekanan diastolik 90-99 mm Hg. Pasien mendapatkan 500mg serbuk

steviosid atau plasebo 3 kali sehari selama 2 tahun. Penelitian ini menunjukkan pemberian

oral steviosid pada pasien yang hipertensi ringan, secara signifikan menurunkan tekanan

darah sistol dan diastol dibandingkan dengan plasebo. Kualitas hidup (QOL) juga meningkat,

dan tidak ada efek samping yang dicatat.20

Penelitian yang dilakukan untuk meng-evaluasi pengaruh glikosida steviol terhadap

kadar glukosa dan tekanan darah pada 3 kelompok individu (diabetes tipe 1, tipe 2 dan tanpa

diabetes dan tekanan darah normal), dilakukan secara random, double blind, placebo control,

selama 3 bulan menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan pada kadar gula darah, HbA1c,

tekanan darah. Steviosid dengan kadar 250 mg/hari aman tanpa efek farmakologi.25

Penelitian yang dilakukan di Uruguay pada laboratorium menggunakan hewan coba

dan manusia dengan diabetes tipe 1 dan 2 menunjukkan tidak ada perubahan yang signifikan

pada tekanan darah, kadar glukosa darah dan glycated hemoglobin (HbA1c) atau kadar

glukosa darah dalam perioda beberapa bulan. Meskipun demikian ditemukan juga bahwa

stevia aman, tidak ada efek samping yang terjadi selama penelitian.25 Penelitian yang sama

menggunakan rebausida A dilakukan pada 120 subyek dengan diabetes tipe 2 menunjukkan

tidak ada perubahan yang sinifikan pada HbA1c, kadar gula puasa, pelepasan insulin dan

kadar C-peptida.25

Toksisitas kronik

Penelitian tentang toksisitas kronik dilaku-kan dengan menambahkan steviosid

(kemurnian 95,6%) pada makanan tikus. Pada makanan seratus tikus Fischer 344 yang terdiri

dari 50 jantan dan 50 betina ditambahkan steviosid dengan kadar 0, 2,5 dan 5% (setara

dengan 0,970 dan 2000mg/kgbb) untuk jantan dan kadar 0, 1100 dan 2400 mg/kgbb untuk

betina, setiap hari selama 104 minggu. Dosis dievaluasi setiap 13 minggu. Hasil analisis

menunjukkan berat badan tikus sedikit menurun dan hubungan dosis-respon terlihat pada

jantan (2,3% dan 4,4%) dan betina (2,4% dan 9,2%) pada dosis terendah dan tertinggi. Pola

konsumsi makan tidak berbeda pada ke-2 kelompok. Survival rate pada tikus jantan yang

menerima steviosid 5% secara signifikan menurun (60%) dibandingkan dengan kontrol

(78%). Pada hewan betina dan jantan yang mendapat steviosid dosis tinggi, berat ginjal

rendah, tidak ada bukti hispatologikal neoplastik atau lesi non neoplastik yang disebabkan

perlakuan pada jaringan atau organ kecuali adanya penurunan insiden mammary adenomas

pada betina dan mengurangi keparahan kronik nefropati pada tikus jantan. Peneliti

menyimpulkan bahwa steviosid tidak bersifat karsinogenik pada tikus Fischer 344 yang

digunakan pada penelitian ini.26,27

Penelitian lain tentang toksisitas kronik steviosid (kemurnian tidak ditetapkan)

dilakukan melalui model 2 tahap karsinogenik kulit pada mencit. Kelompok pertama terdiri

dari 15 mencit ICR jantan diawali dengan pemberian 7,12-dimetilbenzaantrasen (DMBA,

100mg) secara topikal. Satu minggu kemudian mencit tsb diberikan 12-O-

tetradekanoilforbol-13-asetat (TPA1mg) 2 kali per minggu selama 20 minggu. Pemberian 68

mg steviosid secara topikal dilakukan 1jam sebelum diberikan TPA. Steviosid secara

signifikan menurunkan risiko mencit yang terkena papilloma pada10 dan15 minggu.27

Penelitian yang sama dilakukan pada kelompok yang terdiri dari 15 mencit betina SENCAR

yang diawali dengan pemberian 33,1 mg peroksinitril diikuti dengan pemberian TPA dua kali

perminggu selama 20 minggu. Mencit-mencit tersebut diberi air minum yang mengandung

0,0025% steviosida dimulai 1 minggu sebelum sampai 1 minggu setelah terbentuknya tumor.

Steviosida secara signifikan menurunkan risiko tumbuhnya papiloma pada mencit pada10 dan

15 minggu dan jumlah papilloma tiap mencit pada 10, 15, 20 minggu.28

Steviosid mempunyai toksisitas akut (LD 50) pada tikus, mencit dan hamster berkisar

8-15 g/kgbb/hari dan ADI (Acceptable Daily Intake) adalah 7,9 mg/kgbb/hari berdasarkan

NOEL (No Observed Effect Level 970 mg/kgbb. Menurut literatur ADI diperkirakan 20 lebih

dari mg/kgbb (Geuns, 2002). Sedangkan steviol mempunyai ADI 0-2 mg/kgbb/hari

berdasarkan NOEL 383 mg/kgbb/hari.29

Mutagenesitas

Steviol dan derivatnya steviol-16, 17-epoksida,15-okso-steviol,steviol metilester dan

13,16-seco-13-okso-steviol metilester menyebab-kan mutasi pada S typhimurium TM677

dengan adanya aktivasi sistem metabolik. Sistem metabolit menurunkan mutagenesitas

steviol metilester 8,13-lakton. Hasil: 15 α-hidroksi steviol, steviol metilester, dan 13,16-seco-

13α-hidroksi-steviol metilester memberikan hasil negatif.30 Steviol memberikan hasil negatif

dalam penentuan mutasi sel dan kerusakan DNA dalam sel kultur.30,31

Kadar Steviol hanya sedikit terdapat dalam daun stevia tetapi perlu adanya pengaturan

dosis stevia, sesuai dengan yang dikeluarkan oleh FDA bahwa stevia sejak tahun 2008

diizinkan untuk digunakan sebagai “dietary supplement”, FDA menggolongkan stevia dengan

kategori GRAS (Generally Recognize As Safe). Meskipun stevia banyak digunakan sebagai

pemanis di banyak negara khususnya di Amerika Latin dan Jepang, namun Uni Eropa

melarang penggunaan stevia sampai dilakukan penelitian lebih lanjut. Sedangkan Cina dan

Singapura melarang penggunaan stevia. Pada April 2010 European Food Safety Authority

(EFSA) dalam panel Food Additive and Nutrient Source (ANS) memberikan opini positif

tentang keamanan glikosida steviol sebagai food additive.34

Menurut WHO Acceptable Daily Intake untuk glikosida steviol 4 mg/kgbb/hari.34

Dosis maksimum yang dianjurkan di negara Jepang 3 mg/kgbb/hari,dan di Amerika 5

mg/kgbb/hari pada dosis tersebut stevia aman sebagai pemanis pengganti gula namun tidak

berkhasiat?29 Stevia ditunjuk sebagai produk aman oleh FDA berdasarkan pada hasil

konsumsi 1500 mg perhari selama dua tahun. Bagaimanapun, FDA tidak merekomendasikan

stevia digunakan bagi wanita hamil dan menyusui, paling tidak hingga penelitian dalam

jangka panjang dilakukan. WHO pada tahun 2006 menyimpulkan bahwa steviosid dan

rebaudiosid A tidak bersifat mutagenik baik secara in vitro maupun in vivo dan

mutagenesitas steviol dan derivatnya yang positif secara in vitro tidak dapat diekspresikan

pada in vivo.35 WHO juga melaporkan bahwa steviosid, rebaudiosid A dan steviol tidak

bersifat karsinogenik, steviosid juga memberikan efek farmakologi pada pasien hipertensi

dan/atau diabetes tipe 2 tetapi memerlukan penelitian lebih lanjut untuk penentuan dosis.35

Steviosid dan rebaudiosid A dihidrolisis menjadi steviolbiosid kemudian dengan cepat

diubah menjadi steviol, sebelum diabsorpsi pada usus halus. Steviosid dihidrolisis lebih

lambat dibandingkan dengan rebaudiosid A. Absorbsi stevia dalam bentuk aglikon steviol

lebih mudah dibandingkan dengan bentuk glikosida dan absorbs dalam bentuk tunggal lebih

mudah dibandingkan dengan campuran. Steviosid dan rebaudiosid A aman, tidak bersifat

mutagenik dan tidak memberikan khasiat dan efek samping pada dosis rendah. Efek sebagai

insulinotropik, antidiabetik dan antihipertensi terjadi pada dosis yang cukup tinggi.

Sedangkan steviol bersifat mutagenik secara in vitro terutama dengan adanya aktivasi

metabolit namun secara in vivo tidak bersifat mutagenik.

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni M.) adalah tanaman tahunan berbentuk perdu.

Tingginya 30 – 90 cm dengan batang berbentuk bulat, beruas dan bercabang hijau. Daun

Stevia saling berhadapan satu sama lain, berbentuk bulat telur, ujungnya tumpul, runcing

pada pangkalnya, tepi daun rata dengan panjang 2 - 4 cm & lebar 1 – 5 cm, tulang daun

menyirip & berbulu serta memiliki tangkai yang pendek berwarna hijau. Produk utama Stevia

adalah daun yang digunakan sebagai bahan baku pembuat gula atau pemanis alami. Daun

stevia mengandung steviosida yaitu suatu senyawa glikosida yang memiliki tingkat

kemanisan 200 – 300 kali lebih tinggi dibandingkan gula tebu atau sukrosa. Rasa manis

siklamat sebesar 30 kali gula tebu. Jika rendemen glikosida yang didapat dari daun tanaman

stevia sebesar 2.5%, dengan produksi daun kering sekitar 2.5 ton/ha/tahun, maka diperlukan

20.000-30.000 ton daun stevia untuk mengganti pemanis sintetik di Indonesia (Rodiansah,

2007).

Klon tanaman Stevia cukup banyak. Pusat Penelitian Perkebunan Bogor dan PT

Garsela telah menghasilkan sejumlah klon pilihan dari hasil seleksi terhadap 10.000 tanaman

Stevia yang berasal dari Jepang. Indentifikasi klon stevia didasarkan pada kriteria produksi

daun yang tinggi, pembungaan yang lambat, pertumbuhan yang baik dan kadar pemanis yang

tinggi. Klon tanaman stevia yang telah dikembangkan antara lain BPP 02, BPP 08, BPP 16,

BPP 18, BPP 22, BPP 26, BPP 43, BPP 46, BPP 50, BPP 68, BPP 70, BPP 72, BPP 76

(Rukmana, 2003).

Di Indonesia pembudidayaan dan pengolahan tanaman Stevia berkembang pesat, hal

ini dapat dilihat dari semakin luasnya areal pertanaman Stevia dan semakin beragamnya

penggunaan produk stevia. Dengan makin dikenalnya stevia sebagai bahan pemanis

pengganti gula, perlu dilakukan pengembangan tanaman Stevia. Salah satu pengembangan

yang dilakukan adalah perbanyakan tanaman Stevia. Stevia dapat dikembangbiakkan dengan

cara generatif dan vegetatif. Perbanyakan Stevia dengan generatif dapat dilakukan melalui

biji sedangkan perbanyakan tanaman stevia secara vegetatif dapat dilakukan dengan anakan,

stek batang dan kultur jaringan.

1. Perbanyakan Stevia dengan biji

Biji Stevia berbentuk jarum yang berwarna putih, biji harus dibersihkan dari kotoran-

kotoran yang menempel. Sebelum ditanam dilahan, biji Stevia harus disemai terlebih dahulu.

Biji-biji yang telah disemai harus dijaga kelembabannya dengan cara ditutup plastik

transparan yang telah dilubangi. Biji akan berkecambah dalam waktu 4 hari. Plastik penutup

dapat dibuka saat kecambah sudah berumur 2 minggu. Kecambah yang sudah memiliki dua

pasang daun dapat dipindahkan ke bedengan. Kelembaban media persemaian juga dapat

dilakukan dengan memberikan sedikit air pada bagian bawah media (Goettemoeller, 2006).

Kriteria bibit yang siap ditanam di lapang antara lain memiliki 6 daun, bibit yang sehat

mempunyai 5-6 daun, tinggi tanaman 12-15 cm, batang sedikit berkayu, daun lebar berwarna

hijau, daun pucuk berbentuk konkaf, mempunyai 5-7 akar sekunder, 2-3 daun telah memiliki

cabang (Rahayu, 1986). Persentase biji yang tumbuh berbeda dari jumlah biji yang disemai.

Keberhasilan perbanyakan melalui biji tergantung dari pengalaman petani. Beberapa

pembibitan melalui biji tidak dapat berkecambah sama sekali. Perkecambahan biji Stevia

dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti suhu, kelembaban, intensitas cahaya dan kontaminasi

media tanam. Perbanyakan tanaman Stevia juga tergantung pada persiapan lahan yang tepat,

pengelolaan gulma & hama, kelembaban di dalam tanah, panen hati dll (Anonim 1, 2013).

2. Perbanyakan Stevia melalui tunas / bonggol

Penjual bibit Stevia memilih menjual dalam bentuk bonggol untuk menghindari

kematian bibit muda saat di perjalanan. Bonggol Stevia dapat ditanam di tempat yang tidak

langsung terkena matahari. Setelah bertunas dan tumbuh sekitar 15 sentimeter (cm), bonggol

Stevia baru bisa dipisah-pisah dan ditanam langsung di lahan. Tunas yang keluar

menandakan bahwa bonggol masih hidup. Satu bonggol bisa menghasilkan 20 bibit baru.

Untuk mendapat tunas/bonggol yang bermutu, harus dipilih tanaman induk yang baik antara

lain tanaman mempunyai pertumbuhan dan penampilan yang baik, tanaman sehat tidak

terserang hama dan penyakit dan bonggol berasal dari tanaman yang mempunyai daun

dengan kandungan pemanis yang tinggi. Penanaman dapat dilakukan pada musim hujan,

karena pada awal penanaman dibutuhkan naungan dan pengairan yang cukup (Rahayu,

1986).

3. Perbanyakan Stevia melalui Stek

Perbanyakan melalui stek adalah salah satu perbanyakan Stevia secara vegetatif yang

banyak dilakukan oleh para petani. Keuntungan dari perbanyakan ini adalah dapat dihasilkan

tanaman yang sempurna dalam waktu relatif lebih cepat dibanding secara generatif

(Yusmaini, 2008). Dengan perbanyakan melalui stek, pertumbuhan tanaman lebih cepat dan

memiliki sifat yang sama dengan tanaman induk. Oleh karena itu pemilihan tanaman induk

yang tepat adalah hal yang penting dalam perbanyakan ini. Kriteria pohon induk yang

bermutu yaitu memiliki pertumbuhan dan penampilan yang baik, berasal dar pohon induk

yang sehat, mengandung kadar stevioside yang tinggi. Stek diambil dari batang tanaman

bagian atas dengan 5-6 pasang daun. Agar pertumbuahn akar dapat terpacu, diperlukan

perlakuan dengan memberikan zat pengatur tumbuh (Rahayu, 1986).

4. Perbanyakan Stevia melalui Kultur Jaringan

Teknik kultur jaringan dapat digunakan untuk perbanyakan tanaman secara massal

dan cepat untuk menyediakan bahan tanam unggul. Penelitian telah dilakukan untuk

meningkatkan pertumbuhan dan multiplikasi tunas dan keragaan planlet stevia. Penelitian

tersebut telah dilakukan oleh Sumaryono dan Masna, 2011 yaitu dengan menggunakan

eksplan tunas pucuk dan tunas samping dari planlet yang ditumbuhkan pada medium MS.

Ada tiga tahap yang dilakukan dalam perbanyakan secara kultur jaringan yaitu tahap inisiasi

tunas, tahap perbanyakan tunas dan tahap perakaran (Wahyono, 2005).

Kebutuhan masyarakat Indonesia akan gula sangatlah tinggi, namun produksi gula di

Indonesia hanya dapat mencapai 60% dari kebutuhan masyarakat, yaitu 2,3 juta ton dari total

kapasitas produksi 3,54 juta ton. Sedangkan kekurangan sebesar lebih dari 1 juta ton masih

mengandalkan pasokan impor (Musanif, 2012). Untuk memenuhi permintaan gula yang

semakin meningkat pemerintah telah mengupayakan program untuk mempercepat pencapaian

swasembada gula tahun 2014, namun sampai saat ini masih banyak kendala untuk

mewujudkan swasembada gula. Untuk itu diperlukan strategi alternatif untuk memenuhi

kekurangan kebutuhan gula, salah satunya dengan mengeksplor keanekaragaman hayati

tanaman penghasil gula. Beberapa tanaman penghasil gula selain tebu yang sudah dikenal

adalah: aren, jagung, sorgum, kelapa, agave, dan stevia.

Pemanfaatan stevia sebagai pemanis sudah berkembang di negara-negara maju seperti

Amerika dan Jepang. Di Jepang, 5,6% gula yang dipasarkan adalah gula stevia atau yang

dikenal dengan nama sutebia. Di Indonesia tanaman Stevia dikenal pada tahun 1977, namun

di Indonesia, pemanfaatan stevia sebagai bahan pemanis sangatlah terbatas. Budidaya

tanaman stevia juga jarang dilakukan. Selain itu, tanaman ini masih relatif sedikit karena

habitat hidupnya terbatas (Adinegoro, 1986 dalam Rodiansah, 2007). Bagian tanaman stevia

yang digunakan sebagai pemanis adalah daunnya. Daun stevia mengandung glikosida yang

didalamnya mengandung komponen utama steviosida yang dapat menghasilkan rasa manis

dengan tingkat kemanisan 200- 300 kali lebih tinggi dibandingkan gula tebu atau sukrosa

(Buchori, 2007).

Perbanyakan stevia dengan biji kurang efektif karena rendahnya persentase

perkecambahan biji (Goettemoeller and Ching, 1999). Selain itu, perbanyakan menggunakan

biji (generatif) lebih lama masa produksinya dan dapat menghasilkan keturunan yang tidak

sama dengan induknya (Hendaryono dan Wijayani, 1994). Salah satu alternatif untuk

mendapatkan tanaman stevia dalam jumlah banyak dan dalam waktu yang relatif singkat

adalah dengan melakukan perbanyakan secara in vitro. Teknik kultur jaringan diperlukan

untuk menghasilkan bibit unggul stevia klonal secara massal, cepat, dan identik secara

genetik. Keuntungan perbanyakan stevia secara in vitro diantaranya dapat menghasilkan

multiplikasi tanaman dengan cepat sehingga di kemudian hari tanaman ini dapat

menghasilkan gula alami yang diproduksi sebagai pilihan lain selain gula tebu (Hendaryono

dan Wijayani, 1994).

Perbanyakan tanaman stevia secara in-vitro dilakukan dengan menggunakan media

MS (Murashige and Skoog), sebagai medium baku kultur jaringan yang biasa digunakan. Zat

pengatur tumbuh yang biasa digunakan dalam kultur jaringan adalah sitokinin dan auksin.

Peranan sitokinin dan auksin terhadap jaringan berbeda-beda. Jika sitokinin diberikan

bersama dengan auksin, maka akan memberikan pengaruh interaksi terhadap diferensiasi

jaringan. Pada pemberian auksin dengan kadar yang relatif tinggi menyebabkan diferensiasi

kalus cenderung kearah pembentukan primodia akar. Sedangkan pada pemberian sitokinin

dengan kadar yang relatif tinggi, diferensiasi kalus akan cenderung kearah pembentukan

primodia batang atau tunas. Pemberian hormon pada kultur jaringan dapat ditentukan sesuai

dengan tujuannya, misalnya untuk induksi tunas, pemberian kombinasi sitokinin dan auksin

dengan rasio perbandingan 4:1. Kombinasi zat pengatur tumbuh dapat ditentukan dengan

menggunakan metode Mohr (Hendaryono dan Wijayani, 1994).

Beberapa penelitian untuk menginduksi tunas Stevia rebaudiana Bertoni secara in

vitro telah dilakukan. Beberapa penelitian tersebut antara lain: Sivaram & Mukundan (2003)

menggunakan ujung tunas sebagai sumber eksplan dan mendapatkan 11,2 tunas per eksplan

pada perlakuan BA 2 ppm + IAA 1 ppm, sedangkan Anbazhagan et al (2010) mendapatkan

rata-rata 16 tunas tiap eksplan pada medium MS dengan BA 1 ppm + IAA 0,5 ppm.

Sedangkan penelitian Alhady (2011) yang menggunakan eksplan dari segmen nodus,

proliferasi maksimum diperoleh dengan menggunakan medium 2.0 ppm BAP + 0.5 ppm

kinetin. Ada juga penelitian lain yang menggunakan eksplan daun untuk perbanyakan tunas

Stevia, yaitu oleh Janarthanam et al (2009) yang menyimpulkan bahwa untuk eksplan daun

Stevia, media yang paling efektif untuk induksi kalus adalah media MS dengan tambahan

11.31 μM 2,4 D dan 2.22 μM BAP. Berdasarkan hasil studi pendahuluan yang telah

dilakukan, eksplan nodus stevia dapat menghasilkan tunas terbaik pada media MS dengan

kombinasi zat pengatur tumbuh BAP 1 ppm dan IAA 0,5 ppm.

Selain zat pengatur tumbuh, hal penting lain yang mempengaruhi respon eksplan

tanaman yaitu tergantung dari spesies tanaman, varietas, aksesi atau tanaman asal eksplan

tersebut. Spesies, varietas, aksesi, dan asal tanaman eksplan menyandi gen-gen yang berbeda,

sehingga ketika berinteraksi dengan lingkungan, maka akan memberikan pengaruh yang

berbeda pula. Pengaruh gen berhubungan erat dengan faktor-faktor yang mempengaruhi

pertumbuhan eksplan, seperti kebutuhan nutrisi, zat pengatur tumbuh, dan lingkungan kultur

(Hendaryono dan Wijayani, 1994).

Penelitian tentang pengaruh zat pengatur tumbuh terhadap induksi tunas tanaman

stevia sudah banyak dilakukan. Namun penelitian yang bertujuan untuk mengetahui respon

aksesi dan komposisi media terbaik untuk masing-masing aksesi tanaman stevia belum

banyak dilakukan penelitian. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan dengan

mengembangkan beberapa penelitian-penelitian sebelumnya agar didapatkan informasi

tentang respon aksesi terhadap induksi tunas stevia sehingga didapatkan suatu metode yang

efisien untuk mengetahui komposisi media yang cocok untuk masing-masing aksesi dalam

menginduksi tunas stevia secara in vitro, karena kemampuan menghasilkan tunas sangat

menentukan keberhasilan produksi bibit yang dapat diproduksi melalui kultur jaringan untuk

perbanyakan tanaman stevia secara massal dan cepat. Aksesi berpengaruh terhadap respon

jumlah tunas karena memiliki sifat (genotipe) yang berbeda dalam pertumbuhan, morfologi,

maupun kandungan kimia. Menurut rujukan [5], faktor penting yang mempengaruhi

keberhasilan kultur jaringan, selain komposisi media dan lingkungan yaitu genotipe.

Beberapa penelitian pada tanaman lain menunjukkan bahwa setiap genotipe (varietas)

tanaman membutuhkan komposisi media tertentu guna mendukung pertumbuhan eksplan

yang optimal [7].

Apabila dalam perbandingan sitokinin lebih besar dari auksin, maka hal ini akan

memperlihatkan stimulasi pertumbuhan tunas dan daun. Menurut rujukan [7], sitokinin

adalah salah satu zat pengatur tumbuh yang ditemukan pada tanaman. Zat pengatur tumbuh

ini mempunyai peranan untuk memicu proses transisi pada fase G1 (pertumbuhan sel)

menuju fase S (replikasi DNA) dan transisi pada fase G2 (fase transisi sel) menuju fase M

(mitosis) dalam proses pembelahan sel (cell division) [8]. Hal inilah yang diduga dapat

mempengaruhi kecepatan munculnya tunas pada eksplan kultur jaringan. Menurut rujukan

[9], tanaman yang memiliki batang dengan diameter yang lebih besar akan cenderung

memicu kearah pertumbuhan sekunder untuk memperbesar ukuran batang, sehingga laju

pertumbuhan primernya lebih lambat.

Tumbuhan merupakan salah satu mahluk hidup ciptaan Allah SWT yang banyak

memberikan manfaat bagi mahluk hidup yang lainnya, baik manusia maupun hewan. Allah

SWT menganugrahkan mahluknya dengan berbagai macam tanaman, salah satunya adalah

tanaman stevia (Stevia rebaudiana) yang dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat maupun

sebagai pemanis untuk makanan. Allah SWT berfirman dalam surat Asy-Syu’ara (26) ayat 7:

Artinya: “Dan Apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya Kami

tumbuhkan di bumi itu berbagai macam (tumbuh-tumbuhan) yang baik?” (QS. Asy-Syu’ara

ayat 7).

Shihab (2002) memberikan tafsiran bahwa ayat ini mengundang manusia untuk

mengarahkan pandangan hingga batas kemampuannya memandang sampai mencakup

seantero bumi, dengan aneka tanah dan tumbuhannya dan aneka keajaiban yang terdapat pada

tumbuh-tumbuhannya. Allah SWT telah menumbuhkan berbagai macam tumbuh-tumbuhan,

salah satunya tanaman stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) yang ditumbuhkan oleh Allah

dengan berbagai manfaat. Tanaman ini biasanya digunakan oleh masyarakat sebagai

pengganti gula sintetis sebab pada daun stevia terdapat glikosida dengan tingkat kemanisan

kurang lebih 200-300 kali lebih manis dibandingkan gula tebu atau sukrosa serta sifatnya

yang nonkalori sehingga aman jika dikonsumsi oleh penderita diabetes atau orang yang

sedang melakukan program diet. Beberapa negara termasuk indonesia stevia sedang

dikembangkan sebagai pemanis alami alternatif sebagai pengganti sakarin dan siklamat yang

diduga beresiko bagi kesehatan, menurut hasil penelitian kedua pemanis sintetis tersebut

dapat menyebabkan kanker sehingga penggunaanya mulai dikurangi. Menurut Cahyadi

(2008) dijelaskan bahwa pemanis sintetis merupakan bahan tambahan yang dapat

menyebabkan rasa manis pada pangan, tetapi tidak memiliki nilai gizi. Bahan sintetis ini

memiliki sifat yang karsinogenik yaitu penyebab kanker. Beberapa pemanis sintetis yang

telah dikenal dan banyak digunakan adalah sakarin, siklamat dan aspartam. Berdasarkan

penjelasan tersebut keberadaan stevia sangat sesuai dengan harapan yang diinginkan oleh

masyarakat, mengingat gula merupakan salah satu kebutuhan pokok masyarakat di Indonesia.

Stevia rebaudiana Bertoni (Famili-Asteraceae) adalah satu dari 154 jenis stevia dan

satu dari dua spesies yang menghasilkan pemanis steviol glikosida (Madan, 2010., Jitendra,

2012). Glikosida dalam daun stevia terdiri dari steviosida, beberapa rebaudiosida termasuk

rebau-diosida A (reb-A), dulkosida,

dan beberapa senyawa lainnya (Geuns, 2003). Glikosida tidak mengandung kalori dan

mempunyai indeks glikemat hampir nol sehingga sesuai untuk penderita diabetes dan

seseorang yang sedang melakukan diet makanan untuk menurunkan berat badan. Stevia

digunakan pada minuman ringan rendah-kalori, bahan makanan, pasta gigi, bahan kosmetika,

antioksidan, antihipertensi, dan berbagai produk lain (Sumaryono dkk, 2011).

Sesuai dengan Chatsudthipong (2009) steviosida adalah glikosida diterpenoid, yang

terdiri dari aglikon (steviol) dan tiga molekul glukosa. Fatima (2010) menambahkan senyawa

pemanis diisolasi dari daun Stevia. Senyawa ini disebut sebagai "stevioside" yang terdiri dari

tiga molekul komplek glukosa dan satu molekul aglikon steviol, alkohol karboksilat

diterpenik. Berdasarkan banyaknya manfaat dari tanaman stevia inilah yang mendasari untuk

dilakukannya kultur jaringan yaitu kalus. Kultur kalus juga menjadi suatu alternatif untuk

meningkatkan sintesa metabolit sekunder yang mempunyai nilai komersial tinggi. Teknik in

vitro mempunyai keuntungan antara lain produksi metabolit sekunder dapat dilakukan

sepanjang tahun dan tanpa dipengaruhi oleh cuaca, serta dapat dikembangkan untuk produksi

biomassa metabolit secara besar-besaran, sehingga kultur merupakan cara yang dapat

digunakan dalam meningkatkan sintesis

metabolit sekunder. Kelebihan penggunaan kultur jaringan dalam produksi senyawa bioaktif

dibanding dengan budidaya tanaman secara utuh antara lain adalah tidak adanya keterbatasan

iklim, tidak memerlukan lahan yang luas, dan senyawa bioaktif dapat dihasilkan secara terus

menerus dalam keadaan yang terkontrol (Habibah, 2009).

Perubahan warna kalus menjadi kecoklatan atau coklat menunjukkan terjadinya

senyawa fenolik. Menurut Naz (2008) fenolb yang teroksidasi akan membentuk kuinon dan

kuinon adalah senyawa yang menyebabkan warna coklat pada kultur kalus. Intensitas warna

coklat berkorelasi positif dengan hiperaktivitas enzim oksidatif. Peningkatan enzim tersebut

terkait dengan reaksi pertahanan jaringan dari

stres oksidatif. Menurut Hendaryono (1994) menyatakan bahwa warna kalus yang bervariasi

disebabkan oleh adanya pigmentasi, pengaruh cahaya dan bagian tanaman yang dijadikan

sebagai sumber eksplan. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian ini, dimana awal terbentuknya

kalus berwarna hijau atau hijau kekuningan yang lama kelamaan berubah menjadi kuning

kecoklatan atau coklat.

Stevia ialah tanaman perdu yang memiliki tinggi antara 40-60 cm, berbatang bulat,

berbulu, beruas, bercabang banyak, dan berwarna hijau. Daun tunggal berhadapan, berbentuk

bulat telur, dengan panjang 2-4 cm, lebar 1-5 cm. Bunga majemuk, bentuk malai, di ujung

dan di ketiak daun, bentuk terompet, kelopak bentuk tabung, berbulu, berbagi lima, hijau,

tangkai benang sari dan tangkai putik pendek, kepala sari kuning, putik bentuk silindris, putik

mahkota ungu berbentuk tabung dan berakar tunggang. Tanaman ini memiliki daya

regenerasi yang kuat sehingga tahan terhadap pemangkasan. Stevia sebagai sumber pemanis

alami memiliki prospek cerah di masa yang akan datang, mengingat pemanis sintetik

seringkali berpengaruh buruk terhadap kesehatan.

Di daerah asalnya, tanaman stevia disebut caa-ehe, ca-enhem atau azucacaa. Kerabat

dekat tanaman stevia antara lain stevia ovata wild dan stevia sp. stevia ovata yang berasal

dari Meksiko ditemukan tumbuh liar di daerah Selabintana, Sukabumi (Jawa Barat). Produk

utama stevia adalah daun yang digunakan sebagai bahan baku pembuat gula atau pemanis

alami. Saat yang tepat untuk panen pertama pada waktu kandungan stevioside maksimal yaitu

tanaman telah berumur 40-60 hari, tinggi tanaman 40-60 cm, berdaun rimbun, dan menjelang

stadium berbunga. Panen dilakukan dengan cara memotong batang tanaman stevia setinggi

10-15 cm dari permukaan tanah dengan menggunakan gunting pangkas yang tajam

(Rukmana, 2003). Daun stevia yang sudah kering dapat dijadikan bubuk daun dan dapat

digunakan secara langsung sebagai bahan makanan seperti roti, minuman ringan dll.

Meskipun dalam bubuk daun dan tanpa proses lanjutan, daun stevia masih aman dikonsumsi,

bebas kalori, 20-30 kali lebih manis dari pemanis gula dan bermanfaat bagi kesehatan

(Madan, et. al., 2010).

Salah satu bahan makanan yang cukup banyak dikonsumsi adalah bahan pemanis. Ada

dua macam bahan pemanis yaitu bahan pemanis alami dan bahan pemanis sintetis. Bahan

pemanis alami lebih umum digunakan, dimana yang termasuk jenis ini antara lain gula dari

tebu, aren, kelapa, dan bit. Bahan sintetis walaupun tidak umum digunakan tetapi beberapa

sudah dikenal, antara lain sakarin dan siklamat.

Sampai saat ini Indonesia masih belum berswasembada gula. Dari data yang dihimpun

oleh Badan Pusat Statistik (BPS), terlihat bahwa impor gula Indonesia, baik untuk gula alami

maupun untuk gula sintetis, pada tahun 2000 cukup besar. Untuk gula alami jumlahnya

mencapai 2.505.455 ton, sedang untuk gula sintetis jumlahnya 37.522 ton. Peningkatan

jumlah penduduk tentunya ikut berperan dalam peningkatan konsumsi gula, dimana

peningkatan produksi gula masih lebih rendah dibanding peningkatan konsumsi gula oleh

masyarakat.

Di tengah kondisi impor gula tersebut, gula stevia nampaknya mempunyai peluang

untuk mengisi kekurangan produksi gula. Stevia merupakan bahan pemanis non tebu dengan

kelebihan tingkat kemanisan 200 – 300 kali dari gula tebu dan diperoleh dengan mengekstrak

daun stevia (Maudy E., dkk., 1992). Gula stevia bukanlah dimaksudkan untuk menggantikan

gula tebu karena nilai kalorinya yang rendah, tetapi lebih dimaksudkan untuk menggantikan

gula sintetis lainnya yang menurut berbagai penelitian bersifat karsinogenik. Karena stevia

diperoleh dari tanaman maka penggunaannya lebih aman, non karsinogenik dan non kalori.

Keunggulan lainnya adalah gula stevia tidak menyebabkan carries gigi, memiliki nilai kalori

rendah yang cocok bagi penderita diabetes, dan tidak menyebabkan kanker pada pemakaian

jangka panjang.

Daun stevia berisi glycoside yang mempunyai rasa manis tapi tidak menghasilkan

kalori. Stevioside dan rebaudioside merupakan konstituen utama dari glycoside dengan

gabungan dari molekul gula yang berbeda seperti yang terdapat pada tanaman stevia.

Glycoside yang digunakan secara komersial dinamakan stevioside yang memberikan rasa

manis 250 – 300 kali dari gula (http://emperor’s_herbologist.com/steviocide.htm ). Daun

stevia selain mengandung pemanis glycoside (stevioside, rebauside, dan dulcosida) juga

mengandung protein, fiber, karbohidrat, fosfor, kalium, kalsium, magnesium, natrium, besi,

vitamin A, vitamin C, dan juga minyak (http://stevia-steviocide.com/).

Rasa manis pada stevia disebabkan karena dua komponen yaitu stevioside (3 – 10%

berat kering daun) dan rebaudioside (1 – 3%) yang dapat dinaikkan 250 kali manisnya dari

sukrosa. Stevioside mempunyai keunggulan dibandingkan pemanis buatan lainnya, yaitu

stabil pada suhu tinggi (100°C), range pH 3 – 9, dan tidak menimbulkan warna gelap pada

waktu pemasakan (http://newcrops.uk.edu.au). Stevioside mempunyai rumus molekul

C38H60O18 dan berat molekul 804,90. Apabila diurai sempurna stevioside mengandung

56,90% C, 7,51% H, dan 35,78% O.

Rebaudioside merupakan pemanis terbaik yang ada pada tanaman stevia yang

memberikan rasa manis 300 kali dibanding gula. Rebaudioside dengan kemurnian tinggi

diperoleh dengan kristalisasi dari ekstrak stevia dengan menggunakan teknologi pemurnian

tingkat tinggi. Rebaudioside mempunyai rasa yang lebih baik dari stevioside. Kekuatan

kemanisannya sekitar 30% lebih tinggi daripada stevioside tetapi jumlahnya lebih sedikit

(http://stevia-steviacide.com).

Pembuatan gula dari daun stevia selama ini telah dilakukan di negara-negara maju

seperti Jepang dan Amerika Serikat. Di Jepang dikembangkan metode refining sweet

glucoside dari daun stevia, sementara di Amerika Serikat Emperor’s Herbologist

mengembangkan Natural “Aqueous Extraction” (purified water extraction, air dehydration)

Process yang menghasilkan kristal stevia berwarna putih tanpa adanya warna coklat

(http://emperor’s_herbologist.com/steviocide.htm). Gula stevia berbentuk kristal dengan

besar kristal antara 0,8 – 1,2 mm. Mempunyai titik leleh 196 – 198oC dengan pH 5 – 6 dan

densitas 1,43 – 1,67 gram/mL.

Bahan pemanis adalah salah satu bahan pangan yang keperluannya selalu meningkat

setiap tahun. Sampai saat ini Indonesia masih harus mengimpor bahan pemanis, terutama

gula tebu untuk memenuhi kebutuhan di dalam negeri.Sehingga perlu dikembangkan

alternatif tanaman lain yang dapat digunakan untuk mencukupi kebutuhan terhadap pemanis

tersebut. Disamping gula tebu, beberapa pemanis sintetis seperti siklamat dan sakarin, banyak

digunakan secara luas di Indonesia. Bahan pemanis ini mempunyai keuntungan karena

tingkat kemanisannya jauh lebih tinggi daripada gula tebu.Tetapi untuk pemanis sintetis ini

mempunyai efek samping yang membahayakan kesehatan. Hal ini dibuktikan pada suatu

penelitian di Amerika pada tahun 1969 yang berkesimpulan bahwa pemanis sintetis

mempunyai sifat Karsinogenik, yaitu dapat menyebabkan kanker, sehingga pemakaiannya

dibatasi dan diatur sangat ketat.

Pemerintah Indonesia mengatur kadar pemakaian siklamat 20 gram / Kg. Sakarin 50

mg/kg sedangakan beberapa negara besar seperti Amerika serikat sudah membatasi

penggunaan pemanis tersebut dalam produk-produk makan (Padmawinata,1985).Oleh karena

itu perlu dicari bahan pemanis sintetis terutama siklamat dan sakarin. Stevia Rebaudiana

bertoni adalah suatu sumber bahan pemanis alami yang mempunyai tingkat kemaniasan 200-

300 kali lebih manis dari pada gula tebu. Dengan demikian mungkin stevia bisa memberikan

jalan keluar bagi konsumen yang karena alasan apapun tidak mau atau tidak boleh makan

gula pasir / gula tebu, misalnya penderita diabetes, karena tentu saja gula stevia lebih aman

dibandingkan pemanis sintetis / buatan.Tanaman Stevia berasal dari Amerika Serikat,

terutama perbatasan Paraguay- Brazil- Argentina digunakan sebaagai campuran minuman teh

atau kopi. Di Indonesia Stevia mulai ditanam sejak tahun 1977 di Jawa barat dan Jawa

Tengah.

Stevia Rebaudiana Bertoni termasuk familia Compositae merupakan tumbuhan tahunan

berbentuk perdu basah, Tinggi tanaman 60-70 cm bercabang banyak .Jumlah Kromosom 2 n

= 22. Duduk daun berhadapan, tunggal, bentuknya sederhana lonjong dan langsing serta tepi

daun bergerigi halus ( Tjasadiharja,1982). Tangkai daun pendek, tulang daun menyirip dan

pada permukaan daun bagian bawah kelihatan menonjol. Panjang helaian daun antara 2- 5 cm

( Anonim 1985). Nama Stevia rebaudiana Bertoni Mengabadikan dua nama peneliti

tumbuhan, Dr Moises Bertoni (1899) dan Dr. Ovidio Rabaudi (1905)(Tjasadiharja,1982)

Stevia berasal dari distrik Amambai dan Iquaqu, perbatasan Paraguay- Brazil – Argentina.

Tumbuhan itu tumbuh liar atau dibudidayakan oleh penduduk setempat dan dikenal dengan

nama lokal Caa-hehe, Caa-enhe atau Kaa- he-e. Daun Stevia yang telah dipetik pada

umumnya dipasarkan dalam bentuk kering. Cara Pengeringan daun Stevia ada beberapa

macam, diantaranya :

1. Pengeringan dengan aliran udara panas

Dilakukan dengan cara menghamparkan daun dilantai pengering yang dialiri udara

hangat selama 12 jam sambil diaduk-aduk hingga merata. Kemudian dipindah dalam tempat

yang dialiri udara panas sehingga daun menjadi kering.

2. Pengeringan alami dengan sinar matahari

Pengeringan dengan sinar matahari dilakukan dengan cara , daun dilayukan dengan cara

diangin-anginkan, kemudian baru dipanaskan dibawah sinar matahari langsung . Hal tersebut

dapat dilakukan tampa merusak kandungan tanaman . Gula stevia mempunyai tingkat

kemanisan 200-300 kali kemaniasan dari pemanis yang berasal dari gula tebu, berkalori

rendah, tiudak menganggu rasa minuman sirop, relatif tidak berbahaya karena tidak

mengandung zat yang bersifat karsinogenik dan telah dipasarkan dijepang, Taiwan dan Korea

( Inglet, G.E., 1981) Rasa manis ini dihasilkan dari daun tanaman stevia tersebut yang

disebabkan adanya kandungan Glikoside dalam daun stevia tersebut. Glikoside ini

merupakan suatu senyawa yang terdiri dari gula dan bukan gula ( aglukon ) .Bila gulanya itu

glukose maka glikoside tersebut disebut Glukoside. Biasanya selain glukose ada Fruktose,

ribose dan manose.

Pemanis Stevia merupakan ekstrak kasar dari daun stevia, sesungguhnya terdiri atas

delapan komponen yaitu ;

1. Stevioside

2. Steviolbioside

3. Rebaudioside-A

4. Rebaudioside-B

5. Rebaudioside-C

6. Rebaudioside-D

7. Rebaudioside-E

8. Dulcoside-A(Kinghorn et al.1982 )

Dimana stevioside , rebaudioside-A, dan rebaudioside-C (Dulcoside –A) merupakan

kandungan dalam jumlah terbanyak ( Ahmed , et al 1980 ) Rumus molekul stevioside yaitu

C38 H60O16 dengan berat molekul 804.9 gram . Sifat-sifat dari daun Stevia dalah :

a. Higroskopis

b. Titik cair 198 o C

c. Larut dalam air

d. Larut dalam metanol

e. Dioxan

f. Tidak larut dalam alkohol murni

g. Tidak larut dalam khloroform

h. Tidak larut dalam eter ( Depprin,1985)

Produk stevia sudah mulai dipasarkan terutama di Jepang, diantaranya:

a. Stevia ST – AB ( 100 % Ekstrak Stevia )

b. Histevia- 500 ( 50 % Stevioside )

c. Licostevia-A ( 2 % stevioside )

d. Licostevia S-1 ( 10 % Stevioside )

e. Licostevia S-2 ( 5 % Stevioside )

f. Licostevia S-3 ( 3 % Stevioside )

Pada licostevia terdapat tiga sampai tujuh glycyrhizin. Jenis makanan yang

menggunakan stevia dipasarkan di Jepang adalah :

a. Pickles

b. Carbonat Drinks

c. Permen karet

d. Frozen deserts

e. Fist paste

f. Soy sauce

g. Es cream

h. Dan Orange Juice ( Fujite dan Edahrino,1979)

Stevia (Stevia rebaudiana) merupakan salah satu jenis tanaman obat di Indonesia

yang memiliki keunikan berupa rasa manis pada daunnya. Daun stevia ini mengandung

sejumlah senyawa glikosida diterpen dengan steviol sebagai aglikonnya. Komponen utama

yang memberikan rasa manis dan terkandung paling banyak pada daun stevia adalah

steviosida (Daneshyar dkk., 2010), yang diperkirakan 300 kali lebih manis dari sukrosa

(Geuns, 2003).

Bahan pemanis ini telah digunakan di banyak negara sebagai pemanis alami non-

kalori, sehingga dapat direkomendasikan untuk penderita diabetes mellitus tipe 2 dan

penderita obesitas (Jagatheeswari dan Ranganathan, 2012). Penggunaannya juga telah diuji

dan tidak memberikan efek samping (Megaji dkk., 2005 dalam Sairkar dkk., 2009). Daun

stevia memiliki banyak manfaat, selain rasa manis dan tanpa efek samping, juga berpotensi

memberikan manfaat kesehatan sebagai antihiperglikemik (Jeppesen dkk., 2002),

antihipertensi (Hsu dkk., 2002) dan menjaga kesehatan gigi (Geuns dkk., 2003a dalam

Daneshyar dkk., 2010).

Potensi yang dimiliki oleh stevia menjadi perhatian banyak orang sehingga banyak

pula keinginan untuk mengembangkan tanaman ini. Kemampuan biji stevia untuk

berkecambah sangatlah rendah dan propagasi secara vegetatif juga terbatas dilakukan karena

rendahnya jumlah individu yang dapat diperoleh dari satu tanaman induk (Sivaram dan

Mukundan, 2003 ; Saikar dkk., 2009 ; Janarthanam dkk., 2010). Kultur in vitro yang lebih

berpotensi untuk digunakan dalam produksi metabolit sekunder adalah kultur suspensi sel

dan kultur kalus (Rahardja dan Wiryanta, 2005). Banyak faktor yang dapat mempengaruhi

inisiasi proliferasi dan sintesis metabolit sekunder dalam kultur kalus dan suspensi sel, seperti

genotipe tumbuhan, komposisi medium dan faktor-faktor fisik dalam pertumbuhan sel seperti

cahaya dan suhu (Siregar dkk., 2006). Penambahan zat pengatur tumbuh pada kalus dapat

mempengaruhi produksi senyawa metabolit sekunder (Wardani dkk., 2004).

Penelitian ini menggunakan kultur kalus dan steviosida pada penelitian ini diperoleh

dengan menginduksi kalus dari daun stevia. Kalus merupakan proliferasi massa jaringan yang

belum terdiferensiasi. Kumpulan sel terbentuk di seluruh permukaan irisan eksplan, sehingga

semakin luas irisan eksplan maka semakin cepat dan banyak kalus yang terbentuk

(Herdaryono dan Wijayani, 1994). Induksi kalus dapat dioptimasi dengan kombinasi zat

pengatur tumbuh (ZPT) berupa auksin dan sitokinin.

Komposisi medium kultur juga memainkan peranan penting dalam menentukan

morfogenetik kalus (Gupta dkk., 2010). Wiryosoendjoyo (2009) telah berhasil menumbuhkan

kalus dari eksplan daun stevia pada medium New Phaleonopsis (NP) dan menjelaskan bahwa

pertumbuhan kalus pada eksplan daun stevia yang ditanam pada medium Murashige and

Skoog (MS) membutuhkan waktu yang lebih lama dibandingkan pada medium NP. Hal ini

karena medium MS memiliki konsentrasi garam-garam mineral yang tinggi sehingga akan

menyebabkan kondisi medium cenderung hipertonis yang menghambat pertumbuhan

eksplan. Konsentrasi garam-garam mineral pada medium NP lebih rendah dibandingkan

medium MS, sehingga dapat memacu pertumbuhan eksplan. Pada penelitian ini, medium

kultur yang digunakan adalah medium ½ MS dan NP.

Kandungan steviosida bergantung dari kultivar dan lingkungan pertumbuhannya,

yaitu antara 5 – 22 % dari berat kering daun (Kennelly, 2002). Menurut Das dkk. (2006),

senyawa glikosida steviol banyak disintesis di daun dari pada di akar dari tanaman stevia,

sedangkan menurut Gupta dkk. (2010), eksplan daun merupakan materi tumbuhan terbaik

untuk produksi kalus. Hendaryono dan Wijayani (1994) juga mengungkapkan untuk

pemilihan eksplan sebagai bahan dasar pembentukan kalus sebaiknya dipilih bagian tanaman

yang masih muda karena masih bersifat meristematik seperti ujung daun, ujung batang,

keping biji dan sebagainya. Oleh karena itu, eksplan yang digunakan pada penelitian ini

adalah bagian daun dari tanaman stevia yang masih muda. Janarthanam dkk. (2010)

melakukan penelitian mengenai produksi metabolit sekunder melalui kultur kalus stevia dari

eksplan nodus dan daun stevia. Berdasarkan penelitiannya, eksplan daun stevia menunjukkan

respon induksi kalus dan proliferasi yang lebih baik daripada eksplan nodus, dimana 75%

kalus terinduksi pada hari ke-12 setelah inokulasi dengan menggunakan hormon 2,4-D 1,0

mg/l. Produksi biomassa kalus dilakukan pada medium MS dengan kombinasi hormon yang

berbeda. Pada medium produksi biomassa kalus, kombinasi hormon 2,4-D 0,5 mg/l + NAA

0,5 mg/l + Kinetin 1,0 mg/l merupakan kombinasi hormon paling optimum.

Das dkk. (2006) melakukan penelitian dengan menginisiasi kalus dari eksplan daun

stevia dan memeliharanya pada medium MS dengan konsentrasi garam medium yang

berbeda, yaitu ½ MS, 1 MS dan 2 MS. Kombinasi 2,4-D 1,0 mg/l + Kinetin 0,2 mg/l

menunjukkan pertumbuhan kalus dengan proliferasi terbaik pada konsentrasi garam medium

½ MS dan 1 MS, sedangkan kombinasi NAA 0,1 mg/l + BAP 2,0 mg/l sebagai kombinasi

hormon terbaik untuk pemeliharaan kalus. Penggunaan medium MS dengan konsentrasi

garam medium ½ MS menunjukkan hasil yang lebih baik untuk pemeliharaan kalus.

Kandungan persentase steviosida pada kalus yang tumbuh di medium ½ MS (5,6%) lebih

tinggi dibandingkan kalus yang tumbuh di medium 1 MS (4,45%).

Gupta dkk. (2010) juga melakukan penelitian untuk memproduksi senyawa steviol

gikosida dengan menumbuhkan kalus dari eksplan daun salah satunya. Induksi kalus

dilakukan dengan menggunakan berbagai kombinasi hormon seperti 2,4-D, NAA, IBA dan

kinetin. Kombinasi NAA 0,75 mg/l + 2,4-D 1 mg/l merupakan kombinasi hormon optimum

yang mampu menginduksi kalus 100% setelah tiga minggu. Perbanyakan kalus dilakukan

dengan subkultur kalus pada medium MS dengan konsentrasi garam medium 1 MS dan ½

MS. Jumlah kalus maksimum dari hasil subkultur kalus eksplan daun diperoleh dari

perlakuan yang diberi NAA 2 mg/l.

Sivaram dan Mukundan (2003) juga telah melakukan penelitian dengan menggunakan

daun stevia sebagai salah satu eksplannya. Kombinasi hormon BAP (8.87 μM ≈ 2 mg/l) dan

IBA (9.80 μM ≈ 2 mg/l) pada medium MS merupakan kombinasi hormon yang dapat

memberikan kandungan glikosida maksimal pada kalus (5,8%). Nilai ini lebih tinggi dari

kandungan steviosida pada daun stevia in vivo maupun in vitro (4,9% dan 3,6%).

Menurut Geuns (2003), Stevia rebaudiana Bertoni (Gambar 1) adalah tanaman semak

yang berasal dari daerah Amerika Selatan (daerah perbatasan antara Paraguay dan Brazil).

Daun stevia mengandung steviosida yang merupakan komponen utama pemberi rasa manis.

Kandungannya antara 4 – 20 % dari berat kering daun stevia (tergantung dari kondisi

penanaman dan pertumbuhannya). Komponen lain pemberi rasa manis pada daun stevia

tetapi dalam kadar yang lebih rendah, yaitu steviolbiosida, rebaudiosida A, B, C, D, E, F dan

dulcosida A.

Stevia termasuk tumbuhan semak yang tingginya mencapai 30 cm. Daunnya langsung

menempel pada batang dengan panjang sekitar 3 – 4 cm, berbentuk lanset atau bentuk spatula

dengan ujung lamina daun yang tumpul. Tepi daun bergerigi mulai dari bagian tengah hingga

ujung daun. Permukaan atas daun dan batang muda memiliki rambut-rambut halus (trikoma),

sedangkan batang tua menjadi berkayu. Akarnya sedikit bercabang dan bunga berwarna ungu

cerah (Madan dkk., 2010).

Stevia rebaudiana Bertoni pertama kali diklasifikasikan tahun 1899 oleh Moises

Santiago Bertoni. Awalnya tanaman ini benama Eupatorium rebaudianum dan berubah nama

menjadi Stevia rebaudiana Bertoni pada tahun 1905 (Lemus-mondaca dkk., 2012).

Kedudukan taksonomi tanaman stevia menurut Yadav dkk. (2011) sebagai berikut :

Kerajaan : Plantae

Sub-kerajaan : Tracheobionta

Super-divisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Sub-kelas : Asteridae

Grup : Monochlamydae

Bangsa : Asterales

Suku : Asteraceae

Tribe : Eupatorieae

Marga : Stevia

Spesies : Stevia rebaudiana Bertoni.

Persebaran stevia kini telah tersebar ke beberapa daerah di dunia, seperti Kanada,

beberapa negara Asia dan Eropa. Diantara 230 spesies pada genus Stevia, hanya spesies

rebaudiana dan phlebophylla yang menghasikan steviol glikosida. Tanaman ini telah

digunakan berabad-abad oleh suku Guarani di Paraguay sebagai pemanis dan untuk

pengobatan penyakit ringan (Lemus-Mondaca dkk., 2012).

Gambar 1. Stevia rebaudiana Bertoni (Lemus-Mondaca dkk., 2012)

Tumbuhan tidak hanya melakukan metabolisme primer, tetapi juga melakukan

metabolisme sekunder menggunakan jalur metabolisme tertentu untuk pembentukan senyawa

kimia khusus yang disebut metabolit sekunder (Herbert, 1995). Karakteristik metabolit

sekunder adalah struktur kimianya heterogen dan terbentuk hanya pada kelompok makhluk

hidup bahkan jenis tertentu. Metabolit yang diproduksi oleh tumbuhan tersebut memiliki nilai

penting dalam berbagai industri khususnya bahan baku industri farmasi, penyedap, makanan

dan parfum (Khadi dkk., 1981).

Menurut Gupta dkk. (2010), ada 9 tipe senyawa glikosida steviol yang ditemukan

pada tanaman stevia, diantaranya steviosida, rebaudiosida A, rebaudiosida B, rebaudiosida C,

rebaudiosida D, rebaudiosida E, rebaudiosida F, steviolbiosida A dan dulcosida A. Bahan

pemanis yang paling berlimpah pada daun stevia adalah steviosida (Gambar 2) yang

merupakan senyawa yang paling bertanggung jawab terhadap rasa manis pada daun stevia.

Gambar 2. Struktur Steviosida (Geuns, 2008)

Senyawa ini terbentuk dari tiga molekul glukosa dan satu molekul steviol

(Janarthanam dkk., 2010). Steviosida juga merupakan senyawa gula yang stabil pada suhu

100oC (Uddin dkk., 2006). Kandungannya dapat mencapai 13–20% pada daun stevia kering,

sedangkan rebaudiosida hanya sekitar 1–3% pada daun stevia kering (Das dkk., 2006).

Kesimpulan bahwa steviol disintesis dari Kaurene melalui jalur mevalonat telah

terungkap lebih dari 30 tahun yang lalu (Brandle dan Telmer, 2007). Menurut Kim dkk.

(1996) dalam Brahmachari dkk. (2011), ada aktivitas yang tinggi dari 3-hydroxy-3-

methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reduktase di kloroplas Stevia rebaudiana yang

merupakan enzim pokok dari jalur asam mevalonat (MVA) ke isopentildifosfat (IPP),

sehingga disimpulkan bahwa asam mevalonat (MVA) sebagai perantara dari jalur biosintesis

steviol. Akan tetapi, kesimpulan tersebut tidak didukung dengan bukti langsung (Geuns,

2003; Brahmachari dkk., 2011).

Menurut Brahmachari dkk. (2011), penelitian Totte dkk. (2000) menunjukkan bahwa

adanya keterlibatan jalur 2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate (MEP) sebagai jalur

biosintesis untuk ent-kaurene yang merupakan kerangka dari steviosida dan giberelin (GA).

Menurut Geuns (2003), kesimpulan tersebut telah dibuktikan dari 5548 sekuens cDNA dari

daun Stevia. Banyak gen spesifik yang ditemukan dari jalur MEP dan tidak ada yang

teridentifikasi dari jalur MVA, sehingga biosintesis steviosida disimpulkan melalui jalur

MEP (Gambar 3). Tahap awal proses biosintesis steviosida ini terjadi di plastida (Osbourn

dan Lanzotti, 2009).

Gambar 3. Skema Biosintesis Steviosida melalui Jalur MEP (Brandle dan Telmer,

2007)

Keterangan: DXS = deoxyxylulose-5-phosphate synthase; DXR = deoxyxylulose-5-

phosphate reductoisomerase; CMS = 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol synthase;

CMK = 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase; MCS = 4-diphosphocytidyl-2-C-

methyl-D-erythritol 2,4- cyclodiphosphate synthase; HDS = 1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl

4- diphosphate synthase; HDR = 1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl 4- diphosphate reductase;

GGDPS = geranylgeranyl diphosphate synthase; CDPS = copalyl diphosphate synthase; KS

= kaurene synthase; KO = kaurene oxidase; KAH = kaurenoic acid 13-hydroxylase

Tanaman stevia (Stevia rebaudiana Bertoni M.) sangat potensial dikembangkan

sebagai bahan baku gula (pemanis) alami, pendamping gula tebu dan pengganti gula sintetis.

Daun stevia mengandung senyawa glikosida diterpen dengan tingkat kemanisan 200 D300

kali gula tebu tetapi kalorinya sangat rendah, sehingga mempunyai keunggulan lain dapat

digunakan oleh penderita diabetes maupun pada penderita kegemukan. Zat manis dalam

stevia disebut stevisoida. Gula stevia telah dikomersilkan di

Jepang, Korea, RRC, Amerika Selatan untuk bahan pemanis bagi penderita diabetes dan

kegemukan. Di Jepang dan Brazilia, stevia selain digunakan sebagai pemanis buatan untuk

penderita diabetes, juga diijinkan digunakan dalam makanan. Di Amerika, penggunaan stevia

untuk zat tambahan makanan (food additive) masih belum mendapat ijin dari FDA karena

alasan keamanannya. Stevia dilaporkan menimbulkan efek karsinogenik dan mutagenik.

Tetapi hal ini masih menjadi pertentangan mengingat ada beberapa hasil penelitian yang

menyatakan stevia menunjukkan efek mutagenik, efek mutagenik lemah dan ada yang

menyatakan tidak ada masalah dengan keamanannya. Efek mutagenik dan karsinogenik

diduga disebabkan oleh adanya hasil metabolit stevisoida yang disebut steviol.

Puluhan hasil penelitian mengenai keamanan steviosida dan steviol telah dilakukan.

Hasil uji toksisitas akut (LDso) terhadap steviosida dan steviol terhadap 3 jenis hewan coba

yaitu mencit, tikus dan hamster, menunjukkan bahwa steviosida sampai 15 g/kg bb tidak

menyebabkan kematian pada ketiga jenis hewan. LDso steviol pada hamster 5,2 dan 6,10

g/kg bb masing-masing untuk jenis kelamin jantan dan betina; sedangkan LDso steviol pada

mencit dan tikus lebih besar dari 15 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa steviosida maupun

steviol sangat aman. 1 Penelitian lain mengenai toksisitas akut terhadap mencit yang

dilakukan oleh Japan Food Sanitation Corporation tahun 1991, menunjukkan bahwa ekstrak

stevia sangat aman. Pemberian 20 gram ekstrak stevia atau sebanding dengan 3 liter pada

manusia, tidak menunjukkan kelainan setelah 7 hari. Steviosida pada dosis sampai 2,5 g/kg

tidak menimbulkan bahaya pada hewan coba, tidak mempengaruhi perkembangan

pertumbuhan hamster.' Data LDso daun Stevia dari B2P2T02T Tawangmangu, menunjukkan

nilai 79,81 mg/l0 g (=8,0 g/kg ) bb mencit, dengan pemberian intra peritoneal. 3

Stevia merupakan tanaman semak semusim dengan tinggi antara 30-90 cm, dapat

tumbuh

pada 10-1300 dpl. Stevia ditanam dengan populasi 60.000-125.000 tanaman/ha, usia

produktif 2-3

tahun, masa panen 6-7 kali/tahun. Didataran rendah stevia cepat berbunga dan mudah mati

apabila sering dipanen. Stevia yang ditanam di Indonesia berasal dari Jepang, Korea dan

China. Bahan tanaman tersebut berasal dari biji sehingga pertumbuhan tanaman stevia di

lapangan sangat beragam."

Menurut keputusan Menteri Industri dan Perdagangan no.115/mpp/kep/2/1998

tanggal 27 Februari 1998, gula merupakan salah satu dari sembilan bahan pokok

kebutuhan masyarakat Indonesia. Kesembilan bahan pokok tersebut yaitu beras, gula,

minyak goreng, daging, telur, susu, jagung, minyak tanah, dan garam. Konsumsi gula

masyarakat Indonesia mencapai angka 5,2 juta ton per tahun (Ayu Rosyidah, 2013).

Konsumsi gula meningkat seiring dengan meningkatnya jumlah penduduk,

kesejahteraan masyarakat, dan berkembangnya industri berbahan baku gula.

Indonesia memproduksi gula sekitar 2,3 juta ton per tahun dan jumlah ini hanya dapat

memenuhi 40% kebutuhan gula nasional (Didik Kusbiantoro, 2013). Beberapa alasan

pemerintah perlu melakukan impor gula yaitu jumlah produksi gula yang berfluktuasi

dan tidak dapat memenuhi konsumsi gula masyarakat, masa panen gula yang

berlangsung cukup lama yaitu selama 16 bulan sehingga menyebabkan ketersediaan

gula menjadi terbatas, meningkatnya jumlah penduduk setiap tahun, dan semakin

berkembangnya industri berbahan baku gula. Jumlah produksi dan impor gula tebu di

Indonesia (Badan Pusat Statistik, 2013) disajikan pada Tabel 1.1 Tabel 1.1 Jumlah

produksi dan impor gula tebu di Indonesia

Tahun Produksi (ton) Impor (ton)

2009 2.333.900 1.373.546

2010 2.288.700 1.382.525

2011 2.244.150 2.371.250

2012 2.600.350 2.743.778

Jumlah impor gula tebu yang tinggi dan jumlah produksi yang berfluktuasi

menyebabkan diperlukannya alternatif lain pengganti gula tebu. Alternatif tersebut

dapat berupa pemanis alami maupun buatan. Bahan pemanis alami memiliki nilai

kalori tinggi dan mudah dicerna tubuh, contohnya yaitu gula dari aren, bit, madu, dan

kelapa. Bahan pemanis sintesis yang banyak dikonsumsi masyarakat yaitu saccharine,

aspartame, siklamat, sorbitol, xylitol, sucralose, dan acesulfame-K. Bahan pemanis

sintesis memiliki nilai kalori rendah dan sulit dicerna tubuh. Konsumsi gula yang tinggi

dapat berakibat pada penyakit diabetes mellitus karena asupan gula yang tinggi

mengakibatkan pankreas bekerja keras memproduksi insulin yang digunakan tubuh

untuk menormalkan kadar gula dalam darah. Namun pada akhirnya, pankreas akan

kelelahan sehingga produksi insulin akan menurun dan tidak mampu menormalkan

kadar gula dalam darah. Pada akhirnya kadar gula dalam darah menjadi tinggi dan

menimbulkan penyakit diabetes mellitus.

Berdasarkan data Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), penderita diabetes

mellitus di Indonesia mencapai 8,4 juta orang. Pada 2020 diperkirakan penderita

diabetes bertambah menjadi 12 juta orang. Faktor keturunan hanya 20%, sedangkan

faktor utama yaitu pola hidup tidak sehat berupa mengkonsumsi makanan tinggi

kalori, obesitas, rendah serat, dan jarang berolahraga (Yaspen M., 2013). Diabetes

mellitus tercatat menjadi penyakit dengan peringkat keenam penyebab

kematian di dunia. Indonesia merupakan negara urutan ke-7 dengan prevelensi

diabetes tertinggi setelah China, India, USA, Brazil, Rusia dan Meksiko. Penyakit ini

juga dapat menimbulkan penyakit lainnya seperti kebutaan, gagal ginjal, kaki diabetes

(gengrene) sehingga harus diamputasi, penyakit jantung dan stroke (Santi A., 2013).

Penderita diabetes mellitus, obesitas, dan orang yang sedang diet gula sangat

membutuhkan pemanis sintesis sebagai pengganti gula karena nilai kalorinya yang

rendah dan sulit dicerna tubuh. Industri makanan maupun minuman juga telah

banyak yang menggunakan pemanis sintesis untuk menggantikan gula tebu karena

faktor ekonomi. Pemanis sintesis memiliki harga yang lebih murah daripada gula tebu,

memiliki tigkat kemanisan yang jauh lebih tinggi, diproduksi melalui rekayasa kimia

sehingga dapat diproduksi dengan jumlah yang tinggi tanpa memperhatikan faktor

lahan perkebunan. Namun pemanis sintesis sangat berbahaya bagi kesehatan karena

dapat menyebabkan kanker jika dikonsumsi dalam jangka waktu yang lama

(karsinogenik), tidak aman bagi ibu hamil atau menyusui, atau bagi penderita

fenilketonuria (aspartame mengandung asam amino fenilalanin), sehingga diperlukan

pemanis dengan nilai kalori rendah dan aman bagi kesehatan, salah satunya yaitu

stevia.

Pemanis stevia berasal dari tumbuhan dan diperoleh melalui ekstraksi daun

stevia, sehingga penggunaanya lebih aman. Keunggulan stevia yaitu tidak

menyebabkan kanker (non karsinogenik), karies gigi, dapat mencegah obesitas,

menurunkan tekanan darah tinggi, dan kandungan kalori yang rendah dengan tingkat

kemanisan yang jauh lebih tinggi daripada gula tebu yaitu 300 kali lebih manis.

Keunggulan lainnya yaitu pembudidayaan stevia yang mudah, pertumbuhannya yang

relatif tidak lama yaitu tiga hingga empat bulan, dan mengandung vitamin, protein,

kalsium dan lain-lain yang bermanfaat bagi tubuh. Oleh karena itu pemanis stevia

dapat menjadi alternatif yang berpotensial untuk menggantikan pemanis sintesis.

Pemanis merupakan bahan yang ditambahkan pada makanan atau minuman

yang dapat memberikan rasa manis. Secara umum, pemanis dapat dikelompokkan

menjadi dua yaitu alami dan sintesis. Pemanis alami yaitu pemanis yang berasal dari

tanaman maupun lainnya yang dari alam, seperti gula dari tebu, aren, bit, madu, dan

kelapa. Pemanis sintesis yaitu pemanis yang diperoleh dari proses sintesa kimia, seperti

saccharine, aspartame, siklamat, sorbitol, xylitol, sucralose, dan acesulfame-K (Luqman

B., 2007).

Berdasarkan kandungan kalori, pemanis dapat dibagi menjadi dua yaitu

pemanis nutritif dan pemanis non nutritif. Pemanis nutritif adalah pemanis yang dapat

dicerna dan memiliki kalori di dalam komponen gulanya, contohnya yaitu sukrosa dan

polyols. Pemanis non nutritif adalah pemanis yang hanya memiliki sedikit atau sama

sekali tidak memiliki kalori di dalam komponen gulanya. Pemanis non nutritif

dibedakan menjadi dua yaitu pemanis non nutritif alami dan sintesis. Contoh dari

pemanis non nutritif alami yaitu thaumantin, monellin, miraculin, brazzein, stevioside,

glycyrrhizinic acid, mogroside, dan dihydrochalcones, sedangkan contoh dari pemanis

non nutritif sintesis yaitu saccharine, aspartame, siklamat, acesulfame-K, sucalose, dulcin

(Dr. D.Chattopadhya, 2007) ]

Sukrosa merupakan salah satu jenis oligosakarida yang terdiri dari dua

monomer (disakarida) yaitu glukosa dan fruktosa, dan termasuk kelompok

karbohidrat dengan rumus molekul C12H22O11.. Nama lain dari sukrosa yaituα-D-

glukopiranosil-(1→2)-β-Dfruktofuranosida. Sukrosa lebih dikenal dengan nama gula

tebu.

Stevia Rebaudiana Bertoni ditemukan oleh seorang direktur perguruan tinggi

pertanian di Asuncion bernama Dr. Moises Santiago Bertoni ketika sedang menjelajahi

hutan timur Paraguay pada tahun 1887. Nama Rebaudiana berasal dari kimiawan

Paraguay bernama Rebaudi yang pertama kali melakukan ekstraksi daun stevia

(Donna G., 2000). Stevia Rebaudiana lebih dikenal dengan nama honey leaf plant, sweet

chrysanthemum, sweetleaf stevia, sugarleaf, atau kaa-he-e (nama lokal di Amerika

Selatan). Daun Stevia memiliki bentuk seperti kemangi, bergerigi, berukuran kecil dan

berwarna hijau yang termasuk dalam keluarga aster atau chrysanthemum, serta

bertumpuk-tumpuk dalam satu batang, berbiji dan bertunas. Tanaman stevia memiliki

batang yang lemah dan semi kayu, serta memiliki cabang-cabang. Bunga stevia

berwarna putih, berukuran kecil, dan tumbuh di bagian paling atas. Gambar tanaman

stevia disajikan dalam Gambar 2.2:

Gambar 2.2 Stevia rebaudiana (Anonim, 2006)

Stevia memiliki sifat pemanis alami dan tingkat kemanisannya 300 kali

dibandingkan dengan gula tebu. Stevia tumbuh terutama di Gunung Amambay,

Lembah Rio Monday, Paraguay, Amerika Selatan. Stevia telah dibudidayakan di Asia

Timur (China, Korea, Taiwan, Thailand, Malaysia), Amerika Selatan (Brazil,

Kolombia, Peru, Paraguay, Uruguay), dan Israel (Anonim, 2008). Stevia pertama kali

dikenal di Indonesia pada tahun 1977 dan telah dibudidayakan di Tawangmangu,

Sukabumi, Garut, dan Bengkulu. Menurut EFSA (2010), batas konsumsi atau

acceptable daily intake (ADI) untuk pemanis stevia yaitu 4 mg/kg body weight/day.

Stevia memiliki beberapa sifat yaitu:

a. Memiliki kadar kemanisan 300 kali dari sukrosa

b. Stabil pada suhu tinggi (100 0C) , larutan asam maupun basa (range pH 3-9), dan

cahaya

c. Tidak menimbulkan warna gelap pada waktu pemasakan

d. Larut dalam air

e. Tidak larut dalam alkohol murni, kloroform, atau eter

f. Tahan pada pemanasan hingga 200 0C

Tabel 2.3 Taksonomi stevia rebaudiana (USDA, 2008)

Kingdom Plantae

Sub kingdom Tracheobionta

Super divisi Spermatophyta

Divisi Magnoliophyta

Kelas Magnoliopsida

Sub kelas Asteridae

Ordo Asterales

Famili Asteraceae

Genus Stevia Cav.

Spesies Rebaudiana

Di dalam daun stevia terdiri dari berbagai macam glikosida, seperti disajikan

pada

Tabel 2.4. Namun glikosida yang paling banyak dan memberikan rasa manis yaitu

steviosida

dan rebaudiosida A. Stevia tidak hanya mengandung glikosida, namun juga beberapa

senyawa lainnya yaitu seperti disajikan dalam Tabel 2.5 berikut:

Selain mengandung beberapa komponen seperti disajikan dalam Tabel 2.5, daun

stevia juga mengandung beberapa senyawa seperti apigenin, austroinulin, avicularin,

betasitosterol, caffeic acid, kampesterol, kariofilen, sentaureidin, asam klorogenik,

klorofil, kosmosiin, sinarosid, daukosterol, glikosida diterpene, dulkosid A-B, funikulin,

formic acid, gibberellic acid, giberelin, indol-3-asetonitril, isokuersitrin, isosteviol, jihanol,

kaempferol, kaurene, lupeol, luteolin, polistakosid, kuersetin, kuersitrin, skopoletin,

sterebin A-H, steviol, steviolbiosid, steviolmonosida, steviosid a-3, stigmasterol,

umbelliferon, dan santofil (Tropical Plant Database, 2013).

Tanaman stevia dapat tumbuh di dataran dengan ketinggian 500 – 1000 meter di

atas permukaan laut. Kondisi optimum untuk pertumbuhan tanaman ini yaitu pada

suhu 14 – 27 0C

dan pH antara 6,5 – 7,5. Beberapa cara pembudidayaan stevia yaitu dengan

mengecambahkan

biji stevia, stek batang, maupun dengan kultur jaringan. Tanaman stevia dapat

mencapai ketinggian sebesar 45 cm dan lebar 46 – 61 cm selama tiga bulan. Pemanenan

pertama dapat dilakukan setelah 4 – 5 bulan sejak pertama kali ditanam, kemudian

pemanenan selanjutkan dapat dilakukan selama tiga bulan. Jarak antar kolom

tanaman stevia yaitu 51 – 61 cm dan 46 cm untuk setiap tanaman. Tanaman stevia

sensitif terhadap dingin dan kandungan air yang berlebihan, serta bertumbuh secara

lebih baik dengan penambahan pupuk dengan kadar nitrogen yang rendah daripada

asam fosfat atau kalium yang tinggi.

Stevia memiliki beberapa manfaat bagi kesehatan maupun keunggulan

dibandingkan

dengan pemanis lainnya, yaitu (Donna G., 2000):

a. Beberapa glikosida dalam stevia mampu memperlebar pembuluh darah,

meningkatkan

ekskresi natrium dan urin, sehingga pada dosis tertentu mampu menurunkan tekanan

darah (hipotensif).

b. Stevioside dalam stevia adalah senyawa glikosida non-karbohidrat. Senyawa ini tidak

dimiliki oleh sukrosa. Stevia juga memiliki beberapa sifat yang berbeda dengan

sukrosa,

yaitu umur penyimpanan yang panjang, stabil terhadap suhu tinggi, non-fermentasi,

tetapi

mengandung kalori mendekati nol.

c. Stevia memiliki nilai kalori yang sangat rendah.

d. Stevia mampu menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans dalam mulut

karena kadar karbohidrat yang rendah. Streptococcus mutans memfermentasi gula

menjadi

asam. Selanjutnya asam ini akan menempel pada gigi dan menyebabkan karies dan gigi

berlubang. Oleh karena itu, stevia tidak menyebabkan terjadinya karies dan gigi

berlubang.

e. Stevia adalah tumbuhan herbal yang mengandung vitamin penting yang tidak

dimiliki

oleh pemanis sintesis.

f. Stevia mengandung beberapa sterol dan antioksidan seperti triterpenes,

flavonoids,dan

tannins.

g. Chlorgenic acid dalam stevia dapat mengurangi perubahan glikogen menjadi glukosa

sehingga dapat mengurangi penyerapan glukosa dalam usus. Hal ini berarti stevia

dapat

mengurangi kadar gula dalam darah.

h. Membantu memperbaiki pencernaan dan meredakan sakit perut.

i. Steviosida tidak memiliki efek mutagen, teratogenik, maupun karsinogenik.

Glikosida merupakan suatu molekul yang terdiri dari gula (glikon) yang terikat

dengan molekul non gula (aglikon atau genin). Keduanya dihubungkan oleh ikatan

glikosidik berupa jembatan oksigen ( O-glikosida, dioscin), jembatan nitrogen (N-

glikosida, adenosine), jembatan sulfur (S-glioksida, sinigrin), maupun jembatan karbon

(C-glikosida, barbaloin). Glikosida yang mengandung ikatan glikosidik nitrogen sering

dinamakan glycosylamines. Glikon dapat mengandung satu monomer (monosakarida)

atau beberapa monomer (oligosaksrida). Struktur O-glikosida dapat disajikan pada

Gambar 2.3 berikut:

Gambar 2.3 Struktur O-glikosida (Sheila N. A., 2013)

Gula yang sering terdapat dalam glikosida yaitu D-glukosa. Namun ada

beberapa jenis gula lainnya yang terdapat dalam glikosida yaitu ramnosa, digitoksosa,

fruktosa, arabinosa, xylosa, atau simarosa. Penamaan komponen glikon yaitu dengan

cara mengganti akhiran –sa menjadi –sida. Apabila kelompok glikon berupa glukosa,

maka dinamakan glukosida. Apabila kelompok glikon berupa fruktosa, maka

dinamakan fruktosida. Bagian aglikon atau genin terdiri dari berbagai macam senyawa

organik seperti triterpena, steroid, antrasena, ataupun senyawa-senyawa yang

mengandung gugus fenol, alkohol, aldehid, keton, dan ester (Sheila N. A., 2013 ;

Anonim, 2012).

Steviosida merupakan salah satu glikosida utama dalam daun stevia yang

memiliki rasa manis 250-300 kali dari sukrosa dan memiliki nama lain yaitu (4α)-13-

[(2-O-β-DGlucopyranosyl-

β-D-glucopyranosyl)oxy]kaur-16-en-18-oicacid β-D-glucopyranosyl ester (Sigma

Aldhrich, 2013). Kandungan steviosida dalam daun stevia kering yaitu 5 – 22 %-berat

dan pada bunga stevia yaitu 0,9 %-berat. Steviosida mempunyai nilai kalori yang

rendah, sehingga cocok untuk dikonsumsi oleh orang yang mengidap penyakit diabetes

mellitus dan bagi yang sedang melakukan diet. Steviosida tidak bersifat racun, sehingga

aman untuk dikonsumsi oleh manusia. Steviosida mempunyai rumus empiris

C38H60O18 dan berat molekul 804,90 g/mol. Apabila diurai sempurna stevioside

mengandung 56,90 % C, 7,51 % H, dan 35,78 % O. Senyawa Steviosida¨memiliki titik

lebur 198 oC, berbentuk kristal amorf dan hidroskopis, larut dalam air, dioxan, dan

metanol, dan sedikit larut dalam alkohol (Luqman B., 2007) . Struktur kimia steviosida

disajikan dalam Gambar 2.4:

Steviosida dalam tubuh bekerja dengan cara meningkatkan produksi hormon

insulin dan sensitivitasnya. Peningkatan hormon insulin dalam plasma darah. Senyawa

ini juga menghambat penyerapan glukosa pada usus dan pembentukan glukosa pada

hati dengan mengubah aktivitas sejumlah enzim yang berperan dalam sintesa glukosa,

sehingga kadar glukosa dalam (Chatsudthipong, 2009).

Rebaudiosida A merupakan salah satu glikosida dalam daun stevia yang

mempunyairasa pahit dengan tingkat terendah dibandingkan dengan glikosida lainnya.

Rebaudiosida mempunyai sifat yang lebih stabil dan rasa yang lebih manis daripada

steviosida karena memiliki kandungan glukosa yang l C44H70O23, berat molekul

glucopyranosyl-3-O-β-Dglucopyranosyl glucopyranosyl ester (Sigma Aldhrich, 2013)

Gambar 2.5 berikut:

Pada proses pencernaan, rebaudiosida dimetabolisme menjadi steviosida,

kemudian steviosida dipecah menjadi glukosa dan steviol. Glukosa tersebut digunakan

oleh bakteri dalam usus besar dan tidak diserap dalam darah. Steviol tidak dicerna dan

dikeluarkan melalui urin dalam bentuk steviol glucuronide (Anonim, 2008). Proses

perubahan rebaudiosida dalam usus besar manusia disajikan dalam Gambar 2.6

berikut: Gambar 2.6 Proses penguraian steviol glikosida dalam usus besar manusia

Pembentukan akar merupakan tahapan penting dalam perbanyakan bibit

secara in vitro. Inisiasi perakaran tanaman dalam model ini dapat dipacu dengan

menambahkan Zat Pengatur Tumbuh (ZPT) pada media tanam. ZPT yang umum

digunakan untuk pendorong perakaran adalah golongan auksin, yaitu Indole-3-Acetic

Acid (IAA), Naphtalene Acetic Acid (NAA), dan Indole-3-Butyric Acid (IBA).

Pemilihan jenis auksin untuk memacu pertumbuhan akar didasarkan pada: sifat

translokasi, persistensi (tidak mudah terurai), dan laju aktivitas. IBA merupakan jenis

auksin yang paling sering digunakan dalam menginduksi akar diban-dingkan jenis

auksin lainnya, karena kemampuan yang tinggi dalam menginisiasi perakaran

(Wattimena, 1992). Selain IBA, NAA juga kerapkali digunakan karena mempunyai

sifat translokasi yang lambat dan persistensi yang tinggi.

Tanaman Stevia (Stevia rebaudiana) memiliki berbagai keunggulan namun

mengalami keterbatasan dalam perbanyakan bibit. Jenis ini mengandung senyawa

steviosida dengan tingkat kemanisan 300-400 kali dibandingkan gula tebu sukrosa

(Geuns, 2003; Megeji et al., 2005; Mousumi, 2008). Gula stevia bersifat nonkar-

sinogenik dan rendah kalori, sehingga cocok untuk penderita diabetes dan obesitas.

Stevia juga dapat dimanfaatkan sebagai pencegah timbulnya plak gigi dan

menurunkan akumulasinya sebesar 57,82% (De Slavutzky dan Blauth, 2010).

Saat ini stevia telah banyak digunakan dalam campuran makanan dan minuman

di negara Amerika Selatan, Jepang, Cina dan Korea Selatan serta negara-negara lain di

Asia. Di Indonesia sendiri penggunaan stevia masih terbatas pada industri jamu dalam

negeri dan memenuhi permintaan pasar luar negeri dimana satu produsen dapat

memasok 50-70 t daun stevia kering per bulan dengan harga jual sekitar Rp 23.000,-

sampai Rp 24.000,- per kg (http://www. ciputraenterpreneurship).

Perbanyakan stevia secara konvensional umumnya dilakukan dengan biji atau

setek. Perbanyakan menggunakan biji kurang efektif karena rendahnya

perkecambahan dan kese-ragaman (Goettemoeller dan Ching, 1999). Perba-nyakan

stevia melalui setek menghasilkan benih yang seragam tetapi jumlahnya terbatas.

Perbanyakan menggunakan teknik kultur jaringan merupakan metode yang dapat

digunakan untuk menghasilkan benih seragam secara massal dan cepat.

Multiplikasi tanaman stevia telah dilakukan dalam berbagai penelitian,

diantaranya perbanya-kan stevia menggunakan sumber eksplan pucuk dengan media

Lismainer dan Skoog (Gunawan, 1992), sementara Pratiwi (1995) telah memperoleh 10

tunas baru dalam waktu 50 hari pada perbanyakan stevia dengan menggunakan teknik

kultur jaringan. Kristina dan Syahid (2010) telah melakukan perbanyakan dan

penyimpanan Stevia dengan menggunakan media Murashige dan Skoog (MS) dan

penambahan Benzyl Amino Purine (BAP) 0,1 mg l-1 yang menghasilkan sekitar 20

tunas per botol. Keberhasilan tersebut tentunya perlu didukung dengan optimalisasi

perakaran untuk meningkatkan keberhasilan aklimatisasi. Gunawan (1992) telah

melakukan inisiasi perakaran stevia dengan cara menginduksi stevia yang telah

dikulturkan selama 30 hari pada media Linsmainer dan Skoog yang ditambahkan

dengan 0,1 mg l-1 NAA. Namun belum dilakukan studi lebih lanjut dengan

menggunakan jenis auksin lain pada berbagai konsentrasi untuk mendapatkan inisiasi

perakaran yang optimum sabagai protokol perbanyakan bibit secara in vitro. Penelitian

ini dilakukan untuk mengukur respon stevia terhadap zat pengatur tumbuh induksi

perakaran (IAA, IBA dan NAA) dan tahap aklimatisasi. Diharapkan melalui penelitian

ini akan diperoleh informasi jenis auksin dan konsentrasi yang optimal untuk

mendukung perbanyakan bibit stevia secara in vitro.

Masyarakat Indonesia sehari-harinya kebanyakan mengonsumsi gula hablur

dari tebu sebagai zat karbohidrat untuk tubuh yang diproses menjadi energi dan dari

non tebu masih rendah (Gondosari, 2010). Mulai tahun 2010, diperkirakan kebutuhan

gula nasional mencapai 3–4,9 juta ton, sedangkan produksi gula dalam negeri hanya

mampu 2,1–2,7 juta ton (memenuhi 60% kebutuhan), sehingga sekitar 2,2 juta ton

masih impor melalui kebijakan pemerintah (Agustiar, 2010; Triyatna, 2012).

Pemenuhan kebutuhan gula selain impor juga melalui upaya swasembada gula dengan

bentuk revitalisasi sektor on-farm berupa perluasan areal dan peningkatan

produktivitas gula, dan revitalisasi sektor off-farm salah satunya berupa pemberdayaan

penelitian dan pengembangan gula (Direktorat Jenderal Perkebunan Kementerian

Pertanian, 2010).

Selain dilakukan produksi gula melalui tebu sebagai tanaman penghasil gula

terbesar di Indonesia, maka diperlukan studi potensi produksi gula yang dilakukan

dari tanaman yang tergolong non tebu yaitu melalui tanaman Stevia (Stevia rebaudiana

Bertoni M.) yang merupakan alternatif pengganti tebu dalam menghasilkan gula

(pemanis). Ilyas (2003) dan Rukmana (2007) menjelaskan bahwa Stevia sebagai sumber

pemanis alami non tebu ternyata memiliki keunggulan dibandingkan dengan tebu

dengan rasa yang lebih manis dibandingkan tebu karena mengandung senyawa

glikosida diterpen dengan tingkat kemanisan mampu mencapai 200–300 kali gula tebu,

tetapi gula stevia kalorinya lebih rendah dibandingkan gula tebu, serta bersifat non-

karsinogenik.

Pengembangan dan pelestarian bahan baku gula di Kalimantan Tengah dan

Kota Palangka Raya dapat dilakukan menggunakan stevia dan cukup bagus

pertumbuhannya pada media tanah gambut meskipun diperlukan upaya perbaikan

media tanam gambut dan pengaturan cahaya dan suhu untuk memperlambat umur

panen dan meningkatkan potensi hasil (Susilo, 2012). Sementara itu, Provinsi

Kalimantan Tengah merupakan salah satu wilayah yang potensial untuk

dikembangkan sebagai lahan budidaya, khususnya Kota Palangka Raya yang memiliki

sebaran tanah gambut mencapai 141.088 ha meskipun memiliki kendala berupa

kesuburan yang rendah (BPS, 2010) tetapi cukup potensial sebagai alternatif

pengembangan stevia dengan memperhatikan pengelolaan iklim mikro dan kesuburan

tanah media tanamnya.

Selain itu, karena Palangka Raya memiliki rata-rata hari hujan, curah hujan

dan suhu yang relatif tinggi serta kecepatan angin mencapai 5,4 km jam-1 (BPS, 2010),

sehingga untuk mendapat pertumbuhan yang baik dapat dilakukan penaungan

menggunakan agronet sebagai pengaturan cahaya yang menggambarkan kesesuaian

kebutuhan tanaman serta diharapkan mendukung reaksi dan dekomposisi media

tanam, memberikan efek perbaikan iklim mikro berupa mengurangi suhu udara dan

meningkatkan kelembapan udara di sekitar tanaman, menghindari kekeringan media

tanam, dan mempertahankan kelembapan media tanam (Ashari, 1995; Maghfoer dan

Koesriharti, 1998; Widiastoety et al., 2004). Upaya perbaikan sifat-sifat tanah gambut

sebagai media tanam melalui penambahan pupuk kotoran ayam juga dapat dilakukan

untuk memperbaiki sifat-sifat tanah dalam menunjang pertumbuhan dan hasil

tanaman (Atikah, 2004).

Tanaman stevia ditemukan oleh Bertoni sebagai tumbuhan yang daunnya

berasa manis di daerah Paraguay pada tahun 1899. Oleh penduduk Paraguay mula-

mula daun stevia digunakan sebagai pemanis minuman dengan jalan mengeringkan

daunnya. Sebagai pemanis alami daun stevia dinilai aman dan layak digunakan dalam

makanan (Irawadi,1986). Stevia rebaudiana adalah salah satu species famili Compositae

(Atmoko, 2001). Tanaman ini dapat tumbuh baik pada daerah yang berhawa sejuk,

dengan ketinggian 500-1500 m dpl. Tanaman stevia merupakan herba tahunan yang

berbentuk perdu basah dan bercabang banyak dengan tinggi tanaman antara 60

sampai 90 cm. Bentuk daunnya sederhana, lonjong dan langsing, pinggiran daun

bergerigi halus.

Gambar 6. Tanaman stevia (Stevia rebaudiana)

Pemanis stevia bermanfaat sebagai campuran dalam minuman dengan

keasaman rendah, gula-gula, es krim, orange juice, dan minuman berkarbonat. Produk

stevia digunakan terutama untuk makanan berkalori rendah bagi penderita diabetes,

orang yang kegemukan dan penderita gigi berlubang. Pada umumnya produk stevia

dapat mengurangi atau menggantikan 10 sampai 30 persen gula (Muhammad, 1983).

Salah satu produk industri hasil perkebunan yang dibutuhkan oleh masyarakat

adalah gula. Masyarakat di Indonesia umumnya hanya mengenal tebu dan aren sebagai

tanaman penghasil gula, padahal ada tanaman lain yang dimanfaatkan sebagai pemanis

yakni stevia. Tanaman ini memang lebih populer di wilayah asalnya, Amerika Selatan,

dan juga di Asia Timur seperti Jepang, China dan Korea Selatan.

Stevia baik bila dijadikan pengganti gula bagi penderita diabetes dan obesitas.

Daun stevia mampu menjadi bahan pemanis yang bisa menghasilkan rasa manis hingga

400 kali lipat dibandingkan dengan manis yang dihasilkan gula tebu. Penelitian ilmiah

mengindikasikan bahwa stevia efektif meregulasi gula darah dan dapat menormalkan

gula darah. Daun stevia menghambat pertumbuhan bakteri dan organisme yang

menyebabkan infeksi, termasuk bakteri yang menyebabkan gangguan gigi dan

penyakit gusi. Selain itu, stevia menghasilkan rasa manis yang unik tidak seperti

pemanis kebanyakan yang menimbulkan rasa pahit pada akhirnya. Air daun stevia

dapat pula digunakan untuk perawatan kulit (Cahyono, 2011).

Stevia (Stevia rebaudiana) merupakan salah satu jenis tanaman obat di

Indonesia yang memiliki keunikan berupa rasa manis pada daunnya. Komponen utama

yang memberikan rasa manis dan terkandung paling banyak pada daun stevia adalah

steviosida (Daneshyar dkk., 2010), yang diperkirakan 300 kali lebih manis dari sukrosa

(Geuns, 2008). Bahan pemanis ini telah digunakan di banyak negara sebagai pemanis

alami non-kalori, sehingga dapat direkomendasikan untuk penderita diabetes mellitus

tipe 2 dan penderita obesitas (Jagatheeswari dan Ranganathan, 2012). Penggunaannya

juga telah diuji dan tidak memberikan efek samping (Megaji dkk., 2005 dalam Sairkar

dkk., 2009).

Potensi yang dimiliki oleh stevia menjadi perhatian banyak orang sehingga

banyak pula keinginan untuk mengembangkan tanaman ini. Kemampuan biji stevia

untuk berkecambah sangatlah rendah dan propagasi secara vegetatif juga terbatas

dilakukan karena rendahnya jumlah individu yang dapat diperoleh dari satu tanaman

induk (Saikar dkk., 2009 ; Janarthanam dkk., 2010). Oleh karena itu, kultur in vitro

dapat menjadi alternatif dan sebagai sumber yang efisien untuk produksi metabolit

sekunder (Janarthanam dkk., 2010). Kemampuan ZPT 2,4-D 1 mg/l yang digunakan

untuk menginduki kalus dari eksplan daun stevia dapat diketahui tingkat

keberhasilannya dengan pengamatan presentase pertumbuhan kalus. Jumlah eksplan

yang terinduksi diamati selama tiga minggu dan diperoleh persentase induksi kalus

diperoleh sebesar 70,2 %. Eksplan diinduksi menggunakan hormon 2,4-D 1 mg/l

karena menurut Machakova dkk. (2008), auksin yang paling umum digunakan untuk

menginduksi kalus adalah 2,4-D. Penelitian Babu dkk. (2011) juga menunjukkan bahwa

kalus dari eksplan daun stevia yang tumbuh dari medium MS dengan 2,4-D 1 mg/l

mampu menunjukkan kemampuan induksi kalus yang lebih baik dengan respon

induksi 75 ± 5 % (Janarthanam dkk., 2010).

Menurut Payghamzadeh dan Kazemitabar (2010), BAP dan IBA memiliki efek

yang sinergis dalam pembentukan kalus dan berat basah kalus. Hal serupa juga

diungkapan oleh Mohajer dkk. (2012) dalam penelitiannya yang menggunakan

kombinasi NAA, BAP dan IBA pada medium MS dan diperoleh kombinasi 2 mg/l BAP

dan 1 mg/l IBA memberikan berat basah kalus tertinggi dari eksplan daun Sainfoin

(Onobrychis sativa). Hasil pengamatan tekstur kalus pada semua perlakuan yaitu, kalus

memiliki tekstur kompak dengan warna yang mendominasi adalah warna putih

kekuningan (Gambar 2). Menurut Lizawati (2012), warna putih atau kekuningan

menunjukkan ciri kalus yang embrionik. Selain genotipe eksplan dan ZPT endogen,

perkembangan dan tekstur kalus juga dipengaruhi oleh jenis dan konsentrasi ZPT,

komposisi nutrien medium dan kondisi lingkungan kultur.

Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni) merupakan tanaman perdu famili

Compositae yang berasal dari Paraguay. Daun stevia menghasilkan rasa manis yang

disebabkan oleh adanya glikosida dengan tingkat kemanisan 200 – 300 kali lebih tinggi

dibandingkan gula tebu atau sukrosa (Geuns, 2003; Megeji et al., 2005; Mogra &

Dashora, 2009). Glikosida dalam daun stevia terdiri dari steviosida, beberapa

rebaudiosida termasuk rebaudiosida A (reb-A), dulkosida, dan beberapa senyawa

lainnya (Kennelly, 2002; Geuns, 2003). Glikosida tidak mengandung kalori dan

mempunyai indeks glikemat hampir nol sehingga sesuai untuk penderita diabetes dan

seseorang yang sedang melakukan diet makanan untuk menurunkan berat badan

(Jeppesen et al., 2002; Gregersen et al., 2004). Stevia digunakan pada minuman ringan

rendah-kalori, bahan makanan, pasta gigi, bahan kosmetika, antioksidan,

antihipertensi, zat pengatur tumbuh, dan berbagai produk lain (Midmore & Rank,

2002).

Populasi tanaman dalam budidaya stevia sangat tinggi 60 ribu sampai 100 ribu

tanaman per ha dan diremajakan setiap dua atau tiga tahun. Oleh karena itu,

diperlukan bahan tanam dalam jumlah banyak dan berkesinambungan. Perbanyakan

stevia dengan biji kurang efektif karena rendahnya persentase perkecam-bahan biji

(Goettemoeller & Ching, 1999) dan terjadinya inkompatibilitas-sendiri yang

menyebabkan turunannya sangat beragam. Perbanyakan stevia paling umum adalah

dengan stek batang yang menghasilkan benih yang seragam tetapi jumlahnya terbatas.

Teknik kultur jaringan diperlukan untuk menghasilkan bibit unggul stevia klonal

secara massal dan cepat, terutama pada tahap awal pembibitan. Kultur jaringan stevia

dilakukan melalui multi-plikasi tunas, organogenesis dan embriogenesis somatik.

Prosedur multiplikasi tunas lebih sederhana dan kemungkinan terjadinya keragaman

somaklonal lebih rendah dibandingkan dengan organogenesis dan embriogenesis

somatik karena digunakan eksplan yang telah terdiferensiasi. Media MS (Murashige &

Skoog, 1962) pada umumnya digunakan sebagai medium baku untuk kultur in vitro

stevia.

Sebagai bahan eksplan bagi multiplikasi tunas adalah tunas pucuk dan tunas

samping. Untuk meningkatkan laju multiplikasi tunas stevia, pada umumnya

digunakan sitokinin atau kombinasi sitokinin dan auksin. Sivaram & Mukundan (2003)

menggunakan ujung tunas sebagai sumber eksplan dan mendapatkan 11,2 tunas per

eksplan pada perlakuan BA 2 mg/L + IAA 1 mg/L, sedangkan Anbazhagan et al. (2010)

mendapatkan rata-rata 16 tunas tiap eksplan pada medium MS dengan BA 1 mg/L +

IAA 0,5 mg/L. Rafiq et al. (2007) melaporkan bahwa BA 2 mg/L dapat menginduksi

tunas 78% dari eksplan dengan rata-rata 8 tunas per eksplan. Mencelupkan sebentar

tunas stevia dalam larutan BA 250 atau 500 mg/L sebelum dikultur pada medium MS

meningkatkan multiplikasi tunas 2 – 5 kali (Manjusha & Sathyanarayana, 2010).

Peningkatan konsentrasi BA dan kinetin dilaporkan meningkatkan laju multiplikasi

tunas stevia, namun planlet yang diperoleh kecil-kecil dan tidak vigor (Ibrahim et al.,

2008). Peningkatan keragaan planlet dapat dilakukan dengan merubah komposisi

medium dan faktor lingkungan in vitro. Penambahan senyawa penghambat aktivitas

giberelin seperti ansimidol dan paklobutrazol pada medium dapat menghambat

perpanjangan batang dan menghasilkan planlet yang dapat beradaptasi lebih baik di

lingkungan luar (Ziv, 1995). Sebagai contoh penggunaan ansimidol 3 mg/L

meningkatkan daya hidup planlet stevia saat aklimatisasi (Manjusha &

Sathyanarayana, 2010).

Salah satu faktor lingkungan in vitro yang berperan dalam pertumbuhan dan

keragaan planlet adalah intensitas cahaya (Chen, 2004; Huang & Chen, 2005).

Keragaan planlet yang baik berkorelasi positif dengan daya hidup dan

pertumbuhannya pada tahap aklimatisasi di lingkungan ex vitro (Hazarika, 2003). Hasil

penelitian ini memperlihatkan bahwa penambahan BA meningkatkan laju multiplikasi

tunas stevia, namun diperlukan juga penambahan IAA untuk memperoleh tingkat

multiplikasi tertinggi. Nampaknya perlu adanya perimbangan antara sitokinin (BA)

dan auksin (IAA) untuk meningkatkan laju multiplikasi tunas stevia, seperti yang

dilaporkan juga oleh Sivaram & Mukundan (2003) yang mendapatkan rata-rata 11,2

tunas tiap eksplan dengan BA 2 mg/L dan IAA 1 mg/L serta oleh Anbazhagan et al.

(2010) yang mendapatkan rata-rata 16 tunas tiap eksplan pada medium MS dengan BA

1 mg/L dan IAA 0,5 mg/L. Kedua hasil penelitian tersebut menunjukkan laju

multiplikasi tunas setara atau lebih tinggi dari hasil yang diperoleh pada penelitian ini,

namun planlet yang dihasilkan kecil, pendek dan tidak vigor sehingga tidak mampu

tumbuh dengan baik ketika disubkultur. BA banyak digunakan untuk meningkatkan

jumlah tunas stevia (Rafiq et al., 2007; Ibrahim et al., 2008; Sairkar et al., 2009). BA

lebih baik dibandingkan jenis sitokinin lain yaitu kinetin dalam pembentukan tunas

stevia (Anbazhagan et al., 2010). Namun, pembentukan tunas yang banyak tidak

diimbangi dengan keragaan tunas yang baik yakni tunas menjadi kecil, pendek dan

tidak vigor sehingga tidak mampu hidup ketika ditransfer ke medium baru (Ibrahim et

al., 2008; Sairkar et al., 2009).

Indonesia memproduksi gula sekitar 2,3 juta ton per tahun dan jumlah ini hanya

dapat memenuhi 40% kebutuhan gula nasional (Didik 2013), sisanya dipenuhi dari

impor gula maupun dengan menggunakan bahan pemanis lainnya. Bahan pemanis

alami memiliki nilai kalori tinggi dan mudah dicerna tubuh, contohnya yaitu gula dari

aren, bit, madu, dan kelapa. Bahan pemanis sintesis yang banyak dikonsumsi

masyarakat yaitu saccharine, aspartame, siklamat, sorbitol, xylitol, sucralose, dan

acesulfame-K (Luqman 2007). Bahan pemanis sintesis memiliki nilai kalori rendah dan

sulit dicerna tubuh. Pemanis non-nutritif alami antara lain: thaumantin, monellin,

miraculin, brazzein, stevioside, glycyrrhizinic acid, mogroside, dan dihydrochalcones

(Chattopadhya 2007).

Pemanis Stevia berasal dari tumbuhan dan diperoleh melalui ekstraksi daun

Stevia Rebaudiana Bertoni, sehingga penggunaanya lebih aman. Keunggulan Stevia

yaitu tidak menyebabkan kanker (non karsinogenik), karies gigi, dapat mencegah

obesitas, menurunkan tekanan darah tinggi, dan kandungan kalori yang rendah

dengan tingkat kemanisan yang jauh lebih tinggi daripada gula tebu yaitu 200-300 kali

lebih manis (Raini 2011). Di dalam daun Stevia terdapat bermacammacam glikosida.

Namun glikosida yang paling dominan dan memberikan rasa manis yaitu steviosida

atau (4α)-13- [(2-O-β-D-Glucopyranosyl-β-D-glucopyranosyl)oxy]kaur- 16-en-18-oicacid

β-D-glucopyranosyl ester (Sigma 2013) dan rebaudioksida-A atau (4α)-13-[(2-O-β-

Dglucopyranosyl- 3-O-β-Dglucopyranosyl-β-Dglucopyranosyl)- oxy]kaur-6-en-8-oic acid

β-Dglucopyranosyl ester (Sigma 2013).

Keunggulan lain yaitu pembudidayaan Stevia yang mudah (dengan masa

pertumbuhannya sekitar tiga hingga empat bulan hingga masa panen), serta

mengandung vitamin, protein, kalsium, dan kandungan lainnya yang bermanfaat bagi

tubuh. Daun Stevia adalah tanaman asli dari Paraguay sehingga perlu diperhatikan

kesediaan bahan baku dari Stevia itu sendiri. Dalam penelitian ini juga diperhatikan

cara penanaman dan pemeliharaan pohon Stevia, serta cara panen yang benar,

sehingga pada akhirnya daun Stevia ini dapat tumbuh dan dikembangbiakan di

Indonesia (khususnya di Bandung yang memiliki suhu udara dan kelembaban yang

sesuai dengan sifat dari daun Stevia itu sendiri).