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Identificación y medición de la Identificación y medición de la respuesta inmunerespuesta inmune
PRUEBAS SECUNDARIAS
§ SOLUBLE
§ PARTICULADO
§ SUPERFICIE + COMPLEMENTO
PRECIPITACIÓN
AGLUTINACIÓN
FIJACIÓN DE COMPLEMENTO
La prueba a realizar depende de las
características del Ag
Comparación precipitación - aglutinación
Antígeno SOLUBLE
Antígeno PARTICULADO
Y
YYY
Y
YFormación de “retículo” “Amontonamiento”
Y
YY Y
PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN
Anticuerpo
PRECIPITACIÓN
Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en
contacto con su anticuerpo específico, forma
complejos inmunes que al encontrarse en
proporciones óptimas se insolubilizan dando una
reacción de precipitación
Ag/mg
Precipitación
Y YY YY
Y
Y
Y Y
Y Y
Y
Exceso de ACProporciones
óptimas
Exceso de Ag
YYAC ESPECÍFICO
Ag SOLUBLE
MEDIO
PROPORCIÓN
Y
Y Y
Y
YY Y
Y
Y
Y Y
Y
YY Y
Y
RETÍCULO SOLUBLE
MEDIO
LÍQUIDO SÓLIDO
• DIFUSIÓN DOBLE
• INMUNOELECTROFORESIS (IEF)
• INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR)
• CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)
Test de Ascoli - Valente
CARBUNCLO
DIFUSIÓN DOBLE
Fundamento: empleando el medio adecuado (agar
gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag
como Ac (difusión “doble”), de modo que al
encontrarse en proporciones óptimas,
interaccionen, produciendo una banda de
precipitado visible
Inmunodifusión en Gel de Agar
Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE
Test de Coggins para AIE
Placa de Petri
1. Agar gel 126
75
43
2.Sacabocados
3. Suero problema
1 3 54. Suero testigo (+) (reactivo)
2 4 6 5. Antígeno específico (reactivo)
7
126
75
43
267
4
267
4
6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN
A
C B
A. NEGATIVO
B. POSITIVO
C. Débilmente POSITIVO
D. NEGATIVO
E. Fuertemente POSITIVO
F. POSITIVO
G. POSITIVO
H. Banda INESPECÍFICA
I. Banda INESPECÍFICA
267
4D
F E
G
I H
APLICACIONES EN VETERINARIA
§ ANEMIA INFECCIOSA EQUINA
§ PIROPLASMOSIS EQUINA
§ LEUCOSIS BOVINA
§ BRUCELOSIS OVINA
§ BRUCELOSIS CANINA
AGLUTINACIÓN
Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo:
bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su
anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une
por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión
agruma, produciendo una reacción de aglutinación.
Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con
respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de
tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión
de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de
dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la
aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de
sueros muy positivos.
FENÓMENO DE ZONA O PROZONA
AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN PASIVA
COAGLUTINACIÓN
HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.
AGLUTI
NACI
ÓN
Antígeno particulado (reactivo)
+YYYY Y
Suero problema
Proporción
Medio
YY
Y
YYAGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN
En PLACA En TUBO
BrucellaSalmonella Micoplasma
BPA
Brucella
SAT+2-ME PAL
Aglutinación en placa: BPA
1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo)
Aglutinoscopio + placa de vidrio
Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado
3. Mezclar
8 MINUTOS
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Con GRUMOS Sin GRUMOS
AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa
Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME
SAT (Seroaglutinación en Tubo)
Ig M Ig G
2- ME (2- Mercaptoetanol)
Se realizan en simultáneo
En TUBO: SAT + 2- ME
SUERO BPA (+)
1. Suero problema
Título
SAT
2-ME
37ºC-48 hs
2. Solución fisiológica fenicada (SFF)
2. Solución 2-ME
3. Antígeno
60 MINUTOS
1/25 1/50 1/100 1/200
LECTURA e INTERPRETACIÓN
37ºC-48 hs
POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA
Aglutinación en tubo: PAL
PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE
Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra
un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno
particulado coloreado, ambos se unirán, formando un
complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y
asciende con la nata
1. Leche problema
2. Antígeno (reactivo)
37ºC-1 hora
LECTURA e INTERPRETACIÓN
+ ++ +++ ++++
PAL
APLICACIONES EN R. A.
BRUCELOSIS BOVINA
PAL - ELISA IVIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA
FC DEFINITORIA
SAT + 2-ME – FPA ELISA C
COMPLEMENTARIAS
BPA – ELISA ITAMIZ
Prueba
v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN
v IN VIVO PROTECCIÓN
PRUEBAS TERCIARIAS
NEUTRALIZACIÓN
Fundamento: estimación de la capacidad de una
anticuerpo de neutralizar la actividad biológica
de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro
PROTECCIÓN
Fundamento: forma de análisis de neutralización
que se realiza totalmente in vivo para determinar
la capacidad protectora de un anticuerpo
específico frente a su antígeno
RESPUESTA INMUNE CELULAR
v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T
v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B
v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS