PERBANDINGAN KADAR ALKALI FOSFATASE (ALP) SERUM …repository.setiabudi.ac.id/576/2/TUGAS AKHIR...
Transcript of PERBANDINGAN KADAR ALKALI FOSFATASE (ALP) SERUM …repository.setiabudi.ac.id/576/2/TUGAS AKHIR...
PERBANDINGAN KADAR ALKALI FOSFATASE (ALP)
SERUM SEBELUM DAN SESUDAH WAKTU TUNDA
4 DAN 8 HARI PADA SUHU KAMAR (20-25°C)
TUGAS AKHIR
Dibuat untuk Memenuhi Salah Satu Syarat dalam
Menyelesaikan Program Pendidikan Sebagai
Sarjana Sains Terapan
Oleh :
Retno Susilaningsih
09160553N
PROGRAM STUDI D-IV ANALIS KESEHATAN
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS SETIA BUDI
SURAKARTA
2017
ii
iii
iv
v
MOTTO DAN PERSEMBAHAN
“ Maka sesungguhnya bersama kesulitan itu ada kemudahan.
Sesungguhnya bersama kesulitan itu ada kemudahan”
(Q.S. Al Insyirah : 5-6)
“ Allah tidak membebani seseorang itu melainkan sesuai dengan
kesanggupannya”
(Q.S. Al Baqarah : 286)
Persembahan ini untuk :
Ibu, Bapak, Mertua
terimakasih atas do’a, nasehat dan
kasih sayangnya.
Suamiku tercinta Bagus A.P atas
do’a dan dukungannya.
Anak-anakku yang lucu-lucu (mba’
Khanza dan dede’ Shanum kalian
telah memberi kebahagiaan pada
Ayah dan Bunda).
Serta semua keluarga besar yang
selalu memberi dukungan dan kasih
sayangnya.
Untuk rekan-rekan semoga tetap
kompak selalu walaupun kita sudah
tidak bersama.
vi
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur saya panjatkan kepada Allah SWT yang telah
melimpahkan rahmat dan karunia-Nya kepada penulis sehingga penulis dapat
menyelesaikan Tugas Akhir yang berjudul “PERBANDINGAN KADAR
ALKALI FOSFATASE (ALP) SERUM SEBELUM DAN SESUDAH WAKTU
TUNDA 4 DAN 8 HARI PADA SUHU KAMAR (20-25°C)” dengan sebaik
mungkin, serta bisa menyelesaikan dengan tepat waktu. Tugas akhir ini disusun
sebagai salah satu syarat dalam menyelesaikan program pendidikan D-IV Analis
Kesehatan di Universitas Setia Budi Surakarta.
Tugas akhir ini dapat terselesaikan dengan baik, tidak lepas dari bantuan
berbagai pihak, sehingga penulis mengucapkan terima kasih kepada yang
terhormat :
1. Dr. Ir. Djoni Tarigan, MBA selaku Rektor Universitas Setia Budi Surakarta.
2. Prof. Dr. Marsetyawan HNE Soesatyo, M.Sc., Ph.D, selaku Dekan Fakultas
Ilmu Kesehatan Universitas Setia Budi Surakarta.
3. Tri Mulyowati, SKM., M.Sc, selaku Ketua Jurusan Program Studi D-IV
Analis Kesehatan Universitas Setia Budi di Surakarta.
4. dr. M. I. Diah Pramudianti., Sp.PK(K), M.Sc, selaku dosen Pembimbing
Utama Tugas akhir yang telah memberikan bimbingan dan pengarahan.
5. dr. Ratna Herawati, selaku dosen Pembimbing Pendamping Tugas akhir yang
telah memberikan bimbingan dan pengarahan.
vii
6. Bapak dan Ibu dosen serta asisten dosen Universitas Setia Budi yang telah
memberikan ilmu pengetahuan.
7. Pasien laboratorium Patologi Klinik RSUD. Dr. Moewardi di Surakarta atas
ketersediaannya menjadi bagian dari penelitian ini.
8. Bapak Pardi beserta staff laboratorium Kimia Klinik pada khususnya yang
telah membantu penulis dalam melakukan penelitian.
9. Tim penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji dan memberi
masukan untuk penyempurnaan karya tulis ini.
10. Bapak dan Ibu yang sudah mendukung dan mendo’akan untuk kesuksesan
dan keberhasilan demi meraih cita-cita.
11. Suamiku dan anak-anak tercinta atas dukungan, doa dan kesabarannya untuk
keberhasilan dalam menyelesaikan kuliah D4 Analis ini.
12. Teman-teman seperjuangan, terima kasih atas kebersamaan kita selama
kuliah ini. Semoga usaha kita membuahkan hasil yang baik untuk
kedepannya.
13. Semua pihak yang telah membantu atas pembuatan Tugas Akhir ini.
Penulis menyadari Tugas Akhir ini masih jauh dari kata sempurna, maka
dari itu penulis mengharapkan adanya saran dan kritik yang membangun dalam
penulisan ini. Harapan penulis semoga Tugas Akhir ini dapat bermanfaat dalam
bidang pendidikan maupun aplikasi dalam bidang kesehatan.
Surakarta, Juli 2017
Penulis
viii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL........................................................................................ i
LEMBAR PERSETUJUAN ............................................................................ ii
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. iii
LEMBAR PERNYATAAN ............................................................................. iv
MOTTO DAN PERSEMBAHAN ................................................................... v
KATA PENGANTAR ..................................................................................... vi
DAFTAR ISI .................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi
DAFTAR GRAFIK .......................................................................................... xii
DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. xiii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiv
INTISARI ........................................................................................................ xv
ABSTRACT ...................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN.............................................................................. 1
A. Latar Belakang .............................................................................. 1
B. Rumusan Masalah ......................................................................... 3
C. Tujuan Penelitian .......................................................................... 3
D. Manfaat Penelitian ........................................................................ 4
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA..................................................................... 5
A. Serum ............................................................................................ 5
1. Darah ........................................................................................ 5
2. Serum ....................................................................................... 6
ix
B. Alkali Fosfatase ............................................................................. 7
1. Definisi Alkali Fosfatase .......................................................... 7
2. Patofisiologi Alkali Fosfatase .................................................. 10
3. Faktor yang Mempengaruhi Hasil ALP ................................... 11
4. Metode Pemeriksaan ALP ....................................................... 12
5. Nilai Rujukan ALP................................................................... 14
C. Waktu Tunda Pemeriksaan Laboratorium .................................... 14
1. Pra Analitik Pemeriksaan ......................................................... 14
2. Waktu Tunda Pemeriksaan ....................................................... 17
D. Kerangka Pikir .............................................................................. 19
E. Hipotesis ........................................................................................ 20
BAB III.METODE PENELITIAN .................................................................. 21
A. Waktu dan Tempat Penelitian ....................................................... 21
B. Rancangan Penelitian .................................................................... 21
C. Populasi dan Sampel ..................................................................... 22
D. Variabel Penelitian ........................................................................ 24
E. Bahan dan Alat .............................................................................. 26
F. Prosedur Penelitian ........................................................................ 26
G. Kontrol Kualitas Internal ............................................................... 33
H. Teknik Analisis Data ..................................................................... 34
I. Etik Penelitian ............................................................................... 35
J. Jadwal penelitian ........................................................................... 36
BAB IV.HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ................................. 37
A. Hasil Penelitian ............................................................................. 37
1. Uji Kualitas Internal ................................................................. 37
2. Uji Normalitas .......................................................................... 39
3. Uji Karakteristik Subjek penelitian .......................................... 41
4. Uji Deskriptif Kadar ALP Serum ............................................. 42
5. Uji Statistik ............................................................................... 43
B. Pembahasan ................................................................................... 48
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN.......................................................... 55
A. Kesimpulan ................................................................................... 55
B. Saran .............................................................................................. 55
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 57
LAMPIRAN ..................................................................................................... 60
x
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Reaksi ALP .................................................................................... 7
Gambar 2. Struktur Protein ALP...................................................................... 8
Gambar 3. Struktur Gen ALP .......................................................................... 10
Gambar 4. Kerangka Pikir ............................................................................... 19
Gambar 5. Alur Penelitian ............................................................................... 25
Gambar 6. Interpretasi Box Plot Kadar ALP ................................................... 44
xi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Uji Presisi atau Ketelitian ................................................................. 38
Tabel 2. Uji Akurasi atau Ketepatan ............................................................... 39
Tabel 3. Uji Normalitas Saphiro Wilk ............................................................. 40
Tabel 4. Uji Normalitas Transformasi Data .................................................... 41
Tabel 5. Uji Karakteristik Subjek Penelitian .................................................. 42
Tabel 6. Hasil Pemeriksaan Kadar ALP Hari 0,4,8 ........................................ 42
Tabel 7. Perbedaan Kadar ALP Serum Hari 0,4,8 .......................................... 43
Tabel 8. Perbedaan Kadar ALP Serum Hari 0-4, 0-8, 4-8 .............................. 44
Tabel 9. Kadar ALP 0-ALP 4 Metode Bland Altman ..................................... 46
Tabel 10.Kadar ALP 0-ALP 8 Metode Bland Altman ..................................... 47
xii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Kadar Hb ............................................................................................ 15
Tabel 2. Nilai Range Kalibrasi 1...................................................................... 34
Tabel 3. Nilai Range Kalibrasi 2...................................................................... 37
Tabel 4. Jadwal Penelitian ................................................................................ 50
Tabel 5. Hasil Uji Presisi Metode AzidemetHb dan Cyanide-free ................... 51
Tabel 6. Hasil Uji Akurasi Metode AzidemetHb dan Cyanid-free ................... 52
Tabel 7. Karakteristik Subjek Penelitian .......................................................... 53
Tabel 8. Hasil Uji Normalitas Metode AzidemetHb (darah kapiler) dan Cyanide-
free (darah vena) ................................................................................ 54
Tabel 9. Hasil Uji Normalitas Metode AzidemetHb (darah vena) dan Cyanide-
free (darah vena) ................................................................................. 54
Tabel 10. Hasil Uji Perbedaan Metode AzidemetHb (darah kapiler) dan Cyanide-
free (darah vena) ............................................................................... 55
Tabel 11. Hasil Uji Perbedaan Metode AzidemetHb (darah vena) dan Cyanide-
free (darah vena) ................................................................................ 57
xiii
DAFTAR SINGKATAN
ALP = Alkaline phosphatase
ALT = Alanine aminotransferase
AMP = Amino methyl propanol
AST = Aspartat aminotransferase
Depkes = Departemen Kesehatan
EDTA = Ethylenediaminetetraacetic acid
g/dL = Gram per desiliter
HPLC = High performance liquid chromatography
IFCC = International Federation of Clinical Chemistry
KV = Koefisien variasi
Mg = Magnesium
mg/dL = Miligram per desiliter
NA = Nilai aktual
NaOH = Natrium hidroksida
ng = Nano gram
nm = Nano meter
pNPP = Para nitrophenilfosfat
QC = Quality control
RBC = Red blood cell
RSUD = Rumah Sakit Umum Daerah
SD = Standard deviation
U/L = Unit per liter
USB = Universitas Setia Budi
WBC = White blood cell
WHO = World Health Organization
Zn = Zink
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Pengajuan Ijin Penelitian ............................................................ 60
Lampiran 2. Bukti Pengajuan Kelaikan Etik .................................................. 61
Lampiran 3. Kelaikan Etik .............................................................................. 62
Lampiran 4. Surat Pengantar Penelitian ....................................................... 63
Lampiran 5. Lembar Pemberian Informasi Penelitian ................................... . 64
Lampiran 6. Lembar Persetujuan Mengikuti Penelitian ................................. 65
Lampiran 7. Lembar Data Pasien .................................................................... 66
Lampiran 8. Surat Pernyataan Selesai Penelitian ........................................... 67
Lampiran 9. Quality Control Internal ............................................................ 68
Lampiran 10.Data Subjek Penelitian ............................................................... 69
Lampiran 11.Data Suhu Ruangan Laboratorium................................................. 70
Lampiran 12.Uji Statistik ................................................................................. 71
xv
INTISARI
Retno Susilaningsih1, dr. M.I. Diah Pramudianti, Sp.PK (K).,M.Sc
2, dr. Ratna
Herawati3. 2017. Perbandingan Kadar Alkali Fosfatase (ALP) Serum Sebelum dan
Sesudah Waktu Tunda 4 dan 8 Hari pada Suhu Kamar. Program Studi D-IV Analis
Kesehatan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi1, Instalasi Patologi
Klinik RSDM2, Dosen Universitas Setia Budi Surakarta
3.
Alkali fosfatase (ALP) merupakan enzim yang mengatur metabolisme yang
didapatkan pada saluran empedu, hati, usus, ginjal dan kelenjar susu. Pemeriksaan ALP
terkadang tidak segera dikerjakan karena berbagai sebab, sehingga sampel harus
disimpan. Penyimpanan serum ALP stabil pada suhu kamar (20-25ºC) selama 7 hari.
Tujuan penelitian untuk mengetahui perbedaan kadar ALP serum sebelum dan sesudah
waktu tunda 4 dan 8 hari pada suhu kamar.
Penelitian ini bersifat observasional analitik dengan jumlah sampel 31 orang.
Penelitian dilakukan di Instalasi Patologi Klinik Rumah sakit Umum dr. Moewardi di
Surakarta pada bulan April 2017. Pemeriksaan ALP dengan metode IFCC. Data dianalisis
menggunakan uji Friedman dilanjutkan uji Wilcoxon dengan nilai p <0,05 (bermakna)
dan interval kepercayaan 95 %, diperkuat metode Bland-Altman.
Jumlah pria 14, wanita 17, mean umur 53,10 ± 15,89, Median (min-maks) kadar
ALP hari 0, 4, 8 yaitu 73 (42-419), 75 (40-372), 79 (36-423). Perbedaan kadar ALP
serum antara 0 dan 4 hari, 0 dan 8 hari, 4 dan 8 hari yaitu p=0,922; p=0,372; p=0,256.
Hasil penelitian tidak terdapat perbedaan kadar ALP serum sebelum dan sesudah
waktu tunda 4 dan 8 hari pada suhu kamar. Perlu penelitian lanjutan pada suhu kamar
lebih 8 hari, ataupun dengan suhu kulkas.
Kata Kunci : Kadar Alkali Fosfatase serum, Waktu tunda 0, 4, 8 hari, Suhu kamar.
xvi
ABSTRACT
Retno Susilaningsih1, dr. M.I. Diah Pramudianti, Sp.PK (K)., M.Sc
2, dr. Ratna
Herawati3. 2017. The Comparison of Serum Alkaline Phosphatase Level (ALP)
Before and After 4 and 8 Days of Delay Time at Room Temperature. The Study
Program of Four-Year Diploma (D-IV) in Medical Laboratory Technology. The
Faculty of Health Sciences. Setia Budi University1. Clinical Pathology Installation of
Regional Public Hospital of Dr. Moewardi (RSDM)2, Lecturer at Universitas Setia
Budi Surakarta3.
Alkaline phosphatase is an enzyme produced by bile duct, intestines, kidney, and
mammary gland which regulates metabolism. Examination of alkaline phosphatase is
sometimes delayed due to many reasons, and therefore, samples have to be stored. Serum
alkaline phosphatase (ALP) storage is stable at room temperature (20-25ºC) within 7
days. The aims of this study was to investigate the difference of serum alkaline
phosphatase level before and after 4 and 8 days delay time at room temperature.
This research belongs to analytical observational study with a total of 31 people
as samples. The research was carried out in the Clinical Pathology Installation of
Regional Public Hospital of Dr. Moewardi (RSDM) in Surakarta in April 2017. The
examination of alkaline phosphatase level was conducted using International Federation
of Clinical Chemistry (IFCC) method. Data were analyzed using Friedman test and
Wilcoxon test with p value <0.05 (significant) and confidence interval of 95%, and
reinforced with Bland-Altman method.
The findings reveal that there were 14 male respondents and 17 female
respondents, with age mean of 53.10 ± 15.89 and median (min-max) of ALP levels 0, 4,
and 8 days of 73(41-419), 75 (40-372), and 79 (36-423), respectively. The differences of
serum ALP levels among 0 and 4 days, 0 and 8 days, and 4 and 8 days were p=0.922;
p=0.372; p=0.256.
The research results show that there was no difference of serum ALP levels
before and after 4 and 8 days of delay time at room temperature. Further research is
required at room temperature within 8 days and at refrigerator temperature.
Keywords: Alkaline phosphatase serum level, delay time of 0, 4, and 8 days, room
temperature.
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Enzim adalah molekul protein yang mengatalisis reaksi kimia tanpa
mengalami perubahan secara kimiawi. Enzim mengatur metabolisme dengan ikut
serta pada hampir semua fungsi sel. Setiap enzim bersifat spesifik bagi substrat
yang diubahnya menjadi suatu produk tertentu. Analisis enzim digunakan untuk
mempelajari penyakit-penyakit (Widmann, 2000; Sacher & Mc Pherson, 2004).
Salah satu enzim yang dipakai adalah alkali fosfatase (ALP). Alkali
fosfatase adalah sekelompok enzim-enzim yang mengkatalisir berbagai monoester
fosfat dalam suasana basa secara optimum, secara khusus fungsi ALP adalah
membebaskan fosfat anorganik dari ester fosfat organik bersamaan dengan
produksi alkohol. Peranan ALP secara fisiologis tidak jelas, tetapi ALP
didapatkan pada saluran empedu, epitel hati, osteoblast (yakni sel-sel pembentuk
tulang baru), usus, tubuli proksimalis ginjal, plasenta, dan kelenjar susu yang
sedang membuat air susu. Peningkatan aktivitas ALP, terkait dengan
hepatobiliair, penurunan massa tulang, obstruksi saluran empedu, sirrosis biliair,
penyakit hodgkins, gagal jantung kongestiv, infeksi hepatitis, dan masalah
abdominal (Widmann, 2000; Bishop & Fody, 2010; Seita, 2013).
Pemeriksaan ALP di laboratorium klinik terkadang tidak segera dapat
dikerjakan karena berbagai sebab seperti tidak tersedianya kulkas, pemadaman
listrik, reagen habis (tidak tersedianya reagen), jumlah sampel terlalu banyak dan
2
terjadi kerusakan alat, sehingga harus disimpan ataupun sampel yang harus
dirujuk ke laboratorium lain yang mungkin memerlukan waktu lama untuk dapat
segera diperiksa (Hartini & Suryani, 2016).
Sampel yang akan dikirim ke laboratorium lain, sebaiknya diperhatikan
persyaratan pengiriman antara lain kecepatan, tidak terkena sinar matahari
langsung, kemasan harus sesuai dengan syarat keselamatan kerja, kemasan diberi
label yang bertuliskan bahan pemeriksaan infeksius dan suhu pengiriman harus
memenuhi syarat (Permenkes, 2013).
Sampel yang tidak segera diperiksa dapat disimpan dengan memperhatikan
jenis pemeriksaan. Penyimpanan sampel ALP dalam bentuk serum stabil pada
suhu kamar (20-25ºC) selama 7 hari (> 7 hari aktifitas turun 1 %), dalam lemari es
suhu 2-8ºC, dan suhu -20ºC selama 7 hari (Sacher & Mc Pherson, 2004;
Permenkes, 2013).
Penelitian yang dilakukan oleh Cuhadar pada tahun 2012 dengan judul
Stabilitas Biokimia Serum pada Tabung Gel atau Tanpa Gel pada Berbagai
Kondisi Penyimpanan, didapatkan hasil ALP yang relatif stabil selama 72 jam (3
hari) menggunakan tabung gel atau tanpa gel suhu kamar ataupun dingin.
Penelitian Nwosu tahun 2009 dengan judul Perubahan Nilai AST, ALT dan ALP
dari Plasma dan Serum Simpan pada Suhu Kulkas dan Suhu Kamar sampai Lima
Hari menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan secara signifikan untuk hasil ALP
serum dan plasma pada suhu dingin selama 30 jam, dan pada suhu kamar selama
10 jam.
3
Merujuk pada latar belakang di atas, maka penulis ingin melakukan
penelitian tentang kadar ALP serum sebelum dan sesudah waktu tunda 4 dan 8
hari pada suhu kamar (20-25°C).
B. Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang diatas, rumusan masalah yang diambil
berdasarkan :
1. Pemeriksaan ALP tidak rutin dilakukan karena berbagai sebab, sehingga perlu
penyimpanan.
2. Terdapat RS ataupun laboratorium yang belum mempunyai kulkas.
3. Jarak antara RS/Lab dengan RS/Lab rujukan cukup jauh.
Berdasarkan hal diatas, maka permasalahannya adalah :
Apakah terdapat perbedaan kadar ALP serum sebelum dan sesudah waktu tunda 4
dan 8 hari pada suhu kamar (20-25°C) ?
C. Tujuan Penelitian
Tujuan umum :
Untuk mengetahui perbedaan kadar ALP serum sebelum dan sesudah waktu tunda
4 dan 8 hari pada suhu kamar (20-25°C).
Tujuan Khusus :
1. Untuk mengetahui perbedaan kadar ALP serum antara 0 hari dan 4 hari pada
suhu kamar (20-25°C).
4
2. Untuk mengetahui perbedaan kadar ALP serum antara 0 hari dan 8 hari pada
suhu kamar (20-25°C).
3. Untuk mengetahui perbedaan kadar ALP serum antara 4 hari dan 8 hari pada
suhu kamar (20-25°C).
D. Manfaat Penelitian
1. Institusi Kesehatan
Sebagai referensi dan dapat menerapkan ilmu di bidang kimia klinik terutama
tentang pemeriksaan ALP pada Institusi Kesehatan.
2. Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Setia Budi Surakarta (USB)
Menambah referensi dan bahan acuan untuk penelitian lebih lanjut mengenai
kadar ALP dalam serum.
3. Peneliti
Dapat menambah pengetahuan penulis tentang perbandingan kadar ALP serum
sebelum dan sesudah waktu tunda 4 dan 8 hari pada suhu kamar, dan dapat
mengaplikasikan ilmu yang diperoleh pada laboratorium tempat kerja.
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. SERUM
1. Darah
Darah merupakan bagian dari tubuh yang jumlahnya 6-8 % dari berat
badan total. Darah terdiri dari dua komponen utama, yaitu plasma darah dan
butir-butir darah. Plasma darah merupakan bagian cair darah yang sebagian
besar terdiri atas air, elektrolit dan protein darah, sedangkan butir-butir darah
terdiri atas eritrosit atau red blood cell (RBC), leukosit atau white blood cell
(WBC), dan trombosit. Plasma darah tanpa protein pembekuan darah disebut
serum (Widmann, 2000; Bakta, 2006).
Pada pria prosentase ini sedikit lebih besar dibanding wanita. Fungsi
utama darah dalam sirkulasi adalah sebagai media transportasi, pengatur suhu,
pemelihara keseimbangan cairan, asam dan basa, dan mengangkut sejumlah
besar bahan kimia ke seluruh tubuh antar organ-organ dan ke dalam jaringan.
Bahan-bahan ini mencerminkan proses metabolisme dan status penyakit.
Perubahan konsentrasi bahan-bahan tersebut sering berguna untuk menegakkan
diagnosis serta dapat berfungsi untuk memantau pengobatan (Widmann, 2000;
Sacher & McPherson, 2004).
Antara plasma dan serum, walaupun keduanya merupakan cairan darah
yang bebas dari sel dan sama-sama berwarna kuning jernih, terdapat perbedaan
yang jelas. Plasma diperoleh dengan mencegah proses penggumpalan darah,
6
dan serum didapat dengan membiarkan proses tersebut. Plasma didefinisikan
sebagai cairan darah yang terdiri atas fibrinogen dan faktor pembekuan.
Fibrinogen adalah suatu protein darah yang berubah menjadi jaringan dari
serat-serat fibrin pada peristiwa penggumpalan, sedangkan serum tidak
mengandung fibrinogen dan faktor pembekuan (Sadikin, 2002).
2. Serum
Serum telah menjadi sampel yang hampir secara universal digunakan
untuk pemeriksaan kimiawi. Untuk mempermudah pengambilan dan
penyiapannya, sebagian besar tabung penampung darah berada dalam keadaan
vacum dengan penutup karet merah. Pada saat pengambilan serum harus selalu
berhati-hati agar tidak terjadi hemolisis. Hemolisis ditandai dengan lapisan
serum atau plasma berwarna merah muda. Hemolisis dapat menyebabkan
gangguan pemeriksaan akibat dibebaskannya pigmen hemoglobin (Sacher &
Mc Pherson, 2004).
Serum didapatkan dengan cara sejumlah darah dimasukkan dalam
wadah (tabung) tanpa antikoagulan lalu didiamkan pada suhu kamar selama
20-30 menit, maka selang beberapa lama kemudian darah tersebut membeku
dan mengalami retraksi akibat terperasnya cairan dari bekuan. Selanjutnya
darah disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 5-15 menit, maka setelah
itu terdapat cairan yang berwarna kuning pada lapisan atas yang dinamakan
serum. Pemisahan serum dilakukan paling lambat dalam waktu 2 jam setelah
pengambilan spesimen. Serum yang memenuhi syarat harus tidak kelihatan
merah dan keruh atau lipemik (Sacher & Mc Pherson, 2004; Permenkes, 2013).
7
ALP
pH 9-10
B. Alkali Fosfatase
1. Definisi Alkali Fosfatase
Alkali fosfatase adalah jenis enzim hidrolase yang ditemukan pada
sebagian besar organ tubuh. ALP terdistribusi luas di sepanjang membran
permukaan sel yang aktif secara metabolik. Dalam jumlah besar ditemukan di
dalam hati, tulang, ginjal dan plasenta. Dalam sel, ALP muncul karena terlibat
dalam pembelahan senyawa yang mengandung fosfat. Dalam tubuh manusia
terdapat macam-macam bentuk (isoenzim) di berbagai jaringan, yaitu plasenta,
usus, tulang, ginjal dan hati (Sacher & Mc Pherson, 2004; Syed, 2009; Pincus,
2011).
Alkali fosfatase adalah milik sekelompok enzim yang mengkatalis
hydrosis berbagai phosphomonoester dalam suasana basa. ALP adalah enzim
monospesifik yang mampu bereaksi dengan banyak substrat yang berbeda.
Secara khusus, fungsi ALP adalah untuk membebaskan fosfat anorganik dari
ester fosfat organik bersamaan dengan produksi alkohol. Reaksi tersebut
seperti terlihat pada gambar (Lihat Gambar 1).
O O
R P O + H2O R OH + HO P O
O O
Phosophomonoester Alkohol Phosphate ion
Gambar 1. Reaksi ALP (Bishop & Fody, 2010).
8
Struktur protein ALP terdiri dari monomer A dan monomer B,
berbentuk dimer yaitu suatu protein kompleks dari dua molekul. Masing-
masing monomer mengandung 484 residu, empat atom logam, satu ion fosfat
dan 603 molekul air. Kedua monomer terkait dengan dua kali lipat sumbu
kristal. Monomer A ditunjukkan dalam pita, sedang monomer B ditunjukkan
pada permukaan (Lihat Gambar 2).
Gambar 2. Struktur protein ALP (Millan, 2006)
Alkali fosfatase merupakan petunjuk untuk menentukan apakah
terdapat penyakit hati dan tulang. Jika terjadi kerusakan ringan pada sel hati,
kadar ALP mungkin agak naik. Tetapi peningkatan yang jelas terlihat pada
penyakit hati akut. Begitu fase akut terlampaui, kadar serum akan segera
menurun, sementara kadar bilirubin serum tetap meningkat (Kee, 2014).
Prevalensi isoenzim ALP terdistribusi di berbagai macam organ, yaitu :
a. Hati
Isoenzim ALP hati berasal dari sel-sel epitel saluran empedu. Dalam
keadaan normal pelepasan ALP hati dari ekskresi empedu ke dalam usus.
Penyumbatan empedu menyebabkan reabsorbsi bilirubin, sehingga ALP
9
digunakan untuk menetapkan diagnosis ikterus (Sacher & Mc Pherson,
2004).
b. Tulang
Peningkatan ALP tulang dalam serum terjadi sebagai bagian dari respon
pertumbuhan osteoblastik. Anak yang tulangnya sedang tumbuh memiliki
kadar ALP tulang yang tinggi. Demikian juga orang dewasa yang sedang
mengalami penyembuhan patah tulang (Sacher & Mc Pherson, 2004).
c. Plasenta
Terdapat peningkatan ALP pada wanita hamil pada waktu trimester ke tiga
kehamilan (Kee, 2014).
d. Usus
Isoenzim ALP usus meningkat pada penyakit radang usus seperti kolitis
ulserativa dan enteritis regional. Temuan orang dengan golongan darah O
atau B dapat mengeluarkan ALP usus ke dalam sirkulasi setelah
mengkonsumsi makanan berlemak. Kecenderungan ini mungkin
menyebabkan peningkatan nilai ALP pada pasien yang tidak puasa (Sacher
& Mc Pherson, 2004).
Kelompok gen ALP pada awalnya berasal dari suatu gen tunggal. Tiga
gen ALP di kromosom yaitu intestinal ALP gene, placental-like ALP gene,
placental ALP gene. Gen keempat adalah gen ALP hati, tulang, dan ginjal
(L/B/K ALP gene) pada lengan pendek kromosom manusia. Secara individual
isoenzim ini diproduksi paling banyak di hati, tulang, dan ginjal. Oleh karena
itu mereka disebut ALP jaringan spesifik (Lihat Gambar 3).
10
Berikut adalah struktur gen ALP seperti tampak pada Gambar. 3
dibawah ini.
Gambar 3. Struktur gen ALP (Sharma, 2014)
2. Patofisiologi Alkali Fosfatase
Pada keadaan abnormal didapatkan hasil ALP yang meningkat dari
peningkatan rendah sampai peningkatan yang sangat tinggi (lebih dari 5 kali
nilai normal) yaitu :
a. Meninggi sampai lebih 5 kali atau lebih dari nilai normal pada keadaan
obstruksi saluran empedu (intrahepatic atau extrahepatic), sirosis biliar,
osteotis deformans, sarkoma osteogenik, penyakit paget, dan
hiperparatiroid.
b. Meninggi 3 – 5 kali nilai normal pada penyakit granulomatosa atau
infiltratif dalam hati, metastasis tumor ke tulang, penyakit tulang
(osteomalacia), obstruksi bilier akut, cirrhosis aktif, mononukleosis
infeksiosa, hepatitis virus sebelum bilirubin meninggi, dan riketsia.
11
c. Agak meninggi (kurang dari 3 kali) pada hepatitis kronis, sirosis, penyakit
jantung kongestif (Widmann, 2000; Hardjoeno, 2003).
3. Faktor yang Mempengaruhi Hasil ALP
Terdapat beberapa faktor yang mempengaruhi hasil pemeriksaan ALP :
a. Umur
Kadar normal pada anak-anak dapat mencapai 3-4 kali dari kadar normal
orang dewasa. Keadaan ini karena terdapat aktivitas osteoblastik pada masa
pertumbuhan.
b. Jenis Kelamin
Pada pria kadar ALP lebih tinggi daripada wanita.
c. Terapi obat, cairan dan bahan kimia
Banyak obat bersifat toksik bagi hati, dibuktikan dengan peningkatan kadar
enzim hati seperti aspartat aminotransferase (AST) dan ALP. Obat yang
meningkatkan ALP antibiotik, morfin, acetaminophen, benzodiazepine.
Pemberian albumin IV meningkatkan kadar ALP 5-10 kali nilai normal.
Faktor yang menurunkan seperti arsenical, cyanida, fluorides, oxalat,
phosphat, propanolol, zink salt, kontrasepsi oral.
d. Diet
Temuan pada orang dengan golongan darah O atau B dan status sekretorik
golongan darah dapat menaikkan isoenzim ALP usus setelah mengkonsumsi
makanan berlemak, sehingga kecenderungan ini mengakibatkan
peningkatan nilai ALP pada pasien yang tidak puasa. Sebaiknya pasien
diminta puasa sekitar 10-12 jam.
12
e. Kehamilan
Pada masa kehamilan, kadar ALP dapat mengalami kenaikan hingga 2-3
kali nilai normal, terjadi karena kenaikan produksi ALP di plasenta.
f. Merokok
Merokok menyebabkan kenaikan rata-rata 10% pada ALP total, sebagai
hasil peningkatan isoenzim placental-like ALP di paru.
g. Wadah spesimen
Dalam kasus pemakaian antikoagulan ethylenediaminetetraacetic acid
(EDTA), seringkali pengukuran ALP terlalu rendah (Wilson, 2008; Pincus,
2011; Seita, 2013).
4. Metode Pemeriksaan ALP
Terdapat beberapa macam metode untuk pengukuran ALP, yaitu :
a. Pengukuran para-nitrofenil fosfat (pNPP) sebagai substrat pada pH basa dan
diukur secara kolorimetri. Umumnya metode kolorimetri ini menggunakan
alat spektrofotometer manual atau dengan analizer kimia otomatis. Prinsip
kerjanya berdasarkan penyerapan cahaya atau energi radiasi oleh suatu
larutan. Jumlah cahaya atau energi radiasi yang diserap memungkinkan
pengukuran jumlah zat penyerap dalam larutan secara kuantitatif. Kelebihan
dari metode ini adalah hidrolisis dari ester phosphat yang sangat berwarna
sehingga lebih mudah diukur, merupakan metode yang cukup sensitif
karena dapat mendeteksi bahan dalam konsentrasi rendah. Kelemahan
metode ini jika bahan terdapat faktor pengganggu seperti hemolisis maka
dapat menyebabkan kesalahan deteksi, karena serapan radiasi dapat
13
terpengaruh dan menyebabkan kesalahan analisis (Bintang, 2010; Pincus,
2011).
b. High performance liquid chromatography (HPLC) prinsipnya spesimen
yang bersangkutan dipompa melalui sebuah kolom yang berisi sebuah fase
diam bersama sama dengan eluent. Metode HPLC mempunyai kelebihan
dalam analisis hasil yang dapat diselesaikan sekitar 15-30 menit, dapat
mendeteksi kadar jumlah nanogram (ng). Umumnya detektor dalam HPLC
tidak menyebabkan kerusakan komponen sampel. Kelemahannya adalah
tidak dapat menganalisis lebih dari satu jenis sampel sekaligus (Bintang,
2010; Pincus, 2011).
c. Metode fraksionasi panas adalah mudah dan paling sering digunakan untuk
membedakan isoenzim-isoenzim ALP, dengan cara serum dipanaskan 56ºC
selama 15 menit dan kemudian diperiksa untuk mendeteksi sisa aktifitas
ALP. Cara ini lebih mudah karena dengan pemanasan ALP tulang sangat
labil sehingga hanya menyisakan aktifitas 10-20 %, sedangkan ALP hati
relatif stabil dan mempertahankan 30-50 %. Kelemahannya pada keadaan
normal, serum mengandung aktivitas ALP dari berbagai jaringan, sehingga
hasil dari fraksionasi panas dapat membingungkan atau sukar dalam
membedakan isoenzim ALP (Sacher & Mc Pherson, 2004).
Pada tahun 1946, Bessey, Lowry dan Brock mengeluarkan metode
untuk menentukan ALP menggunakan pNPP sebagai buffer substrat dengan
glycin atau natrium hidroksida (NaOH). Uji ini telah memenuhi standar yang
14
direkomendasikan oleh International Federation of Clinical Chemistry (IFCC).
Metode kolorimetri ini merupakan metode standar (IFCC, 2011).
Dalam penelitian ini menggunakan metode IFCC, ALP mengkatalis
hidrolisis pNPP ke p-Nitrophenol. Para-Nitrophenyl fosfat tidak berwarna
tetapi p-Nitrophenol memiliki absorbansi yang kuat pada 405 nm. Tingkat
peningkatan absorbansi pada 405 nm sebanding dengan aktivitas enzim dan
dibaca secara kolorimetri (IL Test, 2012).
5. Nilai rujukan ALP
Nilai Rujukan ALP (IL Test, 2012).
Laki – laki : 43 – 115 U/L
Perempuan : 33 – 98 U/L
C. Waktu Tunda Pemeriksaan Laboratorium
1. Pra Analitik Pemeriksaan
Pra-analitik mengacu pada semua langkah yang harus dilakukan
sebelum sampel dapat dianalisis. Selama bertahun-tahun, serangkaian
penelitian menunjukkan bahwa 32-75 % dari semua kesalahan pengujian
terjadi pada fase pra analitik, sementara itu seiring dengan kemajuan teknologi
dan prosedur dalam jaminan kualitas, secara signifikan telah mengurangi
jumlah kesalahan analitik. Faktor-faktor pra analitik mencangkup yang terkait
dengan variabel pasien (diet, umur, jenis kelamin, dan lain-lain), koleksi
spesimen, teknik pelabelan, pengawet spesimen, antikoagulan, transportasi
spesimen, serta pengolahan dan penyimpanan (Kiswari, 2014).
15
Spesimen yang sudah diambil harus segera dikirim ke laboratorium
untuk diperiksa, karena stabilitas spesimen dapat berubah. Faktor-faktor yang
mempengaruhi stabilitas spesimen antara lain :
a. Terjadinya kontaminasi oleh kuman dan bahan kimia.
b. Terjadinya metabolisme oleh sel-sel hidup pada spesimen.
c. Terjadinya penguapan.
d. Pengaruh suhu.
e. Terkena paparan sinar matahari (Permenkes, 2013).
Sumber potensial kesalahan atau kegagalan dalam proses meliputi jenis
tes yang diminta, kesalahan identifikasi sampel, waktu yang tidak tepat, puasa
yang tidak benar, tidak tepatnya jenis dan perbandingan antikoagulan dengan
darah, pencampuran yang tidak tepat, serta spesimen hemolisis, ikterik atau
lipemik. Pemeriksaan ALP tidak dapat dilakukan apabila sampel lisis sampai
kadar Hb mencapai 120 mg/dL (0,12 g/dL), sampel lipemik (kadar trigliserida
mencapai 1000 mg/dL), sampel ikterik (kadar bilirubin mencapai 15 mg/dL)
(IL Test, 2012; Kiswari, 2014).
Kesalahan yang paling sering terjadi pada tahap pra analitik termasuk
mengisi sampel ke dalam tabung yang tidak benar, penggunaan pengawet yang
tidak sesuai, dan memilih jenis tes yang tidak tepat. Masalah pra analitik
memiliki dampak pada kualitas keseluruhan perawatan. Teknik pengambilan
darah yang tepat juga penting bagi plebotomist untuk meminimalkan cedera
pada pasien. Teknik yang buruk dapat mengakibatkan cedera pada pasien,
16
seperti kerusakan saraf dan arteri, perdarahan subkutan, infeksi, dan bahkan
kematian (Kiswari, 2014).
Beberapa spesimen yang tidak langsung diperiksa dapat disimpan
dengan memperhatikan jenis pemeriksaan yang akan diperiksa, antara lain:
a. Disimpan pada suhu kamar.
b. Disimpan dalam lemari es dengan suhu 0ºC - 8ºC
c. Penyimpanan spesimen lebih dari sehari harus dalam lemari es dengan suhu
- 20ºC
d. Dapat diberikan bahan pengawet
e. Penyimpanan spesimen darah sebaiknya dalam bentuk serum (Permenkes,
2013).
Selama penyimpanan konsentrasi darah pada spesimen dapat berubah
karena berbagai proses, termasuk adsorbsi tabung kaca atau plastik, denaturasi
protein, pergerakan ke dalam sel yang mengakibatkan hemokonsentrasi.
Perubahan ini terjadi dalam berbagai suhu, yaitu suhu kamar, selama
pendinginan atau pembekuan. Studi stabilitas menunjukkan bahwa perubahan
secara klinis terjadi jika serum atau plasma kontak dengan waktu yang lama
dengan sel darah (Kiswari, 2014).
Spesimen yang akan dikirim ke laboratorium lain (dirujuk) sebaiknya
diperhatikan persyaratan pengirimannya antara lain waktu pengiriman jangan
melampaui masa stabilitas, tidak terkena sinar matahari langsung, kemasan
harus memenuhi syarat keamanan kerja laboratorium (Permenkes, 2013).
17
2. Waktu Tunda pemeriksaan
Ketika sampel darah yang diperiksa dalam jumlah besar, sedangkan
faktor sumber daya manusia serta sarana & prasarana tidak memadai maka
tidak bisa dihindari bahwa sampel harus disimpan. Perlakuan sebelum darah
dianalisa bisa menyebabkan variasi hasil, salah satunya adalah kondisi/suhu
(Jayavardhanna, 2011).
Suhu merupakan faktor yang selalu berhubungan langsung terhadap
sampel, baik saat penyimpanan atau saat pemeriksaan. Pemeriksaan ALP
sebaiknya segera diperiksa, tapi dalam keadaan tertentu sampel bisa disimpan.
Stabilitas untuk pemeriksaan ALP pada suhu kamar (20-25ºC) sampai 7 hari (>
7 hari aktifitas turun 1 %, pada suhu dingin (2-8ºC), dan pada suhu -20 ºC
sampai 7 hari (Permenkes, 2013).
Menurut Seita, 2013 stabilitas untuk pemeriksaan ALP adalah 3 hari
pada suhu kamar (20-25ºC), 7 hari dalam suhu 4-8ºC dan 3 bulan pada suhu -
20ºC.
IL Test (2012) penggunaan sampel untuk pemeriksaan ALP harus
menggunakan sampel segar (sampel harus sesegera mungkin dikerjakan) dan
penggunaannya tidak lebih dari 4 jam setelah pengambilan darah. Stabilitas
ALP yang dipakai untuk penelitian ini merujuk pada Permenkes.
Penundaan pemeriksaan ALP adalah pemeriksaan ALP terhadap serum
dengan memisahkan pada tabung yang berbeda, diperiksa kadar ALP pada hari
ke 0, setelah disimpan selama 4 hari dan 8 hari pada suhu kamar dengan
menggunakan alat Ilab 650. Penelitian terkait waktu tunda ALP, yang
18
dilakukan oleh Heins tahun 1995 dengan judul Penyimpanan Serum dan Darah,
pada Pengaruh Waktu dan Suhu didapatkan hasil ALP serum stabil sampai tiga
hari pada suhu kamar, dan stabil sampai 4 hari pada suhu dingin. Penelitian
Divya (2010), dengan judul Efek Suhu dan waktu simpan pada Enzim Hati
Serum Kambing didapatkan hasil ALP yang bervariasi pada berbagai macam
penyimpanan dibanding enzim hepatobiliary lain. Hasil ALP menunjukkan
penurunan dalam waktu 24 jam pada suhu kamar, dan peningkatan setelah 8
hari pada suhu dingin (Heins, 1995; Divya, 2010).
Penelitian Jayavardhanan (2011), dengan judul Penelitian Stabilitas
Serum Simpan terhadap Aktifitas Enzim Hepatobiliary pada Kerbau Murrah,
aktifitas ALP serum simpan pada suhu kamar tidak menunjukkan perubahan
yang signifikan sampai hari pertama, tetapi terjadi penurunan aktifitas kurang
dari 23 % setelahnya sampai akhir periode yaitu hari ke empat belas.
Menurut Sacher & Mc Pherson (2004), pemeriksaan ALP relatif stabil
selama beberapa waktu, walaupun serum yang disimpan pada suhu kamar
memperlihatkan sedikit peningkatan aktifitas ALP dalam 1-4 hari. Serum yang
didinginkan memperlihatkan peningkatan aktifitas ALP yang lebih lambat dari
suhu kamar.
Definisi suhu kamar adalah kisaran suhu dalam suatu ruangan, rentang
suhu kamar biasanya antara 20-25ºC. Pada musim dingin, suhu ruangan adalah
21ºC dan maksimum 24ºC sebagai suhu kamar yang nyaman. Monitoring pada
penelitian ini, harus diperhatikan dari faktor pendingin ruangan dan panas, agar
selalu berada dalam rentang suhu 20-25ºC (Hartley, 2006; Depkes, 2013).
19
D. KERANGKA PIKIR
: bukan lingkup penelitian
: lingkup penelitian
: mempengaruhi
Enzim
ALP
Pemeriksaan Enzim
Isoenzim
ALP
ALP usus ALP hati ALP tulang ALP plasenta
Penyakit
radang usus
(kolesititis
ulserativa
Kehamilan Obstruksi
empedu
- Pertumbuhan
- Penyembuhan
patah tulang
- Peny. Paget
- Karsinoma
metastais
ALP serum
(Pemeriksaan
secara
spektrofotometri)
Waktu dan suhu
Faktor yang mempengaruhi :
- Umur, Jenis kelamin
- Paparan cahaya
- Terapi obat dan cairan
- Diet
- Kehamilan
- merokok
0 hari
suhu 20-25oC
4 hari
suhu 20-25oC
8 hari
suhu 20-25oC
Pra analitik,
analitik, pasca
analitik
Gambar 4. Kerangka Pikir
20
E. Hipotesis
1. Tidak terdapat perbedaan kadar ALP serum antara 0 hari dan 4 hari pada suhu
kamar (20-25°C).
2. Terdapat perbedaan kadar ALP serum antara 0 hari dan 8 hari pada suhu kamar
(20-25°C).
3. Terdapat perbedaan kadar ALP serum antara 4 hari dan 8 hari pada suhu kamar
(20-25°C).
21
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
1. Waktu penelitian
Waktu penelitian dilakukan pada bulan April 2017.
2. Tempat Penelitian
Pengambilan sampel dan penelitian dilakukan di Instalansi Patologi Klinik
Rumah Sakit Umum dr. Moewardi (RSDM) di Surakarta.
B. Rancangan Penelitian
Pada rancangan penelitian ini jenisnya adalah bersifat penelitian
observasional analitik dengan pendekatan cross sectional, dan menurut tingkat
explanasinya adalah penelitian komparatif yang menjelaskan tentang
perbandingan atau perbedaan yang bertujuan untuk mengetahui suatu gejala yang
timbul sebagai akibat dari suatu perlakuan atau percobaan tertentu. Penelitian ini
dilakukan di laboratorium untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan kadar ALP
pada hari ke 0, hari ke 4, dan hari ke 8 pada suhu kamar (20-25ºC).
22
C. Populasi dan Sampel
1. Populasi
Populasi merupakan subjek atau objek yang mempunyai kualitas dan
karakteristik tertentu yang ditetapkan oleh peneliti untuk dipelajari dan ditarik
simpulan (Sugiyono, 2010).
Populasi target dalam penelitian ini adalah pasien yang melakukan
pemeriksaan ALP di laboratorium Patologi Klinik Rumah Sakit Umum Daerah
dr. Moewardi di Surakarta. Populasi terjangkau adalah pasien yang melakukan
pemeriksaan ALP di laboratorium Patologi Klinik Rumah Sakit Umum Daerah
dr. Moewardi di Surakarta dimulai pada bulan April 2017.
2. Sampel
Sampel adalah sebagian dari populasi yang ingin diteliti, yang dipilih
dengan menggunakan prosedur tertentu dan keberadaannya diharapkan mampu
mewakili populasi yang sebenarnya. Teknik pengambilan sampel dalam
penelitian ini adalah consecutive sampling. Pada consecutive sampling, semua
subjek yang datang dan memenuhi kriteria pemilihan dimasukkan dalam
penelitian sampai jumlah subjek yang diperlukan terpenuhi (Sastroasmoro,
2007).
a. Besar sampel
Rumus besar sampel untuk uji perbandingan menurut Issac & Michael
(dalam Siswanto, 2013).
S = ʎ2.N.P.Q
d2.(N-1)+ ʎ
2.P.Q
Keterangan :
S = Ukuran sampel
23
N = Ukuran populasi
ʎ2
= Harga table chi kuadrat dengan dK = 1, kesalahan 5 % = 3,481
P = Proporsi dalam populasi
Q = 0,5
d2
= Ketelitian (error) 0,05
Berdasarkan rumus diatas, karena keterbatasan penelitian maka
menggunakan minimal sampel size, yaitu 30 sampel. Karena pada penelitian
ini sampel diikuti 4 dan 8 hari waktu tunda, maka perlu dilakukan follow up
sampel pada masing-masing kelompok, dengan memperhitungkan kasus
drop out sebesar 10 %.
Ditetapkan jumlah sampel yang diambil masing-masing kelompok
adalah 33, sehingga sudah memenuhi batas minimal sampel yang digunakan
dalam penelitian ini dengan mempertimbangkan kriteria inklusi dan eksklusi
sebagai berikut :
i. Kriteria Inklusi :
a) Pasien yang melakukan pemeriksaan ALP.
b) Laki-laki dan perempuan dewasa.
ii. Kriteria Eksklusi :
a) Jumlah serum kurang.
b) Penempatan serum tidak sesuai tabung serum (penutup karet merah).
c) Serum lipemik (yang diketahui dari kekeruhan serum).
d) Serum lisis (yang diketahui dari warna serum yang merah).
e) Serum ikterik (yang diketahui dari warna serum yang kuning) (IL
Test, 2012).
f) Serum tidak thawing.
24
D. Variabel Penelitian
Variabel didefinisikan sebagai karakteristik subjek penelitian yang
berubah dari satu subjek ke subjek lain. Variabel penelitian di bawah ini adalah
1. Variabel Bebas (Independent)
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah waktu 0 hari, 4 hari, dan 8 hari.
2. Variabel Terikat (Dependent)
Variabel terikat dalam penelitian ini adalah kadar ALP.
3. Definisi Operasional
a. Alkali fosfatase adalah sekelompok enzim-enzim yang mengkatalisir
hidrolisa dari ester-ester fosfat organik dalam suasana basa secara optimal.
Pada orang dewasa ALP terutama berasal dari sistem hepatobiliair, tulang
(sel-sel osteoblast), usus, plasenta (kehamilan trimester III). Alat Kimia
ILAB 650. Metode IFCC. Satuan U/L. Skala rasio. Nilai rujukan laki-laki 43
– 115 U/L, perempuan 33 – 98 U/L.
b. Serum segar adalah serum yang didapat setelah dipisahkan dari bekuan dan
tanpa mengalami penundaan pemeriksaan. Serum tunda 4 hari adalah serum
setelah dipisahkan dari bekuan dibiarkan 4 hari pada suhu kamar. Serum
tunda 8 hari adalah serum yang setelah dipisahkan dari bekuan dibiarkan
selama 8 hari pada suhu kamar. Alat yang digunakan tabung darah,
centrifuge. Metode membagi serum dalam tiga bagian (langsung dikerjakan,
penundaan 4 hari dan penundaan 8 hari pada suhu kamar). Satuan milli liter.
Skala kategorikal.
25
4. Alur Penelitian
Populasi
Sampel penelitian
Langsung diperiksa pada
hari ke 0 (tanpa
penundaan) suhu kamar
(20-25°C)
Pemeriksaan pada
hari ke 4 (waktu
tunda) suhu kamar
(20-25°C)
Pemeriksaan pada
hari ke 8 (waktu
tunda) suhu kamar
(20-25°C)
Hasil
Analisis
Pengambilan darah
Inklusi :
- Pasien yang melakukan
pemeriksaan ALP
- Laki-laki dan perempuan
dewasa
Eksklusi :
- Jumlah serum kurang
- Serum tidak sesuai
tabung serum
- Serum lisis
- Serum ikterik
- Serum lipemik
- Serum tidak thawing Pemeriksaan ALP serum
Gambar 5. Alur Penelitian
26
E. Bahan dan Alat
1. Bahan penelitian
Bahan penelitian yang digunakan untuk pemeriksaan kadar ALP
adalah serum 0 hari, serum 4 hari dan serum 8 hari.
2. Alat penelitian
Alat-alat yang perlu dipersiapkan :
a. Nedle
b. Kapas
c. Alcohol swab
d. Tourniquet
e. Plester
f. Tabung darah yang bertutup merah
g. Alat ILAB 650
h. Centrifuge
i. Pipet automatik
j. Cup sampel
k. Holder
l. Blue tip / yellow tip
F. Prosedur Penelitian
1. Prosedur pengambilan darah vena
Langkah-langkah pengambilan darah vena menurut World Health
Organization (WHO, 2010).
27
a. Menyiapkan tourniquet, kapas alkohol, kapas kering, spuit, tabung,
plester dan perlengkapan lain yang sesuai untuk pengambilan darah.
b. Mencuci tangan menggunakan sabun dan air dan keringkan tangan
dengan handuk, tiap mau melakukan pengambilan darah.
c. Mengidentifikasi dan menyiapkan pasien.
d. Memilih daerah vena anticubital (yaitu daerah tikungan siku). Posisikan
lengan pasien sedikit menekuk dengan posisi ke bawah untuk
mempermudah palpasi (meraba). Palpasi daerah tusukan ke arah vertikal
dan horizontal untuk mencari pembuluh darah besar, jangan menyentuh
daerah setelah diberi antiseptik.
e. Memasang tourniquet sekitar 4-5 jari di atas vena puncture yang dipilih.
f. Meminta pasien untuk mengepalkan tangan sehingga pembuluh darah
dapat terlihat.
g. Memakai sarung tangan.
h. Mensterilkan dengan alkohol 70 % selama 30 detik dan biarkan kering.
i. Menusuk bagian vena dengan memegang lengan pasien dan
menempatkan jempol pada bagian bawah venapuncture dengan sudut
kemiringan 30 derajat.
j. Setelah volume darah dianggap cukup maka lepaskan tourniquet.
k. Menarik jarum dengan lembut dan letakkan kassa bersih atau kering pada
daerah tusukan.
l. Membuang jarum dan darah bekas sampling ke dalam wadah setelah
pengambilan darah.
28
m. Memeriksa label dan formulir pemeriksaan.
n. Membuang sarung tangan pada wadah infeksius.
o. Cuci dengan sabun dan air mengalir dan keringkan dengan handuk.
2. Prosedur pembuatan serum
a. Masukkan 2 ml darah ke dalam wadah (tabung) tanpa antikoagulan.
b. Diamkan 20 – 30 menit hingga membeku.
c. Selanjutnya disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm 15 menit.
d. Lapisan atas yang berwarna kuning muda jernih adalah serum, segera
dipisahkan dari lapisan bawahnya dengan menggunakan pipet automatik
dan dimasukkan dalam wadah (tabung) yang bersih dan kering (Kiswari,
2014).
3. Prosedur pemeriksaan
a. Metode pemeriksaan
Metode yang digunakan IFCC
b. Prinsip pemeriksaan (IL Test, 2012).
Alkali fosfatase menghidrolisis substrat para Nitrophenilfosfat (pNPP)
menjadi p-nitrophenol. Reaksi ini diikuti dengan pengukuran
kolorimetrik untuk kecepatan pembentukan p-nitrophenol pada panjang
gelombang 405 nm yang proporsional dengan aktivitas ALP. Bufer 2-
amino-2-methyl-1-propanol (AMP) digunakan untuk mempertahankan
reaksi pada pH 10,3 – 10,4. Ion magnesium dan zinc ditambahkan ke
dalam bufer AMP untuk mengaktivasi dan stabilisasi enzim.
29
ALP,Mg2+
,Zn2+
PNPP + AMP P-Nitriphenol + P-AMP
4. Prosedur pengoperasian alat (Ilab 650, 2014).
Langkah-langkah :
a. Menyalakan instrumen
i. Tekan tombol on/off (warna hijau) disebelah kiri instrumen.
ii. Nyalakan PC komputer.
iii. Tunggu sampai status alat ready
iv. Lakukan start up dengan mengklik analysis lalu operation.
v. Kemudian akan muncul menu operation, lalu klik pada kotak
Startup, kemudian tekan Start untuk memulai proses Startup.
Tunggu sampai status alat menjadi ready.
b. Botol Reagen
i. Posisi Botol Reagen
a) Outer ring : Posisi 64 bila menggunakan botol ukuran 25 ml, dan
posisi 32 bila menggunakan botol ukuran 10, 20 dan 50 ml.
b) Inner ring : Posisi 32 untuk botol reagen ukuran 20, 50 dan 100
ml.
ii. Reagen Maps
a) Untuk masuk menu reagen maps bisa melalui control panel pilih
Analysis kemudian pilih reagen map.
b) Kemudian akan tampil Reagent Maps by test. Berisi tampilan
parameter yang telah kita setting.
30
c) Pilih parameter yang kita inginkan lalu tekan select
d) Reagen Maps by Tray Position
Pada menu ini kita dapat melakukan pengecekan barcode atau
volume reagen dengan memberi tanda V pada kolom R.
Kemudian tekan start.
Status Parameter yang tampil akan diberi warna sebagai berikut :
Empty (Red) : Volume reagen habis
Expired (Purple) : Lot reagen telah kadaluarsa
Stability (Orange) : Stabilitas reagen kadaluarsa
Low (Yellow) : Peringatan bahwa volume mau habis
c. Pemeliharaan Harian
i. Automatic
a) Cuci jarum dengan detergent (Startup/Shutdown)
b) Bilas jarum dengan air (Startup/Shutdown)
c) Cuci kuvet dengan detergent (Startup, Shutdown)
d) Bilas kuvet dengan air (Startup/Shutdown)
e) Cuci mixer dengan air (Startup/Shutdown)
f) Bilas mixer dengan air (Startup/Shutdown)
g) Ganti air pada deionized water tank (Startup)
h) Ganti air pada inkubator (Startup)
i) Pengukuran kuvet dengan blanko air (Startup)
j) Baca botol kontainer dengan barcode dan ukur volume reagen
(Startup)
31
k) Pengukuran blanko reagen (startup)
ii. Manual
a) Cek reagen, bath additive dan material lainnya
b) Cek tempat limbah
c) Cek kualitas air
d. Mengerjakan kalibrasi
i. Dari layar utama pilih “ Analysis”
ii. Setelah Analysis di klik, pilih menu “ Cal/QC Material”
iii. Kemudian akan muncul tampilan “ Operation”
iv. Beri tanda V pada kolom Cal & R-Blank dan pilih Select
v. Pilih parameter yang akan dilakukan kalibrasi dan reagent blank :
Klik 1 kolom tes berwarna biru (melakukan reagent blank), klik 2
kolom berwarna hijau (kalibrasi serta reagent blank), klik 3 kolom
warna kuning (kalibrasi saja), klik 4 kolom putih (tidak melakukan
tindakan).
vi. Tekan Ok, letakkan sampel cup yang berisi calibrator sesuai
tempatnya, lalu tekan Start.
e. Quality Control (QC)
i. Dari control panel pilih QC.
ii. Setelah QC di klik, pilih menu QC Setup.
iii. Pilih sampel QC yang akan kita masukkan nilai rentangnya dengan
menekan QC Table.
32
iv. Klik bar Target Value untuk memasukkan nilainya.
v. Setelah mengisi target value tentukan aturan QC yang dipakai dengan
menekan QC Rules.
vi. Running QC
a) Dari layar utama pilih Analysis.
b) Setelah Analysis di klik, pilih menu Operation.
c) Setelah itu beri tanda V pada kolom QC dan pilih select .
d) Pilih parameter yang akan dilakukan pemeriksaan QC dengan
mengklik sampai warna biru.
e) Tekan OK
vii. QC Monitor
a) Pada layar utama pilih QC, lalu QC monitor.
b) Untuk melihat grafik QC kita masuk ke menu QC data.
c) Klik test yang akan dilihat grafik QC nya, kemudian tekan Daily
QC.
f. Mengerjakan sampel
i. Memasukkan data pasien
a) Untuk memasukkan data sampel melalui control panel pilih
analysis kemudian pilih request.
b) Pada kolom sampel ID, masukkan nomor identitas pasien.
Tentukan posisi cup sampel pada kolom position.
c) Pilih test yang akan diperiksa.
d) Tekan demographic untuk mengisi data pasien (nama, alamat).
33
e) Tekan reserve untuk menyimpan data, kemudian kita masukkan
data selajutnya.
f) Sampel yang segera dikerjakan tekan compile.
g) Untuk sampel yang kita reserve, untuk kemudian kita compile,
tekan samples klik pending/reserved, pilih sample ID lalu tekan
compile.
h) Dari layar utama klik analysis, pilih menu operation.
i) Klik sample analysis kemudian tekan start untuk memulai
pemeriksaan.
ii. Melihat hasil
a) Dari menu utama pilih sample.
b) Pilih sample ID yang akan kita lihat hasilnya, lalu klik view
sample.
c) Apabila ingin mengulang test tekan repeat. Ulangi langkah-langkah
seperti kita melakukan pemeriksaan yang di reserved.
d) Tekan close untuk keluar.
G. Kontrol Kualitas Internal
Untuk memperoleh hasil pemeriksaan yang bermutu atau berkualitas serta
dapat dipertanggungjawabkan, maka yang perlu dilakukan sebelum melakukan uji
atau pemeriksaan laboratorium yaitu adanya uji presisi atau ketelitian, serta uji
akurasi atau ketepatan atau validitas analitik. Uji presisi adalah suatu uji yang
digunakan untuk melihat seberapa kedekatan pengukuran pada satu bahan uji
34
yang sama yang dilakukan beberapa kali atau seberapa konsistensi
pemeriksaannya. Uji presisi meliputi uji presisi hari ke hari (day to day) dan uji
presisi sehari (within day), uji presisi day to day yaitu pemeriksaan kualitas
kontrol dilakukan secara rutin setiap hari sehingga dapat diketahui mean, standard
deviation (SD) dan koefisien variasi (KV). Rumus SD = √∑d2/2n dan KV
dihitung dengan menggunakan rumus KV = [(SD/rerata)x100%], SD = Standard
Deviation, d = selisih, mean = rata-rata hasil pemeriksaan berulang dan n =
jumlah sampel. Presisi (ketelitian) sering dinyatakan juga sebagai impresisi
(ketidaktelitian). Semakin kecil nilai KV (%) maka semakin teliti sistem
tersebut/metode tersebut dan sebaliknya (Wijono, 2004; Permenkes, 2013).
Uji akurasi (ketepatan) atau inakurasi (ketidaktepatan) dipakai untuk
menilai adanya kesalahan acak atau sistematik atau keduanya (total). Nilai akurasi
menunjukkan kedekatan hasil terhadap nilai sebenarnya adalah yang telah
ditentukan oleh metode standar. Akurasi dinilai dari hasil pemeriksaan bahan
kontrol dan dihitung sebagai nilai biasnya (d%). Rumus d%=[(mean – NA)/NA],
NA=nilai aktual atau sebenarnya dari bahan kontrol. Nilai d (%) dapat positif atau
negatif. Nilai positif menunjukkan nilai yang lebih tinggi dari seharusnya,
sedangkan nilai negatif menunjukkan nilai yang lebih rendah dari seharusnya
(Wijono, 2004; Permenkes, 2013).
H. Teknik Analisis Data
Data yang telah terkumpul dianalisis secara statistik untuk mendapatkan
mean, standard deviation (SD), median, nilai maksimum dan minimum. Selain itu
35
juga dilakukan uji normalitas untuk mengetahui distribusi data tersebut normal
atau tidak dengan menggunakan uji Shapiro Wilk, apabila p > 0,05 berarti data
terdistribusi normal, dan bila p < 0,05 berarti data tidak terdistribusi secara
normal. Jika data terdistribusi normal selanjutnya dilakukan uji repeated Annova
dilanjutkan uji Paired T test, bila data tidak terdistribusi normal dilakukan
transformasi data log. Setelah dilakukan uji transformasi data log apabila data
terdistribusi normal dilakukan uji repeated Annova dilanjutkan uji Paired T test,
tetapi apabila data tidak terdistribusi normal dilanjutkan uji Friedman dilanjutkan
uji Wilcoxon. Hasil akhir dari uji statistik yaitu apabila nilai p < 0,05 maka dapat
ditarik kesimpulan bahwa hipotesis tersebut terdapat perbedaan yang bermakna,
sedangkan apabila nilai p > 0,05 maka dapat ditarik kesimpulan bahwa hipotesis
tersebut tidak terdapat perbedaan yang bermakna, dengan interval kepercayaan 95
%. Untuk mendukung penelitian ini, hasil analisis diperkuat dengan menggunakan
metode Bland-Altman.
I. Pertimbangan Etik
Penelitian ini telah meminta persetujuan komisi etika penelitian di
Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret/RSDM di Surakarta. Pernyataan
bersedia sebagai subjek penelitian atau inform consent dilakukan terhadap pasien.
36
J. Jadwal Penelitian
No Kegiatan
Waktu
2016 2017
Desember Februari April Mei Juli
1 Pembuatan proposal
2 Pengumpulan proposal
3 Izin penelitian
4 Laporan hasil penelitian
5 Ujian tugas akhir
37
BAB IV
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. HASIL PENELITIAN
Pada bab ini akan diuraikan hasil penelitian tentang perbedaan kadar ALP
serum sebelum dan sesudah waktu tunda 4 dan 8 hari pada suhu kamar yang telah
dilaksanakan di Instalasi Patologi Klinik Rumah Sakit Umum dr. Moewardi
(RSDM) di Surakarta pada bulan April 2017 dengan jumlah sampel yang
didapatkan adalah 31 sampel. Berikut adalah hasil penelitian meliputi uji kualitas
internal (presisi dan akurasi), karakteristik pemeriksaan, serta uji hipotesis
penelitian yang telah dilakukan.
1. Uji Kualitas Internal
Pada uji kualitas internal digunakan untuk mengetahui mutu atau
kualitas hasil pemeriksaan secara internal. Uji kualitas internal meliputi uji
presisi atau ketelitian dan uji akurasi atau ketepatan.
a. Uji Presisi atau Ketelitian
Uji presisi dilakukan untuk melihat konsistensi hasil pemeriksaan
atau kedekatan hasil beberapa pengukuran pada bahan uji yang sama. Uji
presisi yang dilakukan meliputi uji presisi hari ke hari (day to day) yaitu
dengan pemeriksaan satu contoh bahan diulang sepuluh kali pada hari yang
berbeda atau pada saat dilakukan uji kontrol harian. Sedangkan uji kontrol
within day dilakukan pada sehari itu juga sepuluh kali pemeriksaan atau
pada hari yang sama. Pada penelitian disini, peneliti melakukan uji kontrol
38
day to day mengikuti kontrol harian yang rutin dilakukan setiap pagi
sebelum memulai pemeriksaan.
Pada Tabel 1. dibawah didapatkan nilai mean 86,20 dan SD 5,90.
Hasil SD yang didapat tidak melebihi 20% dari mean, sehingga ini
menunjukkan variasi yang kecil. Koefisien variasi dari uji presisi kontrol
ALP yang didapat menunjukkan bahwa hasil lebih kecil dari koefisien
variasi maksimum. Berikut adalah hasil uji presisi day to day pemeriksaan
ALP yang digambarkan dalam Tabel 1.
Tabel 1. Uji Presisi atau Ketelitian Parameter
Pemeriksaan
rerata SD KV (%) KV (%)
maksimum*
ALP (U/L) 86,20 5,90 6,84 7
Keterangan SD: standard deviation, KV : Koefisien variasi
*Sumber : Permenkes (2013).
b. Uji Akurasi atau ketepatan
Uji akurasi dilakukan untuk melihat seberapa dekat nilai
pemeriksaan dengan nilai sebenarnya. Akurasi dilihat dari hasil pemeriksaan
bahan kontrol dan dihitung sebagai d (%). Rumus d% = [(mean – NA)/NA],
NA = nilai aktual atau sebenarnya dari bahan kontrol. Nilai d (%) dapat
positif atau negatif. Nilai positif menunjukkan nilai yang lebih tinggi dari
seharusnya, sedangkan nilai negatif menunjukkan nilai yang lebih rendah
dari seharusnya (Wijono, 2004; Permenkes, 2013).
Pada Tabel 2. didapatkan mean (rerata) dari nilai kontrol harian atau
nilai kontrol ALP setiap hari yang dilakukan yang tidak menyimpang dari
nilai rujukan ALP, sehingga didapatkan simpulan bahwa nilai kontrol ALP
masuk nilai rentang kontrol ALP, artinya pengukuran pemeriksaan nilai
39
kontrol ALP akurat. Berikut adalah uji akurasi yang digambarkan dalam
Tabel 2. berikut ini.
Tabel 2. Uji Akurasi atau Ketepatan Parameter
Pemeriksaan
Nilai rujukan ALP
(rentang)*
Hasil
pengukuran
(Mean)
d% Keterangan
ALP (U/L) 89 (71-107) 86,20 0,03 Masuk rentang
Keterangan : Mean : Rata-rata, d : bias
*Sumber : SeraChem Control (2018).
2. Uji Normalitas
Uji normalitas dilakukan setelah didapatkan data dari pemeriksaan ALP
sebelum dan sesudah waktu tunda 4 dan 8 hari pada suhu kamar. Hal ini
dilakukan untuk mengetahui apakah data yang diperoleh terdistribusi normal
atau tidak. Apabila hasil uji normalitas didapatkan hasil p > 0,05 maka data
terdistribusi normal sehingga dilanjutkan dengan uji statistik parametrik
Repeated Annova dan dilanjutkan uji Paired T test, tetapi apabila didapatkan
hasil sebaliknya p < 0,05 maka asumsi uji normalitas ditolak, atau data tidak
terdistribusi secara normal. Data yang tidak terdistribusi normal kemudian
dilanjutkan dengan transformasi data, selanjutnya dilakukan uji normalitas
setelah dilakukan uji transformasi data tersebut. Apabila sebaran selisih tidak
normal dilakukan uji Friedman dilanjutkan Wilcoxon.
Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk menunjukkan bahwa nilai p kadar
ALP serum pada hari ke 0 adalah 0,001 (< 0,05). Untuk kadar ALP serum
sesudah waktu tunda pada hari ke 4 nilai p adalah 0,001 (< 0,05) dan nilai p
untuk kadar ALP serum sesudah waktu tunda pada hari ke 8 adalah 0,001 (<
0,05). Hal ini dapat disimpulkan bahwa nilai p pada ketiga variabel waktu
40
tersebut lebih kecil atau kurang dari 0,05 (< 0,05) yang berarti data dalam
penelitian ini tidak terdistribusi normal. Data yang tidak terdistribusi normal
kemudian dilanjutkan dengan transformasi data.
Uji Normalitas untuk umur didapatkan p 0,937 > 0,05, sehinnga uji
normalitas umur data terdistribusi normal. Jika distribusi (sebaran) data
normal, maka ukuran pemusatan menggunakan mean, dan menggunakan
ukuran penyebaran SD.
Uji normalitas untuk suhu ruangan laboratorium didapatkan nilai p
0,001 < 0,05 pada suhu pagi maupun suhu siang, sehingga uji normalitas suhu
ruangan laboratorium data tidak terdistribusi normal. Jika distribusi (sebaran)
data tidak terdistribusi normal, maka ukuran pemusatan menggunakan nilai
median dan penyebaran menggunakan nilai minimum dan nilai maksimum.
Berikut adalah uji normalitas Saphiro Wilk, seperti tampak pada Tabel
3. berikut ini.
Tabel 3. Uji Normalitas Saphiro Wilk Parameter p
ALP hari 0
ALP hari 4
ALP hari 8
Umur
Suhu pagi
Suhu siang
0,001
0,001
0,001
0,937
0,001
0,001
Keterangan : ALP : Alkali Fosfatase, p > 0,05 terdistribusi normal.
Sumber : Data diolah 2017.
Hasil uji normalitas transformasi data yang sudah dilakukan uji Saphiro
Wilk menunjukkan bahwa nilai p kadar ALP serum pada hari ke 0 adalah 0,001
(< 0,05). Untuk kadar ALP serum sesudah waktu tunda pada hari ke 4 nilai p
adalah 0,005 (< 0,05) dan nilai p untuk kadar ALP serum sesudah waktu tunda
41
pada hari ke 8 adalah 0,019 (< 0,05). Hal ini dapat disimpulkan bahwa nilai p
pada ketiga variabel waktu tersebut lebih kecil atau kurang dari 0,05 (< 0,05)
yang berarti data dalam penelitian ini tidak terdistribusi normal. Ukuran
pemusatan distribusi data yang tidak normal dilihat pada data median untuk
ukuran pemusatan, dan untuk ukuran penyebaran dilihat pada nilai minimum
dan maksimum. Data yang tidak terdistribusi normal ini selanjutnya akan
dilanjutkan ke uji analisis berikutnya, yaitu uji non parametrik Friedman serta
dilanjutkan dengan uji Wilcoxon. Tabel uji normalitas transformasi data
digambarkan seperti pada Tabel 4. berikut ini.
Tabel 4. Uji Normalitas Transformasi Data Log Parameter p
ALP hari 0
ALP hari 4
ALP hari 8
0,001
0,005
0,019
Keterangan : ALP : Alkali Fosfatase, p > 0,05 terdistribusi normal.
Sumber : Data diolah 2017.
3. Uji Karakteristik Subjek penelitian
Uji karakteristik dari subjek penelitian ini dilakukan pada 31 orang
pasien dengan pemeriksaan ALP baik yang berjenis kelamin laki-laki maupun
perempuan dewasa di Instalasi Patologi Klinik RSDM di Surakarta.
Tabel 5. Menunjukkan bahwa dari 31 sampel subjek penelitian
didapatkan jumlah wanita yang lebih banyak dijadikan subjek penelitian yaitu
berjumlah 17 orang atau 54,80 %, sedangkan pada pria berjumlah 14 orang
atau 45,20 %. Mean umur dari subjek penelitian adalah 53,10 tahun, dengan
SD adalah 15,89 tahun. Karakteristik dari suhu kamar pada penelitian ini,
karena data tidak terdistribusi normal maka dengan melihat nilai median yaitu
22ºC pada suhu pagi, dengan suhu terendah adalah 21ºC, dan suhu tertinggi
42
adalah 23ºC. Pada suhu siang hari didapatkan median 23ºC, dengan suhu
terendah adalah 21ºC, dan suhu tertinggi adalah 24ºC. Suhu ruang ideal
laboratorium adalah suhu 20-25ºC, sehingga pada penelitian ini sudah
didapatkan suhu yang ideal seperti tampak pada lampiran suhu ruang
laboratorium pada bulan April 2017. Uji karakteristik ini digambarkan
berdasarkan uji analisis deskriptif pada Tabel 5. di bawah ini.
Tabel 5. Uji Karakteristik Subjek Penelitian Variabel n Rerata ± SD Median (Min – Maks)
Umur (th)# 31 53,10 ± 15,89
Jenis kelamin [n (%)]
Pria 14 (45,20 %)
Wanita
Suhu (ºC)*
Pagi
Siang
17 (54,80 %)
22ºC
23ºC
(21-23ºC)
(21-24ºC)
Keterangan :# Terdistribusi normal, * Tidak terdistribusi normal, Rerata: Rata-rata,
SD: Standart deviation, Minimal : Nilai terendah, Maksimal : Nilai tertinggi, n:
jumlah subjek.
Sumber : Data diolah 2017.
4. Uji Deskriptif Kadar ALP Serum
Hasil median kadar ALP serum pada hari ke 0 adalah 73 U/L, dengan
kadar terendah 42 U/L dan kadar tertimggi 419 U/L. Hasil median kadar ALP
serum pada hari ke 4 adalah 75 U/L, dengan kadar terendah 40 U/L dan kadar
tertinggi 372 U/L, hasil median untuk kadar ALP serum pada hari 8 adalah 79
U/L, dengan kadar terendah 36 U/L dan kadar tertinggi 423 U/L. Berikut
adalah gambaran deskriptif kadar ALP serum seperti pada Tabel 6. dibawah
ini.
Tabel 6. Hasil Pemeriksaan Kadar ALP Hari 0,4,8 Kadar ALP Serum (U/L) n Median Min Maks
Hari 0
Hari 4
Hari 8
31
31
31
73
75
79
42
40
36
419
372
423
43
5. Uji Statistik
Setelah dilakukan uji normalitas Saphiro Wilk dan didapatkan data yang
tidak terdistribusi normal, kemudian dilakukan transformasi data log, data
masih tidak terdistribusi normal, maka penelitian selanjutnya dilakukan dengan
uji Friedman dan uji Wilcoxon yang dilakukan untuk mengetahui perbedaan
kadar ALP serum antara 0 dan 4 hari, antara 0 dan 8 hari, dan pada 4 dan 8 hari
pada suhu kamar (20-25°C).
Pada Tabel 7. didapatkan hasil uji Friedman dengan nilai probabilitas
(p) sebesar 0,051 lebih dari 0,05 (> 0,05) sehingga dapat disimpulkan bahwa
tidak terdapat perbedaan yang bermakna antara kadar ALP serum hari 0, hari 4
dan hari 8 pada suhu kamar. Selanjutnya dilakukan uji analisis Wilcoxon.
Berikut adalah Tabel. 7 perbedaan kadar ALP serum hari 0,4,8.
Tabel 7. Perbedaan Kadar ALP Serum Hari 0,4,8
p Keterangan
ALP 0,051 Tidak terdapat perbedaan yang bermakna
Keterangan : Uji Friedman, p < 0,05 terdapat perbedaan bermakna.
Sumber : Data diolah 2017.
Pada Tabel Uji 8. dibawah didapatkan hasil antara 2 kelompok 0 dan 4
hari dengan hasil p = 0,922 yang lebih besar dari 0,05 (> 0,05),yang berarti
tidak ada perbedaan yang bermakna antara hari ke 0 dan hari ke 4. Kemudian
antara hari 0 dan hari 8 di dapatkan hasil p = 0,372 yang lebih besar dari 0,05(
> 0,05), dan antara hari 4 dan hari 8 didapatkan hasil p= 0,256 yang lebih besar
dari 0,05(> 0,05). Perbedaan kadar ALP serum antara hari ke 0 dengan hari ke
4 tidak terdapat perbedaan yang bermakna, antara hari ke 0 dengan hari ke 8
Keterangan : U/L : Unit/Liter; Minimum: Batas terendah; Maksimum: Batas tertinggi. n:
Jumlah. Sumber : Data diolah 2017.
44
tidak terdapat perbedaan yang bermakna, antara hari ke 4 dengan hari ke 8
tidak terdapat perbedaan yang bermakna.
Berikut adalah uji untuk membandingkan kadar ALP serum antara hari
0-4, 0-8 dan 4-8, seperti tampak pada Tabel 8. berikut ini.
Tabel 8. Perbedaan Kadar ALP Serum Hari 0-4, 0-8, 4-8 Parameter p Keterangan
ALP hari 0-4
ALP hari 0-8
ALP hari 4-8
0,922
0,372
0,256
Tidak terdapat perbedaan yang bermakna
Tidak terdapat perbedaan yang bermakna
Tidak terdapat perbedaan yang bermakna
Keterangan: Uji Wilcoxon, p < 0,05 terdapat perbedaan yang bermakna.
Sumber : Data diolah 2017.
Interpretasi box plot pada Gambar 6. dibawah ini untuk menilai
distribusi data secara deskriptif yaitu menggambarkan karakteristik dari
distribusi data dan menunjukkan nilai outlier dan nilai ekstrim. Berikut adalah
gambar box plot kadar ALP serum (Gambar 6).
Gambar 6. Interpretasi box plot kadar ALP
p =
p =
p =
45
Hasil analisis uji beda (Friedman dan Wilcoxon) diperkuat dengan
menggunakan metode Bland-Altman untuk mendukung analisis pada penelitian
ini. Metode Bland-Altman digunakan untuk menggambarkan perbedaan dua
rerata pengukuran, salah satu pemeriksaan digunakan sebagai rujukan atau gold
standart. Seperti terlihat pada Grafik 1. dibawah menggambarkan diagram plot
Bland-Altman dari selisih dan rerata dua pengukuran kadar ALP hari 0 dan hari
4, dengan kadar ALP hari 0 sebagai acuan dalam pemeriksaan. Bland-Altman
tes juga digunakan untuk mengetahui outliers (nilai pengamatan yang berbeda
dengan pengamatan yang lain). Garis horisontal menunjukkan selisih rerata
kedua pengukuran (mean: -0,65), hasil tersebut ditambahkan dan dikurangi
dalam 1,96 kali SD. Grafik plot Bland-Altman menunjukkan hasil terlihat 1
sampel di luar nilai -1,96 SD dan 1 sampel di luar 1,96 SD. Hasil pengamatan
sampel diatas hanya ada 2 outliner. Hasil diatas diasumsikan bahwa 29 sampel
yang lain berada dalam ± 1,96 SD diartikan nilai tersebut mempunyai
kesamaan dengan hari 0 yang ditetapkan sebagai rujukan atau gold standart.
SD : 24,78
47,92
Mean :-0,65
-49,21
Grafik 1. Hasil Analisis Bland-Altman Kadar ALP hari 0 dan Hari 4
46
Nilai p pada metode Bland-Altman seperti tampak pada Tabel 9. Yaitu
didapatkan nilai p = 0,886, sehingga secara statistik rerata selisih tidak berbeda
dengan nol.
Tabel 9. Kadar ALP 0- ALP 4 Metode Bland-Altman
Nilai
Sample-size 31
p (mean=difference) -0,65
Lower limit -9,73
Upper 8,44
p 0,886
SD 24,78
Sumber : Data diolah 2017, SD : Standard deviation
Grafik plot Bland-Altman digunakan untuk menggambarkan perbedaan
dua rerata pengukuran, salah satu pemeriksaan digunakan sebagai rujukan atau
gold standart. Pada Grafik 2. dibawah menggambarkan diagram plot Bland-
Altman dari selisih dan rerata dua pengukuran kadar ALP hari 0 dan hari 8,
dengan kadar ALP hari 0 sebagai acuan dalam pemeriksaan. Garis horisontal
menunjukkan selisih rerata kedua pengukuran (mean: -4,61), hasil tersebut
ditambahkan dan dikurangi dalam 1,96 kali SD. Grafik plot Bland-Altman
menunjukkan hasil terlihat 2 sampel di luar nilai -1,96 SD dan 1 sampel di luar
1,96 SD. Hasil pengamatan sampel diatas hanya ada 3 outliner. Hasil diatas
diasumsikan bahwa 28 sampel yang lain berada dalam ± 1,96 SD diartikan
nilai tersebut mempunyai kesamaan dengan hari 0 yang ditetapkan sebagai
rujukan atau gold standard.
47
Berikut adalah grafik Bland-Altman antara kadar ALP serum hari 0 dan
hari 8 (Grafik 2.).
Grafik 2. Hasil Analisis Bland-altman Kadar ALP hari 0 dan Hari 8
Nilai p pada metode Bland-Altman seperti tampak pada Tabel 10. Yaitu
didapatkan nilai p = 0,359, sehingga secara statistik rerata selisih tidak berbeda
dengan nol.
Tabel 10. Kadar ALP 0- ALP 8 Metode Bland-Altman Nilai
Sample-size 31
p (mean=difference) -4,61
Lower limit -14,73
Upper 5,51
p 0,359
SD 27,59
Sumber : Data diolah 2017, SD : Standard deviation
SD : 27,59
49,46
Mean :-4,61
-58.68
48
B. PEMBAHASAN
Mutu hasil suatu pemeriksaan laboratorium sangat dipengaruhi oleh salah
satunya kontrol kualitas internal, sehingga hasil pemeriksaan dapat dipertanggung
jawabkan. Kontrol kualitas internal itu meliputi uji presisi atau ketelitian, dan uji
akurasi atau ketepatan. Uji presisi dilakukan untuk melihat konsistensi hasil
pemeriksaan. Uji presisi meliputi uji presisi day to day (uji presisi hari ke hari),
dan uji presisi within day (uji presisi sehari). Uji presisi yang dilakukan disini
adalah uji presisi day to day, yaitu dengan melakukan kontrol ALP yang rutin
dikerjakan setiap hari sebelum melakukan pemeriksaan. Hasil dari kualitas kontrol
dengan uji presisi day to day yang dilakukan pada bulan April 2017, yaitu
didapatkan hasil mean ALP 86,20 U/L dengan (SD) 5,90. Dari hasil perhitungan
hasil SD yang didapat tidak melebihi 20 % dari nilai mean, ini berarti
menunjukkan variasi yang kecil. Semakin kecil nilai koefisien variasi (%) berarti
menunjukkan bahwa semakin teliti metode tersebut. Koefisien variasi yang
didapat juga menunjukkan nilai yang lebih kecil dari KV maksimum, hal ini
menunjukkan bahwa uji presisi tersebut baik.
Pada uji akurasi atau ketepatan dilakukan untuk mengetahui seberapa
dekat nilai pemeriksaan dengan nilai sebenarnya.
Pada uji ini didapatkan nilai
mean dari pengukuran kontrol ALP adalah 86,20 U/L, sedangkan nilai rentang
untuk kontrol ALP yaitu 71 – 107 U/L. Berarti mean dari kontrol ALP berada
antara nilai rentang tersebut, sehingga dapat disimpulkan bahwa nilai kontrol ALP
tersebut masuk nilai range.
49
Pada penelitian ini menggunakan uji normalitas shapiro-wilk sebelum
menentukan uji selanjutnya masuk ke uji repeated Annova dengan uji Paired T
test ataupun uji Friedman dengan uji Wilcoxon. Uji saphiro-wilk ini dilakukan
pada sampel yang berjumlah kurang dari 50 sampel. Uji normalitas didapat bahwa
data tidak terdistribusi secara normal sehingga perlu dilakukan uji log
transformasi untuk menormalkan data. Uji log transformasi kemudian diuji
normalitas Saphiro-Wilk kembali masih didapatkan nilai p < 0,05. Nilai p pada
hari 0 adalah 0,001, nilai p pada hari 4 adalah 0,005, dan nilai p pada hari 8 adalah
0,019 semua hasil lebih kecil dari 0,05 (< 0,05) yang berarti dapat disimpulkan
bahwa data dalam penelitian ini tidak terdistribusi normal. Data yang tidak
terdistribusi normal ini selanjutnya akan dilakukan uji statistik berikutnya, yaitu
uji non-parametrik Friedman dan selanjutnya akan dilanjutkan dengan uji
Wilcoxon. Uji normalitas juga dilakukan untuk mengetahui data terdistribusi
normal atau tidak pada umur dan suhu laboratorium. Uji normalitas pada umur
didapatkan hasil p adalah 0,937 > 0,05 berarti pada umur data terdistribusi secara
normal. Uji normalitas suhu laboratorium pada pagi dan siang hari didapatkan
hasil sama yaitu p 0,001 < 0,05, berarti bahwa pada suhu laboratorium data tidak
terdistribusi secara normal.
Penelitian ini ditetapkan jumlah sampel adalah sebesar 33 sampel pada
masing-masing kelompok, karena sampel diikuti 4 dan 8 hari waktu tunda maka
perlu dilakukan follow up sampel, dengan memperhitungkan kasus drop out
sebesar 10 %. Pada penelitian ini terjadi kasus drop out pada sampel dikarenakan
dua sampel tumpah, sehingga sampel yang didapat menjadi 31 sampel, sehingga
50
sampel yang dipakai pada pemeriksaan ini berjumlah 31 sampel dan masih diatas
batas minimal sampel yaitu 30 sampel.
Data karakteristik yang didapat pada penelitian yang dilakukan di Instalasi
Patologi Klinik Rumah Sakit dr. Moewardi di Surakarta pada bulan April 2017,
didapatkan data yang berjumlah 31 sampel pasien laki-laki ataupun perempuan
dewasa. Subjek penelitian ini sedikit didominasi oleh perempuan dengan jumlah
17 sampel (54,80 %), sedangkan sisanya adalah laki-laki dengan jumlah 14
sampel (45,20 %).
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan hasil
ALP serum yang signifikan antara hari 0, hari 4, dan hari 8 pada suhu kamar.
Penelitian ini dilakukan karena pemeriksaan di laboratorium klinik yang
terkadang tidak dapat segera dikerjakan karena berbagai sebab, seperti
pemadaman listrik, reagen habis, jumlah sampel terlalu banyak, dan terjadi
kerusakan alat yang tidak segera dapat diperbaiki karena terkendalanya teknisi.
Sampel yang tidak dapat dikerjakan sendiri oleh laboratorium akan dirujuk ke
laboratorium rujukan, terkadang membutuhkan waktu yang cukup lama dalam
ekspedisi pengiriman sampel. Untuk itu harus diperhatikan persyaratan
pengiriman sampel yang baik dan benar. Sampel sebaiknya tidak terkena sinar
matahari langsung, dan harus memperhatikan suhu pengiriman sampel.
Sampel yang tidak segera dapat diperiksa dapat disimpan dengan
memperhatikan jenis pemeriksaan. Penyimpanan sampel dalam bentuk serum
untuk pemeriksaan ALP pada suhu kamar (20oC
– 25
oC) selama 7 hari (> 7 hari
51
aktifitas turun 1 %). Dalam lemari es (2-8oC) dan -20
oC selama 7 hari (Sacher &
Mc pherson, 2004; Permenkes, 2013).
Pada uji karakteristik suhu ruangan di Laboratorium RS dr. Moewardi di
Surakarta pada bulan April 2017 didapatkan hasil median pada suhu pagi hari
yaitu 22ºC dengan suhu minimum yaitu 21ºC, dan suhu maksimum 23ºC.
Sedangkan suhu pada siang hari didapatkan nilai median yaitu 23ºC dengan suhu
minimum 21ºC dan suhu maksimum 24ºC, sehingga dapat disimpulkan bahwa
suhu ruangan di laboratorium tersebut sudah sesuai dengan suhu ideal
laboratorium yaitu 20-25ºC.
Data karakteristik kadar ALP serum pada hari ke 0 didapatkan median 73
U/L dengan nilai minimum 42 U/L dan nilai maksimum 419 U/L. Kadar ALP
serum pada hari ke 4 didapatkan nilai median 75 U/L dengan nilai minimum 40
U/L dan nilai maksimum 372 U/L. Kadar ALP serum pada hari ke 8 didapatkan
nilai median 79 U/L dengan nilai minimum 36 U/L dan nilai maksimum 423 U/L.
Pada uji Friedman didapatkan hasil p adalah 0,051, selanjutnya pada uji
Wilcoxon didapatkan hasil p antara kadar ALP hari 0 dengan ALP hari 4 adalah p
= 0,922. Kadar ALP hari 0 dengan hari 8 adalah p = 0,372. Hasil p antara hari 4
dengan hari 8 adalah p = 0,256. Dari ke 3 probabilitas (p) tersebut semuanya
didapatkan nilai p yang lebih besar dari 0,05 (> 0,05) yang berarti menyatakan
bahwa tidak terdapat perbedaan yang bermakna, sehingga dapat disimpulkan
bahwa tidak terdapat perbedaan antara kadar ALP serum sebelum dan sesudah
waktu tunda 4 dan 8 hari pada suhu kamar. Kesimpulan tersebut diatas sesuai
dengan hipotesis antara hari 0 dan hari 4 pada suhu kamar (20-25°C), tetapi tidak
52
sesuai dengan hipotesis antara hari 0 dan hari 8 maupun hari 4 dan hari 8 pada
suhu kamar (20-25°C). Berarti bahwa kadar ALP serum antara hari 0, hari 4 dan
hari 8 tidak terjadi perbedaan secara signifikan.
Grafik plot Bland-Altman antara kadar ALP hari 0 dengan hari 4
menunjukkan hasil terlihat 1 sampel di luar nilai -1,96 SD dan 1 sampel di luar
1,96 SD. Hasil pengamatan sampel diatas hanya ada 2 outliner. Hasil diatas
diasumsikan bahwa 29 sampel yang lain berada dalam ± 1,96 SD diartikan nilai
tersebut mempunyai kesamaan dengan hari 0 yang ditetapkan sebagai rujukan
atau gold standart. Pada uji Bland-Altman nilai p = 0,886, sehingga secara
statistik rerata selisih tidak berbeda dengan nol.
Grafik plot Bland-Altman antara kadar ALP hari 0 dengan hari 8
menunjukkan hasil terlihat 2 sampel di luar nilai -1,96 SD dan 1 sampel di luar
1,96 SD. Hasil pengamatan sampel diatas hanya ada 3 outliner. Hasil diatas
diasumsikan bahwa 29 sampel yang lain berada dalam ± 1,96 SD diartikan nilai
tersebut mempunyai kesamaan dengan hari 0 yang ditetapkan sebagai rujukan
atau gold standart. Pada uji Bland-Altman nilai p= 0,359, sehingga secara statistik
rerata selisih tidak berbeda dengan nol.
Penelitian lain yang pernah dilakukan oleh Cuhadar (2012) dengan judul
Stabilitas Biokimia Serum pada Tabung Gel atau Tanpa Gel pada berbagai
Kondisi Penyimpanan, didapatkan hasil ALP yang relatif stabil selama 72 jam (3
hari) menggunakan tabung gel atau tanpa gel suhu kamar ataupun dingin.
Penelitian Nwosu (2009) dengan judul Perubahan Nilai AST, ALT dan ALP dari
Plasma dan Serum Simpan pada Suhu Kulkas dan Suhu Kamar sampai Lima Hari
53
menunjukkan bahwa tidak berbeda secara signifikan untuk hasil ALP serum dan
plasma pada suhu dingin selama 30 jam, dan pada suhu kamar selama 10 jam
(Nwosu, 2009; Cuhadar, 2012).
Pada penelitian tersebut di atas menunjukkan adanya variasi terkait dengan
stabilitas penyimpanan ALP pada suhu kamar, karena didapatkan data yang saling
bertentangan sehingga diperlukan pengujian kembali stabilitas penyimpanan ALP
serum pada suhu kamar. Menurut Sacher & Mc Pherson, (2004) pemeriksaan
ALP relatif stabil selama beberapa waktu, walaupun serum yang disimpan pada
suhu kamar memperlihatkan sedikit peningkatan aktifitas ALP dalam 1-4 hari.
Serum yang didinginkan memperlihatkan peningkatan aktifitas ALP yang lebih
lambat dari pada suhu kamar.
Pada penelitian ini didaptkan hasil antara kadar ALP hari ke 0, hari ke 4,
dan hari ke 8 tidak menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan. Sehingga
dapat disimpulkan bahwa pemeriksaan ALP masih dapat dikerjakan sampai hari
ke 8 pada suhu kamar (20-25ºC), namun harus diperhatikan kondisi ruangan yang
menggunakan air conditioner (AC), dan dipastikan berada dalam rentang suhu
diantara 20-25°C.
Kelemahan pada penelitian ini belum maksimal di dalam mengurangi
paparan cahaya, karena penyimpanan di suhu kamar dan kurang memperhatikan
tentang paparan cahaya lampu UV, sehingga terdapat faktor dari luar yang
mempengaruhi penelitian.
Adapun keterbatasan dalam penelitian ini adalah prinsip kerja berdasarkan
penyerapan cahaya oleh suatu larutan. Jumlah cahaya yang diserap
54
memungkinkan pengukuran jumlah zat penyerap dalam larutan secara kuantitatif.
Karena pembacaan berdasar kolorimetri, maka sampel harus terhindar dari faktor
yang menyebabkan hasil tidak dapat terbaca. hemolisis dapat menyebabkan
kesalahan deteksi, karena serapan radiasi dapat terpengaruh dan menyebabkan
kesalahan analisis. Pada metode ini juga tidak dapat mendeteksi isoenzim-
isoenzim ALP, sehingga isoenzim ALP hati, tulang, plasenta dan usus tidak dapat
dibedakan. Sehingga untuk penelitian selanjutnya dapat dipakai metode yang
lainnya seperti metode HPLC, serta metode fraksionasi panas.
Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah bersifat penelitian
observasional analitik dengan pendekatan cross sectional. Keterbatasan pada
metode ini adalah karena pada penelitian ini pengamatan objek studi hanya sekali
dan hanya pada periode tertentu saja, tidak seperti penelitian cohort yang
mengikuti perjalanan penelitian.
55
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
Bab ini merupakan bagian akhir dari hasil penelitian yang menguraikan
tentang kesimpulan hasil pembahasan dan saran berdasarkan hasil penelitian yang
telah dilakukan.
A. KESIMPULAN
1. Tidak terdapat perbedaan kadar ALP serum antara 0 hari dan 4 hari pada suhu
kamar 20-25°C (p = 0,922).
2. Tidak terdapat perbedaan kadar ALP serum antara 0 hari dan 8 hari pada suhu
kamar 20-25°C (p = 0,372).
3. Tidak terdapat perbedaan kadar ALP serum antara 4 hari dan 8 hari pada suhu
kamar 20-25°C (p = 0,256).
B. SARAN
Berdasarkan kesimpulan hasil penelitian, maka peneliti memberi saran
pada penelitian ini sebagai berikut :
1. Pentingnya memperhatikan tahapan-tahapan yang harus dilakukan pada
pemeriksaan laboratorium yang meliputi tahap pra analitik, analitik, pasca
analitik secara baik dan benar, dan sesuai dengan petunjuk standar pemeriksaan
laboratorium yang baik dan benar. Pada tahap pra analitik harus diperhatikan
bahwa serum yang didapat harus benar-benar terbebas dari hemolisis, karena
56
hemolisis dapat menyebabkan kesalahan deteksi dan menyebabkan kesalahan
dalam analisis, sehingga hasil yang keluar tidak sesuai dengan hasil
sebenarnya.
2. Sebaiknya diperhatikan tentang pengaruh faktor paparan cahaya pada
pemeriksaan enzim ALP. Karena pengaruh paparan cahaya dapat
mempengaruhi hasil penelitian.
3. Pada kesimpulan yang didapat tidak terdapat perbedaan kadar ALP serum
sampai 8 hari pada suhu kamar (20-25°C), saran dari peneliti walaupun kadar
ALP serum stabil sampai 8 hari pada suhu kamar (20-25°C), sebaiknya
pemeriksaan menggunakan serum segar (tanpa penundaan) dan melakukan
pemeriksaan sesegera mungkin supaya diagnostik segera dapat diketahui.
4. Saran selanjutnya dengan menambah jumlah reagen untuk pemeriksaan ALP,
sehingga tidak perlu untuk merujuk pemeriksaan ALP, sehingga pemeriksaan
ALP segera dapat dikerjakan tanpa mengalami penundaan.
5. Pada penelitian ini peneliti hanya meneliti tentang pemeriksaan ALP saja, tidak
meneliti pemeriksaan enzim selain ALP, sehingga tidak diketahui apakah
pemeriksaan enzim yang lain tersebut juga stabil pada suhu kamar (20-25°C )
atau tidak, sehingga peneliti menyarankan untuk penelitian selanjutnya tentang
stabilitas pemeriksaan enzim selain ALP pada suhu kamar (20-25°C) maupun
suhu kulkas (4°C).
57
DAFTAR PUSTAKA
Bakta, I.M., 2006. Hematologi Klinik Ringkas. Jakarta: EGC.
Bintang, M., 2010. Biokimia Teknik Penelitian. Jakarta: Erlangga.
Bishop, M., Fody, E., 2010. Clinical Chemistry. Techniques, Principles,
Correlations. Philadelphia : Wolters Kluwer.
Cuhadar, S., Atay, S., Koseoglu, M., Dirican, A., 2012. Stability studies of
common biochemical analytes in serum separator tubes with or without
gel barrier subjected to various storage conditions. The journal of
Croation society of medical biochemistry and laboratory medicine.
Biochemia Medica. Biochem Med (Zagreb). 22(2): 202-214.
http://www.biochemia-medica.com/.
Dahlan, S., 2014. Statistik Untuk Kedokteran Dan Kesehatan: Deskriptis,
Bivariat, dan Multivariat. Jakarta : Epidemioligi Indonesia.
Divya., Jayavardhanna., 2010. Effect of temperature and storage time on
hepatobiliary enzyme activities in goat serum. Veterinary World. Vol 3(6)
: 277-279.
Hardjoeno, H., 2003. Interpretasi Hasil Tes Laboratorium Diagnostik. Makasar :
LEPHAS.
Hartini,S., Suryani, M., 2016. Uji kualitas serum simpanan terhadap kadar
kolesterol dalam darah di Poltekkes Kemenkes Kaltim. Jurnal Ilmiah
Manuntung. Vol 2(1) : 65-69
Hartley, A., 2006. Fuel Poverty. Birmingham : West Midlands Public Health
Obsevatory.
Heins, M., Heil, W., Withold, W., 1995. Storage of serum or whole blood samples
? Effects of time and temperature on 22 serum analytes. Eur J Clin Chem
Clin Biochem. Vol 33 (4) : 231-238.
IFCC., 2011. Alkaline Phosphatase IFCC. http://www.mti-
diagnostics.com/produktbeschreibung/bulkware/-alkaline-phosphatase-
ifcc/index.html.
ILab 650., 2014. Standart Prosedur Operasional. Surakarta: PKRSDM
IL Test., 2012. Alkaline Phosphatase. Clinical Chemistry. Milano:
Instrumentation Laboratory.
Jayavardhanna., Divya., 2011. Comparative study and storage stability of serum
hepatobiliary enzyme activities in Murrah buffaloes. Buffalo Buletin. Vol
30 No 3.
57
58
Kee, J.L.F., 2014. Pedoman Pemeriksaan Laboratorium & Diagnostik. Jakarta :
Buku Kedokteran EGC
Kiswari, R., 2014. Hematologi & Transfusi. Jakarta: Penerbit Erlangga.
Millan, J.L., 2006. Alkaline phosphatases. Structure, substrate specificity and
fuctional relatedness to other members of a large superfamily of enzyme.
Purinergic signaling. Vol 2 (2).
Nwosu, O.K., Aloh, G.S., Ihedioha, J.L., 2009. Changes in ALT, AST and ALP
values of plasma and serum samples stored at refrigerator (4ºC) and room
temperature (32 ºC) for up to five days. Bio-Research. Vol 7. No 2
Permenkes RI., 2013. Cara Penyelenggaraan Laboratorium Klinik yang Baik.
Jakarta : Departemen Kesehatan.
Pincus, M. R., Pherson, R. A., 2011. Henry’s Clinical Diagnosis and Management
by Laboratory Methods. Philadelphia: Elsevier Saunders.
Sacher, R.A., Mc Pherson, R.A., 2004., Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan
Laboratorium. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran.
Sadikin, M., 2002. Biokimia Darah. Jakarta : Widya Medika.
Sastroasmoro, S., 2007. Dasar-dasar Metodologi Penelitian Klinis. Jakarta :
Sagung Seto
Seita, A., 2013. Biochemistry Tests Section. Healt Department. Amman : Lab
Guide.
SeraChem., 2018. Control Clinical Chemistry. IL Test: Ilab Taurus.
Sharma, U., Pal, D., Prasad, R., 2014. Alkaline phosphatase : An Overview.
Indian J Clin Biochem. Vol 29 (3).
Siswanto, S., Suyanto., Susila., 2013. Metodelogi Penelitian Kesehatan dan
Kedokteran. Yogyakarta : Bursa Ilmu.
Sugiyono., 2010. Metode Penelitian Kuantitatif Kualitatif & RND. Bandung :
Alfabeta.
Syed, D. B., 2009. Alkaline phosphatase. Inside methods in clinical chemistry an
accessory work. Kaplan & Pesce’s Clinical Chemistry : Teory Analisys and
Correlation. Published by Mosby. Page 90-100.
Wijono, W., Wiadyana., Nendrosuwito, D., 2004. Pedoman Praktek
Laboratorium yang Benar (Good Laboratory Practise). Departemen
Kesehatan RI. Jakarta: Dirjen Yanmed, Dirjen LabKes.
Westgard, J.O., 2009. Wesgard Rules and Multirules.
https://www.westgard.com/the-role-of-rules.htm.
59
WHO., 2010., WHO guidelines on drawing blood : Best Practices in Phlebotomy.
Geneva : WHO., http://www.who.int/iris/handle/10665/44294.
Widmann, F. K., 2000. Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium.
Jakarta : EGC.
Wilson. D., 2008. Manual of Laboratory & Diagnostic Test. New York: The Mc
Graw – Hill Companies.
59
L
A
M
P
I
R
A
N
60
Lampiran 1. Pengajuan Ijin Penelitian
61
Lampiran 2. Bukti Pengajuan Kelaikan Etik
62
Lampiran 3. Kelaikan Etik
63
Lampiran 4. Surat Pengantar Penelitian
64
Lampiran 5. Lembar Pemberian Informasi
65
Lampiran 6. Lembar Persetujuan Mengikuti Penelitian
66
LEMBAR DATA PASIEN
1. Nomor rekam medis :.................................................................................
2. Nama :.................................................................................
3. Tanggal lahir :............/.............../.....................(Umur..........tahun)
4. Jenis kelamin : Laki-laki/Perempuan*)
5. Tinggi Badan :............kg, Berat Badan:...........kg, BMI:.......kg/m2
6. Alamat :.................................................................................
7. Jumlah sampel kurang...................................................................Ya/tidak*)
8. Penempatan sampel sesuai tabung serum (penutup karet merah)....Ya/tidak
9. Sampel lipemik.................................................................................Ya/tidak
10. Sampel
lisis.......................................................................................Ya/tidak
11. Sampel
ikterik...................................................................................Ya/tidak
Keterangan: *)
Coret yang tidak perlu
Lampiran 7. Lembar Data Pasien
67
Lampiran 8. Surat Pernyataan Selesai Penelitian
68
Lampiran 9. Quality Control Internal
69
Lampiran 10. Data Subjek Penelitian
DAFTAR DATA PASIEN ATAU SUBJEK PENELITIAN
PERBEDAAN KADAR ALP SERUM SEBELUM DAN SESUDAH WAKTU
TUNDA 4 DAN 8 HARI PADA SUHU KAMAR DI INSTALASI
PATOLOGI KLINIK RSDM DI SURAKARTA
NO USIA JENIS KELAMIN
PEMERIKSAAN HARI 0
PEMERIKSAAN HARI 4
PEMERIKSAAN HARI 8
1 36 th L 419 372 423 2 52 th L 53 57 77 3 53 th L 129 119 137
4 79 th P 42 40 46 5 20 th L 68 76 64 6 48 th L 70 75 61 7 52 th P 97 93 107 8 55 th L 67 115 133 9 49 th P 88 95 101 10 63 th P 107 117 91 11 41 th P 59 55 63 12 25 th L 67 65 80 13 67 th L 63 68 51 14 64 th P 105 89 103 15 74 th L 74 71 79 16 39 th L 65 61 70 17 84 th P 66 71 52 18 59 th P 73 71 78 19 47 th P 81 75 79 20 66 th L 60 60 67 21 30 th L 45 45 36 22 50 th P 85 92 54 23 56 th P 82 78 90 24 49 th P 121 58 61 25 51 th L 131 141 113 26 78 th P 70 67 82 27 29 th L 90 184 197 28 70 th P 60 65 51 29 57 th P 203 192 222 30 41 th P 97 92 103 31 62 th P 68 66 77
70
Lampiran 11. Data Suhu Ruangan Laboratorium
SUHU RUANGAN BULAN APRIL 2017
Tanggal
Suhu jam 08.00 Suhu jam 14.00
01-Apr
03-Apr
04-Apr
05-Apr
06-Apr
07-Apr
08-Apr
10-Apr
11-Apr
12-Apr
13-Apr
15-Apr
17-Apr
18-Apr
19-Apr
20-Apr
21-Apr
22-Apr
25-Apr
26-Apr
27-Apr
28-Apr
29-Apr
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
21◦C
21◦C
22◦C
22◦C
23◦C
22◦C
22◦C
23◦C
22◦C
22◦C
22◦C
22◦C
23◦C
23◦C
23◦C
23◦C
23◦C
24◦C
23◦C
23◦C
23◦C
22◦C
23◦C
22◦C
21◦C
22◦C
24◦C
24◦C
23◦C
23◦C
24◦C
23◦C
23◦C
23◦C
23◦C
71
Lampiran 12. Uji Statistik
Uji Presisi
One-Sample Statistics
N Mean Std. Deviation Std. Error Mean
alp
10 86,20 5,903 1,867
One-Sample Test
Test Value = 89.5
t df Sig. (2-tailed) Mean
Difference
95% Confidence Interval of the
Difference
Lower Upper
alp -1,768 9 ,111 -3,300 -7,52 ,92
72
Uji Normalitas Saphiro Wilk
Case Processing Summary
waktu Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
kadar alp
hari 0 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
hari 4 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
hari 8 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
Tests of Normality
waktu Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
kadar alp
hari 0 ,261 31 ,000 ,545 31 ,000
hari 4 ,270 31 ,000 ,634 31 ,000
hari 8 ,219 31 ,001 ,681 31 ,000
a. Lilliefors Significance Correction
73
Uji Transformasi Data Saphiro Wilk
Case Processing Summary
waktu Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
log_kadar
hari0 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
hari4 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
hari8 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
Descriptives
waktu Statistic Std. Error
log_kadar
hari0
Mean 1,9166 ,03476
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 1,8456
Upper Bound 1,9876
5% Trimmed Mean 1,8993
Median 1,8633
Variance ,037
Std. Deviation ,19355
Minimum 1,62
Maximum 2,62
Range 1,00
Interquartile Range ,17
Skewness 1,809 ,421
Kurtosis 5,114 ,821
hari4
Mean 1,9211 ,03543
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 1,8488
Upper Bound 1,9935
5% Trimmed Mean 1,9074
Median 1,8751
Variance ,039
Std. Deviation ,19725
Minimum 1,60
Maximum 2,57
Range ,97
Interquartile Range ,16
Skewness 1,421 ,421
Kurtosis 2,929 ,821
hari8 Mean 1,9278 ,03897
74
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 1,8482
Upper Bound 2,0074
5% Trimmed Mean 1,9130
Median 1,8976
Variance ,047
Std. Deviation ,21698
Minimum 1,56
Maximum 2,63
Range 1,07
Interquartile Range ,23
Skewness 1,274 ,421
Kurtosis 2,636 ,821
Tests of Normality
waktu Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
log_kadar
hari0 ,145 31 ,095 ,858 31 ,001
hari4 ,171 31 ,021 ,893 31 ,005
hari8 ,139 31 ,135 ,917 31 ,019
a. Lilliefors Significance Correction
75
Normalitas Usia dan Jenis Kelamin
Case Processing Summary
Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
Usia 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
Jenis Kelamin 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
Descriptives
Statistic Std. Error
Usia
Mean 53,10 2,855
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 47,27
Upper Bound 58,93
5% Trimmed Mean 53,22
Median 52,00
Variance 252,757
Std. Deviation 15,898
Minimum 20
Maximum 84
Range 64
Interquartile Range 23
Skewness -,108 ,421
Kurtosis -,309 ,821
Jenis Kelamin
Mean 1,55 ,091
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 1,36
Upper Bound 1,73
5% Trimmed Mean 1,55
Median 2,00
Variance ,256
Std. Deviation ,506
Minimum 1
Maximum 2
Range 1
Interquartile Range 1
Skewness -,204 ,421
Kurtosis -2,098 ,821
76
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Usia ,093 31 ,200* ,985 31 ,937
Jenis Kelamin ,362 31 ,000 ,635 31 ,000
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction
Jenis Kelamin
Frequency Percent Valid Percent Cumulative
Percent
Valid
Laki-laki 14 45,2 45,2 45,2
Perempuan 17 54,8 54,8 100,0
Total 31 100,0 100,0
77
Uji Normalitas Suhu
Case Processing Summary
Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
suhu pagi 23 100,0% 0 0,0% 23 100,0%
suhu siang 23 100,0% 0 0,0% 23 100,0%
Descriptives
Statistic Std. Error
suhu pagi
Mean 22,00 ,089
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 21,82
Upper Bound 22,18
5% Trimmed Mean 22,00
Median 22,00
Variance ,182
Std. Deviation ,426
Minimum 21
Maximum 23
Range 2
Interquartile Range 0
Skewness ,000 ,481
Kurtosis 3,771 ,935
suhu siang
Mean 22,96 ,147
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 22,65
Upper Bound 23,26
5% Trimmed Mean 23,00
Median 23,00
Variance ,498
Std. Deviation ,706
Minimum 21
Maximum 24
Range 3
Interquartile Range 0
Skewness -,789 ,481
Kurtosis 1,819 ,935
78
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
suhu pagi ,413 23 ,000 ,591 23 ,000
suhu siang ,351 23 ,000 ,783 23 ,000
a. Lilliefors Significance Correction
79
Bland Altman Kadar ALP hari 0- Hari 4
T-Test
One-Sample Statistics
N Mean Std. Deviation Std. Error Mean
difference 31 -,6452 24,77842 4,45033
One-Sample Test
Test Value = 0
t df Sig. (2-tailed) Mean
Difference
95% Confidence Interval of the
Difference
Lower Upper
difference -,145 30 ,886 -,64516 -9,7340 8,4436
Graph
80
Variables Entered/Removeda
Model Variables
Entered
Variables
Removed
Method
1 meanb . Enter
a. Dependent Variable: difference
b. All requested variables entered.
Model Summary
Model R R Square Adjusted R
Square
Std. Error of the
Estimate
1 ,230a ,053 ,020 24,52614
a. Predictors: (Constant), mean
ANOVAa
Model Sum of Squares df Mean Square F Sig.
1
Regression 974,679 1 974,679 1,620 ,213b
Residual 17444,418 29 601,532
Total 18419,097 30
a. Dependent Variable: difference
b. Predictors: (Constant), mean
Coefficientsa
Model Unstandardized Coefficients Standardized
Coefficients
t Sig.
B Std. Error Beta
1 (Constant) -8,992 7,899 -1,138 ,264
mean ,089 ,070 ,230 1,273 ,213
a. Dependent Variable: difference
81
Bland Altman Kadar ALP hari 0- Hari 8
One-Sample Statistics
N Mean Std. Deviation Std. Error Mean
difference 31 -4,6129 27,58584 4,95456
One-Sample Test
Test Value = 0
t df Sig. (2-tailed) Mean
Difference
95% Confidence Interval of the
Difference
Lower Upper
difference -,931 30 ,359 -4,61290 -14,7315 5,5057
82
Variables Entered/Removeda
Model Variables
Entered
Variables
Removed
Method
1 meanb . Enter
a. Dependent Variable: difference
b. All requested variables entered.
Model Summary
Model R R Square Adjusted R
Square
Std. Error of the
Estimate
1 ,168a ,028 -,005 27,65922
a. Predictors: (Constant), mean
ANOVAa
Model Sum of Squares df Mean Square F Sig.
1
Regression 643,409 1 643,409 ,841 ,367b
Residual 22185,946 29 765,033
Total 22829,355 30
a. Dependent Variable: difference
b. Predictors: (Constant), mean
Coefficientsa
Model Unstandardized Coefficients Standardized
Coefficients
t Sig.
B Std. Error Beta
1 (Constant) 1,823 8,599 ,212 ,834
mean -,067 ,073 -,168 -,917 ,367
a. Dependent Variable: difference
83
Uji Perbedaan
Friedman Test
Ranks
Mean Rank
Kadar ALP hari0 1,97
Kadar ALP hari4 1,71
Kadar ALP hari 8 2,32
Test Statisticsa
N 31
Chi-Square 5,967
df 2
Asymp. Sig. ,051
a. Friedman Test
Wilcoxon Signed Ranks Test
Ranks
N Mean Rank Sum of Ranks
Kadar ALP hari4 - Kadar
ALP hari0
Negative Ranks 17a 12,53 213,00
Positive Ranks 12b 18,50 222,00
Ties 2c
Total 31
Kadar ALP hari 8 - Kadar
ALP hari0
Negative Ranks 12d 16,88 202,50
Positive Ranks 19e 15,45 293,50
Ties 0f
Total 31
Kadar ALP hari 8 - Kadar
ALP hari4
Negative Ranks 9g 21,11 190,00
Positive Ranks 22h 13,91 306,00
Ties 0i
Total 31
a. Kadar ALP hari4 < Kadar ALP hari0 b. Kadar ALP hari4 > Kadar ALP hari0 c. Kadar ALP hari4 = Kadar ALP hari0 d. Kadar ALP hari 8 < Kadar ALP hari0 e. Kadar ALP hari 8 > Kadar ALP hari0 f. Kadar ALP hari 8 = Kadar ALP hari0 g. Kadar ALP hari 8 < Kadar ALP hari4 h. Kadar ALP hari 8 > Kadar ALP hari4 i. Kadar ALP hari 8 = Kadar ALP hari4
84
Test Statisticsa
Kadar ALP
hari4 - Kadar
ALP hari0
Kadar ALP hari
8 - Kadar ALP
hari0
Kadar ALP hari
8 - Kadar ALP
hari4
Z -,097b -,892
b -1,137
b
Asymp. Sig. (2-tailed) ,922 ,372 ,256
a. Wilcoxon Signed Ranks Test
b. Based on negative ranks.
85
Data Karakteristik Suhu
Descriptive Statistics
N Range Min Maxi Mean SD Variance Kurtosis
Statistic Statistic Statistic Statistic Statistic Statistic Statistic Statistic Std. Error
Suhu pagi 23 2 21 23 22,00 ,426 ,182 3,771 ,935
Suhu Siang 23 3 21 24 22,96 ,706 ,498 1,819 ,935
Valid N (listwise)
23
Case Processing Summary
Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
Suhu pagi 23 100,0% 0 0,0% 23 100,0% Suhu Siang 23 100,0% 0 0,0% 23 100,0%
Descriptives
Statistic Std. Error
Suhu pagi
Mean 22,00 ,089
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound 21,82
Upper Bound 22,18
5% Trimmed Mean 22,00
Median 22,00
Variance ,182
Std. Deviation ,426
Minimum 21
Maximum 23
Range 2
Interquartile Range 0 Skewness ,000 ,481
Kurtosis 3,771 ,935
Suhu Siang
Mean 22,96 ,147
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound 22,65
Upper Bound 23,26
5% Trimmed Mean 23,00
Median 23,00
Variance ,498
Std. Deviation ,706
Minimum 21
Maximum 24
Range 3
Interquartile Range 0
86
Skewness -,789 ,481
Kurtosis 1,819 ,935
Data Karakteristik Kadar ALP
Case Processing Summary
waktu Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
kadar
hari0 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
hari4 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
hari8 31 100,0% 0 0,0% 31 100,0%
Descriptives
waktu Statistic Std. Error
kadar
hari0
Mean 93,71 12,238
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 68,72
Upper Bound 118,70
5% Trimmed Mean 82,71
Median 73,00
Variance 4643,080
Std. Deviation 68,140
Minimum 42
Maximum 419
Range 377
Interquartile Range 32
Skewness 3,966 ,421
Kurtosis 18,148 ,821
hari4
Mean 94,35 11,232
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 71,42
Upper Bound 117,29
5% Trimmed Mean 85,40
Median 75,00
Variance 3911,037
Std. Deviation 62,538
Minimum 40
87
Maximum 372
Range 332
Interquartile Range 30
Skewness 3,277 ,421
Kurtosis 12,998 ,821
hari8
Mean 98,32 13,054
95% Confidence Interval for
Mean
Lower Bound 71,66
Upper Bound 124,98
5% Trimmed Mean 87,51
Median 79,00
Variance 5282,959
Std. Deviation 72,684
Minimum 36
Maximum 423
Range 387
Interquartile Range 42
Skewness 3,350 ,421
Kurtosis 13,448 ,821