Obranné mechanismy rostlin vinterakcích...

Obranné mechanismy rostlin v interakcích hostitel-patogen

Aleš Lebeda

Michaela Sedlářová

Katedra botanikyPřírodovědecká fakultaUniverzita Palackého

Šlechtitelů 11, 783 71 Olomouc-Holice

PDF vytvořeno zkušební verzí pdfFactory Pro www.fineprint.cz

http://www.fineprint.cz

Struktura přednášky1. Rostlinné patosystémy2. Infekční cyklus3. Životní strategie patogenních „hub“4. Obranné mechanismy5. Základní kompatibilita resp. inkompatibilita6. Teorie „gen-proti-genu“, rozdělení R-genů7. Modelový patosystém Lactuca spp. - Bremia lactucae

7.1. Mechanismy rezistence u Lactuca spp.7.2. Životní cyklus a infekční struktury Bremia lactucae7.3. Vliv faktorů prostředí na vývoj patogenu7.4. Kvalitativní a kvantitativní aspekty tvorby infekčních struktur B. lactucae7.5. Šlechtění na rezistenci vůči plísni salátové7.6. Nevratné poškození membrán7.7. Oxidativní stres – AOS, antioxidační enzymy7.8. Fenolické látky v obranných procesech7.9. Vliv patogenu na cytoskelet hostitele7.10. Hypersenzitivní reakce7.11. Cytokininy a reprodukce patogenu

8. Souhrn9. Poděkování

Katedra botaniky, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Palackého v Olomouci




Trojúhelník a čtyřúhelník choroby




Fáze a subfáze infekčního cyklu

Kůdela et al., 1989




Posloupnost procesů během infekce a jejich terminologie

Kůdela et al., 1989



Životní strategie patogenních „hub“(lze vymezit fakultativní a obligátní formy)

Biotrofní Hemibiotrofní Nekrotrofní


Phytophthora infestans

Fusarium

Exobasidium vaccinii

- během životního cyklubio-, nekro-, saprotrofní fáze

- dlouhou dobu nedochází k narušení buněčné stěny

- saprofáze redukována

- napadají a rychle usmrcují živé buňky – enzymy, toxiny

- narušení BS, protoplastu, metabolismu

- mohou existovat jakosaprotrofové

- napadají živé buňky- invaginace plazmatické membrány

- rovnováha s hostitelem- speciální forma parazitismu



- chemická (enzymatická)

- mechanickápřímá = přes buněčnou stěnunepřímá

- poranění- přirozené otvory:

stomata, lenticely, hydatody, nektária

Způsoby penetrace

Uromyces viciae-fabae

Bremia

Magnaporthe




stimulativní(obligátní biotrofní parazité – v počátečních fázích

svého vývoje: podpora růstu, zvýšení počtu organel)

„green islands“- typické před. pro biotrofní bakterie, viry(nerovnováha kinetinu)

Katedra botaniky a Katedra biochemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Palackého v Olomouci

Vlivy patogenu resp. infekce na buňku

nárůst počtu mitochondrií a ribozómů

nutné zvýšení syntézy proteinů, intenzivnější respirace

respirace + oxidační procesy + degradace látek

uvolnění chemické energie na pokrytí biosyntéz

Životaschopnost rostlinné buňky závisí na: - fungující vakuole- intaktním vezikulárním transportu

degenerativní (nekrotrofní a v pozdních fázích i někteří obligátní

biotrofní parazité:narušení cytoskeletu, organel, membrán)

Beta vulgaris –Fusarium oxysporumHordeum vulgare -

Blumeria graminis



- pasivní (strukturní)fyzikální bariery proti průniku patogenu

preformované: buněčná stěna, vosky, kutikula, fenolické látkyindukované: lignifikace, suberinizace, depozice kalózy

Obranné mechanismy rostlin

- aktivní (fyziologické, biochemické)produkce látek toxických pro patogen

sekundární metabolity (specifické podle hostitele a patogenu): alkaloidy, saponiny, antokyany, fenoly, taniny, melaniny, aromatické AK

proteinyextenziny (bohaté na hydroxyprolin)PR-proteiny (glukanasy, chitinasy, peroxidasy)




Základní inkompatibilita(interakce nehostitel-nepatogen)

Nespecifická inkompatibilita- kompatibilita

Preformované obranné mechanismy; iniciace obecných obranných reakcí

Obecné metabolické a genetické obranné mechanismy

Schéma konceptu základní inkompatibility a základní kompatibility(Lebeda, 1984)

Rostlina - mikroorganismus

Základní kompatibilita(hostitel-patogen)

Obecné obranné mechanismy neúčinné

Specificky diferencovaná inkompatibilita- kompatibilita

Specificky nediferencovaná inkompatibilita- kompatibilita

Vysoce specifické metabolické a genetické adaptace hostitele

Specifický komplex metabolických a genetických

obranných mechanismů




Odezva na infekci a případný rozvoj či potlačení projevů choroby primárně závisí

na genetické výbavě obou partnerů

Teorie „gen-proti-genu“ (Flor, 1946 resp. 1947)

- geny „rezistence“ (u hostitelské rostliny) resp. „avirulence“ (u patogenu) kódují proteiny důležité pro rozpoznání (buněčné receptory resp. molekuly elicitorů)

- platnost tohoto předpokladu byla potvrzena později klonováním genů avirulence různých patogenů (Keen, 1990)

Model koevoluce hostitele a patogenu




Klasifikace R-genů podle

struktury a funkce

(Tör et al., 2003)




Interakce Lactuca spp. - Bremia lactucae

L. sativa, plané druhy rodu Lactuca a některých příbuzných rodů jsou charakterizovány rasově specifickou (RS), rasově nespecifickou (RNS) a polní rezistencí (FR)

Z Lactuca spp., blízce příbuzných L. sativa, je pouze u L. saligna předpokládána nehostitelská rezistence (NR)- faktory nejsou příliš dobře známy- nehostitelská rezistence není primárně asociována s HR

Variabilita mechanismů rasové specificity je podmíněna variabilitou genů kódujících- epikutikulární vosky - enzymy- cytoskelet - IMD- HR - fenoly

Výsledkem je rozdílné načasování potlačení růstu houby

Na rasově nespecifické a polní rezistenci se podílí řada mechanismů- roli hraje i ontogenetický stupeň vývoje a podmínky prostředí

Specifita interakcí rostlina-patogen je různorodý a komplikovaný fenomén




Možné mechanismy rezistence L. sativa a planých Lactuca spp. vůči Bremia lactucae (Lebeda et al., 2000)

Section/subsection Response to B. lactucae from Possible resistance Lactuca spp. L. sativa L. serriola mechanisms Lactuca Lactuca

L. aculeata +/– +/– RS L. altaica +/– +/– RS L. dregeana +/– +/– RS L. livida + + RS? L. saligna +/– (–) RS, NR? L. sativa +/– +/– RS, FR L. serriola +/– +/– RS, RNS, FR L. virosa +/– +/– RS, FR

Cyanicae L. perennis +/– – RS L. tenerrima +/– +/– RS




Section Response to B. lactucae from Possible resistance Lactuca spp. L. sativa L. serriola mechanisms Phaenixopus L. viminea

+/–

(–)

RS

Mulgedium L. taraxacifolia

+

*

?

L. tatarica +/– (–)/– RS Lactucopsis L. aurea

–

*

?

L. quercina +/– * RS Tuberosae L. indica

+/–

–

RS

Micranthae L. undulata

–

*

?

African group L. capensis

–

*

?

L.homblei – – ? North American group L. biennis

–

(–)

?

Možné mechanismy rezistence L. sativa a planých Lactuca spp. vůči Bremia lactucae (Lebeda et al., 2000)



Vliv teploty na efektivitu některých genů rezistence (Dm genů) u Lactuca sativa a L. serriola vůči Bremia lactucae(modifikováno podle Judelson a Michelmore, 1992)

Lactuca spp. Temperature/reaction type B. lactucaecultivar/accession Dm gene 5 oC 10 oC 15 oC 22 oC isolate (race)

L. sativaCapitan Dm11 + -* - - Avr11: CG1, SF5

+ + + + avr11: CS9, CS12Fila Dm11 + -* - - Avr11: SF5Empire Dm13 -* - - - Avr13: CS12

+ + + + avr13: CS9 UCDM14 Dm14 - - - - Avr14: CG1

+ + + + avr14: CS9, CS12

L. serriolaPIVT 1309 Dm15 +** - - - Avr15: CS12

+ + + + avr15: CS9, SF3LSE/18 Dm16 + +** +** - Avr16: CS9, SF3

+ + + + avr16: CS12LSE/57/15 Dm7 + + - - Avr7: SF5Hilde x L. serriola Dm11 + -* - - Avr11: CG1, SF5

- = incompatible reaction * = visible necrosis without sporulation+ = compatible reaction (profuse sporulation) ** = sparse sporulation





depozice sporklíčenítvorba primárních a sekundárních inf. strukturpenetracekolonizace infikovaných rostlinných pletivspecifické reakce na dané infekční agens

proces rozpoznání(recognition)

Hodnocení jevů:KvalitativněSemikvantitativněKvantitativně (Lebeda, 1988b)

Po kontaktu parazitické/patogenní houby s rostlinou se odehrává kaskáda jevů



Vývoj Bremia lactucae v pletivu kompatibilní hostitelské rostliny

Infekční struktury patogenu




Načasování fází infekce a tvorby infekčních struktur Bremia lactucae u náchylných genotypů salátu (Sargent et al., 1973)


Hodiny po inokulaci (hpi)

Stadium vývoje patogenu

0 Inokulace

1-2 Klíčení konidie

2-3 Růst klíčního vlákna a tvorba apresoria

3-4

Penetrace a vývoj primárního vezikulu

4-13 Zvětšování sekundárního vezikulu

13 a později

První dělení jader, invaze do okolních buněk a pletiv haustorii a intracelulárními hyfami




0%

20%

40%

60%

80%

100%

4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Dny po inokulaci

Rel

ativ

ní in

tenz

ita s

poru

lace

(%)

3 týdny

4 týdny

5 týdnů

6 týdnů

Vliv stáří semenáčků Lactuca spp. na klíčení Bremia lactucae (Dickinson a Crute, 1974)




0

20

40

60

80

100

0 5 10 15 20 25 30

Teplota (°C)

Klíč

ení (

%)

Vliv teploty na klíčení Bremia lactucae (Sargent, 1976)




0123456789

0 10 20 30

Teplota (°C)

Poč

et p

enet

rací

/25

um2

W2(N)

W5

Vliv teploty na penetraci semenáčků L. sativa(cv. Avondefiance) konidiemi Bremia lactucae

(Maclean and Tommerup, 1979)




0% 10% 20% 30% 40% 50% 60%

Leaf disc

Cotyledons

Incidence of germination

GreatLakes

Iceberg

0 50 100 150

Leaf disc

Cotyledons

Length of germ tube (um)

Great LakesIceberg

0% 20% 40% 60% 80% 100%

Leaf disc

Cotyledons

Incidence of appressorium formation

Great LakesIceberg

Vliv ontogenetického stáří hostitele:rozdíly v parametrech vývoje Bremia lactucae (rasa NL 15)

6 h po inokulaci (modif. podle Lebeda a Reinink, 1991)

tvorba apresoriídélka klíčních vláken

klíčení

Great Lakes = RSRIceberg = high level of FR




Kvalitativní a kvantitativní aspekty tvorby infekčních struktur Bremia lactucae




Diversity in formation of Bremia lactucae infection structures in L. sativa and wild Lactuca spp. genotypes representing nonhost and host-parasite interactions

and different types of resistance mechanisms resp. (compiled according to Lebeda and Reinink (1991, 1994); Lebeda et al., 2000, Lebeda et al., 2004)

Interaction Type of resistance

Lactuca spp. (cultivar/accession)

Response to B. lactucae / Sporulation

Relative frequency of occurrence and size of infection structures

(48 hpi) intensity (%)

(14 dpi)/ PV/D SV HY/L HA

Nonhost resistance L. saligna (LSA/6) – /0 1/12.3 1 0 0 Host resistance /susceptibility Race specific Cobham Green + /100 4/15.4 4 4/174 4 Dandie + /100 4/14.8 4 2/156 1 Valmaine – /0 4/12.0 1 1/18 0 L. saligna (CGN 5147) – /0 3/11.8 1 1/38 0 L. serriola (PIVT 1168) – /0 2/14.5 1 1/18 0 L. virosa (LVIR/57/1) (–) /2 3/14.9 3 1/42 1 Race nonspecific L. serriola (PI 281876) (–)/21 4/15.0 4 2/82 2 Field resistance Iceberg + /75 3/13.1 2 1/102 1

Inoculation: races CS9 and NL5; Intensity of sporulation (0-100); Relative frequency (0-4) and size ofinfection structures: PV/D = primary vesicle / diameter (μm), SV = secondary vesicle, HY / L = intercellularhyphae / length (μm ), HA = haustoria formation




Diversity in phenotypic and microscopic plant tissue (epidermal and subepidermal cells) response to B.lactucae of L. sativa and wild Lactuca spp. genotypes representing nonhostand host-parasite interactions and different types of resistance mechanisms resp. (compiled

according to Lebeda and Reinink (1991, 1994); Lebeda et al., 2000, Lebeda et al., 2004)

Interaction Type of resistance

Lactuca spp. (cultivar/accession)

Degree of tissue response (48 hpi)

Phenotypic expression of response to B. lactucae (14 dpi)

HR NNC SEN DSEN

Nonhost resistance L. saligna (LSA/6) – 0.04 1.00 0.34 1.25 Host resistance /susceptibility Race specific Cobham Green – 0.77 1.04 0 0 Dandie – 0.06 1.00 0.10 1.00 Valmaine – 0.26 1.07 0 0 L. saligna (CGN 5147) – 0.04 2.00 0 0 L. serriola (PIVT 1168) – 0.78 1.00 0.18 1.53 L. virosa (LVIR/57/1) N, SE, SS 0.96 1.06 0.27 1.65 Race nonspecific L. serriola (PI 281876) N, SE 0.87 1.05 0.22 1.53 Field resistance Iceberg – 0.13 1.07 0 0

N = necrotic response, SE = sporulation only along the leaf dics cut surface, SS = sparse sporulation on the discsurface; HR = hypersensitive response (number of necrotic cells/infection site), NNC = mean number of necroticepidermal cells per infection site with a necrotic response, SEN = subepidermal necrosis, DSEN = degree of SEN (0-3) Inoculation: races CS9 and NL5




Šlechtění salátu na rezistenci vůči plísni salátové (B. lactucae)

LIBUSA



Fyziologické změny působené patogeny


1/ Permeabilita napadených buněk (membrány, strukturní změny BS)2/ Metabolismus vody v napadených rostlinách 3/ Minerální výživa (absorpce, transport)4/ Fotosyntéza (obsah, funkce pigmentů)5/ Respirace (zvýšená intenzita; enzymy glykolýzy)6/ Oxidativní stres (aktivní formy kyslíku, antioxidační enzymy)7/ Syntéza proteinů (PR-proteiny, enzymy) – „na úkor zásobních látek“8/ Metabolismus fenolických látek (akumulace)9/ Fytohormony (obsah a zastoupení aktivních/neaktivních forem)



Rozdíly v načasování nevratného poškození membrán (IMD) determinovaných různými geny rezistence vůči plísni salátové

(podle Mansfield et al., 1997)




Aktivní formy kyslíku

Místa vzniku: chloroplasty, mitochondrie, membrány peroxisomů, glyoxysomů, mikrozomů

Účinky - negativní: peroxidace lipidů, poškození struktury proteinů (enzymů), NK, lipidů

- pozitivní: signalizace, genová regulace

singletový kyslík (1O2), superoxid (O˙- 2), peroxid vodíku (H2O2), hydroxylový radikál (OH-)

HOSTITEL• Přímé antimikrobiální účinky• Signální molekula v regulaci aktivity genů zodpovědných za syntézu

- PR-proteinů- fenolických látek- fytoalexinů

• Zesíťování prekurzorů polyfenolických látek – lignifikace BS• HR

PATOGEN• Signalizace – rozpoznání v inkompatibilních interakcích?• Penetrace? štěpení komponent buněčné stěny, membrán




Katalasa - L. saligna CGN 05271

0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0

0hai 6hai 12hai 18hai 24hai 36hai 48hai 96hai

Katalasa - L. serriola PIVT 1309

0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0


Katalasa - L. virosa NVRS 10.001 602

0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0


L. serriola PIVT1309 L. saligna CGN 05271 L. virosa NVRS 10.001502

(nkat/1g)

Katalasa - L. sativa Mariska

0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0


Katalasa - L. serriola LSE/18

0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0


L. sativa UCDM2 L. sativa Mariska L. serriola LSE/18

Katalasa - L. sativa UCDM 2

0,00,20,40,60,81,01,21,41,61,82,0


Kontrola Infikovaná rostlina


Spektrofotometrické stanovení aktivity katalasy (E.C. 1.11.1.6)

náchylný náchylný

rezistentnírezistentní

rezistentní

silně rezistentní



Cévní svazky

Histochemická lokalizace POX


Lokalizace v penetrované buňce

Spektrofotometrické stanovení aktivity g-POX (EC 1.11.1.7)

POX - L.sativa UCDM2

0,00

50,00

100,00

150,00

200,00

250,00

300,00

350,00

0 6 12 18 24 36 48 96

L. sativa UCDM2

POX - L.sativa Mariska

0,00

50,00

100,00

150,00

200,00

250,00

300,00

350,00

0 6 12 18 24 36 48 96

L. sativa Mariska

POX- L. virosa NVRS 10.001 602

0,00

50,00

100,00

150,00

200,00

250,00

300,00

350,00

0 6 12 18 24 36 48 96

L. virosa NVRS 10.001502

náchylný rezistentní silně rezistentní

Kontrola Infikovaná rostlina



Izoenzymy SOD(E.C. 1.15.1.1)

L. virosa NVRS 10.001 602L. saligna CGN 05271

- aktivita SOD nebyla zaznamenána- superoxid nebyl histochemicky detekován- v izoenzymovém spektru nebyly pozorovány

změny po infekci B. lactucae

6hai 12hai 24hai 48hai

K i K i K i K i




Histochemická lokalizace H2O2

Periplazmatický prostor Během penetrace patogenu Větší rozsah v pozdějších fázích


Spektrofotometrické stanovení obsahu H2O2

c H2O2 - L.sativa UCDM2

0

0,02

0,04

0,06

0,08

0,1

0,12

6hai 12hai 18hai 24hai 36hai 48hai 96haiHai

c H

2O2/

1g

L. sativa UCDM2

c H2O2 - L. sativa Mariska

0

0,02

0,04

0,06

0,08

0,1

0,12


c H

2O2/

1g

L. sativa Mariska

c H2O2 - L. virosa H58 - 0958

0

0,02

0,04

0,06

0,08

0,1

0,12


c H

2O2/

1g

L. virosa NVRS 10.001502

náchylný rezistentní silně rezistentní



- obecně inhibitory enzymů - jejich tvorba v rostlině indukována poraněním,

infekcí- přítomny u rezistentních i náchylných genotypů,

liší se kvalitativně a kvantitativně- antibiotické účinky- strukturní polymery - zesílení buněčné stěny,

lignituber v místě penetrace- irreversible membrane damage (IMD) - autofluorescentní fenoly - de novo syntéza

během HR

Fenolické látky

Autofluorescence fenolů v infikované buňce




Detekované látky

Lactuca spp. genotypy Reakce s NL16 Fenoly Taniny Lignin Kalóza

L. sativa Cobham Green kompatibilní -/+ - - +++ Mariska inkompatibilní +++ - - ++

L. serriola LSE/18 kompatibilní - - - +++

L. saligna CGN 05271 inkompatibilní - - - +

L. virosa NVRS 10.001 602 inkompatibilní +++* - - +

STUPNICE: - žádný signál+ slabá exprese v hostitelských buňkách ++ středně silný signál+++ silná akumulace * = reakce kromě penetrované buňky i ve 2-3 okolních

Fenolické látky – histochemická detekce

Lokalizacemísto penetrace periplazmatický prostor invaginovaná plazmalema okolo haustorií




MT basket

24haiL. sativaUCDM2

MT patches

48haiL. serriolaPIVT 1309

L. serriolaLSE/18

HR

48haiL. sativaMariska

Cytoskelet – imunohistochemická detekce





Změny mikrotubulárního cytoskeletu epidermálních buněk Lactuca spp. inkompatibilních resp. kompatibilních s Bremia lactucae

vzhledem ke stadiu infekce (Sedlářová, Lebeda a Binarová, 1999)

Inkompatibilní interakce

Kompatibilní interakce

Tvorba apresoria a penetrace

- agregace MT pod apresoriem - tvorba MT „cables“ v penetrovaných buňkách

- žádné detekovatelné změny

Tvorba primárního a sekundárního vezikulu

- tvorba MT „basket“ kolem vezikulů

- tvorba MT „basket“ kolem vezikulů

Proces HR a nekróza epidermálních buněk

- tvorba „patches“ (signál ve formě lokálních shluků) - depolymerizace MT v celé buňce

- autofluorescence fenolů




penetrace

L. serriola PIVT 1309-12 hai-laktoglycerol-WU

HR – histochemická detekce




L. virosa H 58-0958-48 hai-chloralhydrát

HR – histochemická detekce

rezistentní




L. sativa Cobham Green

0,0

20,0

40,0

60,0

80,0

5.den 7.den 9.den 11.den

inte

nzita

spo

rula

ce (%

)) mT-PmT-0MeOR-PMeOR-0DMSOH2O

L.serriola LSE/18

0,0

10,0

20,0

30,0

40,0

50,0

60,0

5.den 7.den 9.den 11.den

inte

nzita

spo

rula

ce (%

) mT-P

mT-0

MeOR-P

MeOR-0

DMSO

H2O

L. serriola LSE/18

0

10

20

30

40

50

60

7.den 9.den 13.den

inte

nzita

spo

rula

ce (%

) mT-P

mT-0

MeOR-P

MeOR-0

DMSO

H2O

Vliv koncentrace exogenně aplikovaných cytokininůna časový průběh sporulace B. lactucae

c(CK)=10-5M c(CK)=10-4M

CG

LSE/18

mT – meta-topolinMeOR – metoxybenzylaminopurin-ribosidDMSO - dimetylsulfoxid




0.0

100.0

200.0

300.0

400.0

500.0

DMSO MeOR mT voda

Poc

et s

por

0.0

100.0

200.0

300.0

400.0

500.0

DMSO MeOR mT voda

Výn

os s

por

Vliv exogenní aplikace cytokininůna intenzitu sporulace B. lactucae

L. sativa Cobham Green L. serriola LSE/18

Výsledky Bonferoniho testu mnohonásobných porovnávání výnosu spor, 14dai




Předpokládaný sled procesů vedoucích k obranné reakci buňky po napadení biotrofním patogenem

InfekceProdukce genotypově-specifických elicitorů - signalizace

Primární rozpoznáníAktivace odpovědi

De novo syntéza proteinů v penetrovaných buňkáchIMD a uvolňování fenolických látek

Uvolnění endogenních elicitorůAkumulace fenolů vázaných s BS

Sekundární signalizaceSekundární rozpoznání

Transkripce mRNA kontrolujících biosyntézu ligninových prekurzorů v okolních buňkáchDepozice ligninu v místě a okolí infekce

Hypersenzitivní reakce, rozpad jádraOxidativní procesy

Depozice strukturních látek zesilujících buněčné stěnyKyselina benzoová, salicylová, jasmonová, etylenPR proteiny a další proteiny spojené s obranou

LypoxygenázyFytoalexiny




Obranné mechanismy hostitele vyvolané infekcí patogenuje možno studovat hierarchicky na řadě úrovní

biologické organizace:

Organismus

Orgán

Pletivo

Buňka

Fyziologické procesy

Molekulární struktura

Všechny tyto úrovně se více či méně podílejí na výsledném projevu interakce, přičemž jedna úroveň projevu velmi úzce souvisí s další, vzájemně na sebe

navazují a podmiňují se.



PoděkováníP. Binarová (UEB AV ČR Olomouc) - cytoskelet

L. Luhová (K.biochemie PřF UP Olomouc) - AOSM. Výtisková (studentka) - CK, M. Duchoslav (KB PřF UP Olomouc) - statistika

MSM 153100010 „Stresová a patologická biologie, biochemie a bioenergetika rostlin “GAČR 522/02/D011 „Cytologické a biochemické aspekty interakcí rostlin a patogenů

(model Lactuca spp.-Bremia lactucae)“MZe ČR 75/2004 „Národní program využití genofondu mikrooganismů a drobných živočichů“

a mnoho dalších…




Pro cestu do neznáma jsou pochybnosti a diskuse

nezbytné.Jestliže chceme vyřešit problém, jaký se nám ještě nikdy vyřešit nepodařilo, musíme ponechat dveře

do neznáma pootevřené.

(R. Feynman)



Obranné mechanismy rostlin vinterakcích...

Documents

Transcript of Obranné mechanismy rostlin vinterakcích...