MONITORING A IDENTIFIKÁCIA CRYPTOSPORIDIUM SPP. A GIARDIA

SPP. VO VODNÝCH ZDROJOCH NA SLOVENSKU

Zuzana Velická, Lívia Tóthová, Výskumný ústav vodného

hospodárstva, Nábr. L. Svobodu 5, BRATISLAVA

Velicka@vuvh.sk Tothova@vuvh.sk

Cryptosporidium spp.

kokcídia napáda teplokrvné živočíchy, celý život prežíva v hostiteľských bunkáchvnútrobunkový parazit, veľkosti 2 - 6 µm, ktorý infikuje epiteliálne bunky tráviaceho a dýchacieho aparátu mnohých stavovcov vrátane človekainfekčnú formu predstavujú sporulujúce oocystyinfekčná dávka 1 – 100 oocýst C. parvum (Dolejš a kol., 1999)prenos fekálno-orálnou cestou, vodou, zvieratami (domáce, voľne žijúce), kontaminovanými potravinami (surové mlieko, ovocie, zelenina, mäso, nepasterizované ovocné šťavy)infikovaný hovädzí dobytok a ovce (fekálie) → výskyt v rezervoároch pitnej vodyochorenie kryptosporidióza - 10-14 dňové ochorenie, zvýšená teplota, zvracanie, nebezpečie pre imunodeficientných pacientov(symptomatologická terapia - rehydratácia org., makrolidové ATB)

Giardia spp.

prvé prvoky pozorované voľným okom (1681 - Antony van Leewenhoek)bilaterálne symetrické bičíkovce so zdvojenými organelamimorfologický výskyt v dvoch formách:1. reproduktívny trofozoit (obr.) – veľkosť 10-20 x 5-15 µm2. cysta (obr.) – veľkosť 8-19 x 7-10 µmžijú v tenkom čreve, prisaté na epitelové bunkytrofozoity – množia sa binárnym delením, po rozmnožení sa časť z nich encystujeinfekčná dávka – 10-20 cýst (Petrovičová, 1996)prenos - znečistená voda, potravaochorenie giardióza (lamblióza) – gastrointestinálne ochorenie (giardiesa ťažko eliminujú z čreva), prekonanie nezanecháva imunitu

Trofozoit Giardia lamblia(zväčš. 10 x 100,

farbenie 5 % Giemsa)Morfologická stavba bičíkovca Giardia

lamblia: A – trofozoit, B – cysta

Vstupná brána pre cysty (konzumácia)

Cysty

Excystáciatrofozoitov v tenkom čreve

Trofozoity žijúce na povrchu črevných klkov

Patológia

Normálne klky Sploštené klky

Kontaminácia fekáliami

Encystáciasporozoitov v tenkom čreve

Cysty odchádzajúspolu s fekáliami

Životný cyklus Giardia lamblia

Rezistencia trvalých štádií

prežívanie oocýst a cýst vo vlhkom a chladnom prostredí

oocysty kryptosporídií prežívajú vo vode až 6 mesiacov, dĺžka prežívania cýst giardií je 1-2 mesiace

najväčšia životaschopnosť je pri teplote 0 - 8 °C

inaktivácia - vysušenie a zmrazenie počas dlhej doby, ponorenie do vody 55 °C na dobu 5-20 min., privedením vody do bodu varu, vysoké dávky UV žiarenia

odolnosť voči chlóru, zmenám pH, premenlivému obsahu solí(tepelná úprava potravín 70 °C – 2 min. = eliminácia mikrobiálnej flóry + inaktivácia Cryptosporidium spp.)

Metodika analýzy vzoriek pre patogénne bičíkovce

farbiace techniky - podľa Ziehla-Neelsena, Miláček-Vítovec, Gomoriho trichróm, Giemsovo, farbenie fluresceínom (FITC)

koncentračné techniky - flotácia v roztoku sacharózy, flotácia v glyceríne, metóda podľa Fausta, Percoll-sacharóza gradient, Percoll-gradientsedimentačné metódy - modifikovaná formol-éterová metóda, využitie mertiolát-jód-formaldehyd

imunoenzýmová analýza (PCR)

Monitoring výskytu Cryptosporidium spp.a Giardia spp. na Slovensku

Odberové lokality - vodárenské nádrže

KlenovecNová BystricaMálinecHriňováTurčekStarinaBukovec

vodný zdroj

filter

vodomer

puzdro filtra

tlakomer

Odberová aparatúra

Ponorné čerpadloFilter CUNO Micro-Wynd

Metodika analýzy vzoriekfiltrácia (filter CUNO Micro-Wynd)

prepieranie filtra

eluácia v pufrovacom roztoku

výluh centrifugácia(5000g/30 min., 3000g/20-30 min., 2000g/10 min.)

farbenie preparátov(oocysty kryptosporídií = Miláček-Vítovec, cysty giardií = Gomoriho trichróm)

mikroskopická identifikácia

koncentrácia a eluácia

separácia

farbenie a identifikácia

Centrifugácia veľkých objemov vzorky

1 2

Preparáty po zafarbení vzorky podľaMiláček-Vítovec (1) a Gomoriho

trichrómom (2)

Tab.: Výskyt kryptosporídií a giardií vo vybraných vodárenskýchnádržiach na Slovensku

Vodárenskánádrž

Nádrž Surovávoda

Upravená voda

Cryptosp.spp.

Giardiaspp.

Cryptosp.spp.

Giardiaspp.

Cryptosp.spp.

Giardiaspp.

Nová Bystrica + + + - + -Klenovec + + + - - -Málinec + + + + + -Hriňová + + - + + -Turček + + + + - -Stariná + + + + + -Bukovec + - + - - -

+ pozitívny nález - negatívny nález

Výsledky monitoringubolo vyšetrených 58 vzoriek povrchovej, podzemnej, technologickej a pitnej vody na prítomnosť Giardia spp. a Cryptosporidium spp.

pozitívnych bolo 41,4 % vzoriek pre Cryptosporidium spp. a 37,9 % pre Giardia spp.

vo všetkých sledovaných vodárenských nádržiach bol potvrdený výskytkryptosporídií a giardií, avšak cysty giardií neboli identifikované na ÚVBukovec, prítomnosť resp. neprítomnosť nebola potvdená opakovaným stanovením

Giardia spp. sme opakovane zistili len v surovej vode z úpravne vodyHriňová a Turček, opakované vzorky z Málinca a Starinej nepotvrdilistálu prítomnosť giardií

v upravenej vode v Klenovci, Turčeku a Bukovci sa nepreukázala prítomnosť oocýst kryptosporídií → možno konštatovať dobrý technologický proces úpravy vody, podobne giardie sú ľahšie ostrániteľné v procese úpravy vody, nakoľko v pitnej vode neboli detegovanévôbec

sledovanie podzemných zdrojov v Jelke s príslušnou úpravňou vody ako ajvybranými odberovými miestami diaľkového vodovodu Galanta-Šaľa-Nitra-Močenok

v sledovaných zdrojoch podzemnej vody ani v priľahlej distribučnej sieti nebolzistený výskyt predmetných patogénov

Oocysta Cryptosporidium spp. surová voda ÚV Nová Bystrica (zväčšenie 10 x 100,farbenie podľa Miláček - Vítovec)

Oocysta Cryptosporidium spp.pracia voda ÚV Klenovec(zväčšenie 10 x 100, farbenie podľa Miláček - Vítovec)

Cysty Giardia spp. z pracej vody ÚV Klenovec(zväčšenie 10 x 100, farbenie Gomoriho trichrómom)

Závery

vyšetrených bolo spolu vzoriek podzemnej vody, povrchovej vody a pitnej vody

pozitívnych bolo 41,4 % vzoriek pre kryptosporídie a 37,9 % vzoriek pre giardie

vo všetkých sledovaných vodárenských nádržiach bol potvrdený výskyt Cryptosporidium spp. a Giardia spp.

v zdrojoch podzemnej vody ani v priľahlej distribučnej sieti nebol zistený výskyt ani jedného zo sledovaných patogénnych prvokovochrana vodných zdrojov eliminácia prvokov z pitných vôd (problém voľne žijúce zvieratá)

projekt NRL VÚVH „Identifikácia parazitárnych prvokov rodu Cryptosporidium spp. a Giardia spp. a vybraných podmienene patogénnych mikroorganizmov vo vodárenských nádržiach a v procese úpravy vody”

ĎAKUJEM ZA POZORNOSŤ