Lipidios,Apolipos e Lipoproteinas

Bioquímica ClínicaProf. Ronaldo

Costa

Lipídios:Lipídios:Compostos Compostos solúveissolúveis em solventes orgânicos e em solventes orgânicos e insolúveisinsolúveis em água. em água.

Classificação de lipídios importantes clinicamente

Derivados esteróis Ésteres do glicerolColesterol e seus ésteres TriglicerídiosHormônios esteróides FosfoglicerídiosÁcidos biliares Derivados da esfingnosinaVitamina D Esfingomielina Ácidos graxos GlicoesfingolipídiosCadeia curta (2 a 4 C) TerpenosCadeia média (6 a 10 C) Vitamina ACadeia longa (12 a 26 C) Vitamina EProstaglandinas Vitamina K

Vamos lembrar...

Funções:Fonte primária de energia, quando armazenado no tecido adiposo.Isolantes térmico e elétricosConstituintes da membrana celular e de muitas estruturas celulares.Transporte – trans-membrana e, na corrente sanguínea na forma de lipoproteínas.

Lipoproteínas: estrutura e função

• Responsáveis pelo transporte dos lipídios no Plasma• Estrutura básica:Estrutura básica: núcleo apolar:

Triglicérídes + ésteres de colesterol

Fosfolipídio

Colesterol não esterificado

Apoliproteína

superfície polarsuperfície polar

Quilomícrons - Maiores e menos densas, ricas em

triglicerídeos, de origem intestinal.

VLDL - Densidade muito baixa, origem hepática;

LDL - Densidade baixa, ricas em colesterol

IDL - Densidade intermediária

HDL - Densidade alta, mais pobre em col.

Lp(a) – Densidade média a mais alta, rica em fosfolípide.

Quilomícrons - Maiores e menos densas, ricas em

triglicerídeos, de origem intestinal.

VLDL - Densidade muito baixa, origem hepática;

LDL - Densidade baixa, ricas em colesterol

IDL - Densidade intermediária

HDL - Densidade alta, mais pobre em col.

Lp(a) – Densidade média a mais alta, rica em fosfolípide.

Lipoproteínas: estrutura e função

QuilomicronsSintetizado no intestino delgadoSecretado no sistema linfático e

subsequentemente atinge a circulação.

Transporta lipidios da dieta98% lipidio, tamanho grande,

baixa densidadeApo B-48

Receptor de ligaçãoApo C-II

AtivadorL ipoproteina lipase Apo E

Resto de receptor ligação

Very Low Density Lipoprotein (VLDL)Sintetizado no fígadoTransport endógeno

triglicérides90% lipídio, 10%

proteinaApo B-100

Receptor ligaçãoApo C-II

LPL ativadorApo E

Resto de receptor ligação

VLDL

LDLLow Density Lipoprotein (LDL)Sintetizado do IDLTransporte

Colesterol 78% lipídio, 58%

colesterol & CEApo B-100

Receptor ligação

Intermediate Density Lipoprotein (IDL) Sintetizado do VLDL durante a degradação

do VLDL Transporte de Triglicérides e precursor para

LDL Apo B-100

Receptor Apo C-II

LPL ativadorApo E

Receptor ligação

IDL

HDLHigh Density

Lipoprotein (HDL)Sintetizado no fígado e

intestinoReserva de apoproteinas Transporte reverso de

colesterol 52% proteina, 48% lipid, 35% C

& CEApo A

Activates lecitina-cholesterol aciltransferase (LCAT)

Apo C Ativado LPL

Apo E Resto de receptor ligação

Apoproteína Lp (a)

É uma glicoproteína enorme, homóloga ao plasminogênio, sintetizada pelo fígado. No plasma, forma uma ligação covalente com a apo B100 das LDL, gerando uma nova lipoproteína, a Lp (a).

Apoliproteínas

São uma família complexa de polipeptídio que determinam o destino metabólico dos lipídios no plasma e sua captação pelos tecidos. Ativam e inibem enzimas envolvidas no metabolismo das lipoproteínas. Divisão: ApoA; ApoB; ApoC; ApoE;

Apoproteínas da série A As apo A-I, A-II e A-IV são encontradas na HDL. A-I A-II são sintetizadas no fígado A-IV forma-se apenas no intestino A-I corresponde a 80% de toda a proteína das HDL e é essencial para a integridade dessas partículas. Apo A-I ativa a LCAT (que esterifica colesterol)

Apoliproteínas da série B

Está presente no plasma em duas formas:apoB100apoB48 ApoB100É componente protéico das LDL -quilomícronsÉ reconhecidas por receptores específicos – tecidos periféricos.

Apoproteínas da série C

Esta família de três proteínas (apoCI, apoCII, apoCIII) é sintetizada no fígado e estão em todas as lipoproteínas menos LDL. A apo CII ativa a lipoproteína lipase (LPL), que digere (hidrolisa) os triglicerídeos (gordura) em quilomícrons eVLDL.

Apolipoproteínas da série E

É sintetizada no fígado, neurônios, glia e macrófagos; Ocorre em todas as lipoproteínas, com exceção da LDL; É incorporada ao HDL e transferida, na circulação, para os quilomícrons e VLDL. É a principal apoproteína envolvida na captação hepática dos quilomícrons Liga-se aos receptores apo B nos tecidos.

Prostaglandinas(PG)Derivado de Ác. Graxos(ariquidonato) Produzido em quase todos os tecidos.Ações em respostas fisiológicas: Pressão

arterial(músculo liso ; Indução do parto( músculo uterino); Motilidade Intestinal; Brocoespasmo; Aumenta a coagulação (plaquetas); Aumenta a permeabilidade capilar; Secreção do Ácido Gástrico(Estomago); Inibe a lipólise do triglicérides(tecido adiposo)

FosfolípidesSão formados por glicolipidios e colesterol(menbranacelular).São anfipáticos- formados pela conjugação de 2 tipos de Ác.Graxos e 1 de Glicerol-fosforilado.Resíduos resultam em lecitinas e cefalinasEsfingomielina- único que não deriva do glicerol, e sim de umamino-alcool – Esfingosina

GlicolipidiosSão açúcares contendo lipídios – esfingosina e açúcar ligado aogrupo álcool. Molécula total – ceramidas – galactosilceramida glucosilceramida

Complexos- gangliosídeos(menbranas da células do cérebro e do SNC).- sintetizadas de ceramidas. membrana glicosfingolípide- Papel no reconhecimento dacélula e tipos sanguíneos.

MetabolismoExógena

Endógena

Transporte Intra celular

Transporte Reverso de Colesterol

• Lipoproteina lipase (LPL): hdrólise de particulas ricas em triglicérides

• Lecitina:colesterol aciltransferase (LCAT): participa na remoção do excesso de colesterol das células periféricas

Lipoprotein Lipase (LPL)

LPL

Excess SurfaceMaterial

HDL assembly

Fatty Acidsand

Glycerol

Energy

apoC-II

CM

VLDLapoE

apoA-I

cholesterol

phospholipid

Endothelial Cell

CM

VLDLapoE

Liver

Lipolyticproducts

Bile acids

muscle

“Remnant”

TG

TG = triglyceride

LDL

LCAT

Phospholipid plus cholesterol

Nascent HDL

LCAT: Disk to sphere transformation

Mature HDL

Cholesteryl ester (CE)plus lysophospholipid

apoA-ICE

Cholesteryl ester (CE)

Cholesterol

Phospholipid

ApoA-I

Lecithin:Cholesterol Acyl Transferase (LCAT)

Free cholesterol Cholesteryl ester

Reverse Cholesterol Transport (RCT)

O processo pelo qual o excesso de colesterol nas periferias da células, especialmente células espumantes macrófagos, é retorrnada para o fígado por degradação e excreção.

RCT envolve apoA-I, ABCA1 and LCAT tão bem com receptores no fígado para absorção do excesso de colesterol.

Peripheral Cell UC HDL

HDLCE

HDLUC

ABCA1

LiverVLDLor LDL apoB LDLr

SR-B1

UC

PL

CE

TG

diffusion

LCAT

LCAT

CE

CE

apoA-I

UC = unesterified cholesterolCE = esterified cholesterolPL = phospholipidLDLr = LDL receptor

NascentHDL

Bile to gut

Macrophage/ Foam cell

Chol

Bile acids

Digestão e metabolismo das gorduras da dieta

QM VLDL IDL LDL HDL

Lipoproteina Nomenclatura e Composição

Maior apoB apoB apoB apoB apoA-IProteina

Maior TG TG CE CE CELipidio

Xantomas Tendinosos

Xantomas Planos Arco Corneal

Xantomas Tendinosos

Xantomas Planos Arco Corneal

• LDL receptor: catabolismo oda LDL, apo B ligante

• ABCA1 transportador: transporta excesso de colesterol das células apoA-I ligante

• receptor de varredura A1 (SR-A1): absorção do oxidado e modificado LDL por macrófagos

• SR-B1 receptor:seletiv a absorção do excess o de colesterol do HDL, apoA-I ligante

COLESTEROL ESTERÓIDEESTERÓIDE: Lipídios de cadeia complexa formados à

partir de colesterol.

IMPORTÂNCIA: Servem como base para síntese de hormônios (ex: sexuais-testosterona), precursor de vitamina d e importante componente da membrana plasmática.

4 anéis de carbono (17 C)

COLESTEROLMOLÉCULA INSOLÚVEL (APOLAR):PRODUZIDA PELO PRÓPRIO ORGANISMO (**ENDÓGENO-FÍGADO = 70%) ou INGERIDO (EXÓGENO =

30%)VAI PARA O SANGUE

se liga a molécula carreadora lipoproteíca

LDL: LOW-DENSITY LIPOPROTEIN

(lipoproteína de BAIXA densidade)

HDL: HIGH-DENSITY LIPOPROTEIN

(lipoproteína de ALTA densidade)

VLDL: VERYHIGH-DENSITY LIPOPROTEIN

(lipoproteína de MUITA ALTA densidade)

O colesterol circulante se origina predominantemente de três fontes:

1. Síntese periférica: intestino, músculo, pele e glândulas endócrinas (ovario e suprarrenais)

2. Síntese hepática: a partir do mevalonato através da enzima reductase dahidroximetil glutaril CoA.

3. Absorção intestinal: Ao redor da metade do colesterol do intestino é absorvido, somente a terça parte do colesterol intestinal procede da dieta. O colesterol contido na bilis e o secretado nas células epiteliais do intestino delgado, representam a maioría do colesterol absorvido e que contribui na formação dos quilomicrons.

Origem do Colesterol circulante

LDL- LDL- COLESTEROLCOLESTEROL:: “mau colesterol”

LIPOPROTEÍNAQUE CARREGA O COLESTEROL DO FÍGADO E INTESTINO

CÉLULAS DO CORPO

PROBLEMA: DEFEITO genético(1:500 pessoas nos países ocidentais apresentam uma mutação no gene do receptor de Ldl)

N° DE RECEPTORES DE MEMBRANA

LDL NO SANGUE ATEROSCLEROSE

ATEROSCLEROSEATEROSCLEROSE (Doença arterial (Doença arterial crônica):crônica):

depósitos de gordura e fibras no lúmen dos vasos. (atualmente: processo inflamatório da parede da artéria)

ENRIJECIMENTO E ENTUPIMENTO DOS VASOS.

INFARTO DO MIOCÁRDIO

ATEROMA

Obstrução arteriosclerótica parcial ou total das artérias coronarianas resultando em uma limitação do suprimento do oxigênio ao coração frente ao aumento da demanda.

HDL- HDL- COLESTEROLCOLESTEROL: “bom colesterol ”

pode remover o colesterol da ateroma dentro da artéria, e transportá-lo de volta ao fígado.

CARREGA COLESTEROLDAS CÉLULAS

FÍGADO: METABOLIZADO OU EXCRETADO

QuímicoQuímicoDeterminação

Metodologia Finalidade Princípios Reagentes Amostras Procedimentos Influências Analíticas Interferências Linearidade Intervalo de Referência Significado Clínico


Metodologia : Colorimétrico- Enzimático de Trinder

Finalidade :Método para determinação do Colesterol. Teste enzimático colorimétrico somente para uso in vitro.

Princípio: Os ésteres de colesterol são hidrolizados pela colesterol esterase (COE) a colesterol livre + ácidos graxos.O colesterol livre é oxidado pela colesterol (COD) a colesterol 3 ona + peroxido de hidrogênio.Na presença da Peroxidase (POD) reage com a 4 Aminoantipirina e Fenol, formando um cromógeno vermelho cereja cuja intensidade de cor é proporcional à concentração de Colesterol.

Metodologia : Colorimétrico- Enzimático de Trinder

Finalidade :Método para determinação do Colesterol. Teste enzimático colorimétrico somente para uso in vitro.

Princípio: Os ésteres de colesterol são hidrolizados pela colesterol esterase (COE) a colesterol livre + ácidos graxos.O colesterol livre é oxidado pela colesterol (COD) a colesterol 3 ona + peroxido de hidrogênio.Na presença da Peroxidase (POD) reage com a 4 Aminoantipirina e Fenol, formando um cromógeno vermelho cereja cuja intensidade de cor é proporcional à concentração de Colesterol.

Amostra: Soro obtido livre de hemólise ou plasma colhido com heparina. O Colesterol é estável no plasma ou no soro por 7 dias entre 2 e 8 ºC, e até 5 dias entre 15 e 30 ºC.

Procedimento: Rotular 3 tubos: B, P e T.Colocar 1,0 ml do Reagente Enzimático nos tubos B,P e T.Colocar 0,01ml da Amostra no tubo T e 0,01ml doPadrão no tubo P.Misturar bem e colocar em banho-maria 37 ºC por 10 minutos.Ler a absorbância da Amostra e do Padrão em 500 nm,acertando o zero com o Branco. A cor é estável por 30 minutos.

Cálculos: Colesterol (mg/dL) = Absorbância da Amostra x 200 Absorbância do Padrão

Fator de calibração = Concentração do Padrão (200 mg/dL) Absorbância do Padrão

mg/dL = Absorbância da Amostra x Fator de calibração

Desejável ............................................... < 200mg/dLAceitável ................................................ 200 – 239mg_/dLElevado .................................................. > 240mg/dL

Valor de Referência:

Linearidade: A reação é linear até 500 mg/dL. Para amostras com valores acima de 500 mg/dL, ou densidade óptica maior que 0,8, diluir a amostra comcloreto de sódio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado pelo fator de diluição. O valor encontrado deve ficar entre 150 e 300mg/dL

Influências Analíticas: Postura sentada entre 15 e 30minutos.Torniquete até 1 minuto. Após 2min. Aumento de 5%, Após 5min. Aumento de 15%.Anticoagulantes: citrato, EDTA, oxalato, dão resultados falso negativos.

Interferências:Ácido Ascórbico (mesmo em pequenas concentrações),-falsos

diminuidos – repousar amostra por 90 minutos.Hemoglobina acima de 180 mg/dL Bilirrubina acima de 5 mg/dL. –falso diminuído

Reagentes: Reagente Enzimático - Tampão (pH 7,0) 75 mmol/L, Fenol 24

mmol/L, 4- Aminoantipirina0,5 mmol/L, Colesterol Oxidase < 300 U/L, Lipoproteína Lipase > 500 U/L,

Peroxidase > 300 U/L, Azida Sódica 14,6 mmol/L,. Reagente Nº 2 - Padrão - conservar entre 2 e 8 ºC.

Contém: Colesterol 200,0 mg/dL,

Significado Clínico: Aumentadono diabetes, síndrome nefrótica, cirrose biliar, no

hipotiroidismo e nas hiperlipoproteinemias tipo IIa, IIb e III.

nível elevados do Colesterol LDL (Colesterol ligado a lipoproteínas (LP) de baixa densidade) relacionam-se intimamente à doenças coronarianas isquêmicas (DCI). Ao contrário, a elevação

do Colesterol HDL (Colesterol ligado a lipoproteínas de alta densidade)representa um fator de proteção contra a DCI. Hipertensão, tabagismo,

Obesidade são outras causas responsáveis pela arteroscleroses e DCI.

Significado Clínico: Diminuídodoenças que acometem o parênquima hepático

(Hepatite virótica, Hepatite Tóxica),ocasionalmente nas infecções agudas (pneumonia,

febre tifóide),hipertiroidismo, anemias, desnutrição.

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DislipidemiasDislipidemias

Classificação

Laboratorial

Hipercolesterolemia isolada

Elevação isolada do CT, geralmente aumento do LDL-C

Hipertrigliceridemia isoladaElevação isolada dos TG, por aumento do VLDL e/ou QM

Hiperlipidemia MistaValores aumentados de CT e TG

HDL-C Baixoc/ ou s/ aumento de LDL ou TG

Classificação Etiológica

Dislipidemias primárias Causas genéticas

Dislipidemias SecundáriasApresenta causa secundária

ALIMENTOS RICOS EM COLESTEROL

- Carnes gordas;- Bacon, toucinho;- Gema de ovo;- Produtos embutidos (salsicha, lingüiça);- Leite integral;- Queijos amarelos, como queijo prato,

queijo mussarela, parmesão;- Manteiga, banha, creme de leite;- Frutos do mar como camarão, lagosta,

lagostim, siri, caranguejo;- Alimentos fritos;

- Doces.

TIPOS DE GORDURA GORDURAS GORDURAS SATURADASSATURADAS (“VILÃS”): (“VILÃS”): comum nos ANIMAIS (porco, carnes

bovinas, leite, manteiga, dendêdendê).

Cadeia de carbonos ligados a hidrogênios. Sem dupla ligaçãoSem dupla ligação (cada C se liga a

2H).

Associadas a doenças do coraçãoAssociadas a doenças do coração (↑ (↑ LDL)LDL)

* O corpo necessita de gorduras para que o corpo absorva as vitaminas A, D, E e K (lipossolúveis) .

TIPOS DE GORDURAGORDURAS GORDURAS INSATURADASINSATURADAS:: comum nos VEGETAIS (óleos vegetais) e nos

peixes. MONOINSATURADASMONOINSATURADASCadeia de carbono com uma dupla ligação (azeite de

oliva).

POLIINSATURADASPOLIINSATURADASCadeia de carbono com mais de uma dupla ligação (girassol, canola)

Não associadas a doenças do coração. (aumentam HDLHDL no sangue e reduzem o LDLLDL)

SATURADA INSATURADA POLIINSATURADA

GORDURA TRANS GORDURA TRANS (biscoitos, salgadinhos, frituras , margarina, fast-food...) :

- gorduras insaturadas que sofreram HIDROGENAÇÃOHIDROGENAÇÃO (natural ou industrial).

Motivo (indústria): - alimentos mais saborosos; - prolonga o prazo de validade; - melhora a consistência.

Associadas a doenças cardíacas ( ↑LDL no sangue e ↓HDL)

COMO DIMINUIR O COLESTEROL NO SANGUE ?

DIETA (baixa eficácia):Substituição de ácidos graxos saturados por ácidos graxos poliinsaturados. São mais rapidamente metabolizados no fígado, diminuindo a concentração de colesterol plasmático.

EXERCÍCIOS FÍSICOS (baixa eficácia): Impacto pequeno devido à queima de calorias.Reduz em até 20 % o nível de triglicérides em pessoas com altas taxas do mesmo.

MEDICAMENTOS: estatinas reduzem em no máximo 20% o colesterol ruim. Rendem 4 bilhões de dólares ao ano só no Estados Unidos.

QUESTÃO COMPLEXA

FATORES GENÉTICOS

DIVERSOS FATORES DE RISCO

GORDURAS X CARBOIDRATOS

↑ Triglicérides e do LDL

3 moléculas de ácidos graxos + 1 molécula de glicerol

TRIGLICÉRIDESTRIGLICÉRIDES

TRIGLICÉRIDESrisco de arterosclerose e doenças cardiovasculares

pode indicar patologias como diabetes

excesso de álcool

disfunção renal crónica ou o excesso de determinados medicamentos(ex., diuréticos, tiazida)

O aumento do nível de triglicérides:

Metodologia:Colorimétrica (Reação de Trinder)

Finalidade : Sistema enzimático Para determinação dos triglicérides Por reação de Ponto Final em amostras de Sangue.

Princípio: Triglicérides ....Lipase /Lipoprotéica Glicerol e Ác. Graxos. Glicerol... Glicerol -Quinase Glicerol-3-Fosfato

Glicerol-3-Fosfato ....Oxidase - Peroxidase - Cromógeno Cereja

Metodologia:Colorimétrica (Reação de Trinder)

Finalidade : Sistema enzimático Para determinação dos triglicérides Por reação de Ponto Final em amostras de Sangue.

Princípio: Triglicérides ....Lipase /Lipoprotéica Glicerol e Ác. Graxos. Glicerol... Glicerol -Quinase Glicerol-3-Fosfato

Glicerol-3-Fosfato ....Oxidase - Peroxidase - Cromógeno Cereja

Amostra: Soro obtido livre de hemólise (para evitar resultados

falsamente elevados) ou plasma colhido com EDTA ou heparina. O analito é estável durante 3 dias entre 2 e 8ºC e 30 dias a 10ºC negativos.O sangue deve ser colhido após um jejum de 12 a 14 horas. As amostras lipêmicas devem ser previamente diluídas com Cloreto de Sódio a 0,85%, na proporção 1:2.

Amostra: Soro obtido livre de hemólise (para evitar resultados

falsamente elevados) ou plasma colhido com EDTA ou heparina. O analito é estável durante 3 dias entre 2 e 8ºC e 30 dias a 10ºC negativos.O sangue deve ser colhido após um jejum de 12 a 14 horas. As amostras lipêmicas devem ser previamente diluídas com Cloreto de Sódio a 0,85%, na proporção 1:2.

Interferências:

Procedimento:Rotular 3 tubos: B, P e T.Colocar 1,0 ml do Reagente Enzimático nos tubos B,P e T.Colocar 0,01ml da Amostra no tubo T e 0,01ml doPadrão no tubo P.Misturar bem e colocar em banho-maria 37 ºC por10 minutos.Ler a absorbância da Amostra e doPadrão em 505 nm,acertando o zero com o Branco.A cor é estável por 30 minutos.


Linearidade: A reação é linear até 1100 mg/dL. Amostras com valores acima diluir a amostra com Cloreto de sódio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.

Desejável ............................................... < 150Alto ......................................................... 150 a 199Elevado .................................................. 200 a 499Muito elevado.......................................... > 500

Crianças: < 10 anos entre 10 e 19 anosDesejavel: ≤100 ≤ 130Elevado: > 100 > 130

Influências Analíticas:

Dieta, Consumo de Álcool, Peso Corporal, Exercício Físico.Heparina – ativa lipoproteína lipase - falso diminuídoObter amostra com paciente sentadoTorniquete até 1 minuto

Reagentes:Padrão - conservar entre 2 e 8 °C.Contém: Triglicérides 100,0 mg/dL (1,13 mmol/L), Ácido Benzóico20,47 mmol/L; Reagente Enzimático 1 - conservar entre 2 e 8°C. Tampão Pipes pH 7,0 (100 mmol/L), Cloreto de Magnésio 15 mmol/L, 4-cloro fenol 5 mmol/L, Lipase Lipoprotéica 2500 U/L, Glicerol quinase > 1500 U/L, Peroxidase > 1000 U/L, Colato de sódio 2,7g/L;Reagente Enzimático 2 - conservar entre 2 e 8 °C.Contém: 4-Aminoantipirina 0,9 mmol/L, ATP 1,5 mmol/L, Azida Sódica 15,38 mmol/L, Glicerol-3-Fosfato Oxidase > 4000 U/L, Genapol 1,8g/L.

Cálculos:

Triglicérides ( mg/dL ) = Absorbância da amostra x 200 Absorbância do padrão

Fator de calibração = Concentração do padrão ( 200 mg/dL ) Absorbância do padrão

Triglicérides mg/dL = Abs. da amostra x Fator de calibração

Significado Clínico: AumentadoTêm grande importância na classificação e fenotipagem das

hiperlipoproteinemias. Nas várias patologias em que ocorre hiperlipidemia, os Triglicérides somente não se encontram elevados no Tipo IIa.

No diabetes, doenças cardiovasculares, pancreatite, síndrome nefrótica, uremia, hipotireoidismo, alcoolismo crônico, gravidez e mieloma múltiplo. Estrógenos, corticoesteróides, B-bloqueadores, diuréticos tiazídicos e retinóides.

Em processos de triagem, a dosagem dos Triglicérides, Colesterol, a prova de refrigeração sérica e outros parâmetros podem fornecer dados consistentes à classificação e fenotipagem das hiperlipoproteinemias.

TRIGLICÉRIDESrisco de arterosclerose e doenças cardiovasculares

pode indicar patologias como diabetes

excesso de álcool

disfunção renal crónica ou o excesso de determinados medicamentos(ex., diuréticos, tiazida)

O aumento do nível de triglicérides:

HDL

Rye KA et al. Atherosclerosis 1999;145:227-238.

Hydrophobic CoreHydrophobic Core of Triglyceride and of Triglyceride and Cholesteryl EstersCholesteryl Esters

apoA-IIapoA-II

Surface Monolayer of Surface Monolayer of Phospholipids and Phospholipids and Free CholesterolFree CholesterolapoA-IapoA-I

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Metodologia : Colorimétrico

Finalidade :determinação da fração HDL do colesterol presente no soro.

Princípio: Os quilomícrons e as lipoproteínas de baixíssima densidade(VLDL) e de baixa densidade (LDL) presentes na amostra,precipitam em presença de íons fosfotungstato e magnésio.Após a centrifugação o sobrenadante contém aslipoproteínas de elevada densidade (HDL), cujo colesterolquantifica-se em espectrofotômetro.

Metodologia : Colorimétrico

Finalidade :determinação da fração HDL do colesterol presente no soro.

Princípio: Os quilomícrons e as lipoproteínas de baixíssima densidade(VLDL) e de baixa densidade (LDL) presentes na amostra,precipitam em presença de íons fosfotungstato e magnésio.Após a centrifugação o sobrenadante contém aslipoproteínas de elevada densidade (HDL), cujo colesterolquantifica-se em espectrofotômetro.

col. esteraseColesterol esterificado + H2O---------------------> Colesterol + Ac. graxo col. oxidaseColesterol + ½ O2 + H2O--------------------------> Colestenona + H2O2 peroxidase2H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol -------------> Quinoneimina + 4H2O

Reagntes:

Reagente Precipitante:Ácido Fosfotúngstico 16 mmol/L, Cloreto de magnésio 3,5 mmol/L.

Padrão: Butanol 10% v/v; Triton X100 0,1% v/v; em concentração equivalente à 20 mg/dL de HDL colesterol.

Amostra: Soro ou Plasma(hepariana, lítio, EDTA)

Procedimento:Precipitação

1. Pipetar em tubo de centrífuga amostra: 250 µLe Reagente precipitante 250 µL2. Agitar vigorosamente e deixar em repouso durante10 minutos.3. Centrifugar durante 10 minutos a 3.000 rpm para obter um

sobrenadante límpido.4. Recolher com cuidado o sobrenadante.5. Realizar a dosagem de colesterol HDL imediatamente.

Amostra: Soro ou Plasma(hepariana, lítio, EDTA)

Procedimento:Precipitação

1. Pipetar em tubo de centrífuga amostra: 250 µLe Reagente precipitante 250 µL2. Agitar vigorosamente e deixar em repouso durante10 minutos.3. Centrifugar durante 10 minutos a 3.000 rpm para obter um

sobrenadante límpido.4. Recolher com cuidado o sobrenadante.5. Realizar a dosagem de colesterol HDL imediatamente.

1. Pipetar Reagente do Colesterol: 1,0 mL nos Tubos B,P e T.

2. Água destilada: 100µl no tubo B3. Padrão: 100µl no tubo P4. Sobrenadante: 100µl no tubo T5. Homogeneizar bem e incubar os tubos durante 10

minutos a 37 ºC.3. Medir a absorbância (Ap) do Padrão e (Aa) da

Amostra frente ao Branco a 505 nm. A cor é estável durante 30 minutos.

Cálculos: HDL Colesterol (mg/dL) = Absorbância da Amostra x Conc. Padrão (mg/dL) (*) Absorbância do Padrão(*) 40 equivale ao valor do padrão (20 mg/dL) corrigido de acordo com o fator de diluição (1:2) usado na precipitação.

Fator = Concentração Padrão (mg/dL)(*) Absorbância do Padrão

Colesterol HDL (mg/dL) = Absorbância da amostra x Fator de Calibração


Faixa Etária Valor (mg/dL) InterpretaçãoAté 10 anos > 40 Desejável

De 10 a 19 anos > 35 Desejável < 40 Baixo

Adultos 41 a 59 Aceitável > 60 Desejável Diabéticos > 45 Desejável

Linearidade: até 150 mg/dL.Para valores superiores, diluir a amostra com NaCl 150 mM (0,9%), realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.

Influências Analíticas: Anticoagulantes Citrato e Oxalato, não devem ser usados, pois produzem resultados falsamente diminuídos.Amostras só devem ficar em T.A. por 14 horas.

Interferêrncias: Hemólise, IcteríciaHemoglobina > 150 mg/dLBilirrubina > 10 mg/dL

Significado Clínico : Aumentados exerce importante função na retirada do

colesterol dos tecidos e transporte até o fígado para ser metabolizado em ácidos biliares (transporte

reverso do colesterol correlação forte inversa entre os níveis de HDL colesterol e o risco de aterosclerose.

níveis elevados de HDL são benéficos e até mesmo desejáveis. Exercícios físicos podem aumentar essa fração do HDL.

seus níveis se elevam no hipotireoidismo e

Significado Clínico : Diminuídos

Fatores genéticos: hipoalfalipoproteinemia. Fumo. Obesidade. Hipertrigliceridemia. Sedentarismo. Esteróides,androgênios, progestágenos,

anabólicos, tiazídicos. b-Bloqueadores adrenérgicos. Neomicina. Anti-hipertensivos.

Metodologia : Surfactante Seletivo.

Finalidade : determinação da fração LDL do colesterol presente no soro e plasma

Metodologia : Surfactante Seletivo.

Finalidade : determinação da fração LDL do colesterol presente no soro e plasma

Princípio:Na primeira etapa o LDL colesterol presente na amostra é protegido das reações enzimáticas, enquanto os quilomícrons, VLDL e HDL colesterol reagem com as enzimas Colesterol Esterase (CHE) e Colesterol Oxidase (COD). O peróxido de hidrogênio produzido pelas reações enzimáticas nesta primeira etapa é então decomposto pela Catalase presente no Reagente.Na segunda etapa, a adição do Reagente 2 proporciona a reação do LDLcolesterol com as enzimas CHE e a COD e a inativação da Catalase. O peróxido de hidrogênio produzido nesta etapa forma um complexo colorido pela condensação da 4-Aminoantipirina com HDAOS (N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5- dimetoxianilina) na presença da Peroxidase (POD). A concentração do LDL colesterol é proporcional à absorbância do complexo formado medido a 600 nm.

LDL + HDL+ VLDL+Quilomicrons +Surfactante 1 CE+CO

LDL+ Produto Incolor CE

LDL+ Surfactante 2 Colesterol + Ác. Graxos CO

Colesterol + O2 Colesterol 4 en-ona + H2O2

peroxidaseH2O2+ DSBmT + 4-aminoantipirina

Quinoneimina + 4 H2O

Reagentes:Tampão de Good 25 mmol/L pH 6,8; Colesterol Esterase

5.000 U/L;Colesterol Oxidase 5.000 U/L; HDAOS 0,64 mmol/L e Catalase 1.000.000 U/L.

Tampão de Good 25 mmol/L pH 7,0; 4-aminoantipirina 3,4 mmol/L; Peroxidase 20.000 U/L e azida sódica 0,095%.

Calibrador:Soro Humano; azida sódica 0,095% (valor daconcentração de LDL)

Reagentes:Tampão de Good 25 mmol/L pH 6,8; Colesterol Esterase

5.000 U/L;Colesterol Oxidase 5.000 U/L; HDAOS 0,64 mmol/L e Catalase 1.000.000 U/L.

Tampão de Good 25 mmol/L pH 7,0; 4-aminoantipirina 3,4 mmol/L; Peroxidase 20.000 U/L e azida sódica 0,095%.

Calibrador:Soro Humano; azida sódica 0,095% (valor daconcentração de LDL)

Amostra: Soro ou Plasma(hepariana-lítio, EDTA)

Procedimento: Rotular 2 tubos Calibrador e teste

1. Colocar - 10 µL da Amostra no tubo T.2. Colocar 10 µL do Calibrador no Tubo C.3. Colocar nos tubos T e C 750 µL do reagente 1.4. Homogeneizar, incubar a 37 ºC por 5 minutos.5. Medir imediatamente a absorbância a 546 nm da amostra (A1a) e

do calibrador (A1c) frente a água destilada.6. Colocar 250 μL do Reagente 2. nos 2 tubos.7. Homogeneizar e incubar 5 minutos a 37 º C.8. Medir imediatamente a absorbância da amostra (A2a) e do

calibrador (A2c) frente a água destilada a 546 nm.

Amostra: Soro ou Plasma(hepariana-lítio, EDTA)

Procedimento: Rotular 2 tubos Calibrador e teste

1. Colocar - 10 µL da Amostra no tubo T.2. Colocar 10 µL do Calibrador no Tubo C.3. Colocar nos tubos T e C 750 µL do reagente 1.4. Homogeneizar, incubar a 37 ºC por 5 minutos.5. Medir imediatamente a absorbância a 546 nm da amostra (A1a) e

do calibrador (A1c) frente a água destilada.6. Colocar 250 μL do Reagente 2. nos 2 tubos.7. Homogeneizar e incubar 5 minutos a 37 º C.8. Medir imediatamente a absorbância da amostra (A2a) e do

calibrador (A2c) frente a água destilada a 546 nm.

Cálculos: A2c - A1c = DA calibradorA2a - A1a = DA amostra[C] = Concentração do Calibrador

ΔA amostra x concentração do calibrador = (mg/dL) ΔA calibrador

Fator: = [Cal] ΔA calibradorConcentração de LDL (mg/dL) = ΔA amostra x Fator Calibração

Linearidade: 6,6 e 992 mg/dL.Para valores superiores, diluir a amostra com NaCl 150 mM (0,9%), realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.

Influências Analíticas:Anticoagulantes Citrato e Oxalato, não devem ser usados, pois produzem resultados falsamente diminuídos.Amostras só devem ficar em T.A. por 14 horas.

Interferências:Hemólise, Icterícia e LipemiaHemoglobina > 500 mg/dLBilirrubina Conjugada > 40 mg/dLBilirrubina Não-Conjugada > 50 mg/dLTriglicérides > 1293 mg/dLÁcido Ascórbico > 50 mg/dLGama-Globulinas >5000 mg/dL

Diluir as amostras com valores maiores do que permitido, à exceção do triglicérides.

Valor de Referência: AdultosÓtimo < 100Limiar Ótimo 100 a 129 Limiar Elevado 130 a 159Elevado 160 a 189Muito elevado ≥ 190

Crianças e AdolescentesIdade de 2 a 19 anosDesejável < 110 Limítrofe 110 a 129Elevado ≥ 190

Significado ClínicoAs lipoproteínas de baixa densidade (LDL), são as principais

proteínas de transporte do colesterol. Os níveis de colesterol total são conhecidos por estarem correlacionados com a doença arterial coronariana (DAC). Nos últimos anos, em adição ao colesterol total a determinação da fração LDL do colesterol tornou-se fundamental para a avaliação do risco de DAC, pois são seus níveis que determinam o diagnóstico e as metas de avaliação e de tratamento da hipercolesterolemia. A relação entre a doença aterosclerótica e o aumento de LDL é significativa e direta

VLDLQuantificado pela equação matemática:

VLDL = Triglicérides 5

LDL

VLDL naciente

Apo B-100

Apo CI

Apo CII

Apo CIII

Apo E

Apo A-I

HDL

VLDL madura

Lipasa lipoproteica

TG

AG

FOSFOL

HDLEsteres de COL

IDL

Transformação de VLDL en LDL

Arterias

Equação de FriedwaldVLDL = Triglicérides ÷ 5LDL= Colesterol Total – (HDL + VLDL)Colesterol Total e Frações = Colesterol HDL + Colesterol LDL

+ Colesterol VLDLLimitações: Alta concentração de Triglicérides Quantidade significante de quilomicrons Disbetalipoproteinemias

Avaliação das Apolipoproteínas A medida das apolipoproteina aumentam a especificidade para a identificação dos fatores de risco coronariano. O perfil de apolipoproteinas é indicado para pacientes que apresentam riscos de aterosclerose tais como: Hipercolesterolemia. A apoB é utilizada para confirmar o diagnóstico.HDL – C reduzidosCrianças com antecedentes familiaresMulheres usuárias de anticoncepcional

A Apolipoproteína A1

É a principal constituinte das lipoproteínas de densidade alta (HDL), no qual é captada rapidamente assegurando seu retorno ao fígado para seu catabolismo A diminuição de apoA1 é indicador do aumento do riscocardiovascular

Apolipoproteína B Maior constituinte protéico das lipoproteínas de densidade baixa (LDL) e secundariamente das (VLDL) A apo B atua como determinante da união das LDL a seus receptores específicos As LDL circulante em excesso são captadas pelos macrófagos produzindo as células espumosas, ponto de partida da placa de ateroma. Pois uma concentração elevada de apoB favorece a formação de aterosclerose

Lipoproteína (a) – Lp(a)

Elevados níveis de Lp(a) estão associados com o aumento de risco para o:Infarto do miocárdio;Doenças vasculares prematuras (menor de 55 anos)Doença arterial cérebro vascularEnfarto agudo do miocárdio em pacientes com histórico familiar e hipercolesterolemia;

Lipidios,Apolipos e Lipoproteinas

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