PUSTAKA Cannel, R.J.P., 1998, How to Approach the Isolation of A Natural Product dalam Natural Products Isolation, Cannell, R.J.P. (eds), Humana Press, New Jersey.

Sarker, S. D., Latif, Z. & Gray, A. I., 2006, Natural Products Isolation, second edition, 368, Humana Press, United States of America.

Definisi Isolasi

Bahan Alam

ISOLASI

Isolasi adalah sebuah metode yang digunakan untuk

memisahkan senyawa yang bercampur dalam tumbuhan

sehingga kita dapat menghasilkan senyawa tunggal yang

murni. Tumbuhan mengandung ribuan senyawa sebagai

metabolit primer dan metabolit sekunder. Biasanya proses

isolasi senyawa dari bahan alami mengisolasi senyawa

metabolit sekunder,karena dapat memberikan manfaat bagi

kehidupan manusia.

Beberapa tahapan untuk melakukan Isolasi :

1.Ektraksi

Ekstraksi merupakan proses pemisahan, penarikan atau pengeluaran

suatu komponen cairan/campuran dari campurannya. Biasanya

menggunakan pelarut yang sesuai dengan kompnen yang diinginkan.

2. kromatografi

Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran didasarkan atas

perbedaan distribusi dari komponen-komponen campuran tersebut diantara

dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase gerak (cair atau gas).

3. Isolat Baru

4. Uji Identifikasi

5. Uji Efektifitas

Faktor-faktor yang harus diperhatikan untuk isolasi

senyawa :

1. Sifat dari senyawa target :

a. kelarutan

b. sifat asam basa

c. stabilitas

d. ukuran molekul

2. Biaya

3. Jenis kromatografi yang cocok

ISOLASI

Teknik kromatografi yang digunakan dalam isolasi berbagai jenis produk alami

dapat secara luas diklasifikasikan ke dalam dua kategori: klasik, dan modern.

ISOLASI

KLASIK MODERN

• Kromatografi lapis tipis (TLC) • Kromatografi lapis tipis preparatif (HPTLC) • Kromatografi kolom terbuka (CC) • Flash kromatografi (FC).

• High performance kromatografi lapis tipis (HPTLC) • Kromatografi Multiflash (misalnya, Biotage) • Kromatografi cair vakum (VLC) • Chromatotron • Ekstraksi Solid-fase • Droplet countercurrent chromatography (DCCC) • High-performance liquid chromatography (HPLC) • Hyphenated techniques (misalnya, HPLC-PDA, LC-MS, LC-NMR, LC-MS-NMR).

Isolation of

Spirocardins A and

B From Nocardia sp

ALLPPT.com _ Free PowerPoint Templates, Diagrams and Charts

Isolasi Spirocardins A dan B Dari Nocardia sp

Garis besar protokol umum yang diuraikan oleh Nakajima et al. Untuk isolasi antibiotik diterpene, spirocardins A dan B, dari fermentasi Nocardia sp berikut ini adalah bagan alir proses isolasinya :

Sumber : http://www.idimages.org

Isolasi Spirocardins A dan B Dari Nocardia sp

Senyawa hadir dalam filtrat kaldu, yang diekstraksi dua kali dengan EtOAc

(setengah volume supernatan). fraksi EtOAc (etil asetat) yang dikumpulkan

dipekatkan dengan penguapan dalam vakum, dicuci dengan volume air yang

sama jenuh dengan natrium klorida (NaCl), dan selanjutnya dikurangi untuk

memperoleh minyak. Minyak mentah ini dilarutkan kembali dalam volume minimal

EtOAc dan dikenakan CC (column chromatography) silika gel eluasi dengan n-

heksana mengandung peningkatan jumlah aseton. Baru membawa hasil dua

fraksi yang mengandung spirocardin A dan spirocardin B, masing-masing, sebagai

komponen utama. pemurnian lebih lanjut dicapai dengan CC silika gel dan RP-

HPLC (reversed-phase HPLC). Untuk silika gel CC pada tahap ini, eluen

campuran benzena-EtOAc digunakan. Saat ini, benzena tidak lagi digunakan

sebagai pelarut kromatografi karena karsinogenisitas nya.

Isolation of

Cispentacin From

Bacillus cereus

ALLPPT.com _ Free PowerPoint Templates, Diagrams and Charts

Isolation of Cispentacin From Bacillus cereus

Metode yang paling cocok untuk penerapan kromatografi pertukaran

ion dalam isolasi bahan alami. Filtrat supernatan diaplikasikan langs

ung ke kolom pertukaran ion tanpa perlakuan khusus sebelumnya. La

ngkah terakhir dari proses isolasi yang digunakan CC pada arang akt

if untuk menghasilkan cispentacin dengan kemurnian 96%, yang sela

njutnya dimurnikan dengan rekristalisasi menggunakan aseton-etan

ol-air. ( Konishi et al ).

(Sarker , et al )

Isolasi

phytoecdysteroids

dari limnanthes

douglasii

Isolasi phytoecdysteroids dari limnanthes douglasii

Nama ilmiah : Limnanthes douglasii

Tingkatan takson : Spesies

Klasifikasi lebih tinggi : Limnanthes

Isolasi dari moschatine,

sebuah glikosida

steroid, dari Centaurea

moschata

ALLPPT.com _ Free PowerPoint Templates, Diagrams and Charts

Secara Ilmiah

Moschatine, glikosida steroid diisolasi dari biji C. moschata. Protocol isolasi termasuk berturut-turut extraksi soxhlet dari biji tanah dengan n-hexane, chcl3 dan MeOH diikuti dengan persiapan RP-HPLC (persiapan C18, isocratic eluasi dengan 55% MeOH pada air, 5ml/min). pemurnian akhir adalah pengangkatan keluar dengan RP-HPLC menggunakan semipreparative kolom C6, eluasi secara iso cratis dengan 45% MeOH dalam air, 2 mL/min, hasil yang didapatkan mochatine dengan kemurnian > 98%

Isolasi Saponin dari

Serjania

salzmanniana

ALLPPT.com _ Free PowerPoint Templates, Diagrams and Charts

Isolasi Saponin dari Serjania salzmanniana

Isolasi saponin digunakan untuk obat antijamur dan moluskisida. Pada ekstrak dari Serjania salzmanniana menggunaan uji kromatografi lapis tipis dengan fase diam silika gel CC. Uji KLT menggunaan air sebagai penampak '' Noda'' agar tak rusak. pelat KLT berubah gelap saat disemprot dengan air (basah), kecuali daerah-daerah yang terdapat sapogenins karena bersifat hidrofobik tetap berwarna putih (kering).

Isolasi saponin dari Sarjania salzmanniana

• Mengekstraksi serbuk batang serjania salzmanniana dengan metanol (uapkan sampai kering)

• Disuspensikan dengan Metanol, aquasest (1:2)

• Residu diekstraksi dengan CHCl3 sebanyak 3 kali (uapkan sampai kering)

• Residu ditotolkan pada plat silica CC

• Fase gerak menggunakan CHCl3, MeOH, H2O (7,3,1)

• Noda berwarna putih menunjukan adanya saponin.

(Natural Products Isolation Second Edition halaman 27)

(How to Approach the Isolation of a Natural Product halaman 45)

Penelitian tentang isolasi, identifikasi serta uji aktifitas senyawa alkaoid daun binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis). Serbuk daun binahong dimaserasi menggunakan pelarut n-heksana, kemudian etanol, diperoleh ekstrak n-heksana dan ekstraketanol. Dari ekstrak etanol dilakukan isolasi alkaloid total. Pemisahan alkaloid dilakukan dengan KLT preparatif dan analisis dengan spektrofotometer UV-Vis, FTIR dan LC-MS. Dari analisis yang dilakukan diduga isolat alkaloid adalah senyawa betanidin (C18H16N2O8) yang bersifat tidak sitotoksik dengan LC50 sebesar 85,583 ppm.