informe de practicas

ALUMNA: HERNANDEZ CUEVA LIZ LORENA

DOCENTE : ALBINO CORNEJO GRACIELA

CODIGO : 2015 - I

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOSinforme de practicas

PRACTICA N 3 : DETERMINACIN DE BACTERIAS VAIBLES POR METODO INDIRECTOI. INTRODUCCIN:

En diversos estudios microbiolgicos (como anlisis de alimentos, de agua de bebida, de productos farmacuticos o del medioambiente entre otros), se requiere conocer el nmero de microorganismos presentes en un material con objeto de determinar su calidad. El procedimiento es esencialmente el mismo que para la medida del crecimiento de las poblaciones de bacterias El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante mtodos de medida de la masa total celular, que generalmente es directamente proporcional al nmero de clulas, (mtodos de determinacin del peso, de la actividad del cultivo o mtodos turbidimtricos) o por la determinacin del nmero de clulas.

II. OBJETIVOS :

Llegar a conocer el mtodo de reduccin del colorante para el recuento de bacterias viables.

Medir el nmero de microorganismos con el mtodo indirecto.

III. MARCO TEORICO:El mtodo de reduccin del azul de metileno es un mtodo indirecto para calcular el contenido total de bacterias de la leche. De manera que en lugar de contar las bacterias se establece una correlacin entre el tiempo que se necesita para reducir el colorante de Azul de Metileno en la leche a una forma incolora y la probable poblacin bacteriana de la muestra. Por lo general, el tiempo que se necesita para la reduccin del colorante, es inversamente oro al nmero de bacterias presentes en a leche. Este mtodo puede adaptarse para el examen de gran nmero de muestras en un tiempo corto, pero sin embargo, si la poblacin bacteriana es alta, ste mtodo no nos da informacin de la probable fuente de contaminacin. No hay necesidad de que los utensilios de vidrio utilizados para esta prueba sean estriles, pero su contaminacin puede reducirse al mnimo tratndolos con agua hirviente o vapor que circule libremente. Tal como existe en la ubre, la leche posee un potencial de oxidacin-reduccin suficientemente bajo para reducir inmediatamente el azul de metileno. La incorporacin de oxgeno durante el ordeo, enfriamiento, trasvase, etc. eleva el potencial Redox aproximadamente de + 0.06 a 0.01 voltios. Se cree que en el mecanismo de la reduccin del colorante durante la prueba, intervengan varios factores relacionadas entre s, pero lo que si es seguro que el proceso respiratorio de las bacterias, elimina oxgeno de la leche, provocando un cambio en el potencial de Oxido-Reduccin, puesto que, por lo general, el oxgeno mantiene un potencial positivo, y que, a medida que el potencial va cayendo, el hidrgeno pasa de los elementos constitutivos de la leche y de los metabolitos a1 azul de metileno, causando su reduccin. La prueba del azul de metileno, por su sencillez y la rapidez con que se obtienen los datos, es fcil, prctica y econmica, sin embargo, este mtodo tiene sus limitaciones y son las siguientes. La temperatura de incubacin de 37C (98.6F) no es favorable para el metabolismo de todas las bacterias contenidas en la leche. Las distintas bacterias tienen capacidades diferentes en lo que respecta a rebajar el potencial de Oxido- reduccin de la leche. Por las siguientes razones: Las bacterias termodricas permanecen inactivas durante la prueba, y esta es la objecin ms importante ya que estas bacterias son las que constituyen el mayor problema para el elaborador. Las bacterias sicrfilas y termfilas tendrn muy poca o ninguna actividad durante la prueba. Los materiales inhibidores de la leche impedirn tambin la proliferacin de muchas bacterias y harn que la prueba d indicacin de una calidad ms alta que la realmente existente

IV. MATERIALES:

Muestra : Leche fresca

Colorante: Azul de metileno

Bao Mara

Gradilla

Tubos con tapa rosca

Pipetas de 10 ml y 1ml

Tubos control.V. PROCEDIMIENTO:

Se pipete 10 mL de agua destilada estril en una botella y se le agreg 0.5 mL de la solucin de azul de metileno.

Homogenizar la muestra 20 veces.

Luego le agregamos 0.5ml del azul de metileno y con una pipeta de 10 mL tomamos esa misma cantidad de muestra de leche en un tubo de ensayo.

Previamente debemos tener ya al bao Mara calentado a 37 C ( 0.1), verificar que en ste haya un control ms y menos y un tubo con la muestra y el termmetro.

Revisar cada 30 min.

Si pasados los primeros 30 min. no se vuelve blanco el contenido del tubo, lo sacamos, lo invertimos suavemente 3 veces y lo volvemos a poner en el bao Mara por otros 30 min. y as hasta que el contenido se vuelva blanco.

Al final, anotamos el tiempo que demore en virar de color e interpretamos.

VI. RESULTADOS:

Los resultados obtenidos fueron los siguientes: La leche despus de 2 horas y media, retorna al color inicial. Indicando as que se encuentra dentro de la clasificacin de una leche aceptable, categora C.

> 4h=Muy buena (A)

Entre 3 4 h=Buena (B)

> 30 min. a 3 h=Aceptable (C)

< 30 min.=Inaceptable (D)

Y segn el resultado encontrado, encontramos que puede haber de 0.5 a 4 millones de bacterias en nuestra leche analizada.VII. CONCLUSIONES :

Logramos reconocer el mtodo de reduccin del colorante, se sabe que es una prueba de oxido reduccin.

La prueba de el tiempo de reduccin del Azul de metileno, es un mtodo practico de los tantos existentes y que nos facilitan para analizar la calidad microbiolgica de nuestra leche.

Mediante la prctica realizada para lograr una coloracin demoro ms de 1h a 3h, para virar del color azul al blanco, lo cual esto nos da a conocer que nuestra leche analizada esta dentro del rango permitido y lo cual si esta apto para el consumo humano.

Logramos determinar una cantidad aproximada de microorganismos existente en nuestra leche, lo cual nos permite saber que nuestro producto est apto para el consumo humano. VIII.- CUESTIONARIO: Cul es la cantidad de microorganismos que le corresponde a cada clasificacin de bacterias?

Internacionalmente la tabla de interpretacin del TRAM se relaciona con las siguientes recuentos de bacterias /mL.TRAM (minutos) No Bacterias/mL.

< 30 minutos 20 - 30 millones

30 min - 2 horas 4 - 20 millones

2 - 6 horas 0,5 - 4 millones

> 6 horas < 500.000

XV. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

JAY. J.1994. Microbiologa Moderna de los Alimentos. 2da Edicin. Editorial Acribia. Zaragoza.

MORENO M., M.; M. T., SILVA G. y CALDERON M., W. (2006). Gua de Prcticas: Microbiologa General. Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo Facultad de Ciencias Biolgicas. Lambayeque.

DAVILA FERNANDEZ, N. y HERNANDEZ GARCIA, J. M. (2006). Mtodos de ensayos rpidos de deteccin de microorganismos en la leche.

http://www.anmat.gov.ar/anmat/drvisapi.dll?MIval=fna_show_monog&ID=AZUL_DE_METILENO

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO