Inducción de proteína recombinante

-Lactamasa

Tecnología de DNA recombinante: Herramientas

1 Aislamiento del gen 2. Clonación y expresión

Producción de la proteína

Transcriptasa reversa Enzimas de restricción Célula huésped

DNA polimerasa Ligasa Clones

Sonda de DNA Véctor Medio de cultivo

3

Clonación del DNA

•DNA foráneo (secuencia que se desea clonar)

•Vector de clonación (vehículo)

•Organismo huésped (E. coli)

•Selección de vectores

Vector híbrido o recombinante

Vector de clonación pET-24a(+)

7200 bp

• Un gene siempre tiene que ir flanqueado por una zona promotora y otra terminadora de la transcripción

trangene

Secuencia que codifica para la proteína represora

Secuencia de unión de la proteína represora

• El inductor del operón lac que utilizaremos será el isopropiltiogalactósido (IPTG).

COMPOSICIÓN.

a) Genes estructurales (en tándem).• gen lac z codifica para la β-galactosidasa

• el gen lac y que codifica para la permeasa de galactosido.• el gen lac a, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.

b)Promotor

Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripción.

C) Operador• Se localiza en traslape con el promotor , sirve

como el sitio de unión para una proteína, que se conoce como represor.

d) Gen Regulador.• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que están

siendo regulados. El gen regulador codifica para una proteína específica, un producto denominado REPRESOR.