HCV Ab PLUS - REF 34330 HCV Ab PLUS CALIBRATORS - REF ...€¦ · R1 Access HCV Ab PLUS reagenční...

HCV Ab PLUS - REF 34330

HCV Ab PLUS CALIBRATORS - REF 34335

HCV Ab PLUS QC - REF 34339

From page To Page

Czech CZ 02 11

Danish DA 12 22

German DE 23 33

Greek EL 34 44

English EN 45 55

Spanish ES 56 66

French FR 67 78

Italian IT 79 89

Lithuanian LT 90 100

Norwegian NO 101 111

Polish PL 112 122

Portuguese PT 1200 133

Slovenian SV 134 143

Turkish TR 144 154

Access HCV Ab PLUS A44299CStrana 1

HCV Ab PLUSREF 34330

Použití Test Access HCV Ab PLUS využívá imunoenzymatickou chemiluminiscenční techniku naparamagnetických částicích k detekci protilátek proti viru hepatitidy C v lidském séru nebo plasměpomocí Access Immunoassay systémů (Access, Access2, UniCel® DxI®).

Pouze pro diagnostiku in vitro

Všechny vyráběné a komercionalizované reagencie jsou kontrolovány kompletním systémem kontrolykvality začínajícím od přijetí surovin až po komercionalizaci produktu.

Každá šarže je podrobena kontrole kvality a je uvolněna na trh pouze tehdy, jestliže odpovídástanoveným kritériím.

Dokumentace, vztahující se k výrobě a kontrole každé jednotlivé šarže, je uchovávána naší společností.

Souhrn avysvětlení

Virus hepatitidy C (HCV) je považován za hlavní příčinu potransfúzní non-A, non-B hepatitidy(NANBH) a je jako takový přenášen netransfúzními parenterálními cestami (toxikomani, pacienti pohemodialyze, pacienti po transplantaci).1,2,3,4,5,6,7 Padesát až šedesát procent pacientů s infekcí jenáchylných ke vzniku chronické hepatitidy C a riziku rozvoje cirrhosy jater nebo hepatocelulárníhokarcinomu.8,9

Zavedení povinného vyšetření každé dárcovské krve (na protilátky anti-HCV) výrazně snížilo rizikopřenosu infikovanou krví.10,11

Test Access HCV Ab PLUS je určen k detekci protilátek anti-HCV v lidském séru nebo plasmě, a tak sepodílí na prevenci parenterální kontaminace. Používá se též pro diagnosu infekce HCV. V obou případechmusí být výsledek interpretován v souvislosti s klinickými daty a jinými sérologickými markery.

Principy testu Test Access HCV Ab PLUS je nepřímá imunoenzymatická analýza. Vzorek (sérum, plazma nebokontrola) je přidán do reakční nádoby s paramagnetickými částicemi, potaženými polypeptidem, kterýnapodobuje imunodominantní epitopy kapsidové oblasti a rekombinantními proteiny (NS3 a NS4).Během inkubace se jak IgG, tak IgM přítomné ve vzorku, navážou na pevnou fázi. Po inkubaci je pevnáfáze separována pomocí magnetického pole a nenavázané látky jsou odstraněny sérií promývacích kroků.Ve druhém kroku je k reakční nádobky přidán konjugát (kozí protilátka proti lidskému IgG, značenáalkalickou fosfatázou). Po inkubaci následuje série promývacích kroků odstraňující přebytečný konjugát.Je přidán chemiluminiscenční substrát, Lumi-Phos* 530, a fotony generované enzymovou reakcí jsouzměřeny luminometrem. Emitovaná intenzita signálu je úměrná množství přítomného enzymovéhokonjugátu a tudíž i titru anti-HCV protilátek přítomných v testovaném vzorku. Porovnáním hodnotycut-off, stanovené kalibrací testu k signálu přítomného ve vzorku, je stanovena přítomnost nebo absenceanti-HCV protilátek.

A44299C Access HCV Ab PLUSStrana 2

Informace oproduktu

Access HCV Ab PLUS Reagent PackKat. č. 34330: 100 stanovení, 2 balení, 50 testů/balení• Dodáváno hotové k použití.• Reagenční zásobník uchovávejte při +2-10 °C ve vertikální poloze před vložením do přístroje nebo v

přístroji.• Reagencie je stabilní do data expirace uvedeném na štítku.• Před prvním vložením reagenčního zásobníku promíchejte obsah několikerým opatrným obrácením,

dokud nejsou částice kompletně resuspendovány. • Po počátečním použití, uchovávejte jej v přístroji nebo v chladu (na stojato) a spotřebujte během

28 dnů. • Známkou možné závadnosti jsou poškozená těsnící fólie na reagenčním zásobníku nebo kontrolní

hodnoty mimo akceptovatelný rozsah.

Upozornění abezpečnostní

opatření

• Při prvním vložením do kruhového zásobníku protřepejte reagenční zásobník až jsou částice kompletně resuspendovány.

• Pouze pro diagnostiku in vitro.• Azid sodný může vytvářet s olovem nebo mědí obsaženou ve vodovodním potrubí vysoce výbušné

kovové azidy. Abyste se vyvarovali tvorbě azidových nánosů při likvidaci kapalin, splachujte je velkým množstvím vody12.

• ProClin** 300 je potenciální kožní dráždidlo. Zabraňte rozstříknutí nebo rozlití reagencie na pokožku nebo oblečení. V případě kontaktu s reagencií důkladně opláchněte vodou.

Odběr apříprava

vzorku

1. Doporučenými vzorky jsou sérum nebo plazma (heparin, EDTA nebo citrát).2. Používejte následující standardní postupy při manipulaci a zpracování krevních vzorků: 13, 14

• Při odběru krevních vzorků dodržujte bezpečnostní předpisy pro odběr krve ze žíly.• Ponechte vzorky před centrifugací dostatečně koagulovat, minimálně 1 hodinu.• Po celou dobu ponechte zkumavky uzavřené.• Centrifugujte vzorky 15 minut minimálně při 1500 G.

3. Používejte následující standardní postupy pro uchovávání krevních vzorků:13, 14

• Neuchovávejte vzorky při pokojové teplotě déle než osm hodin.• Pokud nebude test hotov do osmi hodin, uložte vzorek při +2-10 °C.• Pokud nebude test hotov do 48 hodin nebo pro transport vzorků, zmrazte jej na -20 °C. 13

• Vzorky rozmrazujte pouze jednou, rychle je ohřejte po několik minut ve 40 °C vodní lázni.• Za účelem odstranění vznášejících se fibrinových částic nebo shluků, které mohou zapříčinit

falešně pozitivní výsledky, po rozmražení znovu centrifugujte vzorek 15 minut při 3000 G a přeneste jej do testovacího kalíšku.

4. U vzorků obsahujících do 200 mg/l bilirubinu, 90 g/l albuminu, lipemických vzorků s obsahem do ekvivalentu 36 g/l triglyceridu a hemolyzovaných vzorků s obsahem do 5 g/l hemoglobinu nejsou výsledky nijak ovlivněny.

R1a: Paramagnetické částice potažené rekombinantními proteiny (NS3 a NS4) apeptidem (kapsidovým) resuspendované v TRIS pufru obsahujícím < 0,1 %azidu sodného.

R1b: Ředící roztok pro vzorky obsahující <0,1% azidu sodného.

R1c: Ředící roztok pro konjugát, obsahující surfaktant a < 0,1 % azidu sodného.

R1d: Konjugát kozí protilátky proti lidskému IgG s alkalickou fosfatázou v Trispufru, obsahujícím surfaktant, < 0,1 % azidu sodného a < 0,1% ProClin** 300.


Dodávanýmateriál

R1 Access HCV Ab PLUS reagenční sady

Potřebnýmateriál, který

není součástídodávky

1. Access HCV Ab PLUS Calibrators pro kalibraci. Negativní a pozitivní sérum pro anti-HCV.Katalogové číslo 34335.

2. Materiály pro kontrolu kvality: Access HCV Ab PLUS QCKatalogové číslo 34339 - nebo jiná komerční kontrolní séra.

3. Access SubstrateKatalogové číslo 81906

4. Access, Access 2 :Promývací pufr: Access Wash Buffer II, Katalogové číslo A16792

5. UniCel DxI :Promývací pufr: UniCel DxI Wash Buffer II, Katalogové číslo A16793

6. Systémy:Access, Access 2, UniCel DxI.

Poznámky kpracovnímu

postupu

1. Popis instalace, spuštění, principů operace, charakteristik účinnosti systému, provozních k pracovních instrukcí, postupů kalibrace, omezení testu, bezpečnostních opatření, údržby a řešení postupu problémů je uveden v Návodu k použití přístroje a/nebo v Referenční příručce.

2. Pro každé stanovení je třeba 25 μl vzorku (navíc k mrtvému objemu).3. Test probíhá při 37 °C a trvá 55 minut.

Postup Odběr vzorků, konfiguraci testů, potřeby testů a hodnocení výsledků testů je uvedeno v Návodu k použitípřístroje a/nebo v Referenční příručce.

Detailykalibrace

Platná kalibrační křivka je nutná pro všechny testy. Kalibrační data určující hodnotu cut-off kalibracejsou platná 28 dní. Proto je nutné kalibrovat test Access HCV Ab PLUS každých 28 dní pomocí C0 a C1soupravy Acces HCV Ab PLUS Calibrators. Informace o teorii kalibrace, sestavách kalibrátorů, zadáváníkalibračních testů a kontrole kalibračních dat, jsou uvedeny v Návodu k použití přístroje a/nebo vReferenční příručce.

Kontrolakvality

Je doporuèeno provádìt kontroly kvality alespoò každých 24 hodin a pøed jakýmkoliv testovánímpacientského vzorku pøi uvedení systému do chodu. Používejte doporuèený produkt Access HCV AbPLUS QC nebo použijte kontrolní séra jiného pùvodu. Dodržujte instrukce výrobce pro pøípravu auchovávání. Každá laboratoø by mìla stanovit prùmìrné hodnoty a akceptovatelný rozsah pro sledováníanalytických parametrù testu. Výsledky kontrolních sér, nespadající do akceptovatelného rozsahu,mohou indikovat neplatné výsledky testù. V tomto pøípadì pøezkoušejte všechny výsledky kontrolníchtestù, získaných od posledních akceptovatelných testù kontroly kvality daného parametru.

Pro optimální výsledky by se měla provádět vzorková kalibrace a průběžné namátkové zkoušky zapodobných teplotních podmínek. Pokud se okolní laboratorní teplota liší o více než ± 5°C od teplotykalibrace, proveďte kvalitativní kontrolu výsledků a novou kalibraci podle potřeby.

Kompletní informace o přezkoumání výsledků kontrolních sér jsou uvedeny v Návodu k použití přístrojea/nebo v Referenční příručce.

Výsledky Výsledky testu pacienta jsou automaticky počítány systémovým software, používajícím hodnotu cut-off[= průměr pozitivních kontrol (RLU) x 0,23], stanovenou platnou kalibrací. Výsledky (Signál/Cut-Off=S/CO) jsou udávány jako "reaktivní" nebo "nereaktivní" v závislosti na jejich vztahu ke "cut-off" (signálvyšší nebo stejný, respektive nižší než hodnota cut-off). V každém případě, výsledky v relaci nižší oméně než 10 % pod "cut-off " musí být interpretovány velmi opatrně a je doporučeno opakovaně testovatodpovídající vzorky dvojmo před konečnou iterpretací. Tato doporučovaná šedá zóna (0,9 - 1,0) by mělabýt uložena v software systému (úplné informace o šedé zóně při kvalitativní analýze jsou uvedeny v


Návodu k použití přístroje a/nebo v Referenční příručce. Výsledky spadající do šedé zóny umožňujerychle rozpoznat automaticky podávaný rozlišovací signál. Uložené výsledky testů pacientů lze zpětněvyvolat pomocí Obrazovky výsledků (Sample Results screen). Kompletní informace o přezkoumánívýsledků kontrolních sér jsou uvedeny v Návodu k použití přístroje a/nebo v Referenční příručce.

Jakékoli vzorky s poměrem (S/CO) nižším než 0,9 jsou považovány za nereaktivní v testu Access HCVAb PLUS. Vzorky s poměrem (S/CO) stejným nebo vyšším než hodnota 1, jsou považovány za původněreaktivní v testu Access HCV Ab PLUS.

Všechny vzorky, které jsou původně reaktivní nebo jsou v šedé zóně, by měli být opakovaně testoványdvojmo pomocí Access HCV Ab PLUS:

• Jestliže jsou výsledky zdvojených testů < 1,0 S/CO, vzorek musí být považován za nereaktivní (negativní) v testu HCV Ab PLUS.

• Jestliže jeden ze dvou výsledků je 1,0 S/CO, vzorek musí být považován za "reaktivní" v testu HCV Ab Plus.

Nicméně se doporučuje, aby každý opakovaně reaktivní vzorek byl znovu testován druhou řadou EIAtestů a konfirmační metodou pro potvrzení jeho pozitivity.

Omezení testu Test Access HCV Ab PLUS je striktně určen k detekci anti-HCV protilátek v lidském séru nebo plasmě.Pozitivní výsledek získaný testem Access HCV Ab PLUS by měl být vyhodnocen společně s klinickýmiúdaji a konfirmován jiným diagnostickým testem včetně konfirmační metody (imunoblot) předprohlášením za pozitivní na infekci.

Vzhledem k rozdílnosti imunologických reakcí pacientů nakažených virem hepatitidy C (zejména běhemsérokonverze) je možno pozorovat určité rozdíly detekce mezi testy v závislosti na druhu použitýchantigenních bílkovin. Negativní výsledek skríningového testu nevylučuje možnost vystavení či nákazyvirem hepatitidy C.

Všechny metody ELISA mohou snadno produkovat falešné pozitivní reakce. Doporučuje se ověřitspecifičnost reakce na vzorek při zjištění opakované pozitivity za použití vhodné metody k prokázánípřítomnosti protilátek anti-HCV.

Specifickécharakteristiky

účinnosti

CitlivostCitlivost Access HCV Ab PLUS byla vyhodnocena pomocí testování 511 dobře dokumentovanýchpozitivních vzorků zahrnujících:

101 PCR pozitivních sér odebraných od sledovaných pacientů s chronickou HCV, 145 pozitivníchvzorků od HCV infikovaných pacientů, 77 HCV RNA PCR pozitivních vzorků plasmy původem odHCV pozitivních vzorků genotypizovaných jako BBI, 122 genotypizovaných HCV pozitivních vzorků.

Panel SFTS 97 složený z 36 pozitivních vzorků s 26 genotypizovaných a HCV RNA PCR pozitivnímivzorky; 10 pozitivních (PCR negativních) vzorků s nejméně 2 HCV Ab reaktivitami.

Bylo také zahrnuto 30 pozitivních vzorků detekovaných v případných studiích specificity.

Všechny tyto vzorky reprezentují různé sérotypové profily (izolovaná reaktivita, 2 nebo 3 reaktivity) anejvíce rozšířené HCV genotypy 1-4 a několik neobvyklých genotypů 4c/d a 5.

Vyhodnocený výsledků testu HCV Ab PLUS

VýsledekPoměr : Signál/Cut-Off Vyhodnocení Doplňkový test

S/CO < 0,9 nereaktivníS/CO 1 reaktivní opakovat dvojmo

S/CO: 0,9 - 1,0 šedá zóna opakovat dvojmoOpakování testu: S/CO < 1 nereaktivní

Opakování testu: jestliže jeden ze 2 výsledků je 1 reaktivní konfirmační metoda


Všechny tyto vzorky byly shledány pozitivní v testu Access HCV Ab PLUS.

Nebyly pozorovány žádné zjevné rozdíly při detekci různých testovaných HCV genotypů .

Citlivost testu Access HCV Ab PLUS byla vyhodnocena testováním 74 sérokonverzních panelů.

Mezi 29 testovanými komerčními panely test Access HCV Ab PLUS detekoval vznik anti-HCVprotilátek stejně jako RIBA 3.0 komplementární test nebo s velmi malým zpožděním (několik dnů).

Mezi 45 panely testovanými odborníky, test Access HCV Ab PLUS byl pozitivní na stejných vzorcích,které byly testovány nejúčinnějšími komerčními testy, použitými k porovnání. Byly detekovány pouzedvě sérokonverze o několik dnů později a naopak 2 sérokonverze byly v testu Access HCV Ab PLUSpozitivní dříve.

Bylo testováno 25 dalších čerstvých HCV pozitivních vzorků (do 1 dne od odběru krve) a všechny bylyshledány pozitivními.

SpecifičnostSpecifičnost testu byla vyhodnocena:

• jako 99,83 % (95 % CI: 99,7-99,9) na vzorcích od 5995 neselektovaných dárců krve• v populaci 472 hospitalizovaných pacientů, bylo shledáno negativních 469 a 3, které byly neurčité v

testu Chiron Riba HCV 3.0, byly shledány slabě pozitivními v testu Access HCV Ab PLUS. Analýza 108 vzorků od pacientů vykazujících různé patologické nálezy, nesouvisející s virem hepatitidyC (hepatitida A nebo B, herpes, EBV, revmatoidní faktor….), neprokázala žádnou signifikantnínespecifickou křížovou reaktivitu.

PreciznostPřesnost testu Access HCV Ab PLUS byla určena analýzou negativních a pozitivních vzorků.Opakovatelnost byla vyhodnocena testováním 4 vzorků 30-krát během jednoho běhu testu,reprodukovatelnost byla stanovena testováním 4 vzorků v trojím vyhotovení dvakrát denně během 5 dnů.Výsledky jsou uvedeny v následujících tabulkách:

Opakovatelnost

Korelační koeficienty (C.V.) pozitivních vzorků jsou nižší než 5 %.

Reprodukovatelnost

Korelační koeficienty (C.V.) pozitivních vzorků jsou nižší než 10 %.

Access, UniCel a DxI jsou obchodní značky společnosti Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos je obchodní značka společnosti Lumigen, Inc., dceřinné společnosti Beckman Coulter, Inc.

** ProClin je obchodní značka společnosti Rohm and Haas nebo jejích dceřinýchspolečností či jejích přídružených organizací

n = 30 NEG 1 NEG 2 POS 1 POS 2

Průměr (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

C.V.% 4,05 3,19 2,93 2,45


Průměr poměrů (vzorek/Cut-off)

0,07 1,34 3,18 4,42

S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


HCV Ab PLUS CALIBRATORSREF 34335

Použití Kalibrátory Access HCV Ab PLUS Calibrators jsou určeny pro použití s testem Access HCV Ab PLUSpro detekci protilátek proti HCV v lidském séru nebo plazmě pomocí Access Immunoassay systémů(Access, Access2, UniCel® DxI®).






Kalibrátory Access HCV Ab PLUS Calibrators se používají ke kalibraci (určují hodnotu cut-off) testuAccess HCV Ab PLUS. Porovnáním světelné intenzity, vytvářené vzorkem s hodnotou cut-off, je možnéurčit přítomnost či nepřítomnost anti-HCV protilátek ve vzorku.

Informace oproduktu

Access HCV Ab PLUS CalibratorsKat. č. 34335: C0-C1,1 ml/1 lahvička• Dodáváno hotové k použití. • Uchovávejte při 2-10 °C. • Před použitím promíchejte obsah jemným překlopením. Zamezte tvorbě bublin. • Obsah otevřených lahviček je stabilní do data expirace uvedeného na štítku lahvičky, pokud jsou

skladovány při +2-10 °C. • Hodnoty kontroly kvality mimo platný rozsah jsou známkou znehodnocení.r

C0: Lidské sérum obsahující < 0,1 % azidu sodného. Negativní (nereaktivní)na anti-HCV protilátky.

C1: Lidské sérum obsahující < 0,1 % azidu sodného. Pozitivní (reaktivní) naanti-HCV protilátky, tepelně inaktivováno.

Kalibrační karta:

1



opatření

• Pouze pro diagnostiku in vitro• Materiál lidského původu použitý k přípravě reagencií byl testován a shledán nereaktivní na

povrchový antigen viru hepatitidy B (HBs Ag), protilátky viru lidské imunodeficience (HIV-1 a HIV-2) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV), kromě pozitivního kalibrátoru C1, který je pozitivní na anti-HCV protilátku. Jelikož žádná známa metoda neposkytuje úplnou jistotu, že infekční agens nejsou přítomny, zacházejte s reagenciemi a pacientskými vzorky jako se schopnými přenášet infekční nemoci.

• Azid sodný může vytvářet s olovem nebo mědí obsaženou ve vodovodním potrubí vysoce výbušné kovové azidy. Abyste zabránili tvorbě azidových usazenin, při likvidaci kapalin je splachujte velkým množstvím vody12.

Postup Při kalibraci postupujte dle instrukcí v pracovních návodech pro Access Immunoassay System Příručkaoperátora a/nebo Referenční manuál.

Detailykalibrace

Kalibrátory Access HCV Ab PLUS Calibrators jsou dodávány ve dvou formách: negativní kalibrátor C0(připraven z lidského negativního séra) a pozitivní kalibrátor C1 (připraven z lidského séra pozitivního naanti-HCV protilátku), inaktivováno.

Test Access HCV Ab PLUS vyžaduje kalibraci (stanovení hodnoty cut-off). Kalibrační křivka je platná vanalyzátoru Access po dobu 28 dní pouze pro jednu šarži reagenčních zásobníků identifikovanýchpomocí čárového kódu. Po uplynutí 28 dnů nebo jestliže je do analyzátoru vložena jiná šarže reagencií, jekřivka automaticky anulována.

Kalibrace testu Access HCV Ab PLUS vyžaduje minimálně 225 μl (5 kapek/1 kalíšek) (Access / Access2) nebo 305 μl (7 kapek)/kalíšek (UniCel DxI) pro každou kontrolu (hodnota cut-off = průměr RLU C1 x0,23); naprogramovaná kalibrace pro Access HCV Ab PLUS testuje C0 a C1 trojmo.



HCV Ab PLUS QCREF 34339

Použití Kontrola Access HCV Ab PLUS QC je určena pro sledování parametrů systému testu Access HCV AbPLUS.






Kontrola Access HCV Ab PLUS QC je určena ke sledování účinnosti systému pro test Access HCV AbPLUS pro detekci anti-HCV protilátek. Použití materiálů kontroly kvality je indikováno k detekci apotencionálně k vyřešení kritických testovacích chyb, způsobených testovací soupravou, lidskýmfaktorem a přístrojem a jsou součástí správné laboratorní praxe.15, 16, 17, 19, 21, 22 Je dodávána jednanegativní a jedna slabě pozitivní kontrolní hladina, za účelem umožnění kontrolování nejdůležitějšíchoblastí dynamického rozsahu tohoto testu.

Informace oproduktu

Access HCV Ab PLUS QCKat. č. 34339: 2,5 ml/1 lahvičku• Dodáváno hotové k použití. • Před použitím promíchejte obsah jemným překlopením. Zamezte tvorbě bublin. • QC je stabilní do expirační doby uvedené na nálepce reagenčního zásobníku jestliže je uchováván při

+2-10 °C. • Obsah otevřených lahviček je stabilní 30 dnů při řádném zacházení a uchovávání.

QC 1: Lidské sérum obsahující < 0,1 % azidu sodného. Negativní (nereaktivní) naanti-HCV protilátky.

QC 2: Lidské sérum obsahující < 0,1 % azidu sodného. Pozitivní (reaktivní) naanti-HCV protilátky, inaktivováno.

Karta s hodnotou QC:

1



opatření

• Pouze pro diagnostiku in vitro• Materiál lidského původu použitý k přípravě reagencií byl testován a shledán nereaktivní na

povrchový antigen hepatitidy B (HBs Ag), protilátky proti viru lidské imunodeficience (HIV-1 a HIV-2) a protilátky proti viru hepatitidy C (HCV), kromě kontroly QC2, která je pozitivní na anti-HCV. Jelikož žádná známa metoda neposkytuje úplnou jistotu, že infekční agens nejsou přítomny, zacházejte s reagenciemi a pacientskými vzorky jako se schopnými přenášet infekční nemoci.

• Azid sodný může vytvářet s olovem nebo mědí obsaženou ve vodovodním potrubí vysoce výbušné kovové azidy. Abyste se vyvarovali tvorbě azidových usazenin, při likvidaci kapalin je splachujte velkým množstvím vody12.

Postup S kontrolami Access HCV Ab PLUS QC zacházejte stejným způsobem jako s pacientskými vzorky apoužívejte je podle instrukcí obsažených v soupravě dodávané k používanému přístroji. Poznámka: informace týkající se nastavení parametrů, požadavků a prohlížení výsledků QC na AccessImmunoassay System jsou uvedeny v pracovních návodech Příručka operátora a/nebo Referenčnímanuál. K provedení kontroly Access HCV Ab PLUS QC Access Immunoassay System je zapotřebíminimálně 175 μl vzorku/1 kalíšek se vzorkem (4 kapky)/kalíšek (Access / Access 2) nebo 255 μl (6kapek)/kalíšek (UniCel DxI) na každou ze dvou kontrol (jedno stanovení).

Omezení testu Pokud je v kontrole patrná mikrobiální kontaminace nebo nadměrný zákal, vyřaďte lahvičku.

Předpokládanéhodnoty

Kontrolní data pro test Access HCV Ab PLUS jsou dodávána pro každou šarži prostřednictvím „QC Datacard" přiložené v balení. Individuální hladina střední reaktivity uživatelských laboratoří musí spadat doodpovídajícího akceptovatelného rozsahu, avšak každá laboratoř by měla stanovit svou vlastní středníreaktivitu a akceptovatelné rozsahy po shromáždění dostatečného množství dat 18.Vzhledem k odlišnostem specifických hladin reaktivity u testů různých výrobců, jiných postupů, jinýchčísel šarží a jiných laboratoří, by každá laboratoř měla určit specifickou hladinu reaktivity a stanovit svůjvlastní rozsah akceptovatelných hodnot 18, 19, 20, 21. Přijatelný rozsah zahrnuje všechny hodnoty vrozsahu ± 2 SD průměru 20 datových bodů z 20 stanovení během období 30 dnů22.

FIRMA BIO-RAD RUČÍ ZA FUNKČNOST TĚCHTO PRODUKTŮ JAK JE UVEDENO NA ŠTÍTKUA V DODÁVANÉ LITERATUŘE. FIRMA BIO-RAD ODMÍTÁ JAKÉKOLIV IMPLICITNÍ ZÁRUKYV PŘÍPADĚ PRODEJE NEBO POUŽITÍ PRO JAKÉKOLIV JINÉ ÚČELY. V ŽÁDNÉM PŘÍPADĚNENÍ FIRMA BIO-RAD ZODPOVĚDNÁ ZA JAKÉKOLIV NÁSLEDNÉ ŠKODY, VYPLÝVAJÍCÍ ZVÝŠE VYJÁDŘENÉ ZÁRUKY.


Literatura1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis

genome Science, 1989, 244: 359-362.2 Choo QL., Richman KH., Han JH., et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus Proc. Natl. Acad. Sci USA,

1991, 88: 2451-2455.3 Kuo G., Choo QL., Alter HJ., et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A non-B

hepatitis. Science 1989, 244: 362-364.4 Tibbs C.J. Methods of transmission of hepatitis C Journal of of viral Hepatitis, 1995, 2: 113-119.5 Purcell R. The Hepatitis C virus: overview Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 11-14.6 Seeff L.B. Natural History of Hepatitis C Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 21-28.7 Yoshikura H., Hijkata N., Nakajima N. and Shimizy Y.K. Replication of Hepatitis C virus Journal of of viral Hepatitis, 1996, 3:

3-10.8 Hoofnaggle J.H., Hepatitis C virus: the clinical spectrum of disease Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 15-20.9 AlterR HJ., Purcell RH., Shih JW., et al. Detection of antibodies to hepatitis C virus in prospectively followed transfusion

recipients with acute and chronic non-A non-B hepatitis N. Engl. J. Med., 1989, 321: 1994-1500.10 Japanese Red Cross Non-A, Non-B Hepatitis Research Group. Effect of screening for hepatitis C virus antibody and hepatitis B

virus core antibody on incidence of post-transfusion hepatitis. Lancet 1991, 338: 1040-1041.


11 Donahue JF., Munoz A., Ness PM., Et al. The declining risk of post-transfusion hepatitis C virus infection. N. Engl. J. Med. 1992, 327: 369-373.

12 DHHS (NIOSH) Publication No. 78-127, August 1976. Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Available http://www.cdc.gov/niosh.

13 Approved Standard - Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture - H3-A3.1991. National Committee for Clinical Laboratory Standards, 3rd edition.

14 Approved Guideline - Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, H18-A. 1990. National Committee for Clinical Laboratory Standards.

15 Büttner, H. 1963. Fehler bei der Ausführung und Beurteilung von Laboratoriumsuntersuchungen, Dtsch. Med. Wschr. 88: 1050.

16 Benson, E.S., Freier, E.F. 1963.Quality Control. Postgraduate Medicine, 34: A-58.17 Levy, S., Jennings, E.R. 1950. The Use of Control Charts in the Clinical Laboratory, Am. J. Clin. Path., 20: 1059.18 Youden, W.J. 1951. Statistical Methods for Chemists, John Wiley & Sons, Inc., PLUS York.19 Cembrowski, G.S., Carey, R.N. 1989. Laboratory Quality Managment: QC & QA, ASCP Press, 1989.20 Westgard, J.O., Koch, D.D., Oryall, J.J., Quam, E.F., Feldbruegge, et al. 1990. Selection of Medically Useful QC Procedures

for Individual Tests done in a Multitest Analytical System, Clin. Chem, 36: 230.21 Garrett, P.E., 1994. Quality is quantitative: so how do we QC qualitative tests? Journal of Clinical Immunoassay, 17: 23122 Internal Quality Control: Principles and Definitions. 1987. Tentative NCCLS Guideline. National Committee for Clinical

Laboratory Standards, C24-T.

11/2010

Bio-Rad

3, boulevard Raymond Poincaré

92430 Marnes-la-Coquette, France

Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A33604CSide 1


Tilsigtet brug Access HCV Ab PLUS-analysen er en immunenzymatisk metode til påvisning af antistoffer over forhepatitis C-virus i humant serum eller plasma ved hjælp af Access Immunoassay-systemerne (Access,Access 2, UniCel® DxI®).

Til in vitro-diagnosticering

Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssystem lige framodtagelsen af råmaterialet til den endelige kommercialisering af produktet.

Hvert parti sendes til kvalitetskontrol og frigives kun på markedet, hvis det overholder kravene tilgodkendelse.

Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for virksomheden.

Oversigt ogforklaring

Hepatitis C-virus (HCV) betragtes som den væsentligste årsag til posttransfusionel non-A- non-Bhepatitis (NANBH), og ikke-transfusionel, parenteralt overført (stofmisbrugere, hæmodialysepatienter,transplantationspatienter) non-A/non-B-hepatitis (NANBH)1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. 50-60% af patienter medhepatitis C udvikler sandsynligvis kronisk hepatitis og risikerer at udvikle cirrhosis eller hepatocellulærtkarcinom 8, 9.

Indførelsen af obligatorisk screening af alle bloddonationer (for anti-HCV-antistoffer) har formindsketrisikoen for smitteoverførsel via inficeret blod betydeligt10, 11.

Access HCV Ab PLUS-analysen er beregnet til påvisning af anti-HCV-antistoffer i humant serum ellerplasma og bidrager således til forebyggelse af parenteral smitte. Analysen kan også bruges tildiagnosticering af HCV-infektion. I begge tilfælde bør resultaterne tolkes i sammenhæng med kliniskedata og andre serologiske markører.

Procedure-principper

Access HCV Ab PLUS-analysen er en indirekte immunenzymatisk analyse. Prøvematerialet (serum,plasma eller kontrolprøve) kommes i et reaktionskar med paramagnetiske partikler der er dækket med etpeptid, der efterligner de immundominante epitoper i kapsidområdet og rekombinante proteiner (NS3 ogNS4). Under inkubation bindes prøvens IgG og IgM til den faste fase. Efter inkubationen fastholdes denfaste fase i et magnetfelt, og ubundet materiale fjernes ved en række vaske. I trin to tilføjes konjugat(alkalisk fosfatase mærket anti-humant gede IgG-antistof,) i reaktionskarret. Efter inkubationen fjerner enny række vaske det overskydende konjugat. Et kemiluminiscerende substrat, Lumi-Phos 530*, tilføjes,og de fotoner, der genereres af den enzymatiske reaktion, måles med et luminometer. Styrken af detudsendte signal er proportional med mængden af enzymkonjugat, og dermed den titer afanti-HCV-antistoffer, der findes i prøven. Ved at sammenligne værdien af prøvens signal medcut-off-værdien, der er fastlagt ved kalibreringen af analysen, kan forekomsten eller fraværet afanti-HCV-antistoffer bestemmes.

A33604C Access HCV Ab PLUSSide 2

Produkt-information

Access HCV Ab PLUS reagenspakkeKatalognr. 34330: 100 bestemmelser, 2 pakker, 50 tester/pakke• Alle reagenser er klar til brug ved levering. • Opbevares opretstående ved 2-10°C inden brug i apparatet.• Under disse forhold er alle reagenser holdbare indtil den udløbsdato, der er angivet på etiketten. • Inden første brug af reagenspakken skal indholdet blandes ved forsigtigt at vende pakken adskillige

gange, indtil alle partikler er fuldstændigt opslæmmede. • Når pakken har været brugt, skal den forblive i apparatet eller nedkøles (opretstående) og bruges inden

for 28 dage. • Er pakkens elastomerlag brudt, eller er kvalitetskontrolværdierne uden for det gyldige område, kan det

være tegn på nedbrydning.

Advarsler ogforholdsregler

• Ved den første isættelse i karrusellen skal pakken vendes, indtil alle partikler er fuldstændigt opslæmmede.

• Til in vitro-diagnosticering.• Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og dermed danne højeksplosive metalazider. Ved

bortskaffelse skal der skylles med store mængder vand for at forhindre dannelse af azider 12.• ProClin 300** er potentielt sensibiliserende for huden. Undgå at spilde eller stænke denne reagens på

huden og tøjet. Skyl grundigt med vand ved kontakt med reagensen.

Prøveind-samling og

-forberedelse

1. Serum eller plasma (heparin, EDTA eller citrat) anbefales som prøver.2. Anvend følgende standarder ved håndtering og behandling af blodprøver: 13, 14

• Tag alle blodprøver under overholdelse af de generelle forholdsregler vedrørende venepunktur.• Lad prøverne størkne tilstrækkeligt, før de centrifugeres, mindst 1 time.• Sørg for, at rørene altid er lukkede.• Centrifuger prøverne i 15 minutter ved mindst 1.500 G.

3. Anvend følgende standarder ved opbevaring af blodprøver:13, 14

• Prøven må højst opbevares ved stuetemperatur i 8 timer.• Hvis analysen ikke afsluttes inden for 8 timer, skal den nedkøles ved +2-10°C.• Hvis analysen ikke udføres inden for 48 timer, eller prøverne skal sendes som fragt, skal de

nedfryses til -20°C13.• Optø kun én enkelt prøve ad gangen. Optøningen skal foregå hurtigt ved opvarmning i få minutter

i et 40°C varmt vandbad.• Efter optøning skal prøven centrifugeres i 15 minutter ved 3.000 g og hældes over i en prøvekop

for at fjerne opslæmmede fibrinpartikler eller -aggregater, der kan give fejlagtige positive resultater.

4. Prøver, der indeholder op til 200 mg/l bilirubin, op til 90 g/l albumin, lipæmiske prøver, derindeholder mængder op til det, der svarer til 36 g/l triolein (triglycerid), og hæmolyserede prøver, derindeholder op til 5 g/l hæmoglobin, påvirker ikke resultaterne.

R1a: Paramagnetiske partikler, belagt med rekombinante proteiner (NS3/NS4) ogpeptid (capside) og opslæmmet i TRIS-buffer med < 0,1 % natriumazid.

R1b: Prøvefortynder med < 0,1 % natriumazid.

R1c: Konjugatfortynder med surfaktant, < 0,1 % natriumazid.

R1d: Konjugat = Alkalisk fosfatase-mærket anti-humant gede IgG-antistof iTRIS-buffer med surfaktant, < 0,1 % natriumazid og < 0,1 % ProClin 300**.


Vedlagtematerialer

R1 Access HCV Ab PLUS-reagenspakker

Påkrævedematerialer,som ikke er

vedlagt

1. Kalibratorer: Access HCV Ab PLUS Calibrators. Består af serum, der er henholdsvis negativt og positivt for anti-HCV-antistof. Katalognr. 34335

2. Materialer til kvalitetskontrol: Access HCV Ab PLUS QCKatalognr. 34339 - eller andre kommercielt tilgængelige kontrolsera

3. Access SubstrateKatalognr. 81906

4. Access, Access 2:Vaskebuffer: Access Wash Buffer II, Katalognr. A16792

5. UniCel DxI:Vaskebuffer: UniCel DxI Wash Buffer II,Katalognr. A16793

6. SystemerAccess, Access 2, UniCel DxI

Bemærkningerangående

proceduren

1. Der henvises til de aktuelle systemvejledninger og/eller Hjælp-systemet for en specifik beskrivelse af installation, driftsteori, egenskaber, systembetjening (f.eks. brugsanvisning), kalibreringsoplysninger og -procedurer, vedligeholdelse og fejlfinding. Driftsbegrænsninger, forholdsregler og farer er beskrevet i de pågældende vejledninger.

2. Der bruges femogtyve (25) µl prøvemateriale til hver bestemmelse (ud over dødvolumen).3. Analysen inkuberes ved 37°C og tager 55 minutter.

Procedure Der henvises til de pågældende systemvejledninger og/eller Hjælp-systemet for information om kontrolaf prøver, konfiguration af tester, anmodning om tester og gennemgang af testresultater.

Kalibrerings-detaljer

Der kræves en aktiv kalibreringskurve for alle tester. De kalibreringsdata, der kræves for at bestemmecut-off-værdien, er gyldige i 28 dage. For Access HCV Ab PLUS-analysen kræves der derfor kalibreringhver 28. dag ved hjælp af C0 og C1 fra Access HCV Ab PLUS Calibrators. Der henvises til depågældende systemvejledninger og/eller Hjælp-systemet for information om kalibreringsteori,konfiguration af kalibratorer, indtastning af anmodning om kalibratortester og gennemgang afkalibreringsdata.

Kvalitets-kontrol

Det anbefales at udføre kvalitetskontrol mindst hver 24. time samt ved systemstart forud for kørsel afpatientprøver. Brug det foreslåede produkt, Access HCV Ab PLUS QC, eller benyt kontrolsera af andenoprindelse. Følg producentens instruktioner vedrørende opløsning og opbevaring. Hvert enkeltlaboratorium skal fastsætte en gennemsnitsværdi og et acceptabelt område, som testens analyseresultaterskal ligge inden for. Kontrolseraresultater, som ikke ligger inden for det acceptable område, kan væretegn på ugyldige testresultater. Hvis dette er tilfældet, skal samtlige testresultater, som er frembragt sidenden sidste acceptable kvalitetskontrol af den pågældende analyt, undersøges.

For at opnå optimale resultater, bør kalibrering af test og kørsel af patientprøver udføres under lignendetemperaturforhold. Hvis laboratoriets omgivende temperatur varierer med mere end ± 5°C i forhold tilkalibreringstemperaturen, skal man gennemgå resultaterne for kvalitetskontrol og foretage en nykalibrering, hvis det er nødvendigt.

Der henvises til de pågældende systemvejledninger og/eller Hjælp-systemet for information omgennemgang af kontrolseraresultater.


Resultater Resultater af patienttester beregnes automatisk af systemsoftwaren ved hjælp af cut-off-værdien (gennemsnittet af de positive kalibratorer (RLU) x 0,23) fra den gældende kalibrering: Resultaterne(Signal/Cut-off-værdi= S/CO) angives som "reaktive" eller "ikke reaktive" i forhold til "cut-off-værdien"(signalet er henholdsvis større end, lig med eller lavere end cut-off-værdien). Resultater på ~10 % mindreend "cut-off-værdien" skal dog fortolkes med forsigtighed og testes igen. Brugeren skal gemme denneanbefalede gråzone (fra 0,9 til lavere end 1,0) i systemets hukommelse (der henvises til de pågældendesystemvejledninger og/eller Hjælp-systemet for information om gråzoner i forbindelse med kvalitativeanalyser). På denne måde foretages der automatisk en specifik markering, hvilket giver mulighed forhurtigt at identificere et resultat, der befinder sig i gråzonen. Resultater af patienttester kan gennemgåsved hjælp af skærmen for prøveresultater. Der henvises til de pågældende systemvejledninger og/ellerHjælp-systemet for information om gennemgang af resultater.

Enhver prøve med et (S/CO) forhold, der er lavere end 0,9, betragtes som ikke-reaktiv for Access HCVAb PLUS-testen. Prøver med et (S/CO) forhold, der er lig med eller større end 1, betragtes i førsteomgang som reaktive for Access HCV Ab PLUS-testen og skal derfor testes igen to gange inden denendelige fortolkning.

Alle prøver som i første omgang er reaktive, eller som befinder sig i gråzonen, skal testes igen to gangeved hjælp af Access HCV Ab PLUS:

• Hvis resultatet ved gentagelsen af testen er <1,0 S/CO, betragtes prøven som ikke-reaktiv (negativ) for HCV Ab PLUS-analysen.

• Hvis et af de to resultater er 1,0 S/CO, er det oprindelige resultat ikke reproducerbart, og prøven betegnes som "reaktiv" for HCV Ab PLUS-testen.

Det anbefales dog, at enhver prøve, der er reaktiv ved gentagelse af testen, skal gentestes med en andenEIA-analyse og med en valideringsmetode for at sikre, at den er positiv.

Procedurensbegræns-

ninger

Access HCV Ab PLUS-analysen må udelukkende anvendes til påvisning af anti-HVC-antistoffer ihumant serum eller plasma. Et positivt resultat opnået med Access HCV Ab PLUS-analysen skalvurderes sammen med kliniske data og bekræftes af andre diagnosticeringstester, herunder envalideringsmetode (immunoblot), før prøven rapporteres som positiv for infektion.

Hvis man betragter de mange forskellige immunologiske reaktioner hos patienter, der er inficeret medHepatitis C-virus (især under serokonversion), kan der observeres forskelle i påvisningerne fra test tiltest, afhængig af hvilken type antigenprotein der anvendes. Et negativt resultat med en screeningtestudelukker ikke muligheden for udvikling af eller infektion med Hepatitis C-virus.

Alle ELISA-teknikker kan risikere at frembringe falskt positive resultater. Det anbefales at kontrollerereaktionens specificitet i enhver prøve, der gentagne gange konstateres positiv ved hjælp af en passendemetode til at bevise tilstedeværelsen af anti-HCV-antistoffer

Fortolkning af resultatet af HCV Ab PLUS-analysen

ResultatForhold: Signal/Cut-Off-værdi Fortolkning Supplerende tester

S/CO < 0,9 Ikke-reaktivS/CO 1 Reaktiv Gentag testen to gange

S/CO: 0,9 - 1,0 Gråzone Gentag testen to gangeGentest: S/CO < 1 Ikke-reaktiv

Gentest: Hvis et af de to resultater er 1 Reaktiv Bekræftende metode


Specifikkeydelses-

karakteristika

SensitivitetSensitiviteten for ACCESS HCV Ab PLUS blev evalueret ved at teste 511 veldokumenterede positiveprøver, herunder:

101 PCR-positive sera, der er taget ved opfølgning af kroniske HCV-patienter, 145 positive prøver fraHCV-inficerede patienter, 77 HCV-, RNA-, PCR-positive plasma fra BBI og 122 genotypebestemteHCV-positive prøver.

SFTS 97-panel, der bestod af 36 positive prøver, 26 genotypebestemte og HCV-, RNA-, PCR-positiveprøver, 10 positive (PCR-negative) prøver med mindst 2 HCV Ab-reaktiviteter.

Der indgik også 30 positive prøver fra de efterfølgende specificitetsundersøgelser.

Alle disse prøver repræsenterer de forskellige serotypeprofiler (isoleret reaktivitet, 2 eller 3 reaktiviteter)og de mest udbredte HCV-genotyper 1 - 4 samt nogle få ualmindelige 4c/d- og 5-genotyper.

Alle disse prøver blev fundet positive med Access HCV Ab PLUS.

Der blev ikke påvist nogen forskel i konstateringen af de forskellige testede HCV-genotyper.

Sensitiviteten for Access HCV Ab PLUS blev evalueret ved at teste 74 serokonversionspaneler.

Blandt de 29 testede kommercielle paneler konstaterede Access HCV Ab PLUS anti-HCV Ab, som vistesig, så snart den komplementære RIBA 3.0-test var udført eller meget kort derefter (få dage).

Blandt de 45 paneler, der blev testet af eksperter, var Access HCV Ab PLUS-testen positiv lige så ofte(dvs. positiv for samme blodprøve) som de mere følsomme test, der blev anvendt til sammenligning. Derblev kun konstateret to serokonversioner få dage efter, og 2 serokonversioner viste sig tilmed at væretidligere positive med Access HCV Ab PLUS.

Yderligere 25 friske HCV positive prøver (inden for 1 dag efter blodprøvetagning) er blevet testet og allefundet positive.

SpecificitetSpecificiteten for testen er evalueret:

• som 99,83 % (99,7 % til 99,9 % med et 95 % konfidensinterval) ud af en gruppe på 5995 prøver fra tilfældigt valgte bloddonorer.

• på en gruppe på 472 indlagte patienter, hvor 469 blev fundet negative og 3, som var ubestemmelige med Chiron Riba HCV 3.0, blev fundet lavt positive med Access HCV Ab PLUS.

Analysen af 108 prøver fra patienter, der viste forskellige patologier, som ikke var forbundet medHepatitis C-virus (Hepatitis A eller B, Herpes, EBV, reumatoid faktor osv.), viste ingen uspecifikkrydsreaktivitet af betydning.

PræcisionNøjagtigheden af Access HCV Ab PLUS er blevet fastlagt ved hjælp af analysen af negative og positiveprøver. Reproducerbarheden inden for analysen er blevet evalueret ved at teste 4 prøver 30 gange i densamme kørsel. Reproducerbarheden mellem analyser er blevet evalueret ved at teste 4 prøver 3 gange, 2gange om dagen i løbet af 5 dage. Resultaterne vises i følgende tabeller:


Reproducerbarhed inden for analysen

Variationskoefficienten (CV - Coefficient of Variation) er mindre end 5 %.

Reproducerbarheden mellem analyser

Variationskoefficienten (CV - Coefficient of Variation) er mindre end 10 %.

Access, UniCel and DxI er et varemærk der tilhører Beckman Coulter, Inc

* Lumi-Phos er et varemærke, der tilhører Lumigen, et datterselskab af Beckman Coulter, Inc.

** ProClin er et varemærke, der tilhører Rohm and Haas Company eller dettes datter- ellersøsterselskaber.


Gennemsnitsværdi (RLU)

251824 1378166 10966900 12615243

S.D. 10202 43987 320857 309281C.V. % 4,05 3,19 2,93 2,45


GennemsnitsforholdPrøve/cut-off)

0,07 1,34 3,18 4,42

.S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78

Access HCV Ab PLUS A33604C

Side 7


Tilsigtet brug Access HCV Ab PLUS Calibrators er beregnet til brug sammen med Access HCV Ab PLUS-analysen tilpåvisning af anti-HCV-antistoffer i humant serum og plasma ved hjælp af AccessImmunoassay-systemerne (Access, Access 2, UniCel®DxI®).






Access HCV Ab PLUS Calibrators anvendes til at etablere en kalibrering (bestemme cut-off-værdien) forAccess HCV Ab PLUS-analysen. Ved sammenligning af en prøves lysintensitet med cut-off-værdien erdet muligt at bestemme forekomsten eller fraværet af anti-HCV-antistoffer i prøven.

Produkt-information

Access HCV Ab PLUS CalibratorsKatalognr. 34335: C0–C1, 1 ml/hætteglas• Leveres klar til brug. • Opbevares ved 2-10°C. • Bland indholdet ved forsigtigt at vende glasset før brug. Undgå skumdannelse. • Indholdet i åbne glas forbliver holdbart indtil udløbsdatoen på glassenes etiket, når de opbevares ved

+2-10°C. • Kvalitetskontrolværdier uden for det gyldige område kan være tegn på nedbrydning.

C0: Humant serum med < 0,1 % natriumazid. Negativt (ikke-reaktivt) foranti-HCV-antistof.

C1: Humant serum med < 0,1 % natriumazid. Positive (reaktivt) foranti-HCV-antistof, inaktiveret.

Kalibreringskort: 1

A33592C Access HCV Ab PLUSPage 8


• Til in vitro-diagnosticering• Det humane kildemateriale, der er brugt i forberedelsen af reagensen, er blevet testet og fundet

ikke-reaktivt for hepatitis B-overfladeantigenet (HBsAg), antistoffer mod humant immundefektvirusVirus (HIV1 og HIV2) og antistoffer mod hepatitis C-virus (HCV), bortset fra den positive kalibratorC1, som er positiv for anti-HCV-antistof. Eftersom der ikke er kendskab til en testmetode, der medgaranti kan sikre, at der ingen smitstoffer forekommer, skal reagenserne og patientprøverne håndteressom potientielle smittebærere.

• Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og dermed danne højeksplosive metalazider. Vedbortskaffelse af væsker skal der skylles med store mængder vand for at forhindre dannelse af azider 12.

Procedure Der henvises til de aktuelle systemvejledninger og/eller Hjælp-systemet for information omkalibreringsprocedurer.


Access HCV Ab PLUS Calibrators leveres i følgende to former: negativ kalibrator C0, fremstillet fra ennegativ, human serumpulje og positiv kalibrator C1, fremstillet af inaktiveret humant serum, der erpositivt for anti-HCV-antistof.

Access HCV Ab PLUS-analysen kræver en kalibreringskurve (bestemmelse af cut-off-værdien) hver 28.dag for at have en aktiv "kalibrering" for et enkelt parti reagenser, som er identificeret præcist i kraft afstregkoden. Efter de 28 dage eller hvis der anbringes et nyt parti reagenser i systemet, bliver kurvenautomatisk afbrudt.

Til kalibrering af Access HCV Ab PLUS-analysen er det nødvendigt med mindst 225 µl (5 dråber) /prøvekop (Access, Access 2) eller 305 µl (7 dråber) / prøvekop (UniCel DxI) af hver kalibrator(Cut-off-værdi = RLUs C1 X 0,23). Den programmerede kalibrering af Access HCV Ab PLUS tester C0og C1 tre gange.



Side 9


Tilsigtet brug Access HCV Ab PLUS QC er beregnet til overvågning af systemets ydeevne for Access HCV AbPLUS-analysen.






Access HCV Ab PLUS QC-kontrollen er beregnet til overvågning af systemets ydeevne for Access HCVAb PLUS-analysen i forbindelse med påvisning af anti-HCV-antistoffer. Kvalitetskontrolmaterialeranvendes til at opdage og evt. løse kritiske testfejl, der skyldes testudstyr, personale og instrumentbrug,og de er en integreret del af reglerne for god laboratoriepraksis 15, 17, 16, 19, 21, 22. En negativ og en svagtpositiv kontrol medfølger og bruges til overvågning af testens ydeevne i analysens mest relevantedynamiske område.

Produkt-information

Access HCV Ab PLUS QCKatalognr. 34339: 2,5 mL/hætteglas• Produktet leveres klar til brug. • Bland indholdet ved forsigtigt at vende glasset før brug. Undgå skumdannelse.• Kvalitetskontrollen er holdbar indtil udløbsdatoen på glassenes etiket, når glassenes opbevares ved

+2-10°C. • Indholdet i åbne glas forbliver holdbart i 30 dage, hvis glassenes håndteres og opbevares korrekt.

QC 1: Humant serum med < 0,1 % natriumazid. Negativt (ikke-reaktivt)for anti-HCV-antistoffer.

QC 2: Humant serum med < 0,1 % natriumazid. Positivt (reaktivt) foranti-HCV-antistoffer, inaktiveret

Kvalitetskontrolværdikort: 1

A33592C Access HCV Ab PLUS

Side 10


• Til in vitro-diagnosticering• Det humane kildemateriale, der er brugt i forberedelsen af reagensen, er blevet testet og fundet

ikke-reaktivt for hepatitis B-overfladeantigenet (HBs Ag), antistoffer mod humant immundefektvirus(HIV1 og HIV2) og antistoffer mod hepatitis C-virus (HCV) undtagen QC2-kontrolprøverne, som erpositive for anti-HCV.Eftersom der ikke er kendskab til en testmetode, der med garanti kan sikre, at der ingen smitstofferforekommer, skal reagenserne og patientprøverne håndteres som potentielt smittefarlige.

• Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og dermed danne højeksplosive metalazider. Vedbortskaffelse af væsker skal der skylles med store mængder vand for at forhindre dannelse af azider 12.

Procedure Access HCV Ab PLUS QC-kontrolprøver skal håndteres på samme måde som patientprøver og testes ioverensstemmelse med instruktionerne, der følger med det anvendte apparat.Bemærk: Der henvises til de aktuelle systemvejledninger og/eller Hjælp-systemet til AccessImmunoassay-systemerne for information om konfiguration af kontroller, anmodning omkvalitetskontrolprøvetester og gennemgang af kvalitetskontroldata. Det er som minimum nødvendigt atanvende 175 µl (4 dråber) / prøvekop (Access, Access 2) eller 255 µl (6 dråber) / prøvekop (UniCel DxI)for hver af de 2 kontrolprøver (enkelt bestemmelse) ved behandling af Access HCV Ab PLUSQC-kontrollen på Access-immunanalysesystemerne.

Procedurensbegrænsninger

Ved tegn på mikrobiel kontaminering eller usædvanlig uklarhed i en kontrol, skal hætteglasset kasseres.

Forventedeværdier

Kontroldata for Access HCV Ab PLUS-analysen for de enkelte partier findes på det "QC-datakort", derligger i pakken. De enkelte laboratoriers individuelle, gennemsnitlige reaktivitetsniveauer skal liggeinden for tilsvarende gyldige områder. Hvert laboratorium skal dog fastsætte dets egengennemsnitsreativitet og gyldige områder, når der er indsamlet tilstrækkelige data 18.Eftersom de specifikke reaktivitetsniveauer kan være forskellige pga. forskellige producenters analyser,forskellige procedurer, forskellige partinumre og forskellige laboratorier, skal det enkelte laboratoriumbestemme det specifikke niveau eller den specifikke reaktivitet og fastlægge dets egne gyldige værdier18,19,20,21. Det gyldige område kan evt. omfatte alle værdier inden for ± 2 SD for gennemsnitsværdien af20 datapunkter ud af 20 bestemmelser over en periode på 30 dage 22.

BIO-RAD GARANTERER, AT DISSE PRODUKTER VIRKER SOM BESKREVET PÅETIKETTERNE SAMT I ANDET MEDLEVERET SKRIFTLIGT MATERIALE. BIO-RADFRASKRIVER SIG ETHVERT ANSVAR FOR SALGBARHED OG EGNETHED TIL ANDREFORMÅL. BIO-RAD FRASKRIVER SIG ENDVIDERE ENHVER FØLGESKADE, DER OPSTÅRUDEN FOR DEN OVENNÆVNTE, UDTRYKKELIGE GARANTI.



Side 11

Litteraturliste1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis

genome Science, 1989, 244: 359-362. 2 Choo QL., Richman KH., Han JH., et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus Proc. Natl. Acad. Sci USA,

1991, 88: 2451-2455. 3 Kuo G., Choo QL., Alter HJ., et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A non-B

hepatitis. Science 1989, 244: 362-364.4 Tibbs C.J. Methods of transmission of hepatitis C Journal of of viral Hepatitis, 1995, 2: 113-119.5 Purcell R. The Hepatitis C virus: overview Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 11-14.6 Seeff L.B. Natural History of Hepatitis C Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 21-28.7 Yoshikura H., Hijkata N., Nakajima N. and Shimizy Y.K. Replication of Hepatitis C virus Journal of of viral Hepatitis, 1996,

3:3-10.8 Hoofnaggle J.H., Hepatitis C virus: the clinical spectrum of disease Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 15-20.9 AlterR HJ., Purcell RH., Shih JW., et al. Detection of antibodies to hepatitis C virus in prospectively followed transfusion


virus core antibody on incidence of post-transfusion hepatitis. Lancet 1991, 338: 1040-1041.11 Donahue JF., Munoz A., Ness PM., Et al. The declining risk of post-transfusion hepatitis C virus infection. N. Engl. J. Med.

1992, 327: 369-373.12 DHHS (NIOSH) Publication No. 78-127, August 1976. Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Available

http://www.cdc.gov/niosh.13 Approved Standard - Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture - H3-A3.1991. National

Committee for Clinical Laboratory Standards, 3rd edition.14 Approved Guideline - Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, H18-A. 1990. National Committee for

Clinical Laboratory Standards.15 Büttner, H. 1963. Fehler bei der Ausführung und Beurteilung von Laboratoriumsuntersuchungen, Dtsch. Med. Wschr. 88:

1050.16 Benson, E.S., Freier, E.F. 1963.Quality Control. Postgraduate Medicine, 34: A-58.17 Levy, S., Jennings, E.R. 1950. The Use of Control Charts in the Clinical Laboratory, Am. J. Clin. Path., 20: 1059.18 Youden, W.J. 1951. Statistical Methods for Chemists, John Wiley & Sons, Inc., PLUS York.19 Cembrowski, G.S., Carey, R.N. 1989. Laboratory Quality Managment: QC & QA, ASCP Press, 1989.20 Westgard, J.O., Koch, D.D., Oryall, J.J., Quam, E.F., Feldbruegge, et al. 1990. Selection of Medically Useful QC Procedures

for Individual Tests done in a Multitest Analytical System, Clin. Chem, 36: 230.21 Garrett, P.E., 1994. Quality is quantitative: so how do we QC qualitative tests ? Journal of Clinical Immunoassay, 17: 23122 Internal Quality Control: Principles and Definitions. 1987. Tentative NCCLS Guideline. National Committee for Clinical


11/2010

Bio-Rad



Tlf. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

Access HCV Ab PLUS A33599CSeite 1

HCV Ab PLUS REF 34330

Verwendungs-zweck

Access HCV Ab PLUS ist ein Chemolumineszenz Immunoassay mit paramagnetischen Partikeln zumNachweis von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus in Humanserum oder -plasma mit den AccessImmunoassay-Systemen (Access, Access2, UniCel® DxI®).

In-vitro-Diagnostikum

Alle hergestellten oder im Handel erhältlichen Reagenzien unterliegen einem umfassendenQualitätssystem vom Eingang der Rohmaterialien bis zur Vermarktung des Produktes.

Jede Charge unterliegt einer Qualitätskontrolle und wird nur für den Markt freigegeben, wenn dieAkzeptanzkriterien erfüllt sind.

Die Produkt- und Kontrolldokumentation zu jeder einzelnen Charge wird bei Bio-Rad aufbewahrt.

Zusammen-fassung und

Erklärung

Das Hepatitis-C-Virus (HCV) gilt als Hauptursache für Posttransfusions Non-A-Non-B-Hepatitis(NANBH) sowie für Hepatitis, die über den nicht-transfusionalen, parenteralen Weg übertragen wird(Drogenabhängige, Hämodialysepatienten, Transplantationspatienten).1,2,3,4,5,6,7

50-60 % der mit Hepatitis C infizierten Patienten entwickeln chronische Hepatitis, mit dem Risiko eineZirrhose oder ein Leberkarzinom zu entwickeln.8,9

Durch die obligatorische Kontrolle von Blutspenden (auf Antikörper gegen HCV) wurde dasÜbertragungsrisiko durch infiziertes Blut erheblich gesenkt.10,11

Der Test Access HCV Ab PLUS dient zum Nachweis von Antikörpern gegen HCV in Humanserum oder-plasma und trägt so zur Vermeidung parenteraler Infektionen bei. Er eignet sich außerdem für dieDiagnose von HCV-Infektionen. In beiden Fällen sollte das Ergebnis im Zusammenhang mit klinischenDaten und anderen serologischen Markern interpretiert werden.

Testprinzip Access HCV Ab PLUS ist ein indirekter Enzymimmunoassay. Die Probe (Serum, Plasma, Kalibratoroder Kontrolle) wird in ein Reaktionsgefäß mit paramagnetischen Partikeln überführt, die mit Peptidender immunodominanten Epitope der Kapsidregion und zwei rekombinanten Proteinen (NS3 und NS4)beschichtet sind. Während der Inkubation werden die in der Probe vorhandenen spezifischen IgG undIgM Antikörper von der Festphase gebunden. Nach der Inkubation wird das an die ferromagnetischenPartikeln gebundene Material in einem Magnetfeld zurückgehalten, nicht gebundenes Material wirddurch mehrere Waschschritte entfernt. Im zweiten Schritt wird dem Reaktionsgefäß ein Konjugathinzugefügt (Ziege anti-human IgG, mit alkalischer Phosphatase gekoppelt). Nach Abschluss derInkubation wird überschüssiges Konjugat durch einen weiteren Waschschritt entfernt. EinChemolumineszenzsubstrat (Lumi-Phos* 530) wird zugegeben und das bei der enzymatischen Reaktionerzeugte Licht wird mit Hilfe eines Luminometers gemessen. Die Intensität des erzeugten Lichts istproportional zur vorliegenden Menge an Enzymkonjugat und damit zum Titer der in der Probevorliegenden Antikörper gegen HCV. Durch Vergleich des bei der Kalibrierung des Geräts ermittelten

A33599C Access HCV Ab PLUSSeite 2

Grenzwerts mit dem Signal der Probe kann das Vorhandensein bzw. Fehlen von HCV-Antikörpernermittelt werden.

Produkt-informationen

Access HCV Ab PLUS-ReagenzienpackungBestell-Nr. 34330: 100 Bestimmungen, 2 Packungen, 50 Tests/Packung• Die Reagenzien sind gebrauchsfertig und müssen bei 2 bis 10°C gelagert werden. • Unter diesen Bedingungen ist die Reagenzienpackung bis zum auf dem Etikett angegebenen

Verfallsdatum haltbar. • Inhalt vor erstmaligem Beladen durch behutsames Überkopfwenden mischen, bis die Partikel

vollständig aufgeschwemmt sind. • Eine bereits geöffnete Packung sollte im Gerät belassen oder (aufrecht) im Kühlschrank gelagert und

binnen 28 Tagen verbraucht werden. • Anzeichen einer möglichen Beeinträchtigung sind eine aufgebrochene Elastomerschicht der Packung

oder Qualitätskontrollwerte, die außerhalb der gültigen Bereiche liegen.

Warnhinweiseund Vorsichts-

massnahmen

• Vor dem Beladen die Packungen schütteln, bis die Partikel vollständig aufgeschwemmt sind.• In-vitro-Diagnostikum.• Natriumazid kann mit Blei und Kupfer in Leitungen unter Bildung hochexplosiver Metallazide

reagieren. Um die Bildung solcher Metallazide zu vermeiden, nach Ausgießen azidhaltiger Lösungen mit reichlich Wasser nachspülen.12

• ProClin** 300 ist ein potentielles Hautallergen. Kontakt mit Haut oder Kleidung vermeiden. Bei Kontakt mit dem Reagenz gründlich mit Wasser waschen.

Gewinnungund

Aufbereitungder Proben

1. Als Probenmaterial wird Serum oder Plasma (mit Heparin, EDTA oder Citrat) empfohlen.2. Bei der Handhabung und Verarbeitung von Blutproben folgende Empfehlungen beachten:13,14

• Bei der Entnahme der Blutproben sind die routinemäßigen Vorsichtsmaßnahmen für die Venenpunktion einzuhalten.

• Serumproben vor dem Zentrifugieren vollständig gerinnen lassen (mind. 1 Stunde).• Probenröhrchen stets verschlossen halten.• Proben 15 Minuten lang bei mind. 1500 g zentrifugieren.

3. Bei der Lagerung von Blutproben folgende Empfehlungen beachten:13, 14

• Die Proben nicht länger als 8 Stunden bei Zimmertemperatur lagern.• Erfolgt die Bestimmung nicht innerhalb von 8 Stunden, die Proben bei 2 bis 10°C im Kühlschrank

lagern.• Erfolgt die Bestimmung nicht innerhalb von 48 Stunden oder sollen Proben versandt werden, bei

-20°C einfrieren.13

• Proben nur einmal auftauen - schnelles Auftauen durch Erwärmen im Wasserbad (40°C).• Aufgetaute Proben 15 Minuten lang bei 3000 g zentrifugieren und in ein Probengefäß überführen,

um aufgeschwemmte Fibrinpartikel oder -aggregate, die zu falschpositiven Ergebnissen führen können, zu entfernen.

R1a: Paramagnetische Partikel, beschichtet mit rekombinanten Proteinen (NS3/NS4)und Peptid (Kapsid) aufgeschwemmt in TRIS-Puffer mit Natriumazid ( 0,1 %)

R1b: Probendiluent mit 0,1 % Natriumazid

R1c: Konjugatdiluent mit oberflächenaktiver Substanz, 0,1 % Natriumazid

R1d: Konjugat (Ziege anti-human IgG mit alkalischer Phosphatase gekoppelt), inTRIS-Puffer, mit oberflächenaktiver Substanz, 0,1 % Natriumazid und 0,1 % ProClin** 300


4. Proben mit einem Bilirubingehalt bis 200 mg/l und einem Albumingehalt bis 90 g/l, lipämische Proben mit einem Trioleingehalt bis 36 g/l sowie hämolytische Proben mit einem Hämoglobingehalt bis 5 g/l beeinträchtigen die Ergebnisse nicht.

GelieferteArtikel

R1 Access HCV Ab PLUS-Reagenzienpackungen

Zusätzlichbenötigte

Artikel

1. Access HCV Ab PLUS Calibrators zur Kalibrierung Negatives und positives Serum für HCV-Antikörper Bestell-Nr. 34335

2. Material für die Qualitätskontrolle: Access HCV Ab PLUS QC Bestell-Nr. 34339 - oder andere im Handel erhältliche Kontrollseren

3. Access Substrate (Substrat)Bestell-Nr. 81906

4. Access, Access2Waschpuffer: Access Waschpuffer II, Bestell-Nr. A16792

5. UniCel DxIWaschpuffer: UniCel DxI Waschpuffer II, Bestell-Nr. A16793

6. Systeme:Access, Access2, UniCel DxI.

Hinweise zumVerfahren

1. Die Anleitungen für das betreffende System und/oder das Hilfesystem enthalten spezifische Erläuterungen zu: Installation, Inbetriebnahme, Arbeitsweise, Leistungsmerkmalen, Bedienungsanweisungen, Kalibrierungsdaten und -verfahren, Wartung und Fehlerbeseitigung.Hinweise zu Einschränkungen und Vorsichtsmaßnahmen bei der Bedienung sowie zu möglichen Gefahrenquellen sind, wenn zutreffend, ebenfalls in den Handbüchern enthalten.

2. Für eine Bestimmung sind zusätzlich zum Totvolumen fünfundzwanzig (25) μl Probe erforderlich.3. Die Inkubation erfolgt bei 37°C und dauert 55 Minuten.

Testablauf Informationen bezüglich Probenhandhabung, Testkonfiguration, Testanforderung und Einsehen derTestergebnisse enthalten die Anleitungen für das betreffende System und/oder das Hilfesystem.

Kalibrierung Für alle Tests wird eine aktive Kalibrationskurve benötigt. Die Kalibrierungsdaten, die den Grenzwertdes Tests festlegen, sind 28 Tage gültig. Daher muss Access HCV Ab PLUS alle 28 Tage mittels C0 undC1 des Access HCV Ab PLUS Calibrators Kits kalibriert werden. Informationen bezüglichKalibrierungsprinzipien, Kalibratorkonfiguration, Anfordern von Kalibratorproben und Einsehen derKalibrierungsdaten enthalten die Anleitungen für das betreffende System und/oder das Hilfesystem.

Qualitäts-kontrolle

Es wird empfohlen, mindestens täglich bzw. nach jedem Systemneustart, bevor mit dem Abarbeiten derProben begonnen wird, eine Qualitätskontrolle vorzunehmen. Zu diesem Zweck können entweder dasempfohlene Produkt Access HCV Ab PLUS QC oder andere im Handel erhältliche Kontrollserenverwendet werden. Beachten Sie bitte die Vorgaben des Herstellers zur Rekonstitution und Lagerung.Jedes Labor sollte zur analytischen Leistungsüberprüfung eigene Mittelwerte und zulässige Bereicheerstellen. Liegen die Ergebnisse der Kontrollseren außerhalb der zulässigen Bereiche, kann der aktuelleTestlauf ungültig sein. Überprüfen Sie in diesem Fall sämtliche Testergebnisse, die für diesen Analytenseit der zuletzt akzeptierten Qualitätskontrolle erzielt wurden.

Um optimale Ergebnisse zu erzielen, sollten die Kalibrierung der Assays und das Testen derPatientenproben unter gleichen Temperaturbedingungen erfolgen. Wenn die Raumtemperatur im Laborum mehr als +/- 5°C von der Kalibrierungstemperatur abweicht, müssen die Ergebnisse derQualitätskontrolle überprüft und es muss gegebenenfalls neu kalibriert werden.


Beachten Sie bitte die vollständigen Hinweise zur Überprüfung von Qualitätskontrollergebnissen in denAnleitungen für das betreffende System und/oder im Hilfesystem.

Ergebnisse Die Testergebnisse der Patientenproben werden automatisch von der System-Software unterVerwendung des in Abhängigkeit von der aktiven Kalibrierung bestimmten Grenzwerts ermittelt(Cut-Off = Mittelwert positiver Kalibratoren (RLU) x 0,23). Die Ergebnisse (Signal/Cut-Off = S/CO)werden als „reaktiv“ oder „nicht reaktiv“ ausgegeben (Signal größer oder gleich bzw. Signal gleich oderkleiner als der Grenzwert). Testergebnisse ~ ca. 10 % niedriger als der „Cut-Off-Wert“ sollten jedoch mitVorsicht interpretiert und durch eine nochmalige Testung verifiziert werden. Diese empfohlene Grauzone(von 0,9 bis unter 1,0) sollte vom Anwender in der Systemsoftware gespeichert werden (vollständigeAnweisungen über die Grauzone bei qualitativen Assays finden Sie in den entsprechendenSystemhandbüchern und/oder im Hilfesystem). So wird automatisch ein in der Grauzone liegendesErgebnis schnell identifiziert und gemeldet. Die Testergebnisse von Patienten können mit dem FensterProbenergebnisse überprüft werden. Eine vollständige Anleitung für das Überprüfen von Ergebnissenfinden Sie in den entsprechenden Systemhandbüchern und/oder im Hilfesystem.

Jede Probe mit einem Verhältnis (S/CO) kleiner als 0,9 wird als nicht reaktiv mit dem Test Access HCVAb PLUS angesehen. Proben mit einem Verhältnis (S/CO) gleich oder größer als 1 werden zunächst alsreaktiv mit dem Test Access HCV Ab PLUS angesehen. Solche Proben sollten vor der endgültigenInterpretation mittels einer zweiten Bestimmung nochmals getestet werden.

Alle Proben, die initial reaktiv sind oder mit Ergebnissen in der Grauzone, sollten mit dem Access HCVAb PLUS Assay nochmals getestet werden:

• Wenn die Ergebnisse des zweiten Tests 1,0 S/CO sind, muss die Probe als nicht reaktiv (negativ) für den HCV Ab PLUS Assay angesehen werden.

• Wenn eines der beiden Ergebnisse 1,0 S/CO ist, ist das initiale Ergebnis nicht reproduzierbar, und die Probe wird als „reaktiv“ für den Test Access HCV Ab PLUS erklärt.

Es wird jedoch empfohlen, jede reproduzierbar reaktive Probe nochmals durch einen zweiten EIA-Assayund durch ein Bestätigungsverfahren zum eindeutigen Nachweis des positiven Ergebnisses zu testen.

Grenzen desVerfahrens

Der Access HCV Ab PLUS Assay dient ausschließlich zum Nachweis von Antikörpern gegen HCV inHumanserum oder -plasma. Ein positives Ergebnis mit dem Access HCV Ab PLUS Assay sollte stetszusammen mit den klinischen Daten betrachtet und durch andere diagnostische Tests (einschließlicheines Bestätigungsverfahrens [Immunoblot]) bestätigt werden, bevor es als positiv für eine Infektiongemeldet wird.

Angesichts der Unterschiedlichkeit der immunologischen Reaktionen von mit dem Hepatitis-C-Virusinfizierten Patienten (insbesondere während Serokonversionen), können bestimmte Unterschiede desNachweises zwischen einzelnen Tests beobachtet werden, je nach Art der verwendeten antigenenProteine. Ein negatives Ergebnis mit einem Screening-Test schließt die Möglichkeit einer Expositionoder Infektion durch das Hepatitis-C-Virus nicht aus.

Interpretation der Ergebnisse des HCV Ab PLUS Assays

ErgebnisVerhältnis: Signal/Cut-Off (Grenzwert) Interpretation Zusätzliche Tests

S/CO 0,9 Nicht reaktivS/CO 1 Reaktiv Nochmalige Testung

S/CO: 0,9 - 1,0 Grauzone Nochmalige TestungRetestung: S/CO 1 Nicht reaktiv

Retestung: wenn eines der beiden Ergebnisse 1 Reaktiv Bestätigungstest


Alle ELISA-Techniken sind anfällig für falsch positive Reaktionen. Es wird empfohlen, die Spezifität derReaktion für jede (reproduzierbar positive) Probe unter Verwendung einer geeigneten Methode zumBeweis der Anwesenheit von HCV-Antikörpern zu verifizieren.

SpezifischeLeistungs-merkmale

SensitivitätDie Sensitivität von Access HCV Ab PLUS wurde durch die Analyse von 511 gut dokumentierten,positiven Proben evaluiert:

101 PCR-positive Seren von chronischen HCV-Patienten in der Nachuntersuchung, 145 positive Probenvon HCV-infizierten Patienten, 77 HCV RNA PCR-positive Plasmen von BBI, 122 genotypisierteHCV-positive Proben.

SFTS 97 Panel mit 36 positiven Proben, darunter 26 genotypisierte und 10 positive (PCR-negative)Proben mit mindestens 2 HCV Ab-Reaktivitäten.

Darüber hinaus umfassten die prospektiven Spezifitätsstudien 30 positive Proben.

Alle diese Proben waren repräsentativ für die verschiedenen Serotypprofile (isolierte Reaktivität, 2 oder 3Reaktivitäten) und die häufigsten HCV-Genotypen 1 bis 4, sowie die selteneren Genotypen 4c/d und 5.

Alle diese Proben waren mit Access HCV Ab PLUS positiv.

Es bestand kein offensichtlicher Unterschied beim Nachweis der verschiedenen HCV-Genotypen.

Die Sensitivität des Access HCV Ab PLUS wurde durch die Analyse von 74 Serokonversionspanelsevaluiert.

Unter den 29 im Handel erhältlichen, getesteten Panels erfolgte der Nachweis mit Access HCV Ab PLUSanti-HCV Ab genauso früh wie mit dem RIBA 3.0 Zusatztest oder kurze Zeit später (wenige Tage).

Unter den 45, von Experten getesteten Panels war Access HCV Ab PLUS zur gleichen Zeit positiv (d. h.positiv mit der gleichen Probe) wie die sensitiveren Tests, die für den Vergleich verwendet wurden.Lediglich 2 Serokonversionen wurden wenige Tage später und umgekehrt 2 Serokonversionen früher mitAccess HCV Ab PLUS nachgewiesen.

25 zusätzliche frische HCV-positive Proben (innerhalb von 1 Tag nach der Blutabnahme) wurdensämtlich positiv getestet.

SpezifitätDie Spezifität des Tests wurde evaluiert:

• mit einer Population von 5995 nicht selektiven Proben von Blutspendern und beträgt 99,83% (99,7% bis 99,9% mit sicherem Intervall).

• mit einer Population von 472 Krankenhauspatienten: 469 waren negativ und 3, die mit Chiron Riba HCV 3.0 nicht eindeutig waren, waren mit Access HCV Ab PLUS schwach positiv.

Die Analyse von 108 Proben von Patienten mit unterschiedlichen Pathologien ohne Bezug zu HCV(Hepatitis A oder B, Herpes, EBV, Rheumafaktor...) wiesen keine signifikante, nicht spezifischeKreuzreaktivität auf.

PräzisionDie Präzision von Access HCV Ab PLUS wurde durch die Analyse von negativen und positiven Probenermittelt. Zur Ermittlung der Präzision innerhalb einer Serie wurden 4 Proben 30-mal in einem Testlaufuntersucht. Zur Ermittlung der Präzision von Tag zu Tag wurden 4 Proben in Dreifachbestimmungzweimal täglich an 5 Tagen untersucht. Die Ergebnisse sind nachfolgend aufgeführt:

Präzision in der Serie


Mittelwert (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243Standardabweichung 10202 43987 320857 309281Variationskoeffizient

(%)4,05 3,19 2,93 2,45


Der Variationskoeffizient ist kleiner als 5 %.

Präzision von Tag zu Tag

Der Variationskoeffizient ist kleiner als 10 %.

Access, UniCel und DxI sind eingetragene Markenzeichen von Beckman Coulter, Inc.

*Lumi-Phos ist ein eingetragenes Markenzeichen von Lumigen, Inc. ein Tochterunternehmen vonBeckman Coulter, Inc.

** ProClin ist eine Marke von Rohm and Haas Company oder einer ihrer Tochtergesellschaften.


Mittelwert (RLU) 0,07 1,34 3,18 4,42Standardabweichung 0,01 0,09 0,21 0,39Variationskoeffizient

(%)9,9 6,89 6,64 8,78


Seite 7

HCV Ab PLUS CALIBRATORS REF 34335

Verwendungs-zweck

Die Access HCV Ab PLUS Calibrators dienen in Verbindung mit Access Ab PLUS zum Nachweis vonAntikörpern gegen HCV in Humanserum und -plasma mit den Access Immunoassay-Systemen (Access,Access2, UniCel® DxI®).






Erklärung

Die Access HCV Ab PLUS Calibrators dienen zur Kalibrierung (Bestimmung des Grenzwertes) fürAccess HCV Ab PLUS. Durch Vergleich der Lichtintensität einer Probe mit dem Grenzwert kann dasVorhandensein bzw. Fehlen von HCV-Antikörpern in der Probe nachgewiesen werden.


Access HCV Ab PLUS CalibratorsBestell-Nr. 34335: C0–C1, 1 mL/Fläschchen• Die Kalibratoren sind gebrauchsfertig. • Lagerung bei 2 bis 10°C. • Inhalt vor Gebrauch durch behutsames Überkopfwenden mischen. Schaumbildung vermeiden. • Bei Lagerung zwischen 2 und 10 °C sind die Kontrollen bis zum auf dem Etikett angegebenen

Verfallsdatum haltbar. • Anzeichen für eine mögliche Beeinträchtigung sind außerhalb der zulässigen Bereiche liegende

Kontrollwerte.

C0: Humanserum negativ (nicht reaktiv) für Antikörper gegen HCV, mit 0,1 % Natriumazid

C1: Humanserum positiv (reaktiv) für Antikörper gegen HCV, inaktiviert,mit 0,1 % Natriumazid

Kalibratorkarte: 1


Seite 8


massnahmen

• In-vitro-Diagnostikum.• Das für die Herstellung dieser Reagenzien verwendete Ausgangsmaterial humanen Ursprungs wurde

mit negativem Ergebnis auf das Vorhandensein von Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAg), Antikörpern gegen Immundefizienzviren (HIV-1 und HIV-2) und Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus (HCV) untersucht; mit Ausnahme des positiven Kalibrator C1, der für Antikörper gegen HCV ein positives Ergebnis ergab. Da jedoch mit keiner heute bekannten Testmethode mit letzter Sicherheit ausgeschlossen werden kann, dass infektiöse Erreger vorhanden sind, sollten alle Reagenzien und Patientenproben als potentiell infektiös angesehen und mit entsprechender Sorgfalt gehandhabt werden.

• Natriumazid kann mit Blei und Kupfer in Leitungen unter Bildung hochexplosiver Metallazide reagieren. Um die Bildung solcher Metallazide zu vermeiden, nach Ausgießen von Lösungen mit reichlich Wasser nachspülen.12

Testablauf Informationen bezüglich Kalibrierungsprinzipien, Kalibratorkonfiguration, Anfordern vonKalibratorproben und Einsehen der Kalibrierungsdaten enthalten die Anleitungen für das betreffendeSystem und/oder das Hilfesystem.

Kalibrierung Die Access HCV Ab PLUS Calibrators werden in zwei Ausführungen geliefert: negativer Kalibrator C0(gewonnen aus negativem Humanserum) und positiver Kalibrator C1 (gewonnen aus positivemHumanserum für Antikörper gegen HCV), inaktiviert.

Für Access HCV Ab PLUS ist eine Kalibrationskurve (Bestimmung des Grenzwertes) erforderlich. DieKalibrationskurve ist auf dem Access-Automaten für lediglich eine Reagenziencharge, die durch denBarcode identifiziert ist, 28 Tage lang „aktiv“. Am Ende dieser 28 Tage oder bei Verwendung eineranderen Reagenziencharge auf dem Automaten ist die Kurve automatisch nicht mehr gültig.

Für eine Kalibrierung des Tests Access HCV Ab PLUS werden mindestens 225 μl (5 Tropfen) (Access,Access 2) bzw. 305 μl (7 Tropfen) (UniCel DxI) von jedem Kalibrator benötigt (Grenzwert = RLUs C1 X 0,23); mit der programmierten Kalibrierung für Access HCV Ab PLUS werden C0 und C1 inDreifachbestimmung getestet.



Seite 9

HCV Ab PLUS QC REF 34339

Verwendungs-zweck

Access HCV Ab PLUS QC dient zur Überprüfung der Leistungsmerkmale von Access HCV Ab PLUS.






Erklärung

Die Qualitätskontrolle Access HCV Ab PLUS QC dient zur Überprüfung der Leistungsmerkmale desTests Access HCV Ab PLUS für den Nachweis von Antikörpern gegen HCV.Qualitätskontrollmaterialien sind indiziert für die Erkennung und mögliche Behebung kritischerTestfehler, die durch Testkits, Personal und Geräte verursacht werden können. Außerdem stellen sie einenintegralen Bestandteil der anerkannten Laborverfahren dar.15,16,17,19,21,22 Geliefert werden eine negativeund eine schwach positive Kontrolle für die Leistungsüberwachung im wichtigsten Abschnitt desdynamischen Bereichs dieser Tests.


Access HCV Ab PLUS QCBestell-Nr. 34339: 2,5 mL/Fläschchen• Die Qualitätskontrollen sind gebrauchsfertig. • Inhalt vor Gebrauch durch behutsames Überkopfwenden mischen. Schaumbildung vermeiden. • Bei Lagerung zwischen 2 und 10 °C sind die Qualitätskontrollen bis zum auf dem Etikett

angegebenen Verfallsdatum haltbar. • Nach dem Öffnen sind die Kontrollen bei sachgemäßer Handhabung und Lagerung 30 Tage lang

haltbar.


massnahmen

• In-vitro-Diagnostikum.• Das für die Herstellung dieser Reagenzien verwendete Ausgangsmaterial humanan Ursprungs wurde

mit negativem Ergebnis auf das Vorhandensein von Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAg),

QC 1: Humanserum mit 0,1 % Natriumazid. Negativ (nicht reaktiv) fürAntikörper gegen HCV

QC 2: Humanserum mit 0,1 % Natriumazid. Positiv (reaktiv) für Antikörpergegen HCV, inaktiviert

QK-Wertekarte: 1


Seite 10

Antikörpern gegen Immundefizienzviren (HIV-1 und HIV-2) und Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus (HCV) untersucht; mit Ausnahme der QC2-Kontrolle, die für Antikörper gegen HCV ein positives Ergebnis ergab. Da jedoch mit keiner heute bekannten Testmethode mit letzter Sicherheit ausgeschlossen werden kann, dass infektiöse Erreger vorhanden sind, sollten alle Reagenzien und Patientenproben als potentiell infektiös angesehen und mit entsprechender Sorgfalt gehandhabt werden.

• Natriumazid kann mit Blei und Kupfer in Leitungen unter Bildung hochexplosiver Metallazide reagieren. Um die Bildung solcher Metallazide zu vermeiden, nach Ausgießen von Lösungen mit reichlich Wasser nachspülen.12

Testablauf Die Qualitätskontrollen Access HCV Ab PLUS QC sind wie Patientenproben zu handhaben und gemäßden Anweisungen für das benutzte Gerät zu analysieren.

Informationen bezüglich Qualitätskontrollprinzipien, Kontrollenkonfiguration, Anforderung vonQualitätskontrollproben und Einsehen der Qualitätskontrolldaten enthalten die Anleitungen für dasbetreffende System und/oder das Hilfesystem. Für die Verwendung der Qualitätskontrollen Access HCVAb PLUS QC mit den Access Immunoassay Systemen wird pro Gefäß eine Mindestmenge von 175 μl (4Tropfen) (Access, Access 2) bzw. 255 μl (6 Tropfen) (UniCel DxI) für jede der beiden Kontrollenbenötigt (Einzelbestimmung).

Grenzen desVerfahrens

Bei Anzeichen eines mikrobiellen Befalls einer Kontrolle oder bei starken Trübungen ist das Fläschchenzu entsorgen.

ErwarteteWerte

Die Kontrollwerte für den Test Access HCV Ab PLUS sind für jede Charge auf der QC-Wertekarteenthalten, die jeder Testpackung beiliegt. Die von den Anwenderlabors erhaltenen Mittelwerte müssen inden jeweils zulässigen Bereichen liegen. Jedes Labor sollte jedoch eigene Mittelwerte und zulässigeBereiche erstellen, nachdem genügend Daten gesammelt wurden.18

Da die spezifischen Messwerte verschiedener Herstellertests in Abhängigkeit der Testverfahren, dereinzelnen Chargen und des Labors schwanken können, muß jedes Labor eigene spezifische Messwerteund zulässige Bereiche ermitteln.18,19,20,21 Der Vertrauensbereich kann sämtliche Werte umfassen, dieum ± 2 SD eines anhand von 20 Bestimmungen über einen Zeitraum von 30 Tagen errechnetenMittelwerts liegen.22

BIO-RAD ÜBERNIMMT DIE GEWÄHRLEISTUNG FÜR DIESE PRODUKTE IM RAHMEN DERANWENDUNG, DIE AUF DEM ETIKETT UND DER BEILIEGENDENGEBRAUCHSANWEISUNG BESCHRIEBEN IST. BIO-RAD ÜBERNIMMT KEINE HAFTUNG IMFALLE EINES VERKAUFS ODER IM FALLE EINER ANDEREN ANWENDUNG. BIO-RAD IST INKEINEM FALL HAFTBAR FÜR FOLGESCHÄDEN, DIE AUSSERHALB DER ZUVORERWÄHNTEN AUSDRÜCKLICHEN GARANTIE LIEGEN.


LITERATUR1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis



hepatitis. Science 1989, 244: 362-364.4 Tibbs C.J. Methods of transmission of hepatitis C Journal of of viral Hepatitis, 1995, 2: 113-119.5 Purcell R. The Hepatitis C virus: overview Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 11-14.6 Seeff L.B. Natural History of Hepatitis C Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 21-28.


Seite 11

7 Yoshikura H., Hijkata N., Nakajima N. and Shimizy Y.K. Replication of Hepatitis C virus Journal of of viral Hepatitis, 1996, 3: 3-10.

8 Hoofnaggle J.H., Hepatitis C virus: the clinical spectrum of disease Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 15-20.9 AlterR HJ., Purcell RH., Shih JW., et al. Detection of antibodies to hepatitis C virus in prospectively followed transfusion










11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A33605CΣελίδα 1

HCV Ab PLUSΑΝΑΦ. 34330

Προβλεπόμενηχρήση

Η δοκιμή Access HCV Ab PLUS χρησιμοποιεί μία ανοσοενζυμική χημειοφωταυγή τεχνική με παραμαγνητικάσωματίδια για την ανίχνευση των αντισωμάτων κατά του ιού της ηπατίτιδας C στον ορό ή το πλάσμα του ανθρώπου,μέσω των Συστημάτων Ανοσοπροσδιορισμού Access (Access, Access 2, UniCel®DxI®).

Για διαγνωστική χρήση In Vitro

Όλα τα προϊόντα που κατασκευάζονται και διατίθενται στο εμπόριο από την εταιρεία Bio-Rad υποβάλλονται σε όλεςτις διεργασίες του συστήματος διασφάλισης ποιότητας, από την παραλαβή των πρώτων υλών έως τηνεμπορευματοποίηση των τελικών προϊόντων.

Κάθε παρτίδα τελικού προϊόντος υποβάλλεται σε έλεγχο ποιότητας και διατίθεται στο εμπόριο μόνον ότανσυμμορφώνεται με τα κριτήρια αποδοχής.

Η τεκμηρίωση σχετικά με την παραγωγή και τον έλεγχο της κάθε παρτίδας τηρείται εντός της εταιρίας.

Περίληψη καιΕπεξήγηση

Ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV) θεωρείται, επί του παρόντος, υπεύθυνος για την πλειοψηφία των μεταδιδόμενων λόγωμεταμετάγγισης ηπατίτιδων non-Α non -Β (HNANB), καθώς και για τις μεταδιδόμενες διά της παρεντερικής οδούηπατίτιδες (τοξικομανείς, αιμοδιύλιση, μεταμοσχεύσεις). 1,2,3,4,5,6,7 Το χαρακτηριστικό των ηπατίτιδων αυτού τουτύπου έγκειται στο γεγονός ότι 50% έως 60% των προσβεβλημένων ασθενών είναι επιρρεπείς στην προσβολή απόχρόνια ηπατίτιδα με κίνδυνο εξέλιξης σε κίρρωση και καρκίνωμα του ήπατος. 8,9

Η καθιέρωση της υποχρεωτικής δοκιμής προσδιορισμού των αντισωμάτων anti-HCV σε κάθε αιμοδοσία οδήγησε σεσημαντική μείωση των σχετιζόμενων με τη μετάγγιση κινδύνων. 10,11.

Η δοκιμή Access HCV Ab PLUS προορίζεται για την ανίχνευση των αντισωμάτων anti-HCV που ενδέχεται ναυπάρχουν στον ορό ή το πλάσμα του ανθρώπου, συμβάλλοντας κατ' αυτόν τον τρόπο στην πρόληψη τωνπαρεντερικών μολύνσεων. Συν τοις άλλοις, χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της μόλυνσης από τον ιό τηςηπατίτιδας C (HCV). Σε κάθε περίπτωση, τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με τα κλινικάδεδομένα και άλλους ορολογικούς δείκτες.

Αρχές τηςδοκιμής

Η δοκιμή Access HCV Ab PLUS είναι μια έμμεση ανοσοενζυμική δοκιμή προσδιορισμού τύπου EIA. Στο πλαίσιοτης δοκιμής αυτής, ένα δείγμα (ορός, πλάσμα ή μάρτυρας) έρχεται σε επαφή, εντός μιας κυβέτας όπου λαμβάνειχώρα η αντίδραση, με μαγνητικά σωματίδια ευαισθητοποιημένα με ένα πεπτίδιο που μιμείται τα ανοσοκυρίαρχαεπίτοπα της περιοχής του καψιδίου και τις ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες των περιοχών NS3 και NS4. Κατά τηνεπώαση, τα IgG και IgM που υπάρχουν στο δείγμα συλλαμβάνονται από τη στερεά φάση. Μετά την επώαση, οδιαχωρισμός εντός μαγνητικού πεδίου και οι πλύσεις επιτρέπουν την απόρριψη των προϊόντων που δεν δεσμεύτηκανστη στερεά φάση. Σε μια δεύτερη φάση, προστίθεται στη κυβέτα ένα συζυγές που περιέχει αντιανθρώπινααντισώματα IgG αίγας, τα οποία είναι δεσμευμένα από την αλκαλική φωσφατάση. Μετά από νέα επώαση, τοπλεονάζον συζυγές απορρίπτεται με πλύση. Προστίθεται χημειοφωταυγές υπόστρωμα (Lumi-Phos 530*) και ταφωτόνια που εκπέμπονται από την ενζυμική αντίδραση μετριούνται με τη βοήθεια φωτομέτρου. Η ένταση τουεκπεμπόμενου φωτεινού σήματος είναι ανάλογη της ποσότητας του ενζυμικού συζυγούς που προκύπτει στο τέλοςτης αντίδρασης, και ως εκ τούτου ανάλογη των αντισωμάτων anti-HCV που υπάρχουν στο υπό δοκιμή δείγμα. Ησύγκριση του εκπεμπόμενου φωτεινού σήματος με την τιμή κατωφλίου που καθορίστηκε κατά τη βαθμονόμηση τηςδοκιμής επί του οργάνου επιτρέπει την εξαγωγή συμπερασμάτων σχετικά με την παρουσία ή την απουσία, στοσυγκεκριμένο δείγμα, αντισωμάτων anti-HCV.

A33605C Access HCV Ab PLUSΣελίδα 2

Πληροφορίεςσχετικά με το

προϊόν

Συσκευασία Αντιδραστηρίων Access HCV Ab PLUSΚωδικός 34330: Κουτί 100 δοκιμών προσδιορισμού, 2 Συσκευασίες αντιδραστηρίων των 50 δοκιμών• Παρέχονται έτοιμα προς χρήση.• Αποθηκεύστε τις συσκευασίες σε όρθια θέση και διατηρήστε τις εντός ψυγείου στους 2 έως 10°C προ της

φόρτωσής τους ή της αποθήκευσής τους επί της συσκευής.• Τα αντιδραστήρια παραμένουν σταθερά έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα.• Κατά την πρώτη φόρτωση στο φορεα αντιδραστηριων, ανακινήστε το κουτί έως την πλήρη επαναιώρηση των

σωματιδίων.• Μετά το άνοιγμα, αφήστε τη συσκευασία φορτωμένη στον αναλυτή ή διατηρήστε την σε θερμοκρασία ψύξης (σε

όρθια θέση) και χρησιμοποιήστε την εντός των 28 επόμενων ημερών.• Ενδείξεις πιθανής αποσύνθεσης οφείλονται και παρατηρούνται στη καταστροφή του στρώματος της συσκευασίας

από ελαστομερές ή στις τιμές μαρτύρων που δεν εμπίπτουν στο εύρος τιμών του ορίου εμπιστοσύνης.

Προειδο-ποιήσεις καιΠροφυλάξεις

• Κατά την πρώτη φόρτωση στο φορέα αντιδραστηρίων, ανακινήστε το κουτί έως την πλήρη επαναιώρηση των σωματιδίων.

• Για διαγνωστική χρήση in vitro.• Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με τις μολυβδούχες ή χάλκινες σωληνώσεις δημιουργώντας

μεταλλικά αζίδια τα οποία είναι άκρως εκρηκτικά. Κατά την απόρριψη των υγρών, ξεπλύνετε με άφθονο νερό προς αποφυγή της δημιουργίας μεταλλικών αζιδίων.12

• Το ProClin 300** είναι αλλεργιογόνο. Αποφεύγετε το πιτσίλισμα αντιδραστηρίου στο δέρμα ή τα ρούχα. Σε περίπτωση επαφής με το αντιδραστήριο, ξεπλύνετε με άφθονο νερό.

Συλλογή καιπροετοιμασίατου δείγματος

1. Σύνθεση του δείγματος: ορός ή πλάσμα (ηπαρίνη, EDTA ή κιτρικό οξύ).2. Όσον αφορά τον χειρισμό και την επεξεργασία των δειγμάτων αίματος, εφαρμόστε τις ακόλουθες πρότυπες

διαδικασίες:13, 14

• Συλλέξτε τα δείγματα αίματος τηρώντας τις συνήθεις προφυλάξεις φλεβοπαρακέντησης.• Αφήστε τα δείγματα ορού να πήξουν πλήρως προ της φυγοκέντρησης, για 1 τουλάχιστον ώρα.• Διατηρείτε πάντα τους σωλήνες σφραγισμένους με πώμα.• Φυγοκεντρίστε το δείγμα για 15 λεπτά στα 1500g τουλάχιστον.

3. Όσον αφορά τη διατήρηση των δειγμάτων αίματος, εφαρμόστε τις ακόλουθες πρότυπες διαδικασίες:13, 14

• Μην φυλάσσετε τα δείγματα σε θερμοκρασία περιβάλλοντος για περισσότερο από 8 ώρες.• Εάν η δοκιμή δεν έχει ολοκληρωθεί εντός 8 ωρών, διατηρήστε το δείγμα εντός ψυγείου στους 2 έως 10°C.• Εάν η δοκιμή δεν έχει ολοκληρωθεί εντός 48 ωρών, ή για την αποστολή των δειγμάτων, διατηρήστε εντός

καταψύκτη στους -20°C.13

• Υποβάλλετε άπαξ τα δείγματα σε ταχεία απόψυξη, μέσω θέρμανσης για μερικά λεπτά σε υδατόλουτρο θερμοκρασίας 40°C, προκειμένου να περιοριστεί η ιζηματοποίηση του ινώδους.

• Μετά την απόψυξη, φυγοκεντρίστε εκ νέου το δείγμα για 15 λεπτά στα 3.000g και μεταφέρετε το σε ποτηράκι δείγματος, προκειμένου να διεξάγετε τη δοκιμή, και αυτό για να απομακρύνετε τα αιωρούμενα συσσωματώματα ή ινώδη σωματίδια που ενδέχεται να προκαλέσουν πλασματικά θετικά αποτελέσματα.

4. Δείγματα τα οποία περιέχουν 200 mg/L χολυρεθρίνης, 90 g/L αλμπουμίνης, δείγματα τα οποία περιέχουν έως και 36 g/L τριελαΐνης (τριγλυκερίδιο), και δείγματα τα οποία έχουν υποστεί αιμόλυση και τα οποία περιέχουν έως και 5 g/L αιμοσφαιρίνης δεν επηρεάζουν τα αποτελέσματα της δοκιμής.

Παρεχόμενουλικό

R1 Συσκευασίες Αντιδραστηρίων Access HCV Ab PLUS

R1a: Παραμαγνητικά σωματίδια ευαισθητοποιημένα με ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες (NS3 καιNS4) και ένα πεπτίδιο (Καψίδιο) σε αιώρημα ρυθμιστικού διαλύματος Tris, καθώς και μεαζίδιο του νατρίου (<0,1%).

R1b: Αραιωτικό δείγματος, το οποίο περιέχει αζίδιο του νατρίου (< 0,1%)

R1c: Αραιωτικό συζυγούς το οποίο περιέχει επιφανειοδραστικό και αζίδιο του νατρίου (< 0,1%)

R1d: Συζυγές = αντιανθρώπινα αντισώματα (αίγας) IgG/αλκαλική φωσφατάση (βόεια) τα οποίαβρίσκονται σε μορφή αιωρήματος σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris και περιέχουνεπιφανειοδραστικό και αζίδιο του νατρίου (< 0,1%) και ProClin 300** (< 0,1%)


Απαραίτητοαλλά μη

παρεχόμενουλικό

1. Μάρτυρες Βαθμονόμησης Access HCV Ab PLUS Calibrators: Αποτελούνται από έναν ορό αρνητικό και έναν ορό θετικό στα αντισώματα anti-HCV.Κωδικός 34335

2. Υλικό ελέγχου ποιότητας: Access HCV Ab PLUS QCΚωδικός 34339 ή άλλοι οροί μάρτυρες που διατίθενται στο εμπόριο

3. Υπόστρωμα AccessΚωδικός 81906

4. Access, Access 2 :Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης: Access Wash Buffer II, Κωδικός Α16792

5. UniCel DxI:Ρυθμιστικό Διάλυμα Πλύσης: UniCel DxI Wash Buffer II, Κωδικός Α16793

6. Συστήματα:Access, Access 2, UniCel DxI.

Σχόλια σχετικάμε τη

διαδικασία

1. Ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας για αναλυτική περιγραφή των ακόλουθων: εγκατάσταση, θέση σε λειτουργία, αρχές λειτουργίας, χαρακτηριστικά επιδόσεων συστήματος, οδηγίες λειτουργίας, διαδικασίες βαθμονόμησης, όρια και προφυλάξεις κατά το χειρισμό, συντήρηση και αντιμετώπιση προβλημάτων.

2. Για κάθε δοκιμή προσδιορισμού χρησιμοποιούνται είκοσι πέντε (25) μL δείγματος (πέραν του νεκρού όγκου).3. Η δοκιμή διεξάγεται σε θερμοκρασία 37°C και διαρκεί 55 λεπτά.

Διαδικασία Ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας για πληροφορίες σχετικά με τηδιαχείριση δειγμάτων, την επαλήθευση δοκιμών, την απαίτηση διεξαγωγής δοκιμών και την εκ νέου οπτικήαπεικόνιση των αποτελεσμάτων.

Λεπτομέρειεςσχετικά με τηβαθμονόμηση

Για όλες τις δοκιμές απαιτείται καμπύλη βαθμονόμησης. Τα δεδομένα για τη βαθμονόμηση, τα οποία καθορίζουν τηντιμή κατωφλίου της δοκιμής, ισχύουν για διάστημα 28 ημερών. Ως εκ τούτου, η δοκιμή Access HCV Ab PLUSαπαιτεί την πραγματοποίηση, κάθε 28 ημέρες, βαθμονόμησης βάσει των μέσων βαθμονόμησης C0 και C1 του κιτHCV Ab PLUS. Ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας για πληροφορίεςσχετικά με τη θεωρία βαθμονόμησης, τη ρύθμιση των παραμέτρων των μέσων βαθμονόμησης, την καταχώρησηαιτήματος δοκιμής μέσων βαθμονόμησης και την εκ νέου οπτική απεικόνιση των δεδομένων βαθμονόμησης.

Έλεγχοςποιότητας

Συνιστάται η διεξαγωγή ελέγχων ποιότητας κάθε 24 ώρες τουλάχιστον, καθώς και κατά την εκκίνηση τουσυστήματος προ της επεξεργασίας των δειγμάτων των ασθενών. Χρησιμοποιήστε το συνιστώμενο προϊόν "AccessHCV Ab PLUS QC" ή συμπεριλάβετε ορούς ελέγχου ποιότητας διαφορετικής προέλευσης. Ακολουθήστε τις οδηγίεςτου κατασκευαστή σχετικά με την αποθήκευση και τυχόν ανασύσταση. Κάθε εργαστήριο πρέπει να ορίσει μία μέσητιμή, καθώς και διαστήματα εμπιστοσύνης για την παρακολούθηση των αναλυτικών επιδόσεων της δοκιμής. Τααποτελέσματα των ορών μαρτύρων που δεν εμπίπτουν εντός των τιμών του διαστήματος εμπιστοσύνης ενδέχεται ναυποδεικνύουν εσφαλμένα αποτελέσματα δοκιμής. Στην περίπτωση αυτή, εξετάστε όλα τα αποτελέσματα τωνδοκιμών, που διεξήχθησαν μετά από τον τελευταίο έγκυρο έλεγχο ποιότητας, για τη συγκεκριμένη παράμετρο.

Για βέλτιστα αποτελέσματα, η βαθμονόμηση του εξοπλισμού της δοκιμασίας και η ανάλυση του δείγματος τουασθενή θα πρέπει να πραγματοποιούνται στις ίδιες συνθήκες θερμοκρασίας. Εάν η θερμοκρασία περιβάλλοντοςεργαστηρίου διαφέρει κατά περισσότερο από ± 5°C από τη θερμοκρασία της βαθμονόμησης, επανεξετάστε τααποτελέσματα ποιοτικού ελέγχου και προχωρήστε σε νέα βαθμονόμηση, όπως απαιτείται.

Ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας για πληροφορίες σχετικά με εκ νέουοπτική απεικόνιση των αποτελεσμάτων των ορών μαρτύρων.

Αποτελέσματα Τα αποτελέσματα των δοκιμών στις οποίες υποβάλλονται οι ασθενείς υπολογίζονται αυτόματα μέσω του λογισμικούτου συστήματος, το οποίο χρησιμοποιεί την "τιμή κατωφλίου" [τιμή κατωφλίου = μέση τιμή των θετικών μαρτύρων(RLU) x 0,23] που ορίζεται από τη βαθμονόμηση. Ένα αποτέλεσμα (Σήμα/Τιμή Κατωφλίου = S/CO) ερμηνεύεταιως "αντιδρόν" ή "μη αντιδρόν" βάσει της σχέσης του με την "τιμή κατωφλίου" (σήμα μεγαλύτερο, ίσο ή μικρότεροαπό την "τιμή κατωφλίου"). τελικής τους ερμηνείας. Σε κάθε περίπτωση, τα αποτελέσματα που είναι μικρότερα απότην "τιμή κατωφλίου" κατά 10% θα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Ως εκ τούτου, συνιστάται η εκ νέου ειςδιπλούν εξέταση των αντίστοιχων δειγμάτων. Η γκρίζα αυτή ζώνη (από 0,9 έως λιγότερο από 1,0) θα πρέπει νααποθηκεύεται στο λογισμικό του συστήματος από το χρήστη (για αναλυτικές οδηγίες σχετικά με τη γκρίζα ζώνηενός ελέγχου ποιότητας, ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας). Κατ' αυτόν


τον τρόπο, η αυτόματη εμφάνιση ενός διακριτικού σημαδιού επιτρέπει την ταχεία πρόσβαση σε ένα αποτέλεσμα πουπεριλαμβάνεται στη γκρίζα ζώνη. Τα αποτελέσματα των δοκιμών στις οποίες υποβάλλονται οι ασθενείς μπορούν νααπεικονιστούν εκ νέου μέσω της οθόνης "Sample Results" (Αποτελέσματα Δείγματος). Ανατρέξτε στα ανάλογαεγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας για αναλυτικές οδηγίες σχετικά με την εκ νέου οπτικήαπεικόνιση των αποτελεσμάτων.

Δείγματα με λόγο (S/CO) μικρότερο από 0,9 θεωρούνται μη αντιδρώντα με τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS.Δείγματα με λόγο S/CO) ίσο ή μεγαλύτερο από 1 θεωρούνται αρχικά αντιδρώντα με τη δοκιμή Access HCV AbPLUS και θα πρέπει να υποβάλλονται εκ νέου εις διπλούν εξέταση προ της τελικής τους ερμηνείας.

Όλα τα δείγματα τα οποία θεωρούνται αρχικά αντιδρώντα ή παρουσιάζουν αποτελέσματα στη γκρίζα ζώνη θαπρέπει να υποβάλλονται εκ νέου εις διπλούν εξέταση χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS:

• Εάν τα αποτελέσματα των επαναλαμβανόμενων εξετάσεων είναι <1,0 S/CO, το δείγμα πρέπει να θεωρηθεί μη αντιδρόν (αρνητικό) σύμφωνα με τη δοκιμή HCV Ab PLUS.

• Εάν ένα εκ των 2 αποτελεσμάτων είναι 1,0 S/CO, το αρχικό αποτέλεσμα θεωρείται ότι δεν επαναλαμβάνεται και το δείγμα δηλώνεται "αντιδρόν" σύμφωνα με τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS.

Ωστόσο, συνιστάται η διεξαγωγή νέας εξέτασης επαναλαμβανόμενου αντιδρώντος δείγματος μέσω μίας δεύτερηςμεθόδου δοκιμής EIA και μέσω μίας μεθόδου επιβεβαίωσης για τη σαφή στοιχειοθέτηση της θετικότητας τουδείγματος.

Όριαδιαδικασίας

Η δοκιμή Access HCV Ab PLUS περιορίζεται αυστηρά στην ανίχνευση των αντισωμάτων anti-HCV στον ορό και τοπλάσμα του ανθρώπου. Τυχόν θετικό αποτέλεσμα που ελήφθη με τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS πρέπει ναυποβάλλεται σε αντιπαραβολή με τα κλινικά στοιχεία και να επιβεβαιώνεται με τη βοήθεια άλλων διαγνωστικώνδοκιμών, συμπεριλαμβανομένης μίας μεθόδου επιβεβαίωσης (ανοσοαποτύπωση Blot) πριν θεωρηθεί θετικό γιαμόλυνση.

Δεδομένου του ποικίλου χαρακτήρα των ανοσολογικών αντιδράσεων των ασθενών που έχουν μολυνθεί με τον ιό τηςΗπατίτιδας C (ειδικά κατά τη διάρκεια ορομετατροπών), ενδέχεται να παρατηρηθούν ορισμένες διαφορές στοντρόπο ανίχνευσης μεταξύ των δοκιμών ανάλογα με το είδος των αντιγονικών πρωτεϊνών που χρησιμοποιούνται. Ένααρνητικό αποτέλεσμα με δοκιμή ελέγχου δεν αποκλείει το ενδεχόμενο έκθεσης ή μόλυνσης από τον Ιό τηςΗπατίτιδας C.

Όλες οι τεχνικές τύπου ELISA ενδέχεται να παράγουν ψευδείς θετικές αντιδράσεις. Συνιστάται ο έλεγχος τηςειδικότητας της αντίδρασης για κάθε επαναλαμβανόμενα θετικό δείγμα που εντοπίζεται με τη χρήση της κατάλληληςμεθόδου για να αποδειχθεί η παρουσία αντισωμάτων anti-HCV.

Ειδικά χαρα-κτηριστικάεπιδόσεων

ΕυαισθησίαΗ ευαισθησία της δοκιμής αξιολογήθηκε επί 511 τεκμηριωμένων δειγμάτων εκ των οποίων:

101 θετικοί οροί PCR προερχόμενοι από παρακολουθούμενους ασθενείς προσβεβλημένους από χρόνια ηπατίτιδα C,145 θετικά δείγματα ασθενών προσβεβλημένων από τον HCV, 77 δείγματα BBI θετικά σε HCV RNA PCR, και 122δείγματα γονοτύπων θετικά στον HCV.

Συμπεριλήφθηκε, επίσης, το πάνελ SFTS 97 αποτελούμενο από 36 θετικά δείγματα, εκ των οποίων 26 γονότυποι καιHCV RNA PCR θετικά δείγματα. 10 θετικά δείγματα (PCR αρνητικό) με 2 τουλάχιστον αντισώματα HCVαντιδρώντα στα αρνητικά PCR.

Ομοίως, συμπεριλήφθηκαν τα 30 δείγματα που βρέθηκαν θετικά κατά τη διεξαγωγή των προοπτικών μελετών.

Όλα αυτά τα δείγματα είναι αντιπροσωπευτικά των διάφορων προφίλ ορροτύπων (μεμονωμένη ενεργότητα, 2 ή 3ενεργότητες), των συχνότερα απαντώμενων γονοτύπων 1 έως 4, καθώς και των σπανιότερων γονοτύπων 4c/d και 5.

Τα δείγματα αυτά βρέθηκαν στο σύνολό της θετικά με τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS.

Ερμηνεία αποτελεσμάτων της δοκιμής HCV Ab PLUS

ΑποτέλεσμαΛόγος: Σήμα/Τιμή Κατωφλίου Ερμηνεία Συμπληρωματικές δοκιμές

S/CO < 0.9 Μη αντιδρόνS/CO 1 Αντιδρόν Εκ νέου εξέταση εις διπλούν

S/CO: 0.9 - 1.0 Γκρίζα ζώνη Εκ νέου εξέταση εις διπλούνΕκ νέου εξέταση: S/CO< 1 Μη αντιδρόν

Εκ νέου εξέταση: εάν ένα εκ των 2 αποτελεσμάτων είναι 1 Αντιδρόν Μέθοδος επιβεβαίωσης


Δεν παρατηρήθηκε καμία διαφορά κατά την ανίχνευση των υπό δοκιμή γονοτύπων.

Η ευαισθησία της δοκιμής Access HCV Ab PLUS αξιολογήθηκε επί 74 πάνελ ορομετατροπής.

Μεταξύ των 29 πάνελ ορομετατροπής που διατίθενται στο εμπόριο και τα οποία υποβλήθηκαν σε δοκιμή, το AccessHCV Ab PLUS ανιχνεύει τα αντισώματα anti-HCV με πρωιμότητα ισοδύναμη με αυτήν της δοκιμής RIBA 3.0 ή μεκαθυστέρηση μερικών ημερών.

Μεταξύ των 45 πάνελ που υποβλήθηκαν σε δοκιμή από τους εμπειρογνώμονες, αποδείχθηκε ότι το Access HCV AbPLUS παρέχει τα ίδια θετικά αποτελέσματα επί των ίδιων δειγμάτων τα οποία βρέθηκαν θετικά με τις καλύτερεςδιαθέσιμες δοκιμές. Μόνο δύο ορομετατροπές ανιχνεύθηκαν με 2 ημέρες καθυστέρηση και, αντιστρόφως, 2ορομετατροπές ανιχνεύθηκαν πρωιμότερα με το Access HCV Ab PLUS.

25 epιpλέον fρέsκa deίγμata, ως pρος tον HCV (eνtός μιaς ημέρaς μetά tην sυλογή tου aίμatος) aνaλύθηκaν κaιßρέθηκaν θetικά

ΕιδικότηταΗ ακρίβεια της δοκιμής εκτιμήθηκε στο:

• 99,83 % (95% διαστήματος εμπιστοσύνης: 99,7-99,9) επί πληθυσμού 5995 αιμοδοτών• επί πληθυσμού 472 νοσηλευόμενων ασθενών, 469 βρέθηκαν αρνητικά και 3 δείγματα μη προσδιορισμένα με τη

δοκιμή Chiron RIBA HCV 3.0 βρέθηκαν με το Αccess HCV Ab PLUS ελαφρώς θετικά. Σύμφωνα με την ανάλυση 108 δειγμάτων ασθενών προσβεβλημένων από άλλες ιικές μολύνσεις οι οποίες δενσχετίζονται με τον ιό της Ηπατίτιδας C (ηπατίτιδα Α ή Β, έρπης, EBV, ρευματοειδής παράγοντας...) δενπαρατηρήθηκε καμία μη ειδική αντίδραση.

ΑκρίβειαΗ ακρίβεια του κιτ Αccess HCV Ab PLUS προσδιορίστηκε μέσω ανάλυσης αρνητικών και θετικών δειγμάτων. Ηεπαναληψιμότητα αξιολογήθηκε μέσω της ανάλυσης 4 δειγμάτων που υποβλήθηκαν 30 φορές στην ίδια δοκιμή, ενώη αναπαραγωγιμότητα αξιολογήθηκε μέσω της ανάλυσης 4 δειγμάτων που υποβλήθηκαν εις τριπλούν σε δοκιμή επί5 διαφορετικές ημέρες, με δύο ανεξάρτητες δοκιμές ημερησίως. Τα αποτελέσματα κατηγοριοποιούνται στουςακόλουθους πίνακες:

Επαναληψιμότητα (στο πλαίσιο της ίδιας δοκιμής)

Οι συντελεστές είναι μικρότεροι από 5%.

Αναπαραγωγιμότητα (στο πλαίσιο σειράς δοκιμών)

Οι συντελεστές είναι μικρότεροι από 10%.

Τα Access, UniCel και DxI είναι εμπορικά σήματα της Beckman Coulter, Inc.

* Το Lumi-Phos είναι σήμα κατατεθέν της Lumigen, μια θυγατρική της Beckman Coulter, Inc.

** Το ProClin είναι σήμα κατατεθέν της Rohm και Haas Company ή των θυγατρικών της.

n = 30 ΑΡΝ 1 ΑΡΝ 2 ΘΕΤ 1 ΘΕΤ 2

Μέση τιμή (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

Σ.Μ. % 4.05 3.19 2.93 2.45

n = 30 ΑΡΝ 1 ΑΡΝ 2 ΘΕΤ 1 ΘΕΤ 2

Μέση τιμή λόγων (Σήμα/Τιμή κατωφλίου)

0.07 1.34 3.18 4.42

S.D. 0.01 0.09 0.21 0.39Σ.Μ. 9.9 6.89 6.64 8.78


HCV Ab PLUS CALIBRATORSΑΝΑΦ. 34335


Τα μέσα βαθμονόμησης Access HCV Ab PLUS χρησιμοποιούνται με τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS για τηνανίχνευση των αντισωμάτων κατά του ιού της ηπατίτιδας C στον ανθρώπινο ορό ή πλάσμα, μέσω των ΣυστημάτωνΑνοσοπροσδιορισμού Access (Access, Access 2, UniCel®DxI®).



Κάθε παρτίδα τελικού προϊόντος υποβάλλεται σε έλεγχο ποιότητας και διατίθεται στο εμπόριο μόνον όταν

συμμορφώνεται με τα κριτήρια αποδοχής.

Η τεκμηρίωση σχετικά με την παραγωγή και τον έλεγχο της κάθε παρτίδας τηρείται εντός της εταιρείας.


Τα μέσα βαθμονόμησης Access HCV Ab PLUS χρησιμοποιούνται για τη χάραξη της καμπύλης βαθμονόμησης(προσδιορισμός τιμής κατωφλίου) ενόψει της δοκιμής Access HCV Ab PLUS. Συγκρίνοντας την ένταση του φωτόςπου παράγεται από ένα δείγμα, με την τιμή κατωφλίου, διαπιστώνεται η παρουσία ή η απουσία, στο δείγμα,αντισωμάτων κατά του ιού της ηπατίτιδας C.


προϊόν

Access HCV Ab PLUS CalibratorsΚωδικός 34335 CO-C1, 1 mL/φιαλίδιο• "Παρέχεται έτοιμο προς χρήση.• "Φυλάσσετε σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 10°C.• "Ανακινήστε ελαφρά πριν από τη χρήση ώστε να ομοιογενοποιήσετε το περιεχόμενο. Αποφεύγετε τη δημιουργία

αφρού.• "Μετά από το άνοιγμα τους, και εφόσον διατηρούνται σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 10°C, τα μέσα

βαθμονόμησης παραμένουν σταθερά έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες των φιαλιδίων.• "Οι τιμές του ποιοτικού ελέγχου οι οποίες δεν περιλαμβάνονται στο εύρος τιμών του διαστήματος εμπιστοσύνης

αποτελούν ένδειξη πιθανής αλλοίωσης του προϊόντος.r

C0: Ανθρώπινος ορός αρνητικός σε αντισώματα anti-HCV, αζίδιο (< 0,1% NaN3)

C1: Ανθρώπινος ορός θετικός σε αντισώματα anti-HCV, αζίδιο (< 0,1% NaN3), οοποίος κατέστη ανενεργός μέσω φωτοχημικής τεχνικής

Χάρτης "γραμμωτοί κώδικες":

1


Προειδο-ποιήσεις καιΠροφυλάξεις

• "Για διαγνωστική χρήση in vitro• "Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης που χρησιμοποιείται στην παρασκευή του αρνητικού μάρτυρα υποβλήθηκε

σε δοκιμή και βρέθηκε μη αντιδρόν στο επιφανειακό αντιγόνο του ιού της ηπατίτιδας Β (Ag HBs), στα αντισώματα κατά της ηπατίτιδας C (αντι- HCV) και στα αντισώματα κατά του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (αντι-HIV-1 και αντι-HIV-2). Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης που χρησιμοποιείται στην παρασκευή του θετικού μέσου βαθμονόμησης, υποβλήθηκε σε δοκιμή και βρέθηκε μη αντιδρόν στο επιφανειακό αντιγόνο του ιού της ηπατίτιδας Β (Ag HBs) και στα αντισώματα κατά του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (αντι-HIV-1 και αντι-HIV-2). Δεδομένου ότι καμία γνωστή μέθοδος δοκιμής δεν μπορεί να εγγυηθεί με απόλυτη βεβαιότητα την απουσία μολυσματικών παραγόντων, τα εν λόγω αντιδραστήρια καθώς και τα δείγματα των ασθενών πρέπει να θεωρούνται ως δυνητικά λοιμογόνα και κατά τη χρήση τους να λαμβάνονται οι δέουσες προφυλάξεις.

• "Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με τις μολυβδουχες ή χάλκινες σωληνώσεις δημιουργώντας μεταλλικά αζίδια τα οποία είναι άκρως εκρηκτικά. Κατά την απόρριψη των υγρών, ξεπλύνετε με μεγάλη ποσότητα νερού προς αποφυγή της δημιουργίας μεταλλικών αζιδίων.12

Διαδικασία Για τις διαδικασίες βαθμονόμησης, ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδια συστήματος και/ή στο σύστημα Βοήθειας.

Λεπτομέρειεςσχετικά με τηβαθμονόμηση

Τα μέσα βαθμονόμησης HCV Ab PLUS Calibrators παρέχονται σε δύο μορφές: αρνητικό μέσο βαθμονόμησης C0και θετικό μέσο βαθμονόμησης C1, οι οποίοι παρασκευάζονται με βάση δεξαμενές ανθρώπινων ορών θετικών καιαρνητικών σε αντισώματα anti-HCV, οι οποίοι κατέστησαν ανενεργοί μέσω φωτοχημικής τεχνικής.

Για τη δοκιμή HCV Ab PLUS απαιτείται καμπύλη βαθμονόμησης (προσδιορισμός της τιμής κατωφλίου). Ηκαμπύλη βαθμονόμησης μίας μόνο παρτίδας αντιδραστηρίων, αναγνωρίσιμης μέσω του γραμμωτού της κώδικα,είναι "ενεργή" επί της Αυτόματης Συσκευής Access για διάστημα 28 ημερών. Μετά την παρέλευση 28 ημερών ή σεπερίπτωση που στο αυτόματο φορτώνεται διαφορετική παρτίδα αντιδραστηρίων, η καμπύλη καθίσταται αυτομάτωςάκυρη, κάθε 28 ημέρες να υπάρχει πάντα μια πρόσφατη βαθμονόμηση.

Για τη βαθμονόμηση της δοκιμής Access HCV Ab PLUS απαιτούνται περίπου 225 μL (5 σταγόνες)/ποτηράκιδείγματος (Access / Access 2) ή 305 μL (7 σταγόνες)/ποτηράκι δείγματος (UniCelDxI) για κάθε έναν εκ των 2μέσων βαθμονόμησης (τιμή κατωφλίου = RLU C1 x 0,23). Η προγραμματιζόμενη διαδικασία βαθμονόμησης για τηδοκιμή Access HCV Ab PLUS θα ελέγξει τα C0 και C1 τρεις φορές.



HCV Ab PLUS QCΑΝΑΦ. 34339


Το Access HCV Ab PLUS QC είναι ένας ορός ελέγχου ποιότητας ο οποίος επιτρέπει στα εργαστήρια ναπαρακολουθούν την αναλυτική ακρίβεια της δοκιμής Access HCV Ab PLUS.



Κάθε παρτίδα τελικού προϊόντος υποβάλλεται σε έλεγχο ποιότητας και διατίθεται στο εμπόριο μόνον όταν

συμμορφώνεται με τα κριτήρια αποδοχής.

Η τεκμηρίωση σχετικά με την παραγωγή και τον έλεγχο της κάθε παρτίδας τηρείται εντός της εταιρείας.


Το Access HCV Ab PLUS QC χρησιμοποιείται ως ορός ελέγχου της ποιότητας για την παρακολούθηση, στοεργαστήριο, της αναλυτικής ακρίβειας της δοκιμής HCV Ab PLUS, ή άλλων ορολογικών μεθόδων που αποσκοπούνστον προσδιορισμό αντισωμάτων anti-HCV. Η εφαρμογή ενός ελέγχου ποιότητας ενδείκνυται για την ανίχνευση καιτη διόρθωση σφαλμάτων διαδικασίας, εγγενών του χειρισμού του κιτ, της ποιότητάς του ή των χρησιμοποιούμενωνοργάνων, και αποτελεί αναπόσπαστο μέρος των ορθών εργαστηριακών πρακτικών.15, 17, 16, 19, 21, 22. Παρέχεται έναςαρνητικός και ένας ελαφρώς θετικός μάρτυρας, ώστε να διευκολύνεται η παρακολούθηση των επιδόσεων τηςδοκιμής εντός του εύρους της πλέον σημαντικής περιοχής του αναλυτικού φάσματος της.


προϊόν

Access HCV Ab PLUS QCΚωδικός 34339: 2,5 mL/φιαλίδιο• "Παρέχεται έτοιμο προς χρήση. • "Ανακινήστε ελαφρά πριν από τη χρήση ώστε να ομοιογενοποιήσετε το περιεχόμενο. Αποφεύγετε τη δημιουργία

αφρού. • "Το υλικό για τον έλεγχο της ποιότητας, και εφόσον διατηρείται σε θερμοκρασία μεταξύ 2 έως 10°C, παραμένει

σταθερό έως την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ετικέτες των φιαλιδίων. • "Μετά το άνοιγμα τους, τα φιαλίδια παραμένουν σταθερά επί 30 ημέρες, υπό την προϋπόθεση ότι διατηρούνται

δεόντως και υφίστανται κατάλληλο χειρισμό.

QC 1: Ανθρώπινος ορός και αζίδιο (< 0,1% NaN3). Αρνητικός (μη αντιδρών) στα αντισώματαanti-HCV.

QC 2: Ανθρώπινος ορός και αζίδιο (< 0,1% NaN3). Θετικός (αντιδρών) στα αντισώματαanti-HCV, ο οποίος κατέστη ανενεργός μέσω φωτοχημικής διαδικασίας.

Χάρτης "Ελέγχου Ποιότητας":

1


Προ-ειδοποιήσεις

καιΠροφυλάξεις

• "Για διαγνωστική χρήση in vitro• "Το υλικό ανθρώπινης προέλευσης που χρησιμοποιείται στην παρασκευή του αρνητικού μάρτυρα ποιότητας

υποβλήθηκε σε δοκιμή και βρέθηκε μη αντιδρών στο επιφανειακό αντιγόνο του ιού της ηπατίτιδας Β (Ag HBs), στα αντισώματα κατά της ηπατίτιδας C (αντι- HCV) και στα αντισώματα κατά του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (αντι-HIV-1 και αντι-HIV-2). Το υλικό ανθρώπινηςπροέλευσης που χρησιμοποιείται στην παρασκευή του θετικού μάρτυρα ποιότητας, υποβλήθηκε σε δοκιμή και βρέθηκε μη αντιδρόν στο επιφανειακό αντιγόνο του ιού της ηπατίτιδας Β (Ag HBs) και στα αντισώματα κατά του ιού της ανθρώπινης ανοσο- ανεπάρκειας (αντι-HIV-1 και αντι-HIV-2). Δεδομένου ότι καμία γνωστή μέθοδος δοκιμής δεν μπορεί να εγγυηθεί με απόλυτη βεβαιότητα την απουσία μολυσματικών παραγόντων, τα εν λόγω αντιδραστήρια καθώς και τα δείγματα των ασθενών πρέπει να θεωρούνται ως δυνητικά λοιμογόνα και κατά τη χρήση τους να λαμβάνονται οι δέουσες προφυλάξεις.

• Το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με τις μολυβδούχες ή χάλκινες σωληνώσεις δημιουργώντας μεταλλικά αζίδια τα οποία είναι άκρως εκρηκτικά. Κατά την απόρριψη των υγρών, ξεπλύνετε με μεγάλη ποσότητα νερού προς αποφυγή της δημιουργίας μεταλλικών αζιδίων.12

Διαδικασία Οι μάρτυρες ποιότητας Access HCV Ab PLUS QC πρέπει να υφίστανται χειρισμό κατά παρόμοιο τρόπο με αυτόνγια τα δείγματα ασθενών και να δοκιμάζονται σύμφωνα με τις οδηγίες οι οποίες περιέχονται στο κιτ που συνοδεύειτο όργανο. Σημείωση: Όσον αφορά τα Συστήματα Ανοσοπροσδιορισμού Access, ανατρέξτε στα ανάλογα εγχειρίδιασυστήματος και στο σύστημα Βοήθειας για πληροφορίες σχετικά με τη ρύθμιση των παραμέτρων του αιτήματοςδοκιμής σε δείγμα των μαρτύρων ποιότητας QC και την επεξεργασία των δεδομένων ελέγχου. Για να εφαρμόσετεστο σύστημα Ανοσοπροσδιορισμού Access τον έλεγχο ποιότητας με το Access HCV Ab PLUS QC, απαιτείταιελάχιστος όγκος 175 μL (4 σταγόνες) / ποτηράκι δείγματος (Access / Access 2) ;h ή 255 μL (6 σταγόνες) / ποτηράκιδείγματος (UniCel DxI) για κάθε έναν εκ των δύο μαρτύρων (για προσδιορισμό που διεξάγεται άπαξ).

Όριαδιαδικασίας

Εάν στο φιαλίδιο διαπιστώνετε μικροβιακή μόλυνση ή υπερβολική κροκκίδωση, μην χρησιμοποιείτε το φιαλίδιο.

Αναμενόμενεςτιμές

Οι αναμενόμενες τιμές του μάρτυρα ποιότητας για τη δοκιμή Access HCV Ab PLUS απεικονίζονται, για κάθε παρτίδα,στο χάρτη Ποιοτικού Ελέγχου (QC) που περιέχεται στη συσκευασία του HCV Ab PLUS QC. Οι τιμές που προκύπτουνστα εργαστήρια τα οποία τον χρησιμοποιούν, πρέπει να εμπεριέχονται στο υποδεικνυόμενο διάστημα εμπιστοσύνης.Ωστόσο, κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίζει τη δική του μέση τιμή και διαστήματα εμπιστοσύνης, αφού διεξαχθείεπαρκής αριθμός μετρήσεων.18

Για τις άλλες δοκιμές (διαφορετικές από την Access), το ποσοστό ειδικής ενεργότητας μπορεί να ποικίλλει μεταξύκατασκευαστών αντιδραστηρίων, διαδικασιών, παρτίδων ή, ακόμη, εργαστηρίων και, συνεπώς, το κάθε εργαστήριο θαπρέπει να καθορίζει το δικό του ποσοστό ειδικής ενεργότητας και τα δικά του διαστήματα εμπιστοσύνης. 18, 19, 20, 21 Τοδιάστημα εμπιστοσύνης θα μπορούσε να ορισθεί βάσει όλων των τιμών μεταξύ ± 2 SD σε σχέση με τη μέση τιμή των20 βαθμών, που αντιστοιχούν σε 20 διαφορετικές μετρήσεις οι οποίες διεξήχθησαν σε περίοδο 30 ημερών.22

Η BIO-RAD ΕΓΓΥΑΤΑΙ ΤΑ ΣΥΓΚΕΚΡΙΜΕΝΑ ΠΡΟΪΟΝΤΑ ΓΙΑ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΠΟΥ ΠΕΡΙΓΡΑΦΕΤΑΙ ΣΤΗΝΕΤΙΚΕΤΑ ΚΑΙ ΣΤΟ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΟ ΕΝΗΜΕΡΩΤΙΚΟ ΕΝΤΥΠΟ. Η BIORAD ΑΠΑΛΛΑΣΣΕΤΑΙΟΙΑΣΔΗΠΟΤΕ ΕΥΘΥΝΗΣ ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΠΩΛΗΣΗΣ ΓΙΑ ΑΛΛΟ ΣΚΟΠΟ Ή ΧΡΗΣΗΣ ΜΕ ΑΛΛΟΝ ΤΡΟΠΟ.Η BIORAD, ΣΕ ΚΑΜΙΑ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΔΕΝ ΦΕΡΕΙ ΕΥΘΥΝΗ ΓΙΑ ΖΗΜΙΕΣ ΠΟΥ ΠΡΟΚΥΠΤΟΥΝ ΠΕΡΑΝ ΤΗΣΠΑΡΟΥΣΗΣ ΕΠΙΣΗΜΗΣ ΕΓΓΥΗΣΗΣ.


Βιβλιογραφία1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis



hepatitis. Science 1989, 244: 362-364.4 Tibbs C.J. Methods of transmission of hepatitis C Journal of viral Hepatitis, 1995, 2: 113-119.5 Purcell R. The Hepatitis C virus: overview Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 11-14.6 Seeff L.B. Natural History of Hepatitis C Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 21-28.7 Yoshikura H., Hijkata N., Nakajima N. and Shimizy Y.K. Replication of Hepatitis C virus Journal of of viral Hepatitis, 1996, 3:

3-10.


8 Hoofnaggle J.H., Hepatitis C virus: the clinical spectrum of disease Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 15-20.9 AlterR HJ., Purcell RH., Shih JW., et al. Detection of antibodies to hepatitis C virus in prospectively followed transfusion










11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A33592CPage 1


Intended Use The Access HCV Ab PLUS assay is an immunoenzymatic method for the detection of antibodies to thehepatitis C virus in human serum or plasma, using the Access Immunoassay Systems (Access, Access 2,UniCel® Dxl®).

For In Vitro Diagnostic Use

All manufactured and commercialized reagents are under complete quality system starting fromreception of raw material to the final commercialization of the product.

Each lot is submitted to a quality control and is only released on the market when conforming to theacceptance criteria.

The records relating to production and control of each single lot are kept within our company.

Summary andExplanation

Hepatitis C virus (HCV) is considered to be the major cause of post transfusional non-A - non-B hepatitis(NANBH), as well as that transmitted by non-transfusional parenteral routes (toxicomaniacs,hemodialysis patients, transplant patients).1,2,3,4,5,6,7 Fifty to sixty percent of hepatitis C infected patientsare likely to develop chronic hepatitis, and risk the development of cirrhosis or hepatocellularcarcinoma.8,9

The practice of compulsory screening of every blood donation (for anti-HCV antibodies) hassignificantly decreased the risk of transmission by infected blood.10,11

The Access HCV Ab PLUS assay is intended for the detection of anti-HCV antibodies in human serum orplasma, and thus contributes to the prevention of parenteral contamination. It is also useful for thediagnosis of HCV infection. In both cases, results should be interpreted in conjunction with clinical dataand other serological markers.

Principles ofthe Procedure

The Access HCV Ab PLUS assay is an indirect immunoenzymatic assay. The sample (serum, plasma orcontrol) is added to a reaction vessel with paramagnetic particles coated with a peptide mimickingimmunodominant epitopes of the capsid region and recombinant proteins (NS3 and NS4). Duringincubation both IgG and IgM present in the sample are captured by the solid phase. After incubation, thesolid phase is collected by a magnetic field and unbound materials are removed by a series of washes. Inthe second step, conjugate (anti-human IgG goat antibody, labeled with alkaline phosphatase) is added tothe reaction vessel. Following incubation, another series of washes eliminate the excess conjugate. Achemiluminescent substrate, Lumi-Phos* 530, is added and photons generated by the enzymatic reactionare measured with a luminometer. The emitted signal intensity is proportional to the amount of enzymeconjugate present, and thus to the titer of anti-HCV antibodies present in the test sample. By comparingthe cut-off value, established by the assay calibration, to the signal present in the sample, the presence orabsence of anti-HCV antibodies is determined.


ProductInformation

Access HCV Ab PLUS Reagent PackCat. No. 34330: 100 determinations, 2 packs, 50 tests/pack• Provided ready to use.• Store upright and refrigerate at 2 to 10°C before use on the instrument.• Under these conditions, a reagent pack is stable until the expiration date stated on the label.• Upon initial loading of the reagent pack, mix contents by gently inverting pack several times until

particles are completely resuspended. • After initial use, keep it loaded on the instrument or refrigerated (upright), and use it within 28 days. • Signs of possible deterioration are a broken elastomeric layer on the pack or quality control values out

of range.

Warnings andPrecautions

• Upon initial loading in the carousel, shake the pack until particles are completely resuspended.• For in vitro diagnostic use.• Sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal azides. Upon

disposal, flush with a large volume of water to prevent azide build-up.12

• ProClin** 300 is a potential skin sensitizer. Avoid spilling or splashing this reagent on skin or clothing. In case of contact with the reagent, thoroughly flush with water.

SpecimenCollection and

Preparation

1. Serum or plasma (heparin, EDTA or citrate) are the recommended samples.2. Apply the following standards for handling and processing blood samples:13, 14

• Collect all blood samples observing routine precautions for venipuncture.• Allow samples to clot adequately before centrifugation, 1 hour minimum.• Keep tubes stoppered at all times.• Centrifuge samples, 15 minutes at 1,500 g minimum.

3. Apply the following standards for storing blood samples:13, 14

• Within two hours after centrifugation, transfer at least 500 μL of cell-free sample to a tightly stoppered storage tube.

• Store sample at room temperature for no longer than 8 hours.• If the assay will not be completed within 8 hours, refrigerate at +2-10°C.• If the assay will not be completed within 48 hours, or for shipment of samples, freeze at -20°C.13

• Thaw samples once only, rapid thawing by heating a few minutes in a 40°C water bath• After thawing, centrifuge the sample 15 minutes at 3,000 g and transfer to an assay cup, to

eliminate suspended fibrin particles or aggregates that may give false positive results.4. Samples containing up to 200 mg/L bilirubin, up to 90 g/L albumin, lipemic samples containing the

equivalent of 36 g/L triolein (triglyceride), and hemolyzed samples containing up to 5g/L hemoglobin do not affect the results.

MaterialsProvided

R1 Access HCV Ab PLUS Reagent Packs

R1a: Paramagnetic particles coated with recombinant proteins (NS3/NS4) andpeptide (Capside) suspended in TRIS buffer, with < 0.1% sodium azide

R1b: Sample diluent with < 0.1% sodium azide

R1c: Conjugate diluent, with surfactant, < 0.1% sodium azide

R1d: Goat anti-human IgG alkaline phosphatase conjugate in TRIS Buffer, withsurfactant, < 0.1% sodium azide, and < 0.1% ProClin ** 300


MaterialsRequired ButNot Provided

1. Access HCV Ab PLUS Calibrators for calibration: Negative serum and positive serum for anti-HCV antibodyCat. N° 34335

2. Quality control materials: Access HCV Ab PLUS QCCat. N° 34339 - or other commercial control sera

3. Access SubstrateCat. N° 81906

4. Access, Access 2 :Wash buffer: Access Wash Buffer II, Cat. No. A16792

5. UniCel Dxl :Wash Buffer: UniCel Dxl Wash Buffer II, Cat. No. A16793

6. Systems:Access, Access 2, UniCel Dxl.

ProceduralComments

1. Refer to the appropriate system manuals and/or Help system for a specific description of installation, start-up, principles of operation, system performance characteristics, operating instructions, calibration procedures, operational limitations and precautions, hazards, maintenance, and troubleshooting.

2. Twenty five (25) μL of sample is used for each determination (in addition to dead volume).3. The assay incubates at 37°C and takes 55 minutes

Procedure Refer to the appropriate system manuals and/or Help system for information on managing samples,configuring tests, requesting tests and reviewing results.

CalibrationDetails

An active calibration curve is required for all tests. The calibration data to determine the Cut-Off are validfor 28 days. Consequently, for the Access HCV Ab PLUS assay, calibration is required every 28 daysusing C0 and C1 from the Access HCV Ab PLUS Calibrators kit. Refer to the appropriate systemmanuals and/or Help system for information on calibration theory, configuring calibrators, calibrator testrequest entry, and reviewing calibration data.

QualityControl

Quality control is recommended, at least, every 24 hours and upon the system start-up prior to runningpatient samples. Use the suggested product Access HCV Ab PLUS QC or include control sera from otherorigins. Follow manufacturer's instructions for reconstitution and storage. Each laboratory shouldestablish a mean value and acceptable range to follow the analytical performance of the test. Control seraresults that do not fall within the acceptable range may indicate invalid test results. In that case, examineall test results generated since the last acceptable quality control test point for this analysis.

For optimal results, assay calibration and patient sample testing should be conducted under similartemperature conditions. If ambient laboratory temperature varies more than ± 5°C from the temperatureof calibration, review quality control results and recalibrate as necessary. Refer to the appropriate system manuals and/or Help system for information about reviewing control seraresults.

Results Patient test results are calculated automatically by the system software using the cut-off value [cut-off =mean of positive calibrators (RLU) x 0.23] determined by active calibration. Results (Signal/Cut-Off=S/CO) are reported to be "reactive" or "non-reactive" as a function of their relationship with the "cut-off"(signal greater than or signal equal to or less than the cut-off value, respectively).However, results ~10%lower than the "cut-off value" should be prudently interpreted and retested in duplicate. Thisrecommended gray zone (from 0.9 to less than 1.0) should be stored by the user in the system software(refer to the appropriate system manuals and/or Help system for complete instructions on gray zone for aqualitative assay). In this way a distinctive mark automatically will be reported, permitting rapididentification of a result situated in the gray zone. Patient test results can be reviewed using the Sample


Results screen. Refer to the appropriate system manuals and/or Help system for complete instructions onreviewing results.

Any sample with ratio (S/CO) lower than 0.9 is considered to be non-reactive with the Access HCV AbPLUS test. Samples with ratio (S/CO) equal or greater than 1 are initially considered to be reactive withthe Access HCV Ab PLUS test and such samples should be retested in duplicate before finalinterpretation.

All samples that are initially reactive or with results in the gray zone should be retested in duplicate usingthe Access HCV Ab PLUS:

• If the results of the duplicates are <1.0 S/CO, the sample must be considered non-reactive (negative) for HCV Ab PLUS assay.

• If one of the 2 results is ≥1.0 S/CO, the initial result is non repeatable and the sample is declared as "reactive" for the Access HCV Ab PLUS test.

However, it is advised that any repeatable reactive sample be retested by a second line EIA assay and bya confirmatory method to ensure its positivity.

Limitations ofthe Procedure

The Access HCV Ab PLUS assay is strictly for the detection of anti-HCV antibodies in human serum orplasma. A positive result with the Access HCV Ab PLUS assay should be considered together withclinical data and confirmed by other diagnostic tests, including a confirmatory method (immunoblot)before reporting as positive for infection.

Given the diversity of the immunological reactions of infected patients by the Hepatitis C Virus(especially during seroconversions), some differences of detection between tests can be observeddepending on the kind of antigenic proteins used. A negative result with a screening test does not excludethe possibility of exposition or infection by Hepatitis C Virus.

All ELISA techniques are liable to produce false positive reactions. It is recommended to verify thespecificity of the reaction for any sample found to be a repeatable positive, using a suitable method toprove the presence of anti-HCV antibodies.

SpecificPerformance

Characteristics

SensitivitySensitivity of Access HCV Ab PLUS was evaluated by testing 511 well documented positive samplesincluding:

101 PCR positive serums collected from HCV chronic patients follow-up, 145 positive samples fromHCV infected patients, 77 HCV RNA PCR positive plasma sourced from BBI, 122 genotyped HCVpositive samples.

SFTS 97 panel compound of 36 positive samples 26 genotyped and HCV RNA PCR positive samples; 10positive (PCR negative) samples with at least 2 HCV Ab reactivities.

Also were included the 30 positive samples found in the prospective specificity studies.

All these samples are representative of the different serotype profiles (isolated reactivity, 2 or 3reactivities) and of the most widespread HCV genotypes 1 to 4, plus a few uncommon 4c/d and 5genotypes.

Result interpretation of the HCV Ab PLUS assay

ResultRatio : Signal/Cut-Off Interpretation Supplementary tests

S/CO < 0.9 Non reactiveS/CO ≥ 1 Reactive To retest in duplicate

S/CO: 0.9 - 1.0 Gray zone To retest in duplicateRetest: S/CO < 1 Non reactive

Retest: if one of the 2 results is ≥ 1 Reactive Confirmatory method


All these samples were found positive with Access HCV Ab PLUS.

No apparent difference was evidenced in detection of the various HCV genotyped tested.

Sensitivity of Access HCV Ab PLUS was evaluated by testing 74 seroconversion panels.

Among the 29 commercial panels tested, Access HCV Ab PLUS detected anti-HCV Ab rising as soon asRIBA 3.0 complementary test or in a very short delay later (few days).

Among the 45 tested panels by the experts, Access HCV Ab PLUS test was positive as the same time (i.e.positive with the same bleed) than the more sensitive tests used for comparison. Only 2 seroconversionswere detected few days later and inversely 2 seroconversions were earlier positive with Access HCV AbPLUS.

At least 65 early seroconversion samples from commercial panels were tested with Access HIV-1/2 New.

25 additional HIV fresh positive samples (within 1 day after blood collection) were tested and all werefound positive.

SpecificityThe specificity of the test has been evaluated:

• as 99.83% (95% CI: 99.7-99.9) on a population of 5995 non selected blood donors samples• on a population of 472 hospitalized patients, 469 were found negative and 3, which were

undetermined with Chiron Riba HCV 3.0, were found low positive with Access HCV Ab PLUS. The analysis of 108 samples from patients showing different pathologies not linked to the Hepatitis Cvirus (Hepatitis A or B, Herpes, EBV, Rheumatoid factor...) showed no significant nonspecific crossreactivity.

PrecisionThe precision of Access HCV Ab PLUS has been determined by the analysis of negative and positivesamples. The intra-assay reproducibility has been evaluated by testing 4 samples 30 times in the samerun, the inter-assay reproducibility has been evaluated by testing 4 samples in triplicate, 2 times a dayduring 5 days. The results are shown in the following tables:

Intra-assay reproducibility

C.V. are less than 5%.

Inter-assay reproducibility

C.V. are less than 10%.

Access, UniCel and Dxl are trademarks of Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos is a trademark of Lumigen, Inc., a subsidiary of Beckman Coulter, Inc.

** ProClin is a trademark of Rohm and Haas Company or of its subsidiaries or affiliates.


Mean (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

C.V.% 4.05 3.19 2.93 2.45


Mean of ratios(Sample/Cut-off)

0.07 1.34 3.18 4.42

S.D. 0.01 0.09 0.21 0.39C.V. 9.9 6.89 6.64 8.78



Intended Use The Access HCV Ab PLUS Calibrators are intended for use with the Access HCV Ab PLUS assay for thedetection of anti-HCV antibodies in human serum and plasma, using the Access Immunoassay Systems(Access, Access 2, UniCel® Dxl®).






The Access HCV Ab PLUS Calibrators are used to establish calibration (determine the cut-off value) forthe Access HCV Ab PLUS assay. By comparing the light intensity generated by a sample to the cut-offvalue, it is possible to determine the presence or absence of anti-HCV antibodies in the sample.

ProductInformation

Access HCV Ab PLUS CalibratorsCat. No. 34335: C0–C1, 1 mL/vial• Provided ready to use. • Store at 2-10°C. • Mix contents by gently inverting before use. Avoid foam formation. • The content of opened vial will remain stable until the expiration date stated on the vial labels when

stored at + 2-10°C. • Quality Control values out of range are a sign of possible deteriorationr


• For in vitro diagnostic use• Human source material used in the preparation of the reagent has been tested and found non reactive

for hepatitis B surface antigen (HBs Ag), antibodies to human immuodeficiency virus (HIV-1 and HIV-2) and antibodies to hepatitis C virus (HCV), excluding the positive calibrator C1 which is positive for anti-HCV antibody. Because no known test method can offer complete assurance that infectious agents are absent, handle reagents and patient samples as if capable of transmitting

C0: Negative (non-reactive) human serum for anti-HCV antibody, with <0.1% sodium azide

C1: Positive (reactive) human serum for anti-HCV antibody, inactivated, with< 0.1% sodium azide

Calibration Card:

1


infectious disease.• Sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal azides. One

disposal of liquids, flush with a large volume of water to prevent azide build-up.12

Procedure For calibration procedures, follow the instructions in the appropriate system manuals and/or Help system.

CalibrationDetails

The Access HCV Ab PLUS Calibrators are provided in two forms: negative calibrator C0 (prepared fromhuman negative serum pool), and positive calibrator C1 (prepared from human serum positive foranti-HCV antibody), inactivated.

The Access HCV Ab PLUS assay requires a calibration curve (cut-off value determination) every 28days in order to have an active "calibration" for only one lot of reagents well identified by its bar code. Atthe end of the 28 days or if another lot of reagents is loaded on the system, the curve is automaticallyinvalidated.

A calibration of the Access HCV Ab PLUS assay requires at least 225 μL (5 drops)/cup (Access / Access2) or 305 μL (7 drops)/cup (UniCel Dxl) of each calibrator (Cut-off value = RLUs C1 X 0.23); theprogrammed calibration for Access HCV Ab PLUS will test the C0 and C1 in triplicate.




Intended Use The Access HCV Ab PLUS QC is intended for monitoring system performance of the Access HCV AbPLUS assay.






The Access HCV Ab PLUS QC control is intended for monitoring system performance of the AccessHCV Ab PLUS assay for the detection of anti-HCV antibodies. The use of quality control materials isindicated for detecting and potentially resolving critical testing errors due to test kits, personnel, andinstrumentation, and are an integral part of good laboratory practices.15, 17, 16, 19, 21, 22 One negative andone low positive control level are provided to allow performance monitoring in the most relevant area ofthe dynamic range of such assays.

ProductInformation

Access HCV Ab PLUS QCCat. No. 34339: 2.5 mL/vial• Provided ready to use. • Mix contents by gently inverting before use. Avoid foam formation. • QC are stable until the expiration date stated on the vial labels when stored at +2-10°C. • The content of opened vials will remain stable for 30 days if properly handled and stored


• For in vitro diagnostic use• Human source material used in the preparation of the reagent has been tested and found non-reactive

for hepatitis B surface antigen (HBs Ag), antibodies to human immunodeficiency virus (HIV-1 and HIV-2), and antibodies to hepatitis C virus (HCV), except the QC2 Controls which is positive for anti-HCV. Because no known test method can offer complete assurance that infectious agents are absent, handle reagents and patient samples as if capable of transmitting infectious disease.

QC 1: Human serum with < 0.1% sodium azide. Negative (non-reactive) for anti-HCVantibodies

QC 2: Human serum with < 0.1% sodium azide. Positive (reactive) for anti-HCVantibodies, inactivated

QC Value Card:

1


• Sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal azides. On disposal of liquids, flush with a large volume of water to prevent azide build-up.12

Procedure The Access HCV Ab PLUS QC controls should be treated the same way as patient specimens and run inaccordance with the instructions contained in the kit accompanying the instrument being used. Note: for the Access Immunoassay Systems refer to the appropriate system manuals and/or Help systemfor information on configuring controls QC sample test request, and reviewing control data. To processthe Access HCV Ab PLUS QC Control on the Access Immunoassay Systems a minimum of 175 μL (4drops)/cup (Access / Access 2) or 255 μL (6 drops)/cup (UniCel Dxl) is required for each of the 2controls (single determination).

Limitations ofthe Procedure

If there is evidence of microbial contamination or excessive turbidity in a control, discard the vial.

ExpectedValues

Control data for the Access HCV Ab PLUS assay are provided for each lot by means of the “QC DataCard” contained in the pack. Individual mean reactivity levels of user laboratories should fall within thecorresponding acceptable range, however, each laboratory should assign its own mean reactivity andacceptable ranges after sufficient data had been collected.18

Given that specific levels of reactivity may vary among various manufacturer's assays, differentprocedures, different lot numbers and different laboratories, each laboratory should determine thespecific level or reactivity and establish its own range of acceptable values.18,19,20,21 The acceptablerange might include all values within ± 2 SD of the mean of 20 data points out of 20 determinations overa period of 30 days.22

BIO-RAD WARRANTS THESE PRODUCTS TO PERFORM AS DESCRIBED IN THE LABELINGAND LITERATURE SUPPLIED. BIO-RAD DISCLAIMS ANY IMPLIED WARRANTY OFMERCHANTABILITY OR FITNESS FOR ANY OTHER PURPOSE. IN NO EVENT SHALLBIO-RAD BE LIABLE FOR ANY CONSEQUENTIAL DAMAGES ARISING OUT OF THEAFORESAID EXPRESS WARRANTY.


References1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis










Clinical Laboratory Standards.






11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A33597CPágina 1


Indicaciones El ensayo Access HCV Ab PLUS es un método inmunoenzimático para la detección de anticuerposcontra el virus de la hepatitis C en suero o plasma humano, utilizando los sistemas de inmunoensayoAccess (Access, Access2, UniCel® DxI®).

Para su uso en diagnósticos in vitro

Todos los reactivos fabricados y comercializados están sujetos a un completo sistema de calidad que seinicia al recibir las materias primas y se extiende hasta la comercialización final del producto.

Cada lote se somete a un control de calidad y únicamente se aprueba su introducción en el mercadocuando cumple los criterios de aceptación.

La empresa posee los registros relativos a la producción y el control de cada uno de los lotes.

Resumen yexplicación

El virus de la hepatitis C (VHC) está actualmente considerado como la principal causa de hepatitis no Ano B (HNANB) post-transfusión, así como aquellas transmitidas por vía parenteral no relacionada con latransfusión (toxicómanos, pacientes de hemodiálisis, pacientes trasplantados) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. El 50-60% delos pacientes infectados con hepatitis C es susceptible de desarrollar una hepatitis crónica, con el riesgode evolucionar hacia una cirrosis o un carcinoma hepatocelular 8, 9.

La imposición de la obligación de cribar todas las donaciones de sangre (para detectar anticuerpos antiVHC) ha reducido significativamente el riesgo de transmisión a través de la sangre infectada 10, 11.

El ensayo Access HCV Ab PLUS ha sido diseñado para detectar anticuerpos anti VHC en suero o plasmahumano y, de este modo, contribuye a la prevención de la contaminación por vía parenteral. Tambiénresulta útil para el diagnóstico de la infección por VHC. En ambos casos, los resultados debeninterpretarse junto con los datos clínicos y otros marcadores serológicos.

Principios delprocedimiento

El ensayo Access HCV Ab PLUS es un análisis inmunoenzimático indirecto. La muestra (suero, plasmao control) se introduce en una cubeta de reacción con partículas paramagnéticas revestidas con un péptidoque imita los epítopes inmunodominantes de la región cápside, y proteínas recombinantes (NS3 y NS4).Durante la incubación tanto el IgG como el IgM presentes en la muestra son capturados por la fase sólida.Tras la incubación, se recoge la fase sólida mediante un campo magnético y se retiran los materiales nounidos por medio de una serie de lavados. En el segundo paso, el conjugado (anticuerpos de cabra antiIgG humano, marcados con fosfatasa alcalina) se añade a la cubeta de reacción. Tras la incubación, otraserie de lavados elimina el exceso de conjugado. Se añade un substrato quimioluminiscente,Lumi-Phos* 530, y se miden con un luminómetro los fotones generados por la reacción enzimática. Laintensidad de la señal emitida es proporcional a la cantidad de conjugado enzimático presente y, portanto, al título de anticuerpos anti VHC presente en la muestra de prueba. Mediante la comparación delvalor del punto de corte, establecido a través de la calibración del análisis, con la señal presente en lamuestra, se determina la presencia de anticuerpos anti VHC.

A33597C Access HCV Ab PLUSPágina 2

Informaciónsobre el

producto

Envase de reactivos Access HCV Ab PLUSCat. Núm. 34330: 100 determinaciones, 2 envases, 50 ensayos/envase• Se suministran listos para su uso.• Conservar en posición vertical a una temperatura de +2 °C y +10 ºC. • En estas condiciones, un paquete de reactivo es estable hasta la fecha de caducidad establecida en la

etiqueta. • Antes de cargar inicialmente el paquete de reactivo, mezcle los contenidos invirtiendo suavemente el

paquete varias veces hasta que las partículas se hallen de nuevo completamente en suspensión. • Tras utilizarlo por primera vez, manténgalo cargado en el instrumento o refrigerado (en posición

erguida), y utilícelo en el plazo de 28 días. • Una rotura en la capa elastomérica del envase o la presencia de valores de control de calidad fuera de

la escala son signos de un posible deterioro.

Advertencias yprecauciones

• Antes de cargarlo por primera vez en el carrusel, agite el paquete hasta que todas las partículas queden de nuevo completamente en suspensión.

• Para su uso en diagnósticos in vitro.• La azida sódica puede reaccionar con las tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas

altamente explosivas. Al desecharla, enjuague con abundante agua para evitar la acumulación de azida12.

• El ProClin** 300 puede provocar sensibilidad cutánea. Evite vertidos o salpicaduras de este reactivo en la piel o las ropas. En caso de contacto con el reactivo, enjuague con abundante agua.

Recogida ypreparación de

las muestras

1. Las muestras recomendadas son suero o plasma (heparina, EDTA o citrato).2. Aplique las siguientes normas para la manipulación y el procesamiento de muestras de sangre 13, 14.

• Recoja todas las muestras de sangre respetando las precauciones habituales para la punción venosa.• Deje que las muestras coagulen adecuadamente antes de la centrifugación, 1 hora como mínimo.• Mantenga los tubos siempre cerrados.• Centrifugue las muestras durante 15 minutos a 1.500 g como mínimo.

3. Aplique las siguientes normas para la conservación de muestras de sangre 13, 14 :• Conserve las muestras a temperatura ambiente durante un máximo de 8 horas• Si no se va a completar el análisis en el plazo de 8 horas, refrigérelas a +2 °C y +10 °C.• Si no se va a completar el análisis en el plazo de 48 horas, o en caso de envío de las muestras,

congélelas a -20 °C 13.

• Descongele las muestras sólo una vez, mediante un procedimiento rápido, calentándolas durante unos minutos en un baño de agua a 40 ºC

• Tras la descongelación, centrifugue la muestra durante 15 minutos a 3.000 g y transfiérala a una cubeta de análisis para eliminar los agregados o las partículas de fibrina en suspensión que pudieran provocar resultados positivos falsos.

4. Las muestras que contengan hasta 200 mg/l de bilirrubina, hasta 90 g/l de albúmina, las muestras lipémicas que contengan el equivalente a 36 g/l de trioleína, y las muestras hemolizadas que contengan hasta 5 g/l de hemoglobina, no afectan a los resultados.

R1a: Partículas paramagnéticas revestidas con proteínas recombinantes (NS3/NS4) ypéptido (Cápside) suspendidas en tampón TRIS, con < 0,1% de azida sódica

R1b: Diluyente de la muestra con < 0,1% de azida sódica

R1c: Diluyente del conjugado, con surfactante, < 0,1% de azida sódica

R1d: Conjugado de anticuerpos de cabra anti IgG humano y fosfatasa alcalina entampón TRIS, con surfactante, < 0,1% de azida sódica y < 0,1% ProClin** 300


Materialessuministrados

R1 Envases de reactivos Access HCV Ab PLUS

Materialesnecesarios pero

nosuministrados

1. Calibradores Access HCV Ab PLUS Calibrators para la calibración de sueros negativos y sueros positivos para anticuerpos anti VHC Nº Cat. 34335

2. Control de calidad: Access HCV Ab PLUS QC Nº Cat. 34339 - u otros sueros de control comerciales

3. Sustrato: Access SubstrateNº Cat. 81906

4. Access, Access 2Solución tamponada de lavado: Access Wash Buffer II, Nº Cat. A16792

5. UniCel DxISolución tamponada de lavado: UniCel DxI Wash Buffer II, Nº Cat. A16793

6. Sistemas:Access, Access 2, UniCel DxI.

Comentariossobre el

procedimiento

1. Consulte los manuales del sistema correspondientes o el sistema de ayuda para obtener una descripción de la instalación, la teoría de funcionamiento, las características de comportamiento, el procesamiento del sistema (es decir, las instrucciones de funcionamiento), los procedimientos e instrucciones de calibración, el mantenimiento y la solución de problemas. Las limitaciones, las precauciones y los riesgos de las operaciones se incluyen según sean aplicables a lo largo de los manuales.

2. Para cada determinación se utilizan veinticinco (25) μl de muestra (además del volumen muerto).3. El ensayo se incuba a 37 °C y requiere 55 minutos.

Procedimiento Consulte los manuales del sistema correspondientes o el sistema de ayuda para obtener información sobrela manipulación de las muestras, la configuración de las pruebas, las solicitudes de pruebas y lasrevisiones de los resultados de las pruebas.

Detalles de lacalibración

Se requiere una curva de calibración activa para todas las pruebas. Los datos de calibración quedeterminan el valor del punto de corte del análisis son válidos durante un periodo de 28 días. Por tanto,para el ensayo Access HCV Ab PLUS, es necesario realizar una calibración a partir de los calibradoresC0 y C1 del kit Access HCV Ab PLUS Calibrators cada 28 días. Consulte los manuales del sistemacorrespondientes o el sistema de ayuda para obtener información sobre la teoría de calibración, laconfiguración de los calibradores, la introducción de solicitud de la prueba del calibrador y la revisión delos datos de calibración.

Control decalidad

Se recomienda realizar controles de calidad al menos cada 24 horas y al poner en marcha el sistema antesdel procesamiento de una muestra del paciente. Utilice el producto sugerido Access HCV Ab PLUS QC oincluya sueros de control de otra procedencia. Siga las instrucciones del fabricante para la reconstitucióny el almacenamiento. Cada laboratorio debe establecer un valor medio y las escalas aceptables paraseguir el comportamiento analítico del ensayo. Los resultados de los sueros de control que no quedendentro de las escalas aceptables pueden indicar resultados inválidos del ensayo. En este caso, examinepara este parámetro todos los resultados de la prueba generados desde el último punto de comprobacióndel control de calidad que resultó aceptable.

Para obtener los mejores resultados, la calibración del ensayo y el análisis de la muestra del pacientedeberían realizarse en condiciones de temperatura parecidas. Si la temperatura ambiente del laboratoriovaría más de ± 5 ºC respecto a la temperatura de calibración, revise los resultados del control de calidad yvuelva a calibrar según proceda.


Consulte los manuales del sistema correspondientes o el sistema de ayuda para obtener información sobrela revisión de los resultados de los sueros de control.

Resultados Los resultados de la prueba del paciente son determinados automáticamente por el software del sistemautilizando el valor del punto de corte (valor del punto de corte = media de los calibradores positivos X0,23) determinado mediante la calibración activa. Los resultados (señal/valor de corte = S/CO) seconsideran reactivos o no reactivos en función de su relación con el valor de corte (señal mayor, o señaligual o inferior al valor de corte, respectivamente). No obstante, los resultados ~10% inferiores al valorde corte deberían interpretarse con prudencia y ser analizados de nuevo por duplicado. El usuario deberíaalmacenar esta zona gris recomendada (entre 0,9 y 1,0) en el software del sistema (consulte los manualesdel sistema correspondientes o el sistema de ayuda para obtener instrucciones completas sobre la zonagris de un ensayo cualitativo). De esta forma se informará de forma automática con una marca distintiva,permitiendo así la rápida identificación de un resultado situado en la zona gris. Los resultados de laprueba del paciente pueden revisarse usando la pantalla Resultados de muestra. Consulte los manualesdel sistema correspondientes o el sistema de ayuda para obtener instrucciones completas sobre la revisiónde resultados.

Toda muestra con una relación (S/CO) inferior a 0,9 se considera no reactiva con la prueba Access HCVAb PLUS. Las muestras con una relación (S/CO) igual o superior a 1 se consideran inicialmente reactivascon la prueba HCV Ab PLUS y deberían ser analizadas de nuevo por duplicado antes de la interpretaciónfinal.

Todas las muestras que resulten inicialmente reactivas o cuyos resultados se encuentren en la zona grisdeberían ser analizadas de nuevo con Access HCV Ab PLUS:

• Si los resultados de los duplicados son < 1,0 S/CO, la muestra debe considerarse no reactiva (negativa) para el ensayo HCV Ab PLUS.

• Si uno de los dos resultados es 1,0 S/CO, el resultado inicial no es susceptible de repetición y la muestra se considera reactiva para la prueba Access HCV Ab PLUS.

No obstante se recomienda volver a analizar toda muestra reactiva susceptible de repetición con unsegundo ensayo inmunoenzimático y un método de confirmación para asegurarse de que es positiva.

Limitacionesdel

procedimiento

El ensayo Access HCV Ab PLUS es únicamente para la detección de anticuerpos antiVHC en suero oplasma humanos. Un resultado positivo con el ensayo Access HCV Ab PLUS debería considerarse juntoa datos clínicos y ser confirmado mediante otras pruebas diagnósticas, incluido un método deconfirmación (Western blot), antes de ser considerado positivo.

Dada la diversidad de las reacciones inmunológicas de los pacientes infectados por el virus de la hepatitisC (en especial durante las seroconversiones), pueden producirse algunas diferencias de detección entrepruebas dependiendo del tipo de proteínas antigénicas usadas. Un resultado negativo con una prueba dedetección no excluye la posibilidad de haber estado expuesto al virus de la hepatitis C o de estar infectadopor él.

Interpretación de resultados del ensayo HCV Ab PLUS

ResultadoRelación: Señal/valor de corte Interpretación Pruebas adicionales

S/CO 0,9 No reactivoS/CO 1 Reactivo Volver a analizar por

duplicadoS/CO: 0,9 - 1,0 Zona gris Volver a analizar por

duplicadoSegunda prueba: S/CO 1 No reactivo

Segunda prueba: si uno de los dos resultados es 1 Reactivo Método de confirmación


Todas las técnicas ELISA pueden producir resultados positivos falsos. Se recomienda comprobar laespecificidad de la reacción para toda muestra positiva susceptible de repetición usando un métodoadecuado para probar la presencia de anticuerpos antiVHC.

Característicasespecíficas del

funciona-miento

SensibilidadLa sensibilidad de la prueba se ha evaluado ensayando 511 muestras bien documentadas, de las que:

101 sueros PCR positivos procedían de seguimientos de pacientes que presentaban hepatitis C crónica,145 muestras positivas de pacientes infectados por VHC, 77 muestras ARN VHC positivas por PCR deBBI, 122 muestras genotipadas VHC positivas.

El panel SFTS 97 está compuesto por 36 muestras positivas de las que 26 están genotipadas y sonmuestras ARN VHC positivas por PCR y las otras 10 son muestras positivas (negativas por PCR) con almenos 2 reactividades a anticuerpos VHC.

Además se incluyen 30 muestras que resultaron positivas durante los estudios prospectivos.

Todas estas muestras son representativas de los diferentes perfiles de serotipos (reactividad aislada, 2 o 3reactividades) y son representativas de los genotipos 1 a 4 encontrados con mayor frecuencia así como delos genotipos menos frecuentes 4c/d y 5.

Todas estas muestras resultaron positivas con Access HCV Ab PLUS.

No se ha observado ninguna diferencia durante la detección de los genotipos ensayados.

La sensibilidad de la prueba Access HCV Ab PLUS se ha ensayado en 74 paneles de seroconversión.

De los 29 paneles comerciales de seroconversión analizados, Access HCV Ab PLUS detectó losanticuerpos anti-VHC con la misma precocidad que la prueba RIBA 3.0 o pocos días después.

De los 45 paneles analizados por expertos, la prueba Access HCV Ab PLUS resultó positiva en lasmismas muestras al mismo tiempo que otras pruebas más sensibles usadas a modo de comparación. Sólo2 seroconversiones se detectaron algunos días más tarde y al revés, 2 seroconversiones se detectaronantes con Access HCV Ab PLUS.

La sensibilidad en los paneles de seroconversión se ha valorado como muy satisfactoria.

25 muestras adicionales HCV positivas frescas (1 día tras la extracción de sangre) fueron analizadas yfueron todas positivas.

EspecificidadLa especificidad de la prueba se ha estimado:

• o en un 99,83% (99,7% a 99,9% con 95% de intervalo de confianza) en una población de 5995 donantes de sangre.

• o en una población de 472 pacientes hospitalizados de los cuales 469 fueron negativos y 3 que habían dado resultado indeterminadas con la prueba CHIRON RIBA HCV 3.0 resultaron débilmente positivas con Access HCV Ab PLUS.

No se ha observado ninguna reacción no específica en 108 pacientes que presentaban otras infeccionesvirales (hepatitis A o B, herpes, EBV, factor reumatoide....)

PrecisiónSe determinó la precisión de Access HCV Ab PLUS analizando muestras positivas y negativas. Lareproducibilidad intraanálisis se evaluó comprobando 4 muestras 30 veces en el mismo ciclo; lareproducibilidad interanálisis se evaluó comprobando 4 muestras por triplicado, 2 veces al día durante 5días. Los resultados se muestran en las tablas siguientes:


Reproducibilidad intraensayo

Los C.V. son inferiores al 5 %.

Reproducibilidad interensayo

Los C.V. son inferiores al 10 %.

Access, UniCel y DxI son marcas registradas de Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos es una marca registrada de Lumigen, Inc., subsidaria de Beckman Coulter, Inc.

** ProClin es una marca comercial de Rohm y Haas Company


Media (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243D.E. 10202 43987 320857 309281

C.V. % 4,05 3,19 2,93 2,45


Media de proporciones

(Muestra/Punto de corte)

0,07 1,34 3,18 4,42

D.E. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78



Indicaciones Los calibradores Access HCV Ab PLUS Calibrators están destinados a su uso con el ensayo Access HCVAb PLUS para la detección de anticuerpos anti VHC en suero y plasma humano, utilizando los sistemasde inmunoensayo Access (Access, Access2, UniCel® DxI®).


Todos los reactivos fabricados y comercializados están sujetos a un completo sistema de calidad que se inicia al recibir las materias primas y se extiende hasta la comercialización final del producto.

Cada lote se somete a un control de calidad y únicamente se aprueba su introducción en el mercado cuando cumple los criterios de aceptación.

La empresa posee los registros relativos a la producción y el control de cada uno de los lotes


Los calibradores Access HCV Ab PLUS Calibrators se utilizan para establecer la calibración (paradeterminar el valor del punto de corte) en el ensayo Access HCV Ab PLUS. Comparando la intensidad dela luz generada por una muestra con el valor del punto de corte, se puede determinar la presencia oausencia de anticuerpos dirigidos contra el virus de la hepatitis C en la muestra.


producto

Access HCV Ab PLUS CalibratorsCat. Núm. 34335: C0–C1, 1 mL/vial• Se suministra listo para su uso. • Consérvelo a una temperatura de entre +2 °C y +10 °C. • Mezcle los contenidos invirtiéndolo suavemente antes del empleo. Evite la formación de espuma. • El contenido del vial abierto permanecerá estable hasta la fecha de caducidad establecida en la

etiqueta del vial cuando se conserva a una temperatura de entre +2 °C y +10 °C. • La existencia de valores del control de calidad fuera de rango indica un posible deterioro.

C0: Suero humano negativo (no reactivo) para anticuerpos anti VHC, con < 0,1% de azida sódica

C1: Suero humano positivo (reactivo) para anticuerpos anti VHC, inactivados, con < 0,1% de azida sódica

Tarjeta de calibración:

1

A33597C Access HCV Ab PLUS Pagina 8

Advertencias yprecauciones

• Para su uso en diagnósticos in vitro• El material de origen humano utilizado en la preparación del reactivo ha sido comprobado y ha

resultado no reactivo para el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), los anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1 y VIH-2) y los anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC), excluyendo el calibrador positivo C1, que es positivo para el anticuerpo anti VHC. Dado que ningún método puede ofrecer una garantía absoluta de la ausencia de agentes infecciosos, manipule los reactivos y las muestras de los pacientes como si pudieran transmitir enfermedades infecciosas.

• La azida sódica puede reaccionar con las tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar los líquidos, enjuague con una abundante cantidad de agua para evitar la acumulación de azida 12.

Procedimiento Consulte los manuales del sistema correspondientes o el sistema de ayuda para obtener información sobrela teoría de calibración, la configuración de calibradores, la introducción de solicitud de la prueba decalibración y la revisión de los datos de calibración.

Detalles de lacalibración

Los calibradores Access HCV Ab PLUS Calibrators se suministran en dos formas: calibrador negativo C0 (preparado a partir de un pool de suero humano negativo), y calibrador positivo C1 (preparado a partir de suero humano positivo para el anticuerpo anti VHC), inactivado.

El ensayo Access HCV Ab PLUS requiere una curva de calibración (determinación del valor del punto de corte). La curva de calibración es "activa" en el equipo Access durante 28 días para un solo lote de paquete de reactivos bien identificado con su código de barras. Al cabo de 28 días o si se carga otro lote de paquete de reactivos en el equipo, la curva se invalida automáticamente.

Una calibración del análisis Access HCV Ab PLUS requiere al menos 225 μl (5 gotas) / cubeta (Access,Access 2) o 305 μl (7 gotas) / cubeta (UniCel DxI) de cada calibrador (Valor del punto de corte = RLUsC1 X 0,23); la calibración programada para el Access HCV Ab PLUS comprobará los calibradores C0 yC1 por triplicado.




Indicaciones Access HCV Ab PLUS QC está diseñado para monitorizar la precisión analítica de Access HCV AbPLUS.


Todos los reactivos fabricados y comercializados están sujetos a un completo sistema de calidad que seinicia al recibir las materias primas y se extiende hasta la comercialización final del producto.

Cada lote se somete a un control de calidad y únicamente se aprueba su introducción en el mercadocuando cumple los criterios de aceptación.

La empresa posee los registros relativos a la producción y el control de cada uno de los lotes.


El control Access HCV Ab PLUS QC está destinado a monitorizar la precisión analítica del análisisAccess HCV Ab PLUS para la detección de anticuerpos anti VHC. El empleo de materiales de control decalidad está indicado para detectar y corregir errores cruciales de la prueba debidos a los kits de prueba, elpersonal y los instrumentos, y forma parte de las buenas prácticas de laboratorio 15, 16, 17, 19, 21, 22. Seproporcionan un valor negativo del control y un valor débilmente positivo del control para permitircomprobar el comportamiento en el área más relevante del espectro analítico de esas prueba.


producto

Access HCV Ab PLUS QCNº cat. 34339: 2,5 mL/vial• Se suministra listo para su uso. • Mezcle los contenidos invirtiéndolo suavemente antes de su empleo. Evite la formación de espuma. • Los controles de calidad son estables hasta la fecha de caducidad establecida en las etiquetas de los

viales cuando se conservan a una temperatura de entre +2 °C y +10 °C. • El contenido de los viales abiertos permanecerá estable durante 30 días si se manipula y conserva

adecuadamente.

QC 1: Suero humano con 0,1% de azida sódica. Negativo (no reactivo) paraanticuerpos anti VHC

QC 2: Suero humano con 0,1% de azida sódica. Positivo (reactivo) para anticuerposanti VHC, inactivados

Tarjeta de Valores QC:

1


Advertencia yprecauciones

• Para su uso en diagnósticos in vitro• El material de origen humano utilizado en la preparación del reactivo ha sido comprobado y ha

resultado no reactivo para el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), los anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1 y VIH-2), y los anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC), excepto el Control QC2 que es positivo para el anticuerpo anti VHC.Dado que ningún método de comprobación puede ofrecer una garantía absoluta de la ausencia de agentes infecciosos, manipule los reactivos y las muestras de pacientes como si pudieran transmitir enfermedades infecciosas.

• La azida sódica puede reaccionar con las tuberías de plomo y cobre para formar azidas metálicas altamente explosivas. Al desechar los líquidos, enjuague con una abundante cantidad de agua para evitar la acumulación de azida 12.

Procedimiento El control Access HCV Ab PLUS QC debe ser tratado del mismo modo que una muestra del paciente.

Remítase al Manual del Usuario y al Manual de referencia de los sistemas de inmunoensayo Access paramás información acerca de la teoría del control de calidad, la configuración de los controles, laintroducción de solicitudes de ensayo de la muestra de control de calidad y la revisión de los datos decontrol de calidad.

Para procesar el control Access HCV Ab PLUS QC en los sistemas de inmunoensayo Access, se requiereun mínimo de 175 μl (4 gotas) / cubeta (Access, Access 2) o 255 μl (6 gotas) / cubeta (UniCel DxI) paracada control (determinación simple).

Limitacionesdel

procedimiento

Si existe evidencia de contaminación microbiana o una turbiedad excesiva en un control, deseche el vial.

Valoresesperados

Los datos de control para el ensayo Access HCV Ab PLUS se proporcionan para cada lote por medio dela "Tarjeta de datos QC" incluida en el envase. Los niveles de reactividad media individuales de loslaboratorios del usuario deben situarse dentro de la escala admisible correspondiente ; no obstante, cadalaboratorio debe asignar su propia reactividad media y las escalas admisibles una vez recopiladossuficientes datos 20.

Dado que los niveles específicos de reactividad pueden variar entre los análisis de distintos fabricantes,diferentes números de lote y diferentes laboratorios, cada laboratorio debe determinar el nivel específicode reactividad y establecer su propia escala de valores admisibles18, 19, 20, 21. La escala admisible puedeincluir todos los valores situados en el marco de ± 2 DE de la media de 20 puntos, correspondientes a 20mediciones distintas realizadas a lo largo de un periodo de 30 días 22.

BIO-RAD GARANTIZA QUE ESTOS PRODUCTOS SE COMPORTARÁN SEGÚN LO DESCRITOEN EL ETIQUETADO Y LOS TEXTOS PROPORCIONADOS. BIORAD RECHAZA CUALQUIERGARANTÍA IMPLÍCITA EN CASO DE VENTA O UTILIZACIÓN PARA CUALQUIER OTRO FIN.BIORAD NO SERÁ EN NINGÚN CASO RESPONSABLE POR CUALESQUIERA DAÑOSSURGIDOS FUERA DE LO ESTABLECIDO EN ESA GARANTÍA EXPRESA.



REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis














11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459


Page 1

®


Utilisation Le test Access HCV Ab PLUS utilise une technique immunoenzymatique chimioluminescente àparticules paramagnétiques pour la détection des anticorps dirigés contre le virus de l'Hépatite C dans lesérum ou le plasma humain à l'aide des Systèmes d'Immunoanalyse Access (Access, Access 2, UniCel®

DxI®).

Pour diagnostic in vitro

Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un systèmed'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis.

Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conformeaux critères d'acceptation.

La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par notre société.

Généralités Le virus de l'hépatite C (VHC) est actuellement considéré comme responsable de la majorité deshépatites non-A non-B (HNANB) post-transfusionnelles tout comme celles transmises par voieparentérale non transfusionnelle (toxicomanes, hémodialysés, transplantés) 1,2,3,4,5,6,7. Ces hépatites sontmarquées par le fait que 50 à 60% des patients infectés sont susceptibles de développer une hépatitechronique avec le risque d'évolution vers une cirrhose et un hépatocarcinome 8,9.

L'instauration du dépistage obligatoire des anticorps anti-VHC sur chaque don de sang a permis deréduire de manière significative les risques de transmission 10,11.

Le test Access HCV Ab PLUS est conçu pour détecter les anticorps anti-VHC éventuellement présentsdans le sérum ou le plasma humain contribuant ainsi à la prévention des contaminations parentérales. Ilprésente également un intérêt pour le diagnostic d'une infection par le VHC. Dans tous les cas,l'interprétation des résultats doit être associée aux données cliniques et aux autres marqueurssérologiques.

Principe dutest

Le test Access HCV Ab PLUS est un dosage immunoenzymatique de type EIA indirect. Ce test met enprésence dans une cuve réactionnelle un échantillon (sérum, plasma ou contrôle), des particulesmagnétiques sensibilisées avec un peptide mimant des épitopes immunodominants de la région capside etdes protéines recombinantes situées en régions NS3 et NS4. Lors de l'incubation, les IgG et IgMprésentes dans l'échantillon sont captées par la phase solide. Après incubation, la séparation dans unchamp magnétique et les lavages permettent l'élimination des produits non liés à la phase solide. Dansune seconde étape, un conjugué anticorps de chèvre anti-IgG humaines, liés à la phosphatase alcaline estajouté dans la cuvette. Après une nouvelle incubation, l'excès de conjugué est éliminé par lavage. Unsubstrat chimiluminescent (Lumi-Phos* 530), est ajouté et les photons générés par la réactionenzymatique sont mesurés à l'aide d'un luminomètre. L'intensité du signal émis est proportionnelle à laquantité de conjugué enzymatique présente à la fin de la réaction et donc au taux d'anticorps anti-HCVprésent dans l'échantillon testé.


Page 2

Par comparaison avec la valeur seuil déterminée lors de la calibration du test sur l'instrument, on peutainsi conclure à la présence ou à l'absence d'anticorps anti-HCV dans cet échantillon.

Description duproduit

Pack Réactifs Access HCV Ab PLUS

Code 34330: Coffret de 100 dosages, 2 packs, 50 tests/pack

• Fournis prêts à l'emploi. • Conserver les packs en position verticale et les réfrigérer à 2-10°C avant de les charger ou de les

conserver sur l'appareil. • Lors du premier chargement dans le caroussel, agiter le Pack jusqu'à resuspension complète des

particules. Un Pack Réactifs est stable jusqu'à la date de péremption inscrite sur l'étiquette lorsqu'il est conservé à 2-10°C.

• Après ouverture, le laisser chargé sur l'appareil en fonctionnement ou le conserver à 2-10°C et l'utiliser dans les 28 jours qui suivent.

• En cas de stockage d'un Pack entamé à l'extérieur de l'instrument, veiller à le conserver en position verticale.

• Les signes d'une détérioration possible sont la rupture de la couche d'élastomère sur le Pack ou des valeurs de contrôle en dehors des intervalles de confiance.

Précautionsd’utilisation

• Lors du premier chargement dans le carrousel, agiter le pack Réactifs jusqu'à resuspension complète des particules.

• A utiliser comme test de diagnostic.• L'azoture de sodium peut réagir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures

métalliques hautement explosifs. Lors de l'évacuation des liquides, déverser un volume d'eau important afin de prévenir la formation de tels azotures 12.

• Le ProClin** 300 est un allergisant potentiel. Eviter toute projection de réactif sur la peau ou les vêtements. En cas de contact avec le réactif, laver abondamment à l'eau.

Recueil etpréparation de

l’échantillon

Nature de l'échantillon: sérum ou plasma (héparine, EDTA ou citrate).

Appliquer les normes suivantes en ce qui concerne la manipulation et le traitement des échantillonssanguins 13,14 :

• Prélever les échantillons sanguins en observant les précautions de routine concernant la ponction veineuse.

• Laisser les échantillons sériques coaguler complètement avant la centrifugation, minimum 1 heure.• Garder les tubes bouchés à tout moment.• Centrifuger l'échantillon, 15 minutes à 1500g minimum.

Appliquer les normes suivantes en ce qui concerne la conservation des échantillons sanguins 13,14:

• Ne pas conserver les échantillons à température ambiante pendant plus de 8 heures.• Si le test n'est pas terminé dans les 8 heures, réfrigérer l'échantillon à 2-10°C.• Si le test n'est pas terminé dans les 48 heures, ou pour l'expédition des échantillons, congeler à -20°C.

R1a: Particules paramagnétiques sensibilisées avec des protéines recombinantes(NS3 et NS4) et un peptide (Capside) en suspension dans un tampon Tris, del'azide de sodium (< 0,1%).

R1b: Diluant échantillon, contenant de l'azide de sodium (< 0,1%).

R1c: Diluant conjugué contenant un surfactant, de l'azide sodium (< 0,1%).

R1d: Conjugué = anticorps (chèvre) anti-IgG humaines/phosphatase alcaline(bovine) en suspension dans un tampon Tris et contenant un surfactant, del'azide de sodium (< 0,1%) et du ProClin** 300 (< 0,1%).


Page 3

• Décongeler les échantillons une fois seulement, décongélation rapide par chauffage quelques minutes au bain-marie à 40°C pour limiter la précipitation de la fibrine.

• Après décongélation, centrifuger à nouveau l'échantillon 15 minutes à 3000g et transférer dans un godet pour pratiquer l'essai, ceci afin d'éliminer les particules ou agrégats de fibrine en suspension qui peuvent donner des résultats faussement positifs.

Les échantillons contenant 200 mg/L de bilirubine, 90 g/L d'albumine, les échantillons contenantl'équivalent de 36 g/L de trioléine (triglycérides) et les échantillons hémolysés contenant jusqu'à 5 g/Ld'hémoglobine n'affectent pas le résultat.

Matériel fourni R1 Packs Réactifs Access HCV Ab PLUS

Matérielnécessaire mais

non fourni

1. Calibrateurs: Access HCV Ab PLUS CalibratorsComposés d'un sérum négatif et d'un sérum positif en anticorps anti-HCVCode. 34335

2. Contrôles de qualité (QC): Access HCV Ab PLUS QC Code. 34339 - ou autres sérums de contrôle commerciaux

3. Substrat: Access SubstrateCode 81906

4. Access, Access 2 :Solution de lavage : Access Wash Buffer II, Cat. No. A16792UniCel DxI :Solution de lavage : UniCel DxI Wash Buffer II, Cat. No. A16793

5. Systèmes :Access, Access 2, UniCel DxI.

Observationstechniques

1. Se reporter aux manuels des systèmes appropriés et au système d’Aide pour obtenir une description spécifique des chapitres suivants: Installation, Mise en Marche, Principes du Fonctionnement, Caractéristiques des Performances du Système, Instructions sur le Fonctionnement, Procédures de Calibration, Limites et Précautions opérationnelles, Maintenance et Dépannages.

2. Vingt cinq (25) µL d'échantillon sont utilisés pour chaque dosage (hors volume mort).3. Le test est réalisé à 37°C et dure 55 minutes.

Procédure Se reporter aux manuels des systèmes appropriés et au système d’Aide pour obtenir des informations surla gestion des échantillons, la configuration des tests et la consultation des résultats des tests.

Détails de lacalibration

Une courbe de calibration active est nécessaire pour tous les tests . Les données de calibrationdéterminant la valeur seuil du test sont valables pendant 28 jours . En conséquence, pour le test AccessHCV Ab PLUS, une calibration à partir des calibrateurs C0 et C1 du kit Access HCV Ab PLUSCalibrators est nécessaire tous les 28 jours. Se reporter aux manuels des systèmes appropriés et ausystème d’Aide afin d'obtenir des instructions complètes sur les procédures de calibration.

Contrôle dequalité

Les contrôles de qualité sont recommandés au minimum toutes les 24 heures et au démarrage du systèmeavant le traitement des échantillons patients. Utiliser le produit proposé "Access HCV Ab PLUS QC" ouinclure des sérums de contrôle de qualité d'autres sources. Suivre les instructions du fabricant en ce quiconcerne la reconstitution éventuelle et la conservation. Chaque laboratoire devra valider une valeurmoyenne et des intervalles de confiance pour suivre les performances analytiques du test. Les résultatsdes sérums de contrôle qui ne rentrent pas dans les intervalles de confiance peuvent indiquer des résultatsde test erronés. Dans ce cas examiner tous les résultats des tests effectués depuis le dernier contrôle dequalité validé pour ce paramètre.


Page 4

Pour garantir des performances optimales, la température du laboratoire doit être équivalente pour lacalibration et le test de l'échantillon. Si la température ambiante varie de plus de ± 5°C entre la calibrationet la réalisation des tests, vérifier les résultats du contrôle de qualité et recalibrer si nécessaire.

Se reporter aux manuels des systèmes appropriés et au système d’Aide afin d'obtenir des instructionscomplètes en ce qui concerne la revisualisation des résultats des sérums de contrôle.

Résultats Les résultats des tests des patients sont déterminés automatiquement par le logiciel du système qui utilisela "valeur seuil" [valeur seuil = moyenne des calibrateurs positifs (RLU) x 0,23] déterminée par lacalibration active. Les résultats exprimés en Signal/Cut-Off (S/CO) sont rendus comme "réactif" ou "nonréactif" en fonction de leur rapport avec la "valeur seuil" (signal supérieur ou égal, ou inférieur à la"valeur seuil").

Les échantillons présentant un rapport S/CO (Signal/Cut-Off) inférieur à 0,9 sont considérés comme nonréactifs avec le test Access HCV Ab PLUS.

Les échantillons avec un rapport S/CO (Signal/Cut-Off) supérieur ou égal à 1 sont considérés commeinitialement réactifs avec le test Access HCV Ab PLUS, ils doivent être retestés en double avant leurinterprétation finale.

Toutefois, les résultats dont les rapports S/CO sont compris entre 0,9 et 1 doivent être interprétés avecprudence. Il est alors conseillé de retester en double les échantillons correspondants. Cette zone griserecommandée (0,9 - 1,0) est à mettre en mémoire par l'utilisateur (se reporter aux manuels des systèmesappropriés et au système d’Aide afin d'obtenir des instructions complètes en ce qui concerne la zone grisepour un test qualitatif). Ainsi une marque distinctive reportée automatiquement permet de repérerrapidement un résultat situé en zone grise. Les résultats des tests des patients peuvent être revisualisés enutilisant l'écran "Résultats". Se reporter aux manuels des systèmes appropriés et au système d’Aide afind'obtenir des instructions complètes en ce qui concerne la revisualisation des résultats.

Si après avoir été retesté, un échantillon présente un rapport S/CO inférieur à 1 sur les deux duplicats, lerésultat initial n'est pas reproduit et l'échantillon est déclaré "non réactif" avec le test Access HCV AbPLUS.

Si après retest d'un échantillon, un des duplicats présente un signal (RLU) supérieur ou égal à un rapportS/CO supérieur ou égal à 1,, le résultat initial est reproduit et l'échantillon est déclaré "réactif" avec le testAccess HCV Ab PLUS. Il est cependant recommandé, voire indispensable d'analyser tout échantillon"réactif" en deuxième intention par des tests complémentaires, en accord avec la législation du pays, afind'établir clairement sa positivité.

Interprétation des résultats du test HCV Ab PLUS

RésultatRapport : Signal/Cut-Off

Interprétation Analyses complémentaires

S/CO < 0.9 Non réactif

S/CO ≥ 1 Réactif Retester en double

S/CO: 0.9 - 1.0 Zone grise Retester en double

Retest: S/CO < 1 Non réactif

Retest: si au moins l’un des 2 résultats est ≥ 1 Réactif Contrôle sérologique


Page 5

Limites de latechnique

Le test Access HCV Ab PLUS est strictement limité à la détection des anticorps anti-HCV dans le sérumou le plasma humain. Un résultat positif obtenu avec le test Access HCV Ab PLUS doit être confrontéaux renseignements cliniques et confirmé par d'autres tests diagnostics, y compris un test de validation(immuno-blot). En raison de la diversité des réponses immunologiques des patients infectés par le virusde l'hépatite C (notamment lors de séroconversions), des différences de détection entre tests peuvent êtreobservées en fonction de la nature des protéines antigéniques utilisées. Un résultat analytique négatif lorsd'un test de dépistage n'exclut donc pas la possibilité d'une exposition ou d'une infection par le virus del'hépatite C.

Toute technique ELISA peut produire des réactions faussement positives. Il est conseillé de vérifier laspécificité de la réaction pour tout échantillon trouvé positif répétable par une méthode appropriée.

Performancesdu test

Sensibilité

La sensibilité du test a été évaluée en testant 511 échantillons bien documentés dont:

101 sérums PCR positifs provenant de suivis de patients atteints d'hépatite C chronique, 145 échantillonspositifs de patients HCV infectés, 77 échantillons HCV RNA PCR positifs de BBI, 122 échantillonsgénotypés HCV positifs.

Le panel SFTS 97 composé de 36 échantillons positifs dont 26 génotypes et 10 échantillons positifs avecau moins 2 réactivités anticorps HCV PCR négatifs.

Ainsi que les 30 échantillons trouvés positifs lors des études prospectives.

Tous ces échantillons sont représentatifs des différents profils de sérotypes (réactivité isolée, 2 ou 3réactivités) et sont représentatifs des génotypes 1 à 4 les plus couramment rencontrés ainsi que desgénotypes moins fréquents, 4c/d et 5.

Tous ces échantillons ont été trouvés positifs avec Access HCV Ab PLUS.

Aucune différence n'a été mise en évidence lors de la détection des génotypes testés.

La sensibilité du test Access HCV Ab PLUS a été testée sur 74 panels de séroconversion.

Parmi les 29 panels commerciaux de séroconversion testés, Access HCV Ab PLUS détecte les anticorpsanti-HCV avec la même précocité que le test RIBA 3.0 ou avec un retard de quelques jours.

Parmi les 45 panels testés par les experts, Access HCV Ab PLUS est positif sur les mêmes échantillonsque les tests commercialisés fournissant les meilleures performances. Seules 2 séroconversions ont étédétectées quelques jours plus tard et inversement, 2 séroconversions ont été détectées plus précocementavec Access HCV Ab PLUS.

25 échantillons frais positifs en anticorps anti-HCV (maximum une journée après le prélèvement) ont ététestés et tous ont été trouvés positifs.

Spécificité

La spécificité du test a été estimée :

• à 99,83% sur une population de 5995 donneurs de sang, avec un intervalle de confiance à 95% de 99,7% - 99,9%.

• sur une population de 472 patients hospitalisés, 3 échantillons indéterminés avec le test CHIRON RIBA HCV 3.0 ont été trouvés faiblement positif avec Access HCV Ab PLUS.

Aucune réaction aspécifique n'a été observée sur 108 patients atteints d'autres infections virales (hépatitesA ou B, herpès, EBV, facteur rhumatoïde....)


Page 6

Précision

La précision de la trousse Access HCV Ab PLUS a été déterminée par l'analyse d' échantillons négatifs etpositifs.

La répétabilité a été évaluée par l'analyse de ces échantillons testés 30 fois au cours d'une mêmemanipulation; la reproductibilité a été évaluée par l'analyse d'échantillons testés en triplet sur 5 joursdifférents à raison de 2 essais différents par jour.

Les résultats sont regroupés dans les tableaux suivants:

Répétabilité (intra-essai)

Les coefficients sont inférieurs à 5 %.

Reproductibilité (inter-essai)

Les coefficients sont inférieurs à 10%.

Access, UniCel et DxI sont des marques déposées de Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos est une marque déposée de Lumigen, Inc., filiale de Beckman Coulter, Inc.

** ProClin est une marque déposée de Rohm and Haas Company, ou de ses filiales.


Moyenne (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243

D.S. 10202 43987 320857 309281

C.V. % 4,05 3,19 2,93 2,45


Moyenne des rapports(Signal/Valeur seuil)

0,07 1,34 3,18 4,42

D.S. 0,01 0,09 0,21 0,39

C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


Page 7


Utilisation Les calibrateurs Access HCV Ab PLUS Calibrators sont à utiliser avec le test Access HCV Ab PLUS pour la détection des anticorps dirigés contre le virus de l'Hépatite C, dans le sérum et le plasma humain, à l'aide des Systèmes d'Immunoanalyse Access (Access, Access 2, UniCel® DxI®).


Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis.

Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation.


Généralités Les calibrateurs Access HCV Ab PLUS Calibrators sont utilisés pour établir la calibration (pour déterminer la valeur seuil) pour le test Access HCV Ab PLUS. En comparant l'intensité de la lumière générée par un échantillon à la valeur seuil, il est possible de déterminer la présence ou l'absence d'anticorps dirigés contre le virus de l'Hépatite C dans l'échantillon.


Calibrateurs Access HCV Ab PLUS Calibrators

Code 34335: C0–C1, 1 mL/flacon

• Fourni prêt à l'emploi. • Conserver et réfrigérer entre 2 et 10°C.• Mélanger doucement les contenus par retournement avant utilisation. Eviter la formation de mousse. • Une fois ouverts, les calibrateurs sont stables jusqu'à la date de péremption indiquée sur les étiquettes

des flacons, lorsqu'ils sont conservés à 2 - 10°C. • Les valeurs de contrôles de qualité situées en dehors de l'intervalle de confiance sont un signe de

possible détérioration du produit.

C0: Sérum humain négatif en anticorps anti-HCV, azidé (< 0,1% NaN3)

C1: Sérum humain positif en anticorps anti-HCV, azidé (< 0,1% NaN3) et inactivé photochimiquement

Carte de calibration:

1


Page 8


• A utiliser pour un diagnostic in vitro.• Le matériel d'origine humaine utilisé dans la préparation du calibrateur négatif a été testé et trouvé non

réactif en antigène de surface du virus de l'hépatite B (Ag HBs), en anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite C (anti-HCV) et en anticorps dirigés contre les virus de l'immundéficience humaine (anti-HIV-1 et anti-HIV-2). Le matériel d'origine humaine utilisé dans la préparation du calibrateur positif a été testé et trouvé non réactif en antigène de surface du virus de l'hépatite B (Ag HBs) et en anticorps dirigés contre les virus de l'immundéficience humaine (anti-HIV-1 et anti-HIV-2). Du fait qu'aucune méthode de test connue ne peut offrir une garantie absolue de l'absence d'agents infectieux, considérer les réactifs ainsi que tous les échantillons de patients comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les précautions d'usage.

• L'azoture de sodium peut réagir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures métalliques hautement explosifs. Lors de l'évacuation des liquides, déverser un volume d'eau important afin de prévenir la formation de tels azotures 12.

Procédure Pour les procédures de calibration, se reporter aux manuels des systèmes appropriés et au système d’Aide.

Détails de lacalibration

Les Access HCV Ab PLUS CALIBRATORS sont fournis sous deux formes: calibrateur négatif C0 et calibrateur positif C1, préparés à partir de pool de sérums humains négatifs et de pool de sérums humains positifs en anticorps anti-HCV, inactivés photochimiquement.

Le test Access HCV Ab nécessite une courbe d'étalonnage (détermination de la valeur seuil). La courbe d'étalonnage est "active" sur l'automate Access pendant 28 jours pour un seul lot de pack réactifs bien identifié par son code à barre. Au bout des 28 jours ou si un autre lot de pack réactifs a été chargé sur l'automate, la courbe est automatiquement invalidée.

Une calibration du test Access HCV Ab PLUS nécessite 225 µL / 5 gouttes (Access/Access 2) ou 305 µL / 7 gouttes (UniCel DxI) de chacun des 2 calibrateurs (valeur seuil = RLU C1 x 0,23).



Page 9


Utilisation Le contrôle de qualité Access HCV Ab PLUS QC est un sérum de contrôle de qualité qui permet aux laboratoires de suivre la précision analytique du test Access HCV Ab PLUS.


Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis.

Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation.


Généralités Le contrôle de qualité Access HCV Ab PLUS QC est à utiliser comme sérum de contrôle de qualité pour le suivi au laboratoire de la précision analytique du test Access HCV Ab PLUS. L'utilisation d'un contrôle de qualité est indiquée pour la détection et la correction d'erreurs de procédure inhérentes à la manipulation des trousses, leur qualité ou à l'instrumentation utilisée, et fait partie intégrante des bonnes pratiques de laboratoires15, 16, 19, 21, 22.

Un contrôle négatif et un contrôle faiblement positif sont fournis pour permettre le suivi des performances dans la zone la plus pertinente du spectre analytique de ces tests.


Contrôle de qualité Access HCV Ab PLUS QC

Code 34339: 2,5 mL/flacon

• Fourni prêt à l'emploi. • Mélanger doucement les contenus par retournement avant utilisation. Eviter la formation de mousse. • Le contrôle de qualité est stable jusqu'à la date de péremption indiquée sur les étiquettes des flacons,

lorsqu'ils sont conservés à 2 - 10°C. • Une fois ouverts, les flacons sont stables pendant 30 jours, lorsqu'ils sont proprement manipulés et

conservés.

QC 1: sérum humain azidé (< 0,1% NaN3). Négatif (non-réactif) pour les anticorps anti-HCV.

QC 2: sérum humain azidé (< 0,1% NaN3). Positif (réactif) pour les anticorps anti-HCV, inactivé photochimiquement.

Carte des valeurs QC:

1


Page 10


• A utiliser pour un diagnostic in vitro.• Le matériel d'origine humaine utilisé dans la préparation du contrôle de qualité négatif a été testé et

trouvé non réactif en antigène de surface du virus de l'hépatite B (Ag HBs), en anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite C (anti-HCV) et en anticorps dirigés contre les virus de l'immundéficience humaine (anti-HIV-1 et anti-HIV-2). Le matériel d'origine humaine utilisé dans la préparation du contrôle qualité positif a été testé et trouvé non réactif en antigène de surface du virus de l'hépatite B (Ag HBs) et en anticorps dirigés contre les virus de l'immundéficience humaine (anti-HIV-1 et anti-HIV-2). Du fait qu'aucune méthode de test connue ne peut offrir une garantie absolue de l'absence d'agents infectieux, considérer les réactifs ainsi que tous les échantillons de patients comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les précautions d'usage.

• L'azoture de sodium peut réagir avec la tuyauterie en plomb ou en cuivre pour former des azotures métalliques hautement explosifs. Lors de l'évacuation des liquides, déverser un volume d'eau important afin de prévenir la formation de tels azotures 12.

Procédure Les contrôles de qualité Access HCV Ab PLUS QC devront être traités de la même façon que les échantillons de patients et testés en suivant les instructions contenues dans la trousse accompagnant l'instrument utilisé.

Note: Pour les systèmes Access, se référer au Guide Opérateur et au Manuel de Référence des Systèmes d'Immunoanalyse Access pour le paramétrage, les demandes de QC et l'édition des valeurs de contrôle.

Pour utiliser le contrôle de qualité Access HCV Ab PLUS QC sur les Systèmes d'Immunoanalyse Access, un volume minimum de de 175 µL / 4 gouttes (Access / Access 2) ou de 255 µL / 6 gouttes (UniCel DxI) est nécessaire pour chacun des deux contrôles (détermination réalisée en simple).

Limites de latechnique

Si une contamination microbienne ou une floculation exagérée est constatée dans un flacon, mettre celui-ci de côté et ne pas l'utiliser. Ce contrôle contient de l'azide de sodium qui a la particularité d'être un inhibiteur de la peroxydase. Les systèmes qui utilisent la peroxydase pour l'étape de détection ne devront pas utiliser ce type de contrôle.

Valeursattendues

Les valeurs attendues du contrôle de qualité pour le test Access HCV PLUS sont affichées, pour chaque lot, sur la carte de "QC" contenue dans le coffret Access HCV Ab PLUS QC. Les valeurs obtenues par les laboratoires utilisateurs devront se situer dans les intervalles de confiance indiqués. Cependant, chaque laboratoire devra déterminer sa propre valeur moyenne et ses intervalles de confiance, quand suffisamment de mesures auront été effectuées. Pour les autres tests (non Access), le taux de réactivité spécifique pouvant varier d'un fabricant de réactifs à un autre, d'une procédure à une autre, d'un lot à un autre ou bien d'un laboratoire à un autre, chaque laboratoire devra déterminer le taux de réactivité spécifique et établir ses propres intervalles de confiances 18, 19, 20, 21. L'intervalle de confiance pourrait être défini par toutes les valeurs comprises à ± 2 SD par rapport à la moyenne de 20 points, correspondants à 20 mesures distinctes, obtenues sur une période de 30 jours 22.

BIO-RAD GARANTIT CES PRODUITS POUR L'UTILISATION DECRITE SUR L'ETIQUETAGE ET DANS LA NOTICE FOURNIE. BIO-RAD DECLINE TOUTE RESPONSABILITE DANS LE CAS DE VENTE OU D'UTILISATION POUR TOUT AUTRE USAGE. EN AUCUN CAS, BIO-RAD NE PEUT ETRE TENU RESPONSABLE DE DOMMAGES SURVENANT EN DEHORS DE CETTE GARANTIE FORMELLE.



Page 11

Bibliographie

1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome Science, 1989, 244: 359-362.

2 Choo QL., Richman KH., Han JH., et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1991, 88: 2451-2455.

3 Kuo G., Choo QL., Alter HJ., et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A non-B hepatitis. Science 1989, 244: 362-364.

4 Tibbs C.J. Methods of transmission of hepatitis C Journal of of viral Hepatitis, 1995, 2: 113-119.5 Purcell R. The Hepatitis C virus: overview Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 11-14.6 Seeff L.B. Natural History of Hepatitis C Hepatology, 1997, 26, 3, suppl 1: 21-28.7 Yoshikura H., Hijkata N., Nakajima N. and Shimizy Y.K. Replication of Hepatitis C virus Journal of of viral Hepatitis, 1996, 3:












Page 12

05/2011

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459


Pagina 1


Finalità delprodotto

Access HCV Ab PLUS è una tecnica immunoenzimatica in chemiluminescenza con particelleparamagnetiche per l'individuazione degli anticorpi diretti contro il virus dell'Epatite C nel siero o nelplasma umano con Access Immunoassay Systems (Access, Access 2, UniCel®DxI®).

Per uso diagnostico in vitro

Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema diassicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodottifiniti.

Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltantose risulta conforme ai criteri di approvazione.

Tutta la documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata negli archividella nostra società.

Caratteristichegenerali

Il virus dell'epatite C (HVC) è attualmente ritenuto responsabile della maggior parte delle epatiti non-Anon-B (HNANB) post-trasfusionali come pure di quelle trasmesse per via parenterale non dovute atrasfusioni (tossicomani, emodializzati, trapiantati) 1,2,3,4,5,6,7. Questi tipi di epatite si distinguono per ilfatto che dal 50% al 60% dei pazienti infetti svilupperanno con molta probabilità un'epatite cronica con ilrischio di evoluzione verso cirrosi ed epatocarcinoma 8,9.

L'istituzione del monitoraggio obbligatorio degli anticorpi anti-HCV per ciascuna donazione di sangueha permesso di ridurre in modo significativo i rischi di contagio 10,11.

Il test Access HCV Ab PLUS è stato creato con lo scopo di individuare gli anticorpi anti-HCVeventualmente presenti nel siero o nel plasma umano contribuendo in tal modo alla prevenzione deicontagi per via parenterale. Si rivela altresì utile nella diagnosi di infezioni da HCV. In tutti i casi,l'interpretazione dei risultati deve essere associata ai dati clinici e agli altri marker sierologici.

Principio delmetodo

Il test Access HCV Ab PLUS è un dosaggio immunoenzimatico di tipo EIA indiretto. Questo testconsiste nell'aggiungere, in una vaschetta per reazioni, ad un campione (di siero, plasma o di controllo),particelle magnetiche sensibilizzate con un peptide che mima alcuni epitopi immunodominanti dellaregione della capside e alcune proteine ricombinanti site in regione NS3 e NS4. Durante l'incubazione, leIgG e le IgM presenti nel campione vengono captate dalla fase solida. Dopo l'incubazione, la separazionein un campo magnetico e i lavaggi permettono di eliminare prodotti non legati alla fase solida. In unaseconda fase, viene aggiunto nella vaschetta un coniugato di anticorpi anti-IgG umane, legati allafosfatasi alcalina. Dopo una ulteriore incubazione, il coniugato in eccesso viene eliminato tramitelavaggio. Viene quindi aggiunto un substrato chemiluminescente (Lumi-Phos* 530), e i fotoni prodottidalla reazione enzimatica vengono misurati mediante un lumenometro. L'intensità del segnale emesso èproporzionale alla quantità di coniugato enzimatico presente al termine della reazione e quindi al tasso di


Pagina 2

anticorpi anti-HCV presenti nel campione testato. Per confronto con il valore-soglia determinato durantela calibratura del test sullo strumento, si può pertanto determinare la presenza o assenza di anticorpianti-HCV in tale campione.

Caratteristichedel prodotto

Kit di reagenti Access HCV Ab PLUSCat. N. 34330: 100 determinazioni, 2 confezioni, 50 test/confezione• Il prodotto è fornito pronto per l'uso. • Conservare le confezioni di reagenti in posizione verticale e raffreddarle a 2-10°C prima di caricarle o

di tenerle nell'apparecchio. • Al momento del primo utilizzo nell'apparecchio, agitare la confezione di reagente fino ad ottenere una

sospensione completa delle particelle. • La confezione di reagente è stabile fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta se conservata a

2-10°C. • Una volta aperta, lasciare la confezione caricata sull'apparecchio in funzione oppure conservarla a

2-10°C e utilizzarla entro i 28 giorni successivi. • I segni di un possibile deterioramento sono la rottura dello strato di elastomero sulla confezione o la

presenza di valori di controllo al di fuori degli intervalli di confidenza.

Avvertenze eprecauzioni

• Al momento del primo utilizzo nell'apparecchio, agitare la confezione di reagente fino ad ottenere una sospensione completa delle particelle.

• Per uso diagnostico in vitro.• L'azide di sodio può reagire con le tubature di piombo o rame e formare azoturi metallici ad alto

potere esplosivo. Durante l'evacuazione dei liquidi, versare una quantità di acqua consistente al fine di prevenire la formazione di detti azoturi12.

• Il ProClin** 300 è un potenziale allergizzante. Evitare qualunque contatto di reagente con la pelle o gli abiti. In caso di contatto con il reagente, lavare con abbondante acqua.

Prelievo epreparazionedel campione

1. Natura del campione siero o plasma (eparina, EDTA o citrato)2. Per quanto riguarda la manipolazione e il trattamento dei campioni di sangue applicare le seguenti

norme13,14:• Prelevare i campioni ematici rispettando le precauzioni di routine per la puntura endovenosa.• Lasciare che i campioni di siero coagulino completamente prima della centrifugazione, almeno 1 ora.• Conservare sempre le provette ben chiuse.• Centrifugare il campione per un minimo di 15 minuti a 1500 g.3. Per quanto riguarda la conservazione dei campioni di sangue applicare le seguenti norme 13,14:• Non conservare i campioni a temperatura ambiente per una durata superiore alle 8 ore.• Se il test non è completato entro 8 ore, raffreddare il campione a 2-10°C.• Se il test non è completato entro 48 ore, o per i campioni da spedire, congelare a -20°C.13

• Scongelare i campioni una sola volta. Lo scongelamento deve essere rapido mediante riscaldamento per qualche minuto a bagnomaria a 40°C per limitare la precipitazione della fibrina.

R1a: Particelle paramagnetiche sensibilizzate con proteine ricombinanti (NS3 eNS4)e un peptide (Capside) in sospensione in un tampone Tris, azide di sodio (<0,1%).

R1b: Diluente per il campione, contenente azide di sodio (< 0,1%).

R1c: Diluente per il coniugato contenente un surfattante, azide di sodio (< 0,1%).

R1d: Coniugato = anticorpi (capra) anti-IgG umane/fosfatasi alcalina in sospensionein un tampone Tris e contenente un surfattante, azide di sodio (< 0,1%) eProClin** 300 (< 0,1%).


Pagina 3

• Una volta scongelato, centrifugare di nuovo il campione per 15 minuti a 3000 g e trasferirlo in un bicchierino per effettuare la prova, questo al fine di eliminare le particelle o aggregati di fibrina in sospensione che possono produrre risultati falsi positivi.

4. I campioni contenenti 200 mg/L di bilirubina, 90 g/L di albumina, e campioni lipemici contenenti l'equivalente di 36 g/L di trioleina (trigliceride) e i campioni emolizzati contenenti fino a 5 g/L di emoglobina non influenzano il risultato.

Materialiforniti

R1 Kit di reagenti Access HCV Ab PLUS

Materialinecessari ma

non forniti

1. Calibratori Access HCV Ab PLUS CalibratorsComposti di un siero negativo e un siero positivo per gli anticorpi anti-HCV Codice. 34335

2. Controlli di qualità: Access HCV Ab PLUS QC Codice. 34339-o altri sieri di controllo in commercio.

3. Substrato: Access Substrate Cat. N. 81906

4. Access, Access 2Tampone di Lavaggio: Access Wash Buffer II, Cat. N. A16792

5. UniCel DxITampone di Lavaggio: UniCel DxI Wash Buffer II, Cat. N. A16793

6. SistemiAccess, Access 2, UniCel DxI

CommentiProcedurali

1. Consultare i relativi manuali di sistema e/o l'Help system per la descrizione specifica di: installazione, avvio, principi di funzionamento, caratteristiche specifiche del sistema, istruzioni operative, procedure di calibrazione, limiti operativi e precauzioni, rischi, manutenzione e riparazione guasti.

2. Per ogni dosaggio sono utilizzati venticinque (25) μL di campione (in aggiunta al volume morto)3. Il test è realizzato a 37°C e dura 55 minuti.

Procedura Per informazioni su: gestione dei campioni, configurazione dei test, richiesta test e visualizzazione deirisultati dei test, consultare i relativi manuali di sistema e/o l’Help system.

Dettagli dicalibrazione

Per tutti i test è necessaria una curva di calibratura. I dati di calibratura che determinano il valore sogiadel test sono validi per un periodo di 28 giorni. Di conseguenza, per il test Access HCV Ab PLUS, ènecessario eseguire ogni 28 giorni una calibratura a partire dai calibratori C0 e C1 del kit Access HCVAb PLUS Calibrators. Per istruzioni dettagliate su principi di calibrazione, configurazione dei calibratori, inserimento dirichieste test sui calibratori e visualizzazione dei dati di calibrazione, consultare i relativi manuali disistema e/o l’Help system.

Controllo diQualità

Si consiglia di effettuare i controlli sulla qualità almeno ogni 24 ore e all'avvio del sistema prima dicominciare l'elaborazione dei campioni prelevati dai pazienti. Utilizzare il prodotto proposto "AccessHCV Ab PLUS QC" o adottare sieri di controllo qualità di origini diverse. Seguire le istruzioni delproduttore per l'eventuale ricostituzione e la conservazione. Ciascun laboratorio dovrà stabilire un valoremedio convalidato e degli intervalli di confidenza per seguire il percorso analitico del test. I risultati deisieri di controllo che non rientrano negli intervalli di confidenza possono essere indice di risultati erratidei test. In tal caso esaminare tutti i risultati dei test effettuati a partire dall'ultimo controllo qualitàconvalidato per questo parametro.

Per ottenere risultati ottimali, si dovrebbe condurre la calibrazione del test e gli esami dei pazienti consimili condizioni di temperatura. Se la temperatura ambiente del laboratorio varia più di +/- 5°C dallatemperatura di calibrazione, rivedere i risultati del controllo di qualità e ricalibrare se necessario.


Pagina 4

Per informazioni dettagliate sulla visualizzazione dei risultati dei controlli di qualità, consultare i relativimanuali di sistema e/o l’Help system.

Risultati I risultati dei test dei pazienti sono determinati automaticamente dal software del sistema che utilizza il(Valore-soglia = media dei calibratori positivi (RLU) x 0,23) determinato dalla calibratura attiva. Irisultati (Segnale/Valore-soglia= S/CO) vengono considerati "reattivi" o "non reattivi" in funzione delrapporto con il valore-soglia" (rispettivamente, segnale maggiore, uguale o inferiore al valore-soglia).Tuttavia, i risultati inferiori di ~10% rispetto al "valore-soglia" devono essere interpretati con prudenza erianalizzati in duplicato. Questa zona grigia raccomandata (da 0,9 a meno di 1,0) deve essere salvata, acura dell'utente, nel software del sistema (fare riferimento ai manuali del sistema appropriati e/o la guidadel sistema per le istruzioni complete sulla zona grigia per un test qualitativo). In questo modo vieneautomaticamente prodotto un segno distintivo che consente una rapida identificazione di un risultatosituato nella zona grigia. I risultati dei test dei pazienti possono essere riesaminati nella schermata deirisultati dei campioni. Per le istruzioni complete sulla revisione dei risultati, consultare i relativi manualidel sistema e/o l'Help system.

I campioni con un rapporto (S/CO) inferiore a 0,9 vengono considerati non reattivi con il test AccessHCV Ab PLUS. I campioni con un rapporto (S/CO) uguale o maggiore di 1 vengono inizialmenteconsiderati reattivi con il test Access HCV Ab PLUS, pertanto devono essere rianalizzati in duplicatoprima dell'interpretazione finale.

Tutti i campioni, inizialmente reattivi o con risultati nella zona grigia, devono essere rianalizzati induplicato mediante il test Access HCV Ab PLUS:

• Se i risultati dei duplicati sono < 1,0 S/CO, il campione deve essere considerato non reattivo (negativo)per il test HCV Ab PLUS.

• Se uno dei 2 risultati è 1,0 S/CO, il risultato iniziale non è ripetibile e il campione viene dichiarato"reattivo" per il test Access HCV Ab PLUS. Si consiglia tuttavia di rianalizzare i campioni reattiviripetibili con un test EIA di seconda linea e un metodo di conferma per stabilirne chiaramente lapositività.

Limiti dellaprocedura

Il test Access HCV Ab PLUS è destinato esclusivamente alla determinazione degli anticorpi anti-HCVnel siero o nel plasma umano. Prima di poter essere dichiarati positivi per un'infezione, i risultati positivial test Access HCV Ab PLUS devono essere valutati nell'ambito dei dati clinici e confermati da altri testdiagnostici, compreso un metodo di conferma (immunoblot).

Data la diversità delle reazioni immunologiche dei pazienti infetti dal virus dell'epatite C (soprattuttodurante le sieroconversioni), a seconda del tipo di proteine antigeniche utilizzate, è possibile osservarealcune differenze fra i risultati del test. Un risultato negativo a un test di screening non esclude lapossibilità di un'eventuale esposizione o infezione dal virus dell'epatite C.

Tutte le tecniche ELISA possono generare false reazioni positive. Si raccomanda di verificare laspecificità della reazione di tutti i campioni positivi ripetibili mediante un metodo atto a dimostrare lapresenza di anticorpi anti-HCV.

Interpretazione dei risultati del test HCV Ab PLUS

RisultatoRapporto: Segnale/Valore-soglia Interpretazione Test supplementari

S/CO < 0,9 Non reattivoS/CO 1 Reattivo Rianalizzare in duplicato

S/CO: 0,9 - 1,0 Zona grigia Rianalizzare in duplicatoRianalizzare: S/CO < 1 Non reattivo

Rianalizzare: se uno dei 2 risultati è 1 Reattivo Metodo di conferma


Pagina 5

Caratteristichespecifiche di

sistema

SensibilitàLa sensibilità del test è stata valutata analizzando 511 campioni ben documentati, tra cui:

101 sieri PCR positivi provenienti da follow-up di pazienti affetti da epatite C cronica, 145 campionipositivi di pazienti infetti da HCV, 77 campioni positivi a HCV RNA PCR del panel BBI e 122 campionicon genotipo HCV positivi.

Il panel SFTS 97 è formato da 36 campioni positivi di cui 26 con definizione del genotipo e 10 positivicon almeno 2 reattività anticorpali HCV PCR negative, come per i 30 campioni risultati positivi nel corsodi studi prospettici.

Tutti questi campioni sono rappresentativi di vari profili di sierotipi (reattività isolata, 2 o 3 reattività), deigenotipi HCV da 1 a 4 più comuni nonché dei genotipi meno frequenti, 4c/d e 5.

Tutti i campioni considerati sono risultati positivi con ACCESS HCV Ab PLUS.

Nel corso della rivelazione dei genotipi testati, non sono emerse differenze.

La sensibilità del test Access HCV Ab PLUS è stata testata su 74 panel di sieroconversione.

Tra i 29 panel di conversione in commercio analizzati, Access HCV Ab PLUS rivela gli anticorpianti-HCV con la stessa precocità del test RIBA 3.0 o con un ritardo di pochi giorni.

Tra i 45 panel testati dagli esperti, Access HCV Ab PLUS risulta positivo sugli stessi campioni che i testcommerciali forniscono come aventi le migliori prestazioni. Soltanto 2 sieroconversioni sono staterivelate con due giorni di ritardo e al contrario, 2 sieroconversioni sono state rivelate più precocementecon Access HCV Ab PLUS.

25 campioni aggiuntivi HCV freschi (entro 1 giorno dal prelievo ematico) sono stati testati e sono statitrovati tutti positivi.

SpecificitàLa specificità del test è stata stimata:

• pari al 99,83 % (dal 99,7 % al 99,9 % con 95 % d'intervallo di confidenza) su una popolazione di 5995 donatori di sangue.

• su una popolazione di 472 pazienti ospedalizzati, 469 sono risultati negativi, mentre 3 campioni indeterminati con il test CHIRON RIBA HCV 3.0 sono risultati bassi positivi con Access HCV Ab PLUS.

Non si sono osservate reazioni aspecifiche su 108 pazienti affetti da altre infezioni virali (epatite A o B,herpes, EBV, fattore reumatoide, ecc.) non collegate con il virus del'epatite C.

PrecisioneLa precisione del test Access HCV Ab PLUS è stata determinata mediante l'analisi di campioni negativie positivi. La ripetibilità è stata valutata analizzando 4 campioni per 30 volte nel corso dello stesso esame.La riproducubilità è stata valutata analizzando questi campioni in triplicato effettuando 2 diversi esami algiorno per 5 giorni. I risultati sono riassunti nelle tabelle seguenti:

Ripetibilità (intra-dosaggio)

I coefficienti risultano inferiori al 5 %.


Media (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243D.S. 10202 43987 320857 309281

C.V. % 4,05 3,19 2,93 2,45


Pagina 6

Riproducibilità (inter-dosaggio)

I coefficienti sono inferiori al 10%.

Access, UniCel e DxI sono marchi registrati di Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos è un marchio registrato di Lumigen, Inc., una consociata di Beckman Coulter, Inc.

** ProClin è un marchio registrato di Rohm and Haas Company, o sue filiali.


Media dei rapporti(Segnale/V-S)

0,07 1,34 3,18 4,42

D.S. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78

Access HCV Ab PLUS A33601CPagina 7



Access HCV Ab PLUS Calibrators devono essere utilizzati con il test Access HCV Ab PLUS per l'individuazione degli anticorpi diretti contro il virus dell'Epatite C nel siero e nel plasma umano con Access Immunoassay Systems (Access, Access 2, UniCel® DxI®).


Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti.

Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione.

Tutta la documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata negli archivi della nostra società.


I calibratori Access HCV Ab Plus Calibrators sono impiegati per effettuare la calibratura (determinare il valore soglia) del test Access HCV Ab PLUS. Mettendo a confronto l'intensità della luce generata da un campione e quella del valore soglia, è possibile determinare la presenza o assenza di anticorpi diretti contro il virus dell'epatite C presente nel campione.


Access HCV Ab PLUS CalibratorsCat. N. 34335: C0–C1: 1 mL/flaconcino• Il prodotto è fornito pronto per l'uso. • Conservare a 2-10°C.• Mescolare delicatamente il contenuto capovolgendo il flacone prima dell'uso. Evitare la formazione di

schiuma. • Una volta aperti, i controlli rimangono stabili fino alla data di scadenza indicata sulle etichette dei

flaconi, se conservati ad una temperatura pari a 2-10°C. • I valori di controllo di qualità che non rientrano nell'intervallo di confidenza sono indice di un

possibile deterioramento del prodotto.

C0: Siero umano negativo agli anticorpi anti-HIV-1, contenente azide (< 0,1% NaN3).

C1: Siero umano positivo agli anticorpi anti-HCV, contenente azide (< 0,1% NaN3) e inattivato.

Scheda di calibrazione:

1

A33601C Access HCV Ab PLUS Pagina 8


• Per uso diagnostico in vitro.• Il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione del calibratore positivo è stato sottoposto a

test ed è risultato non reattivo all'antigene di superficie del virus dell'epatite B (Ag HBs) e agli anticorpi diretti contro i virus dell'immunodeficienza umana (anti-HIV-1 e anti-HIV-2), escludendo il calibratore positivo C1 che risulta positivo agli anticorpi anti-HCV. Poiché nessun metodo di analisi finora conosciuto può dare la certezza assoluta dell'assenza di agenti infettivi, considerare sia i reagenti sia tutti i campioni prelevati dai pazienti come potenzialmente infettivi e maneggiarli con le precauzioni d'uso.

• L'azide di sodio può reagire con le tubature di piombo o rame e formare azoturi metallici ad alto potere esplosivo. Durante lo smaltimento dei liquidi, versare una quantità di acqua consistente onde prevenire la formazione di detti azoturi 12.

Procedura Per le procedure di calibrazione, consultare i relativi manuali di sistema e/o l'Help system.

Dettagli dicalibrazione

I calibratori Access HCV Ab PLUS Calibrators sono forniti in due forme: calibratore negativo C0 e calibratore positivo C1, preparati a partire da sieri negativi e da pool di sieri umani negativi e pool di sieri umani positivi agli anticorpi anti-HCV inattivati.

Il test Access HCV Ab PLUS necessita di una curva di calibratura (determinazione del valore soglia), che rimane "attiva" sul sistema automatico di Access per un periodo di 28 giorni per un solo lotto di reagenti ben identificato dal codice a barre. Al termine dei 28 giorni, o se sul sistema è stato caricato un altro lotto di reagenti, la curva viene invalidata automaticamente.

Una calibratura del test Access HCV Ab PLUS necessita di circa 225 μl (5 gocce) / bicchiere dosatore (Access, Access 2) o 305 μl (7 gocce) / bicchiere dosatore (UniCel DxI) di ciascun calibratore (valore-soglia = RLU C1 x 0,23); la calibrazione programmata per Access HCV Ab PLUS eseguirà i test C0 e C1 in triplicato.



Pagina 9



Il controllo di qualità Access HCV Ab PLUS QC è un siero di controllo della qualità che consente ai laboratori di monitorare la precisione analitica del test Access HCV Ab PLUS.


Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti.

Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione.

Tutta la documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata negli archivi della nostra società.


I controlli Access HCV Ab PLUS QC devono essere impiegati come siero per il controllo di qualità per monitorare in laboratorio la precisione analitica del test Access HCVAb PLUS o di altri metodi sierologici di screening degli anticorpi anti-HCV. L'utilizzo di un controllo di qualità è indicato per rilevare e correggere errori procedurali inerenti alla manipolazione dei kit, alla loro qualità o alla strumentazione utilizzata, ed è parte integrante delle buone pratiche di laboratorio 15,16,17,19,21,22. Vengono forniti un controllo negativo e un controllo positivo basso per consentire il monitoraggio delle performance nell'area più idonea della gamma analitica di questi test.


Controlli di qualità Access HCV Ab PLUS QCCat. N. 34339: 2,5 mL/flaconcino• Il prodotto è fornito pronto per l'uso. • Mescolare delicatamente il contenuto capovolgendo il flacone prima dell'uso. Evitare la formazione di

schiuma. • Il controllo di qualità rimane stabile fino alla data di scadenza indicata sulle etichette dei flaconi, se

conservati ad una temperatura pari a 2-10°C. • Una volta aperti, i flaconi sono stabili per 30 giorni se maneggiati e conservati in maniera adeguata.

QC 1: Siero umano negativo (non-reattivo) agli anticorpi anti-HCV, contenente azide (< 0,1% NaN3).

QC 2: Siero umano positivo (reattivo) agli anticorpi anti-HCV, contenente azide (< 0,1% NaN3), inattivato.

Scheda valori QC:

1


Pagina 10


• Per uso diagnostico in vitro.• Il materiale di origine umana utilizzato nella preparazione del controllo positivo è stato sottoposto a

test ed è risultato non reattivo all'antigene di superficie del virus dell'epatite B (Ag HBs), agli anticorpi diretti contro il virus dell'immunodeficienza umana (anti-HIV-1 e anti-HIV-2) e contro gli anticorpi del virus dell'epatite C (HCV) ad eccezione dei controlli QC2 che risultano positivi agli anticorpi anti-HCV. Poiché nessun metodo di analisi finora conosciuto può dare la certezza assoluta dell'assenza di agenti infettivi, considerare sia i reagenti sia tutti i campioni prelevati dai pazienti come potenzialmente infettivi e maneggiarli con le precauzioni d’uso.

• L'azide di sodio può reagire con le tubature di piombo o rame e formare azoturi metallici ad alto potere esplosivo. Durante lo smaltimento dei liquidi, versare una quantità di acqua consistente al fine di prevenire la formazione di detti azoturi 12.

Procedura I controlli di qualità Access HCV Ab PLUS QC devono essere trattati allo stesso modo dei campioni dei pazienti e sottoposti a test seguendo le istruzioni contenute nella confezione dell'apparecchio utilizzato.

Nota: per informazioni su principi dei controlli di qualità, configurazione dei controlli, inserimento richiesta test campioni di controllo di qualità e visualizzazione dei dati dei controlli di qualità consultare i relativi manuali di sistema e/o l’Help system.

Per utilizzare il controllo di qualità Access-HCV Ab PLUS QC nei sistemi di immunodosaggio Access, è necessario un volume minimo di 175 μl (4 gocce) / bicchiere dosatore (Access, Access 2) o 255 μl (6 gocce) / bicchiere dosatore (UniCel DxI) per ciascuno dei due controlli (determinazione in singolo).

Limiti dellaprocedura

Scartare e non utilizzare un flacone che presenta segni di contaminazione microbica o un'eccessiva flocculazione.

Valori attesi I valori attesi del controllo di qualità del test Access HCV PLUS sono indicati, per ogni lotto, sulla scheda "QC" contenuta nella confezione di Access HCVAb PLUS QC. I valori ottenuti dai laboratori che utilizzano il test devono rientrare negli intervalli di confidenza indicati. Tuttavia, ogni laboratorio deve stabilire i propri valori medi e gli intervalli di confidenza dopo aver eseguito un numero sufficiente di misurazioni.18

Per gli altri test (non Access), poiché il tasso di reattività specifica può variare fra i diversi produttori di reagenti, fra le diverse procedure, fra i vari lotti o anche fra i laboratori, ogni laboratorio dovrà determinare il tasso specifico di reattività e stabilire i propri intervalli di confidenza 18,19,20,21. L'intervallo di confidenza potrebbe essere definito da tutti i valori compresi in ± 2 DS rispetto alla media di 20 punti, corrispondenti a 20 diverse misurazioni, ottenute in un periodo di 30 giorni 22.

BIO-RAD GARANTISCE QUESTI PRODOTTI PER L'USO DESCRITTO SULL'ETICHETTA E SUL FOGLIETTO ILLUSTRATIVO INCLUSO NELLA CONFEZIONE. BIO-RAD DECLINA QUALUNQUE RESPONSABILITÀ IN CASO DI VENDITA O UTILIZZO PER USO DIVERSO DA QUELLO INDICATO. IN NESSUN CASO BIO-RAD PUO' ESSERE RITENUTA RESPONSABILE DEI DANNI CHE POSSONO PRESENTARSI AL DI FUORI DELLA PRESENTA GARANZIA FORMALE.



Pagina 11

Bibliografia1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis














11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459


Page 1


Paskirtis „Acces HCV Ab PLUS“ tyrimas – tai imunofermentinis metodas hepatito C viruso antikūnams žmogaus serume irplazmoje aptikti naudojant „Access“ imuninių tyrimų sistemas („Access“, „Access 2“, „UniCel® Dxl®).

Skirta in vitro diagnostikai

Visiems gaminamiems ir komerciškai realizuojamiems reagentams taikoma visapusė kokybės sistema,pradedant nuo žaliavų gavimo ir baigiant galutiniu gaminio realizavimu.

Visos partijos pateikiamos kokybės kontrolei ir išleidžiamos į rinką tik tuomet, jei atitinka priimtinumokriterijus.

Mūsų įmonė saugo su kiekvienos partijos gamyba ir kontrole susijusius įrašus.

Santrauka irpaaiškinimas

Hepatito C virusas (HCV) laikomas pagrindine potransfuzinio nei A, nei B hepatito (NANBH) irnetransfuziniu parenteraliniu keliu (toksikomanai, hemodializės pacientai, transplantacijų pacientai)perduodamo hepatito priežastimi.1,2,3,4,5,6,7 Nuo 50 % iki 60 % hepatitu C užsikrėtusių pacientų galiišsivystyti chroniškas hepatitas, yra rizikos išsivystyti cirozei arba hepatoceliulinei karcinomai.8,9

Kiekvienos donorų kraujo porcijos privalomojo tikrinimo praktika (ieškant HCV antikūnų) žymiaisumažino užkrato pernešimo per infekuotą kraują riziką.10,11

„Access HCV Ab PLUS“ tyrimas skirtas HCV antikūnams žmogaus serume arba plazmoje aptikti, todėlpadeda užkirsti kelią parenteralininiam užkratui. Jis taip pat naudingas HCV infekcijai diagnozuoti.Abiem atvejais rezultatai turėtų būti interpretuojami kartu su kitais klinikiniais duomenimis ir kitaisserologiniais žymenimis.

Procedūrosprincipai

„Access HCV Ab PLUS“ tyrimas – tai netiesioginis imunofermentinis tyrimas. Mėginys (serumas,plazma arba kontrolė) supilamas į reakcijos indą su paramagnetinėmis dalelėmis, padengtomis peptidais,imituojančiais imunodominantinius epitopus iš kapsido srities, ir rekombinantiniais baltymais (NS3 irNS4). Inkubacijos metu mėginyje esančius IgG ir IgM sugauna kietoji fazė. Po inkubacijos kietoji fazėsurenkama magnetiniu lauku ir nesukibusios medžiagos pašalinamos plovimų serija. Antruoju etapu įreakcijų indą pridedama konjugato (ožkos anti-žmogaus IgG antikūno, pažymėto šarmine fosfataze). Poinkubacijos likęs konjugatas pašalinamas dar viena plovimų serija. Pridedama chemiliuminescenciniosubstrato „Lumi-Phos* 530“ ir per fermentinę reakciją susidarę fotonai išmatuojami liuminometru.Skleidžiamo signalo intensyvumas yra proporcingas esamo fermento konjugato kiekiui, taigi, ir mėginyjeesančių anti-HCV antikūnų titrui. Palyginant tyrimo kalibravimu nustatytą ribinę vertę su mėginiosignalu nustatoma, ar yra anti-HCV antikūnų.


Page 2

Informacijaapie produktą

„Access HCV Ab PLUS“ reagentų paketas

Kat. Nr. 34330: 100 tyrimų, 2 paketai, 50 tyrimų pakete

• Paruošta naudoti.• Prieš naudojant su prietaisu laikyti statmenai ir vėsinamą 2–10°C temperatūroje.• Šiomis sąlygomis reagentų paketas išlieka stabilus iki etiketėje nurodytos galiojimo pabaigos datos.• Prieš pirmąsyk supildami reagentus, sumaišykite turinį lengvai pavartydami paketą keletą kartų, kad

visos dalelės vėl imtų plūduriuoti.• Po pirmojo panaudojimo laikykite prietaise arba vėsinamą (statmenai) ir sunaudokite per 28 dienas.• Reagentai gali būti nebetinkami, jei pažeistas paketo elastomerinis sluoksnis arba kokybės kontrolės

vertės yra už ribų.

Įspėjimai irperspėjimai

• Prieš pirmąkart įdėdami į karuselę pakratykite paketą, kad visos dalelės vėl imtų plūduriuoti.• Skirta in vitro diagnostikai.• Natrio azidas gali reaguoti su švino ir vario vandentiekio dalimis, sudarydamas labai sprogius metalų

azidus. Pašalinę, išplaukite dideliu kiekiu vandens, kad nesikauptų azidai.12

• „ProClin** 300“ gali didinti odos jautrumą. Venkite užsipilti ar apsitaškyti šiuo reagentu odą ar drabužius. Jei patektų reagento, stropiai nuplaukite vandeniu.

Mėginiopaėmimas irparuošimas

1. Rekomenduojama naudoti serumo arba plazmos (heparino, EDTA ar citrato) mėginius.2. Kraujo mėginius tvarkykite ir apdorokite laikydamiesi šių standartų:13, 14

• Kraujo mėginius imkite laikydamiesi įprastų venepunkcijos atsargumo priemonių.• Prieš centrifuguodami leiskite mėginiams pakankamai sukrešėti (ne trumpiau kaip 1 val.).• Mėgintuvėlius visuomet laikykite uždarytus.• Mėginius centrifuguokite 15 minučių, ne mažiau kaip 1500 g išcentrine jėga..

3. Kraujo mėginius laikykite laikydamiesi šių standartų:13, 14

• Kambario temperatūroje mėginį laikykite ne ilgiau kaip 8 val.• Jei tyrimas nebus baigtas per 8 val., laikykite atvėsintai +2–10 °C temperatūroje.• Jei tyrimas nebus baigtas per 48 val. arba mėginius reikia pervežti, užšaldykite iki -20 °C

temperatūros.13

• Mėginius atšildykite tik vieną kartą, keletą minučių staigiai pašildydami 40 °C vandens vonelėje• Po atšildymo 15 min. centrifuguokite mėginį 3000 g išcentrine jėga ir perpilkite į tyrimo taurelę,

kad pašalintumėte plūduriuojančias fibrino daleles ar sankaupas, dėl kurių gali būti gauti klaidingi teigiami rezultatai.

4. Mėginiai, kuriuose yra iki 200 mg/l bilirubino, iki 90 g/l albumino, lipeminiai mėginiai, kuriuose yra 36 g/l trioleino (triglicerido) ekvivalento ir hemolizuoti mėginiai, kuriuose yra iki 5g/l hemoglobino, rezultatų neiškraipo

Pateiktosmedžiagos

„Access HCV Ab PLUS“ reagentų paketo R1

R1a: Paramagnetinės dalelės, padengtos rekombinantiniais baltymais (NS3/NS4) irpeptidu (kapsidu), plūduriuojančios TRIS buferyje su < 0,1% natrio azido

R1b: Mėginio skiediklis su < 0,1% natrio azido

R1c: Konjugato skiediklis su paviršiaus įtempimą mažinančia medžiaga ir < 0,1%natrio azido

R1d: Ožkos anti-žmogaus IgG šarminės fosfatazės konjugatas TRIS buferyje supaviršiaus įtempimą mažinančia medžiaga, < 0,1% natrio azido ir < 0,1%„ProClin ** 300“


Page 3

Reikalingos,bet nepateiktos

medžiagos

1. „Access HCV Ab PLUS“ kalibratoriai, skirti kalibravimui: Neigiamasis serumas ir teigiamasis serumas anti-HCV antikūnamsKat. Nr. 34335

2. Kokybės kontrolės medžiagos „Access HCV Ab PLUS“ KK (kokybės kontrolė)Kat. N°r.34339 ar kiti laisvai parduodami kontroliniai serumai

3. „Access“ substratas Kat. Nr. 81906

4. „Access“, „Access 2“: plovimo buferis: „Access Wash Buffer II“, Kat. Nr. A16792

5. „UniCel DxI“ : plovimo buferis: „UniCel DxI Wash Buffer II“, Kat. Nr. A16793

6. Sistemos:„Access“, „Access 2“,„UniCel DxI.“

Pastabos apieprocedūrą

1. Apie įrengimą, paleidimą, veikimo principus, sistemos eksploatacines charakteristikas, naudojimosi instrukcijas, kalibravimo procedūras, veikimo apribojimus ir perspėjimus, pavojus, priežiūrą ir sutrikimų paiešką bei šalinimą skaitykite atitinkamuose sistemų vadovuose ir (arba) pagalbos sistemose.

2. Kiekvienam tyrimui naudojami dvidešimt penki (25) µl mėginio (neįskaitant perteklinio kiekio).3. Tyrimo inkubacija vyksta 37 °C temperatūroje ir trunka 55 minutes

Procedūra Informacijos apie mėginių tvarkymą, tyrimų konfigūravimą, tyrimų užsakymą ir rezultatų peržiūrąieškokite atitinkamų sistemų vadovuose ir (arba) pagalbos sistemose.

Informacijaapie

kalibravimą

Visiems tyrimams būtina aktyvioji kalibravimo kreivė. Kalibravimo duomenys ribinei vertei nustatytigalioja 28 dienas. Taigi, „Access HCV Ab PLUS“ tyrimams kalibravimas būtinas kas 28 dienas,naudojant C0 ir C1 iš „Access HCV Ab PLUS“ kalibratorių rinkinio. Informacijos apie kalibravimoteoriją, kalibratorių konfigūravimą, kalibratoriaus tyrimo užsakymo įvestį ir kalibravimo duomenųperžiūrą ieškokite atitinkamų sistemų vadovuose ir (arba) pagalbos sistemose.

Kokybėskontrolė

Kokybės kontrolę rekomenduojama atlikti ne rečiau kaip 24 val. ir paleidžiant sistemą prieš pacientųmėginių tyrimus. Naudokite siūlomą produktą „Access HCV Ab PLUS“ KK arba kitų gamintojųkontrolinį serumą. Laikykitės gamintojo instrukcijų dėl atskiedimo ir laikymo. Kiekviena laboratorijaturėtų nusistatyti vidutinę vertę ir priimtiną intervalą, kad galėtų kontroliuoti tyrimų analitinįpatikimumą. Jei kontrolinių serumų rezultatai nepatenka į priimtinumo ribas, tai gali reikšti, kad tyrimorezultatai netinkami. Tokiu atveju patikrinkite visus tyrimų rezultatus, gautus po paskutinio priimtinorezultato šios analizės kokybės kontrolės tyrimo.

Siekiant optimalių rezultatų, tyrimo kalibravimas ir paciento mėginio bandymas turėtų būti atliekamipanašios temperatūros sąlygomis. Jei laboratorijos aplinkos temperatūra skiriasi nuo kalibravimotemperatūros daugiau kaip ± 5 °C, peržiūrėkite kokybės kontrolės rezultatus ir, prireikus, perkalibruokite.

Informacijos apie kontrolinių serumų rezultatų peržiūrą ieškokite atitinkamų sistemų vadovuose ir (arba)pagalbos sistemose.


Page 4

Rezultatai Pacientų tyrimų rezultatus sistemos programinė įranga apskaičiuoja automatiškai, panaudodama ribinęvertę [ribinė vertė = teigiamų kalibratorių vidurkis (RLU) x 0,23], nustatytą aktyviuoju kalibravimu.Rezultatai (Signalas/Ribinė vertė= S/CO), įvardijami kaip „reaktyvūs“ arba „nereaktyvūs“, pateikiamikaip jų santykio su ribine verte funkcija (signalas atitinkamai didesnis arba ne didesnis už ribinę vertę).Tačiau rezultatai, kurie yra ~10 % žemesni už ribinę vertę, turi būti interpretuojami atsargiai, o tyrimaspakartojamas du kartus. Šią rekomenduojamą pilkąją sritį (nuo 0,9 iki < 1,0) naudotojas turėtų įrašyti įsistemos programinę įrangą (išsamių instrukcijų apie kokybinio tyrimo pilkąją sritį ieškokite atitinkamųsistemų vadovuose ir (arba) pagalbos sistemose). Tokiu būdu bus automatiškai pranešama išskirtiniužymeniu, pagal kurį bus galima iškart atpažinti rezultatą iš pilkosios srities. Pacientų tyrimų rezultataigali būti peržiūrėti Mėginių rezultatų rodinyje. Išsamių instrukcijų apie rezultatų peržiūrą ieškokiteatitinkamų sistemų vadovuose ir (arba) pagalbos sistemose.

Visi „Access HCV Ab PLUS“ tyrimu tiriami mėginiai, kurių (S/CO) santykis yra mažesnis kaip 0,9,laikomi nereaktyviais. Visi „Access HCV Ab PLUS“ tyrimu tiriami mėginiai, kurių (S/CO) santykis yranemažesnis kaip 1, laikomi reaktyviais ir jų tyrimai prieš galutinį interpretavimą turėtų būti pakartoti dukartus.

Visi mėginiai, kurie iš pradžių yra reaktyvūs arba kurių rezultatai yra iš pilkosios srities, turi būti dukartus pakartotinai ištirti „Access HCV Ab PLUS“:

• Jei dviejų pakartotinių tyrimų rezultatai yra <1,0 S/CO, mėginio „HCV Ab PLUS“ tyrimo rezultatai turi būti laikomi nereaktyviais (neigiamais).

• Jei vienas iš 2 rezultatų yra ≥1,0 S/CO, pradinis rezultatas nepakartojamas ir mėginio „HCV Ab PLUS“ tyrimo rezultatai laikomi „reaktyviais“.

Tačiau rekomenduojama bet kurį pakartojamą reaktyvų mėginį pakartotinai ištirti antriniu EIA tyrimu irpatvirtinamuoju metodu teigiamam jo rezultatui patvirtinti.

Procedūrosribotumas

„Access HCV Ab PLUS“ tyrimas skirtas tik HCV antikūnams žmogaus serume arba plazmoje aptikti.„Access HCV Ab PLUS“ tyrimu gautas teigiamas rezultatas turėtų būti vertinamas kartu su klinikiniaisduomenimis ir patvirtintas kitais diagnostiniais tyrimais, įskaitant patvirtinamąjį metodą (imunobloto), irtik tuomet paskelbiama apie infekcijos patvirtinimą.

Atsižvelgiant į hepatito C virusu užsikrėtusių pacientų imunologinių reakcijų įvairovę (ypač vykstantserokonversijai), galima pastebėti, kad esama tam tikrų skirtumų tarp įvairių tyrimų aptikties,priklausomai nuo naudojamų antigeninių baltymų. Tikrinamojo tyrimo neigiamas atsakymas neatmetaužsikėtimo hepatito C virusu galimybės.

ELISA metodika kartais gaunamos klaidingos teigiamos reakcijos. Rekomenduojama bet kurio mėginio,kurio pakartojamas rezultatas teigiamas, reakcijos specifiškumą patikrinti tinkamu metodu, kad būtųįrodyta esant anti-HCV antikūnų.

„HCV Ab PLUS“ tyrimo rezultatų interpretavimas

RezultatasSantykis: Signalas/Ribinė vertė

Interpretavimas Papildomi tyrimai

S/CO < 0,9 Nereaktyvus

S/CO ≥ 1 Reaktyvus Pakartoti tyrimą du kartus

S/CO: 0,9 - 1,0 Pilkoji sritis Pakartoti tyrimą du kartus

Pakartoti tyrimą: S/CO < 1 Nereaktyvus

Pakartoti tyrimą: jei vienas iš 2 rezultatų yra ≥1 Reaktyvus Patvirtinamasis metodas


Page 5

Specialiosioseksploatacinės

charakteristikos

Jautrumas

„Access HCV Ab PLUS“ jautrumas buvo įvertintas ištyrus 511 tinkamai dokumentais patvirtintųteigiamų mėginių, tarp kurių buvo:

101 PCR teigiamo serumo mėginys, paimtas iš chroniškų HCV pacientų, 145 teigiami mėginiai iš HCVužsikrėtusių pacientų, 77 HCV RNR PGR teigiamos plazmos mėginiai iš BBI, 122 genotipuoti HCVteigiami mėginiai.

SFTS 97 grupinis rinkinys iš 36 teigiamų mėginių, 26 genotipuotų ir HCV RNR PGR teigiamų mėginių;10 teigiamų (PGR neigiamų) mėginių su bent 2 HCV Ab reaktyviais mėginiais.

Taip pat buvo įtraukta 30 teigiamų mėginių, aptiktų atliekant numatomo specifiškumo tyrimus.

Visi minėti mėginiai yra būdingi skirtingiems serotipiniams profiliams (atskiro reaktyvumo, 2 ar 3reaktyvumų) ir daugumai plačiai paplitusių HCV genotipų nuo 1 iki 4 bei keletui retų 4c/d ir 5 genotipų.

Visi šie mėginiai „Access HCV Ab PLUS“ buvo nustatyti kaip teigiami.

Aptinkant įvairius išbandytus HCV genotipus aiškių skirtumų nebuvo.

„Access HCV Ab PLUS“ jautrumas buvo įvertintas ištyrus 74 serokonversijos grupes:

Iš 29 ištirtų komercinių grupių „Access HCV Ab PLUS“ aptiko anti-HCV Ab augimą kartu su „RIBA3,0“ papildomuoju tyrimu arba neilgai trukus (keletą dienų) po to.

Iš 45 grupių, kurias ištyrė ekspertai, „Access HCV Ab PLUS“ tyrimo teigiami rezultatai (t. y. teigiami topaties kraujo) buvo gauti kartu su palyginimui taikytais jautresniais tyrimais. Tik 2 serokonversijos buvoaptiktos po keleto dienų, kitos 2 serokonversijos, priešingai, „Access HCV Ab PLUS“ kaip teigiamosbuvo nustatytos anksčiau.

Buvo ištirti papildomi 25 HCV švieži teigiami mėginiai (per 1 dieną po kraujo paėmimo) ir visi jie buvoteigiami.

Specifiškumas

Tyrimo specifiškumas buvo įvertintas:

• kaip 99,83 % (95% CI: 99,7–99,9) ištyrus 5995 neatrinktų kraujo donorų mėginių imtį• 472 hospitalizuotų pacientų imtį, iš kurių 469 rezultatai buvo neigiami, o 3, kurie ištyrus „Chiron Riba

HCV 3,0“, buvo neapibrėžti, „Access HCV Ab PLUS“ buvo nustatyti kaip žemo laipsnio teigiami. Atlikus 108 mėginių, paimtų iš pacientų, turinčių įvairių su hepatito C virusu nesusijusių (hepatito A arbaB, herpeso, EBV, reumatoidinio faktoriaus ir kt.) patologijų, tyrimą nepaaiškėjo jokio reikšmingonespecifinio kryžminio reaktyvumo.

Tikslumas

„Access HCV Ab PLUS“ tikslumas buvo nustatytas ištyrus neigiamus ir teigiamus mėginius.Atkuriamumas tame pačiame tyrime buvo įvertintas ištyrus 4 mėginius po 30 kartų tuo pačiu ciklu, oatkuriamumas tarp skirtingų tyrimų – atlikus 4 mėginių trigubą tyrimą, 2 kartus per dieną, 5 dienas.Rezultatai pateikti lentelėse:


Page 6

Atkuriamumas tame pačiame tyrime

C.V. mažiau kaip 5 %.

Atkuriamumas tarp skirtingų tyrimų

C.V. mažiau kaip 10 %.

„Access“, „UniCel“ ir „DxI“ yra „Beckman Coulter, Inc.“ prekės ženklai.

* „Lumi-Phos“ yra „Lumigen, Inc.“, „Beckman Coulter, Inc.“ pavaldžiosios įmonės, prekės ženklas.

** „ProClin“ yra „Rohm and Haas Company“ ar jos pavaldžiųjų įmonių ar filialų prekės ženklas.


Vidurkis (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243

S.D. 10202 43987 320857 309281

C.V.% 4,05 3,19 2,93 2,45


Santykių vidurkis

(Mėginio/Ribinė vertė)

0,07 1,34 3,18 4,42

S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39

C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


Page 7


Paskirtis „Acces HCV Ab PLUS CALIBRATORS“ kalibratoriai skirti naudoti su „Acces HCV Ab PLUS“ tyrimuanti-HCV antikūnams žmogaus serume ir plazmoje aptikti naudojant „Access“ imuninių tyrimų sistemas(„Access“, „Access 2“, „UniCel® Dxl®).




Mūsų įmonė saugo su kiekvienos partijos gamyba ir kontrole susijusius įrašus.


„Acces HCV Ab PLUS CALIBRATORS“ kalibratoriai naudojami „Acces HCV Ab PLUS“ tyrimuikalibruoti (ribinei vertei nustatyti). Palyginant mėginio šviesos intensyvumą su ribine verte įmanomanustatyti, ar mėginyje yra anti-HCV antikūnų.


„Access HCV Ab PLUS CALIBRATORS“ kalibratoriai

Kat. Nr. 34335: C0–C1, 1 ml buteliuke

• Paruošta naudoti.• Laikyti 2–10 °C temperatūroje.• Prieš naudodami sumaišykite turinį lengvai pavartydami. Venkite putų susidarymo.• Jei laikoma + 2–10 °C temperatūroje, atidarytame buteliuke esanti medžiaga išlieka stabili iki

etiketėje nurodytos galiojimo pabaigos datos.• Medžiaga gali būti nebetinkama, jei kokybės kontrolės ribos yra už ribųr

C0: Neigiamas (nereaktyvus) žmogaus serumas anti-HCV antikūnams su <0,1% natrio azido

C1: Teigiamas (reaktyvus) žmogaus serumas anti-HCV antikūnams,išaktyvintas, su < 0,1% natrio azido

Kalibravimo kortelė:

1


Page 8


• Skirta in vitro diagnostikai.• Ruošiant reagentą naudota žmogaus kilmės medžiaga buvo ištirta ir nustatyta, kad ji nereaktyvi

hepatito B paviršiniam antigenui (HBs Ag), žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV-1 and ŽIV-2) antikūnams ir hepatito C viruso (HCV) antikūnams, išskyrus teigiamąjį kalibratorių C1, kuris yra teigiamas anti-HCV antikūnams. Kadangi nėra žinoma tyrimų metodų, kurie visiškai užtikrintų, kad nėra infekcinių medžiagų, reagentus ir pacientų mėginius tvarkykite taip, lyg jie galėtų pernešti užkrečiamą ligą.

• Natrio azidas gali reaguoti su švino ir vario vandentiekio dalimis, sudarydamas labai sprogius metalų azidus. Pašalinę skysčius, išplaukite dideliu kiekiu vandens, kad nesikauptų azidai.12

Procedūra Kalibravimo procedūras vykdykite laikydamiesi atitinkamų sistemų vadovuose ir (arba) pagalbossistemoje pateiktų instrukcijų.

Informacijaapie

kalibravimą

„Access HCV Ab PLUS“ kalibratoriai pateikiami dviejų pavidalų: neigiamasis kalibratorius C0(paruoštas iš žmogaus neigiamojo mišraus serumo) ir išaktyvintas teigiamasis kalibratorius C1 (paruoštasiš žmogaus serumo, teigiamo anti-HCV antikūnams).

„Access HCV Ab PLUS“ kas 28 dienas būtina nustatyti kalibravimo kreivę (ribinei vertei nustatyti), kadaktyvioji „kalibracija“ galiotų tik vienai reagentų partijai, aiškiai identifikuojamai pagal jos brūkšninįkodą. Praėjus 28 dienoms arba į sistema įdėjus kitą reagentų partiją kreivė automatiškai anuliuojama.

„Access HCV Ab PLUS“ tyrimui sukalibruoti reikia po 225 µl (5 lašų)/taurelei („Access“ / „Access 2“)arba 305 µl (7 lašų)/taurelei („UniCel DxI“) kiekvieno kalibratoriaus (ribinė vertė = RLUs C1 X 0,23);atliekant užprogramuotą „Acces s HCV Ab PLUS“ kalibraciją C0 ir C1 tyrimai pakartojami po triskartus.



Page 9


Paskirtis „Access HCV Ab PLUS“ QC skirta „Access HCV Ab PLUS“ tyrimų sistemos veikimui kontroliuoti.




Mūsų įmonė saugo su kiekvienos partijos gamyba ir kontrole susijusius įrašus


„Access HCV Ab PLUS QC“ skirta „Access HCV Ab PLUS“ tyrimų sistemos, naudojamos anti-HCVantikūnams aptikti, veikimui kontroliuoti. Kokybės kontrolės medžiagos skirtos aptikti ir galbūt pataisytisvarbias tyrimų klaidas, atsiradusias dėl tyrimų rinkinių, darbuotojų ir įrangos, yra neatsiejama tinkamoslaboratorijų praktikos dalis.15, 17, 16, 19, 21, 22 Pateikiama viena neigiama ir viena žemo laipsnio teigiamakontrolė, kad galima būtų kontroliuoti veikimą aktualiausioje tokių tyrimų dinaminio intervalo srityje.


„Access HCV Ab PLUS QC“ (kokybės kontrolė)

Kat. Nr. 34339: 2,5 ml buteliuke

• Paruošta naudoti.• Prieš naudodami sumaišykite turinį lengvai pavartydami. Venkite putų susidarymo.• Jei laikoma + 2–10 °C temperatūroje, kokybės kontrolė išlieka stabili iki buteliuko etiketėje nurodytos

galiojimo pabaigos datos.• Tinkamai tvarkomų ir laikomų atidarytų buteliukų turinys išlieka stabilus 30 dienų

QC 1: Žmogaus serumas su < 0,1% natrio azido Neigiamas (nereaktyvus) anti-HCVantikūnams

QC 2: Žmogaus serumas su < 0,1% natrio azido Teigiamas (reaktyvus) anti-HCVantikūnams, išaktyvintas

KK verčių kortelė:

1


Page 10


• Skirta in vitro diagnostikai• Ruošiant reagentą naudota žmogaus kilmės medžiaga buvo ištirta ir nustatyta, kad ji nereaktyvi

hepatito B paviršiniam antigenui (HBs Ag), žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV-1 and ŽIV-2) antikūnams ir hepatito C viruso (HCV) antikūnams, išskyrus QC2 kontroles, kurios yra teigiamos anti-HCV. Kadangi nėra žinoma tyrimų metodų, kurie visiškai užtikrintų, kad nėra infekcinių medžiagų, reagentus ir pacientų mėginius tvarkykite taip, lyg jie galėtų pernešti užkrečiamą ligą.

• Natrio azidas gali reaguoti su švino ir vario vandentiekio dalimis, sudarydamas labai sprogius metalų azidus. Pašalinę skysčius, išplaukite dideliu kiekiu vandens, kad nesikauptų azidai.12

Procedūra „Access HCV Ab PLUS QC“ KK turėtų būti tvarkomos taip pat, kaip ir pacientų mėginiai ir tiriamoslaikantis naudojamo prietaiso rinkinyje pateiktų instrukcijų.

Pastaba: informacijos apie KK konfigūravimą, mėginio tyrimo užsakymą ir kalibravimo duomenųperžiūrą ieškokite atitinkamų „Access“ imuninių tyrimų sistemų vadovuose ir (arba) pagalbos sistemose.„Access HCV Ab PLUS QC“ naudoti „Access“ imuninių tyrimų sistemose reikia ne mažiau kaip po 175µl (4 lašai)/taurelei („Access“ / „Access 2“) arba 255 µl (6 lašai)/taurelei (UniCel DxI) kiekvienos iš 2kontrolių (vienam tyrimui).

Procedūrosribotumas

Jei yra kontrolės užsiteršimo mikrobais požymių arba per didelis drumstumas, išmeskite buteliuką.

Numatytosiosvertės

Kiekvienos „Access HCV Ab PLUS“ tyrimų partijos kontrolės duomenys pateikiami pakete esančioje„KK duomenų kortelėje“. Vartotojų laboratorijų atskirasis vidutinis reaktyvumo lygis turi patekti įatitinkamą priimtiną intervalą, tačiau kiekviena laboratorija turėtų nustatyti nuosavą vidutinioreaktyvumo vertę ir priimtinumo intervalus, surinkusi pakankamai duomenų.18

Atsižvelgiant į tai, kad skirtingų gamintojų tyrimų, skirtingų procedūrų, skirtingų partijų ir skirtingųlaboratorijų savitieji reaktyvumo lygiai gali skirtis, kiekviena laboratorija turėtų nustatyti nuosavąreaktyvumo lygį ir priimtinų verčių intervalą.18,19,20,21 Į priimtiną intervalą galėtų patekti visos vertės iš± 2 SD intervalo nuo 20 duomenų rinkinių, gautų 20 tyrimų per 30 dienų laikotarpį, vidurkio.22

„BIO-RAD“ GARANTUOJA, KAD ŠIE PRODUKTAI ATITIKS ETIKETĖSE IR NURODYTOJELITERATŪROJE NURODYTAS SAVYBES. „BIO-RAD“ PANEIGIA BET KOKIĄ NUMANOMĄPREKINIO PAKLAUSUMO AR TINKAMUMO KOKIAM NORS KITAM TIKSLUI GARANTIJĄ.„BIO-RAD“ NĖRA ATSAKINGA UŽ JOKIUS PASEKMINIUS NUOSTOLIUS, ATSIRANDANČIUSDĖL MINĖTOS IŠREIKŠTOS GARANTIJOS.


Šaltiniai

1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome Science, 1989, 244: 359-362.

2 Choo QL., Richman KH., Han JH., et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1991, 88: 2451-2455.

3 Kuo G., Choo QL., Alter HJ., et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A non-B hepatitis. Science 1989, 244: 362-364.





1992, 327: 369-373.


Page 11








11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459



Tiltenkt bruk Access HCV Ab PLUS-analysen er en immunoenzymatisk metode for sporing av antistoffer for hepatittC-virus i humant serum eller plasma ved hjelp av Access-immunanalysesystemene (Access, Access 2,UniCel® DxI®).

For bruk ved in vitro-diagnostikk

Alle produserte og kommersielle reagensmidler er underlagt et komplett kvalitetssystem som starter framottak av råmateriale til den endelige markedsføringen av produktet.

Hvert parti blir underlagt kvalitetskontroll og slippes bare ut på markedet når det etterlever kravene tilgodkjenning.

Resultatene i forbindelse med produksjon og kontroll av hver lot arkiveres i selskapet.

Sammendragog forklaring

Hepatitt C-virus (HCV) betraktes som den viktigste årsaken til NANBH (non-A - non-B hepatitis) etterinjeksjoner i tillegg til den som overføres utenom injeksjoner (medikamentavhengige,hemodialysepasienter, transplantasjonspasienter).1,2,3,4,5,6,7 Femti til seksti prosent av hepatitt C-infisertepasienter vil sannsynligvis utvikle kronisk hepatitt og risikere utvikling av cirrhose eller hepatocellulærkarsinom.8,9

Praksisen med obligatorisk screening av alle bloddonasjoner (for anti-HCV-antistoffer) har redusertrisikoen for overføring av infisert blod betydelig.10,11

Access HCV Ab PLUS-analysen er beregnet på sporing av anti-HCV-antistoffer i humant serum ellerplasma, og bidrar på denne måten til å forhindre kontaminasjon. Den er også nyttig for diagnostisering avHCV-infeksjon. I begge tilfeller må resultatene tolkes sammen med kliniske data og andre serologiskemarkører.

Prinsipper forfremgangs-

måten

Access HCV Ab PLUS-analysen er en indirekte immunoenzymatisk analyse. Det tas en prøve (serum,plasma eller kontroll) med paramagnetiske partikler dekket med en peptid som etterlignerimmunodominante epitoper av capsidregionen og rekombinante proteiner (NS3 og NS4). Underinkubasjonen fanges både IgG og IgM i prøven opp av den solide fasen. Etter inkubasjonen samles densolide fasen av et magnetisk felt, og ubundet materiale fjernes med en serie med vaskinger. I det andretrinnet legges forbindelsen (anti-humant IgG geit-antistoff, merket med alkalisk fosfatase) til ireaksjonskaret. Etter inkubasjonen fjerner en ny serie med vaskinger overflødig forbindelse. Etkjemiluminescens-substrat, Lumi-Phos 530*, legges til, og fotonene som genereres av enzymreaksjonen,måles med et luminometer. Signalintensiteten er proporsjonal med mengden av enzymforbindelse som ertil stede, og derfor med konsentrasjonen av anti-HCV-antistoff i testprøven. Ved å sammenlignecut-off-verdien, som fastslås av analysekalibreringen, med signalet i prøven, kan det fastslås om detfinnes anti-HCV-antistoff eller ikke.


Produkt-informasjon

Access HCV Ab PLUS Reagent PackKat. nr. 34330: 100 bestemmelser, 2 pakker, 50 tester/pakke• Leveres klar til bruk.• Oppbevares stående og i kjøleskap ved 2 til 10 °C før bruk på instrumentet.• Under slike forhold er en reagenspakke stabil til utløpsdatoen som oppgis på etiketten.• Ved den første lastingen av reagenspakken blandes innholdet forsiktig ved å snu pakningen flere

ganger til partiklene er helt oppløst. • Etter første gangs bruk, må den oppbevares i instrumentet eller oppbevares i kjøleskap (stående) og

brukes innen 28 dager. • Tegn på mulig forringelse er ødelagt elastomerlag pakningen eller at kontrollverdiene er utenfor

godkjent område.


• Ved første lasting av karusellen, må pakken ristes til partiklene er helt oppløst.• For bruk ved in vitro-diagnostikk.• Natriumazid kan reagere med bly og kobber og danne svært eksplosive metall-azider. Dersom

reagenset skal kastes må det skylles med store mengder vann for å forhindre at det bygges opp azid.12

• ProClin 300** kan føre til irritasjoner på huden. Unngå å søle eller skvette dette reagensmiddelet på hud eller klær. Hvis du får reagensmiddelet på huden, må du skylle grundig med vann.

Innsamling ogklargjøring av

prøver

1. Serum eller plasma (heparin, EDTA eller citrat) er anbefalte prøver.2. Følg disse retningslinjene ved håndtering og behandling av blodprøver:13, 14

• Ta de vanlige, nødvendige forholdsreglene for å unngå venepunktur når blodprøve tas.• La prøvene få tid til å koagulere tilstrekkelig før sentrifugering, minst 1 time.• La alltid rørene være korket.• Sentrifuger prøvene i minst 15 minutter ved 1500 g.

3. Følg disse retningslinjene for oppbevaring av blodprøver:13, 14

• Prøven må ikke oppbevares i romtemperatur i mer enn 8 timer.• Hvis analysen ikke fullføres i løpet av 8 timer, oppbevares den ved +2-10 °C.• Hvis analysen ikke fullføres i løpet av 48 timer, eller hvis prøvene skal sendes bort, må den fryses

ned ved -20 °C.13

• Prøvene må bare tines opp én gang, rask opptining ved oppvarming i vannbad ved 40 °C i noen få minutter.

• Etter opptiningen sentrifugeres prøven i 15 minutter ved 3000 g og overføres til en analyserør for å fjerne eventuelle suspenderte fibrinpartikler eller sammenklumpninger som kan gi feilaktige, positive resultater.

4. Prøver som inneholder opptil 200 mg/L bilirubin, opptil 90 g/L albumin, lipemiske prøver som inneholder ekvivalenten til 36 g/L triolein (triglyserid) og hemolyserte prøver som inneholder opptil 5g/L hemoglobin påvirker ikke resultatene.

Materiale somfølger med

R1 Access HCV Ab PLUS Reagent Pack

R1a: Paramagnetiske partikler dekket med rekombinante proteiner (NS3/NS4) ogpeptid (Capside) suspendert i TRIS-buffer, med < 0,1 % natriumazid.

R1b: Pøveuttynningsmiddel med < 0,1 % natriumazid.

R1c: Forbindelsesuttynningsmiddel, med overflateaktivt stoff, < 0,1 % natriumazid.

R1d: Forbindelse med geit anti-human IgG alkalisk fosfatase i TRIS-buffer, medoverflateaktivt stoff, < 0,1 % natriumazid og < 0,1 % ProClin 300**


Nødvendigmateriale som

ikke følger med

1. Access HCV Ab PLUS Calibrators for kalibrering: Negativt serum og positivt serum for anti-HCV-antistoffKat. nr. 34335

2. Kvalitetskontrollmateriale: Access HCV Ab PLUS QCKat. nr. 34339 - eller andre kontrollsera i handelen

3. Access SubstrateKat. nr. 81906

4. Access, Access 2 :Vaskebuffer: Access Wash Buffer II, kat. nr. A16792

5. UniCel DxI:Vaskebuffer: UniCel DxI Wash Buffer II, kat. nr. A16793

6. Systems:Access, Access 2, UniCel DxI.

Kommentarertil fremgangs-

måter

1. Se de tilhørende systemmanualene og/eller hjelpesystemet hvis du vil ha en beskrivelse av installering, oppstart, prinsipper for bruk, systemytelsesegenskaper, instruksjoner for bruk, kalibreringsprosedyrer, bruksbegrensninger og forholdsregler, farer, vedlikehold og feilsøking.

2. Tjuefem (25) μL med prøve brukes for hver test (i tillegg til dødvolum).3. Analysen inkuberer ved 37 °C og tar 55 minutter.

Fremgangs-måte

Se de aktuelle systemmanualene og/eller hjelpesystemet hvis du vil ha informasjon om administrering avprøver, konfigurering av tester, anmodning om tester og vurdering av resultater.

Kalibrerings-informasjon

En aktiv kalibreringskurve er nødvendig for alle tester. Kalibreringsdata for å bestemme Cut-Off ergyldige i 28 dager. Derfor krever Access HCV Ab PLUS-analysen kalibrering hver 28. dag ved hjelp avC0 og C1 fra Access HCV Ab PLUS-kalibreringssettet. Se de aktuelle systemmanualene og/ellerhjelpesystemet hvis du vil ha informasjon om kalibrering, konfigurering av kalibratorer, anmodninger omkalibratortest og vurdering av kalibreringsdata.

Kvalitets-kontroll

Kvalitetskontroll anbefales minst hver 24. time og ved oppstart av systemet før kjøring av pasientprøver.Bruk det foreslåtte produktet Access HCV Ab PLUS QC, eller ta med kontrollsera med annenopprinnelse. Følg produsentens instruksjoner for rekonstituering og oppbevaring. Alle laboratorier børetablere en gjennomsnittsverdi og et akseptabelt område for å etterleve testens analytiske ytelse.Kontrollseraresultater som ikke faller inn under det akseptable området, kan indikere ugyldigetestresultater. I så fall må alle testresultater som er generert siden forrige akseptablekvalitetskontrolltestpoeng for denne analytten, undersøkes.

For optimale resultater må analysekalibreringen og pasientprøvetestingen gjennomføres under liketemperaturforhold. Hvis temperaturen i laboratoriet varierer mer enn ± 5 °C i forhold til temperaturen vedkalibreringen, må kvalitetskontrollresultatene vurderes, og det må om nødvendig foretas enomkalibrering.Se de aktuelle systemmanualene og/eller hjelpesystemet for informasjon om vurdering avkontrollseraresultater.

Resultater Pasienttestresultater beregnes automatisk av systemprogramvaren ved hjelp av cut-off-verdien[cut-off-verdi=gjennomsnitt av positive kalibratorer (RLU) x 0,23] som bestemmes av aktiv kalibrering.Resultatene (Signal/Cut-Off= S/CO) rapporteres som reaktive eller ikke-reaktive som en funksjon avderes forhold til cut-off (signal som er henholdsvis større enn eller signal som er likt med eller mindreenn cut-off-verdien). Resultater som er ~10 % lavere enn cut-off-verdien bør imidlertid analyseresgrundig og testes på nytt i duplikat. Denne anbefalte gråsonen (fra 0,9 til mindre enn 1,0) bør oppbevaresav brukeren i systemprogramvaren (se de aktuelle systemmanualene og/eller hjelpesystemet forfullstendige instruksjoner om gråsonen for en kvalitativ analyse). På denne måten vil et iøynefallendefunn bli rapportert automatisk, noe som gir rask identifikasjon av et resultat i gråsonen.


Pasienttestresultater kan vurderes ved hjelp av skjermen for prøveresultater (Sample Results). Se deaktuelle systemmanualene og/eller hjelpesystemet for fullstendige instruksjoner om vurdering avresultater.

Alle prøver med forholdstall (S/CO) lavere enn 0,9 betraktes som ikke-reaktive med Access HCV AbPLUS-testen. Prøver med forholdstall (S/CO) som er likt med eller større enn 1, betraktes som reaktivemed Access HCV Ab PLUS-testen, og slike prøver bør testes på nytt i duplikat før endelig interpretasjon.

Alle prøver som først er reaktive eller med resultater i gråsonen, bør testes på nytt i duplikat ved hjelp avAccess HCV Ab PLUS:

• Hvis resultatene av duplikatene er < 1,0 S/CO, må prøven betraktes som ikke-reaktiv (negativ) for HCV Ab PLUS-analysen.

• Hvis ett av de 2 resultatene er 1,0 S/CO, er det første resultatet ikke gjentakbart, og prøven betraktes som reaktiv for Access HCV Ab PLUS-testen.

Vi anbefaler imidlertid at alle gjentakbare, reaktive prøver testes på nytt ved hjelp av en annenEIA-analyse og en konfirmativ metode for å sikre at den er positiv.

Begrensningerfor

fremgangsmåte

Access HCV Ab PLUS-analysen er bare beregnet på sporing av anti-HCV-antistoff i humant serum ellerplasma. Et positivt resultat med Access HCV Ab PLUS-analysen må vurderes sammen med kliniske dataog bekreftes av andre diagnostiske tester inkludert en konformativ metode (immunoblot) før detrapporteres som positivt for infeksjon.

På grunn av de mangeartede immunologiske reaksjonene hos pasienter som er infisert med hepatittC-viruset (særlig under serokonversjoner), kan man finne enkelte sporingsforskjeller mellom testeravhengig av hva slags antigenproteiner som brukes. Et negativt resultat med en screeningtest utelukkerikke muligheten for eksposisjon eller infeksjon med hepatitt C-virus.

Alle ELISA-teknikker kan gi feilaktige, positive reaksjoner. Det anbefales å kontrollere reaksjonensspesifisitet for alle prøver som finnes å være gjentagbare positive ved hjelp av en passende metode for åbevise at det finnes anti-HCV-antistoff.

Spesifikkeytelsesegens-

kaper

SensitivitetSensitiviteten for Access HCV Ab PLUS ble evaluert ved å teste 511 veldokumenterte positive prøver,inkludert:

101 PCR-positive sera innhentet fra oppfølging av kroniske HCV-pasienter, 145 positive prøver fraHCV-infiserte pasienter, 77 HCV RNA PCR-positiv plasma fra BBI, 122 genotypede HCV-positiveprøver.

SFTS 97-forbindelse med 36 positive prøver fra 26 genotypede og HCV RNA PCR-positive prøver; 10positive (PCR-negative) prøver med minst 2 HCV Ab-reaktiviteter.

Det ble også tatt med de 30 positive prøvene i de prospektive spesifitetsstudiene.

Alle disse prøvene er representative for de forskjellige serotypeprofilene (isolert reaktivitet, 2 eller 3reaktiviteter) og av de mest utbredte HCV-genotypene 1 til 4, i tillegg til noen uvanlige 4c-/d- og5-genotyper.

Alle disse prøvene ble funnet å være positive med Access HCV Ab PLUS.

Interpretasjon av resultater i HCV Ab PLUS-analysen

Resultatforhold: Signal/Cut-Off Interpretasjon Tilleggstester

S/CO < 0,9 Ikke-reaktivS/CO 1 Reaktiv Testes på nytt i duplikat

S/CO: 0,9 - 1,0 Gråsone Testes på nytt i duplikatTest på nytt: S/CO < 1 Ikke-reaktiv

Test på nytt: hvis ett av de 2 resultatene er 1 Reaktiv Konfirmativ metode


Det ble ikke påvist noen synlig forskjell i sporingen av de forskjellige testede HCV-genotypede.

Sensitiviteten til Access HCV Ab PLUS ble evaluert ved testing av 74 serokonversjonspaneler.

Blant de 29 kommersielle panelene som ble testet, fant Access HCV Ab PLUS økende anti-HCV-Ab såsnart RIBA 3.0-komplementærtest ble kjørt eller med svært kort forsinkelse (noen få dager).

Blant de 45 panelene som ble testet av ekspertene var Access HCV Ab PLUS-testen positiv på samme tid(dvs. positiv med samme bleed) enn de mer sensitive testene som ble brukt for sammenligning. Bare 2serokonversjoner ble sporet noen få dager senere, og omvendt ble 2 serokonversjoner tidligere positivemed Access HCV Ab PLUS.

25 komplementære, ferske HCV-positive prøver (innen 1 dag etter innhenting av blodprøve) ble testet, ogalle funnet positive.

SpesifisitetTestens spesifisitet er evaluert:

• som 99,83 % (95 % CI: 99,7-99,9) på prøver fra en populasjon på 5995 ikke-valgte bloddonorer• av en populasjon på 472 pasienter i sykehus ble 469 funnet å være negative, og 3, som ikke ble

bestemt med Chiron Riba HCV 3.0, ble funnet lavt positive med Access HCV Ab PLUS. Analysen av 108 prøver fra pasienter som viste forskjellige patalogier som ikke var knyttet til hepatittC-virus (hepatittA eller B, herpes, EBV, revmatoid faktor...) viste ingen signifikant, ikke-spesifikkkryssreaktivitet.

PresisjonPresisjonen til Access HCV Ab PLUS ble fastslått ut fra analysen av analysen av negative og positiveprøver. Intraanalyse-reproduserbarheten er evaluert ved testing av 4 prøver 30 ganger i samme kjøring,interanalyse-reproduserbarheten er evaluert ved testing av 4 prøver in triplo, 2 ganger om dagen i 5 dager.Resultatene vises i følgende tabeller:

Intraanalyse-reproduserbarhet

C.V. er mindre enn 5 %.

Interanalyse-reproduserbarhet

C.V. er mindre enn 10 %.

Access, UniCel og DxI er varemerker for Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos er et varemerke for Lumigen, en filial av Beckman Coulter, Inc.

** ProClin er et varemerke for Rohm og Haas Company eller datterselskaper eller filialer..


Gjennomsnitt (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

C.V.% 4,05 3,19 2,93 2,45


Gjennomsnitt av forhold (prøve/cut-off)

0,07 1,34 3,18 4,42

S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78



Tiltenkt bruk Access HCV Ab PLUS Calibrators er tiltenkt å brukes med Access HCV Ab PLUS-analysen for sporingav antistoffer for anti-HCV i humant serum eller plasma ved hjelp av Access-immunanalysesystemene(Access, Access 2, UniCel® DxI®).






Access HCV Ab PLUS Calibrators brukes for å etablere kalibrering (bestemme cut-off-verdi) for AccessHCV Ab PLUS-analysen. Ved å sammenligne lysintensiteten som genereres av en prøve medcut-off-verdien, er det mulig å bestemme om det er anti-HCV-antistoffer til stede i en prøve eller ikke.

Produkt-informasjon

Access HCV Ab PLUS CalibratorsKat. nr. 34335: C0-C1, 1 mL/vial• Leveres klar til bruk. • Oppbevares ved 2-10 °C. • Bland innholdet ved å snu forsiktig opp ned før bruk. Unngå at det dannes skum. • Innholdet i en åpnet ampulle vil holde seg stabilt til utløpsdatoen som er oppgitt på ampulletikettene

hvis den oppbevares ved +2 til +10 °C. • Kvalitetskontrollverdier som er utenfor området, er et tegn på mulig forringelse.r

C0: Negativt (ikke-reaktivt) humant serum for anti-HCV-antistoff, med < 0,1% natriumazid

C1: Positivt (reaktivt) humant serum for anti-HCV-antistoff, inaktivert, med< 0,1 % natriumazid

Kalibrerings-kort:

1



• For bruk ved in vitro-diagnostikk.• Humant kildemateriale som brukes ved forberedelse av reagensmiddelet er testet og funnet å være

ikke-reaktivt for hepatitt B-overflate-antigen (HBs Ag), antistoffer for humant immunsviktvirus (HIV-1 og HIV-2) og antistoffer for hepatitt C-virus (HCV), eksklusiv den positive kalibratoren C1, som er positiv for anti-HCV-antistoff. Siden ingen kjent testmetode kan tilby fullstendig sikkerhet for at infeksiøse stoffer ikke er til stede, må reagens og pasientprøver behandles som om de kan overføre infeksjonssykdommer.

• Natriumazid kan reagere med bly og kobber og danne svært eksplosive metall-azider. Dersom produktet må kastes, må det skylles med store mengder vann for å forhindre at det bygges opp azid.12

Fremgangs-måte

Av hensyn til kalibreringen, må du følge instruksjonene i de tilhørende systemmanualene og/eller ihjelpesystemet.

Kalibrerings-informasjon

Access HCV Ab PLUS Calibrators leveres i to former: Negativ kalibrator C0 (forberedes fra humantnegativt serum), og positiv kalibrator C1 (forberedes fra humant serum positivt for anti-HCV-antistoff,inaktivert.

Access HCV Ab PLUS-analysen krever en kalibreringskurve (bestemmelse av cut-off-verdi) hver 28.dag for å ha en aktiv "kalibrering" for bare én lot med reagensmidler som er identifisert ved hjelp avstrekkoden. Etter de 28 dagene, eller hvis en annen lot med reagensmidler lastes i systemet, blir kurvenautomatisk gjort ugyldig.

En kalibrering av Access HCV Ab PLUS-analysen krever minst 225 μL (5 dråper)/kopp (Access / Access2) eller 305 μL (7 dråper)/kopp (UniCel DxI) for hver kalibrator (cut-off-verdie = RLUs C1 X 0,23); denprogrammerte kalibreringen for Access HCV Ab PLUS vil teste C0 og C1 i triplikater.

Access, UniCel og DxI er varemerker for Beckman Coulter, Inc



Tiltenkt bruk Access HCV Ab PLUS QC er beregnet på overvåkning av systemytelsen til Access HCV AbPLUS-analysen.






Access HCV Ab PLUS QC-kontrollen er beregnet på overvåkning av systemytelsen til Access HCV AbPLUS-analysen for sporing av anti-HCV-antistoffer. Bruk av kvalitetskontrollmateriale indiseres for åoppdage og muligvis kritiske testfeil som skyldes testsettene, personell og instrumentering og er enintegrert del av god laboratoriepraksis.15, 17, 16, 19, 21, 22 Det er ett negativt og ett lavt positivt kontrollnivåfor å tillate ytelsesovervåkning på det mest relevante området for det dynamiske utvalget for slikeanalyser.

Produkt-informasjon

Access HCV Ab PLUS QCKat. nr. 34339: 2,5 mL/ampulle• Leveres klar til bruk. • Bland innholdet ved å snu forsiktig opp ned før bruk. Unngå at det dannes skum. • QC er stabil til utløpsdatoen som oppgis på etikettene på ampullen ved oppbevaring ved +2 til +10 °C. • Innholdet i åpnede ampuller holder seg stabilt i 30 dager hvis det behandles og oppbevares riktig.

QC 1: Humant serum med < 0,1 % natriumazid. Negativ (ikke-reaktiv) foranti-HCV-antistoffer

QC 2: Humant serum med < 0,1 % natriumazid. Positiv (reaktiv) foranti-HCV-antistoffer, inaktivert.

QC-verdikort:

1



• For bruk ved in vitro-diagnostikk.• Humant kildemateriale som brukes ved forberedelse av reagensmiddelet er testet og funnet å være

ikke-reaktivt for hepatitt B-overflate-antigen (HBs Ag), antistoffer for humant immunsviktvirus (HIV-1 og HIV-2) og antistoffer for hepatitt C-virus (HCV), unntatt QC2-kontrollene, som er positiv for anti-HCV. Siden ingen kjent testmetode kan tilby fullstendig sikkerhet for at infeksiøse stoffer ikke er til stede, må reagens og pasientprøver behandles som om de kan overføre infeksjonssykdommer.

• Natriumazid kan reagere med bly og kobber og danne svært eksplosive metall-azider. Dersom produktet skal kastes, må det skylles med store mengder vann for å forhindre at det bygges opp azid.12

Fremgangs-måte

Access HCV Ab PLUS QC-kontrollene må behandles på samme måte som pasientprøver og kjøres isamsvar med instruksjonene i settet som følger med instrumentet som testes. Merk: For Access Immunoassay Systems kan du se de aktuelle systemmanualene og/eller hjelpesystemetfor informasjon om konfiguring av kvalitetskontrollprøvetest og vurdering av kontrolldata. For åprosessere Access HCV Ab PLUS QC-kontroll på Access-immunanalysesystemene kreves det minst 175μL (4 dråper)/kopp (Access/Access 2) eller 255 μL (6 dråper)/kopp (UniCel DxI) for hver av de 2kontrollene (enkeltbestemmelse).

Begrensningerfor

fremgangsmåte

Hvis det er bevis på mikrobiologisk kontaminasjon eller for høy turbiditet i en kontroll, kasseresampullen.

Forventedeverdier

Kontrolldata for Access HCV Ab PLUS-analysen oppgis for hver lot ved hjelp av "QC Data Card" ipakken. De enkeltstående, gjennomsnittlige reaktivitetsnivåene for brukerlaboratoriene bør falle innunder et korresponderende akseptabelt område, men hvert laboratorium bør tilordne sin egengjennomsnittlige reaktivitet og akseptable områder etter at det er samlet inn nok data.18

Siden de bestemte nivåene for reaktivitet kan variere i forskjellige produsenters analyser, forskjelligeprosedyrer, forskjellige lotnumre og forskjellige laboratorier, bør hvert laboratorium bestemme detspesifikke nivået for reaktivitet og etablere sine egne akseptable verdier.18,19,20,21 Det akseptableområdet kan omfatte alle verdier innenfor ±2 SD av gjennomsnittet for 20 datapoeng av 20determinasjoner i en periode på 30 dager.22

BIO-RAD GARANTERER AT DISSE PRODUKTENE FUNGERER SOM BESKREVET IMERKINGEN OG DOKUMENTASJONEN SOM FØLGER MED. BIO-RAD FRASKRIVER SEGALLE UNDERFORSTÅTTE GARANTIER NÅR DET GJELDER SALGBARHET OG EGNETHETFOR ANDRE FORMÅL. IKKE UNDER NOEN OMSTENDIGHET SKAL BIO-RAD HOLDESANSVARLIG FOR EVENTUELLE INDIREKTE SKADER SOM OPPSTÅR UT AV TIDLIGERENEVNTE UTTRYKTE GARANTI.

Access, UniCel og DxI er varemerker for Beckman Coulter, Inc

Referanser1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis





recipients with acute and chronic non-A non-B hepatitis N. Engl. J. Med., 1989, 321: 1994-1500.


10 Japanese Red Cross Non-A, Non-B Hepatitis Research Group. Effect of screening for hepatitis C virus antibody and hepatitis B virus core antibody on incidence of post-transfusion hepatitis. Lancet 1991, 338: 1040-1041.









11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A44297CStrona 1

HCV Ab PLUSNR KAT. 34330

Zastosowanie Access HCV Ab PLUS jest chemiluminescencyjnym testem immunoenzymatycznym do wykrywaniaprzeciwciał anty-HCV w ludzkiej surowicy lub osoczu przy zastosowaniu ImmunoenzymatycznychSystemów Access (Access, Access 2, UniCel® DxI®).

Do diagnostyki in vitro

Wszystkie produkty wytwarzane i wprowadzane do obrotu przez Bio-Rad podlegają naszemu systemowijakości poczynając od momentu otrzymania surowców aż do chwili wprowadzenia do obrotuostatecznego produktu komercyjnego.

Każda seria odczynników jest poddana kontroli jakości i jest dopuszczona do sprzedaży po spełnieniuokreślonych kryteriów jakości.

Dane dotyczące procesu produkcji oraz kontroli jakości każdej serii produkcyjnej są archiwizowane uproducenta.

Znaczeniekliniczne

Wirus zapalenia wątroby typu C (HCV) jest uważany za główną przyczynę potransfuzyjnego zapaleniawątroby nie-A, nie-B (NANBH), jednakże przenosi się także drogą nie transfuzyjną (narkomani,dializowani, pacjenci po przeszczepach).1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 50-60% pacjentów z zapaleniem wątroby typu Cprzechodzi w postać przewlekłą z ryzykiem rozwinięcia marskości lub nowotworu wątroby.8, 9

Ustanowienie przymusowego badania przesiewowego wszystkich dawców krwi (w kierunku przeciwciałanty-HCV) znacznie ograniczyło ryzyko przeniesienia infekcji przez zakażoną krew.10, 11

Test Access HCV Ab PLUS jest przeznaczony do wykrywania przeciwciał anty-HCV w ludzkiejsurowicy lub osoczu i przyczynia się do zapobiegania zakażeniom drogą parenteralną. Jest równieżużyteczny do diagnozowania zakażeń HCV. W obu przypadkach, wyniki powinny być interpretowane wpowiązaniu z danymi klinicznymi i innymi serologicznymi wyznacznikami.

Zasada testu Access HCV Ab PLUS jest pośrednim testem immunoenzymatycznym. Próbka (surowica, osocze lubkontrole) jest dodawana do naczynia reakcyjnego (RV) z cząstkami paramagnetycznymi opłaszczonymipeptydami naśladującymi immunodominanty epitopów regionu kapsydowego oraz rekombinantamibiałek (NS3 i NS4). Podczas inkubacji przeciwciała IgG i IgM obecne w próbce są wiązane na faziestałej. Po inkubacji, faza stała jest zatrzymywana w polu magnetycznym a nie związany materiałusuwany w serii płukań. Następnie do naczynia reakcyjnego dodawany jest koniugat (kozie anty-ludzkieprzeciwciała IgG, oznaczone fosfatazą zasadową). Inkubacja i następna seria płukań eliminuje nadmiarkoniugatu. W kolejnym etapie, dodajemy substrat chemiluminescencyjny Lumi-Phos 530* i fotonygenerowane w wyniku reakcji enzymatycznych są mierzone przy pomocy luminometru. Intensywnośćemitowanego sygnału jest proporcjonalna do związanego koniugatu i do miana przeciwciał anty-HCVobecnych w badanej próbce. Przez porównanie wartości cut-off ustalonej dla kalibratorów z sygnałempróbki określa się brak lub występowanie przeciwciał anty-HCV.

A44297C Access HCV Ab PLUSStrona 2

Informacje oprodukcie

Zestaw Access HCV Ab PLUS Reagent PackNr kat. 34330: 100 oznaczeń, 2 pakiety odczynników po 50 oznaczeń.• Odczynniki są gotowe do użycia.• Przed użyciem przechowywać pionowo i schłodzić w temperaturze +2-10°C.• W tych warunkach pakiet odczynników jest trwały do daty ważności przedstawionej na etykiecie.• Przed pierwszym wstawieniem pakietu do karuzeli, należy nim wstrząsnąć, delikatnie odwracając

kilka razy, aby całkowicie zawiesić cząstki. • Po pierwszym użyciu odczynniki należy pozostawić w aparacie lub schłodzić (w pozycji pionowej) i

zużyć w czasie 28 dni. • Oznaką możliwego uszkodzenia odczynników jest pęknięcie plastikowego opakowania pakietu lub

uzyskanie dla kontroli wartości poza zakresem odczytu.

Zalecenia dlaużytkownika

• Przed załadowaniem do karuzeli wstrząśnij pakietem tak by zawiesić cząstki.• Odczynniki służą wyłącznie do diagnostyki in vitro.• Azydek sodu może reagować z miedzią i ołowiem, tworząc wysoce wybuchowe azydki metali. Aby

zapobiec akumulacji azydku w zlewie i rurach, po wylaniu odczynników należy spłukać zlew dużą ilością wody.12

• ProClin 300** jest potencjalnym czynnikiem uczulającym. Unikać rozlewania lub wylania odczynnika na skórę lub odzież. W przypadku kontaktu z odczynnikiem, spłukać obficie bieżącą wodą.

Próbki 1. Zalecanym do testu rodzajem próbki jest surowica lub osocze (pobrane na: heparynę, EDTA, cytrynian).

2. Pobieranie, obróbka i przechowywanie próbek krwi:13, 14

• Próbki krwi należy pobrać zgodnie z rutynową procedurą z wkłucia dożylnego.• Aby uzyskać surowicę, przed odwirowaniem pozostawić próbkę na min. 1 godzinę do powstania

skrzepu.• Przez cały czas próbówki powinny być zamknięte.• Odwirować próbki przez 15 min. przy min. 1500 g.

3. Zachować następujące standardy przy przechowywaniu próbek krwi.13, 14

• Próbki należy przechowywać w temperaturze pokojowej, nie dłużej niż 8 godzin.• Jeśli test nie będzie wykonany w ciągu 8 godzin próbki można przechować w temperaturze

+2-10°C.• Jeśli test nie będzie wykonany w ciągu 48 godzin, lub próbki będą transportowane, należy je

zamrozić w temperaturze -20°C.13

• Rozmrażać próbki tylko raz, szybko przez ogrzanie kilka minut w łaźni wodnej o temperaturze 40°C

• Po rozmrożeniu próbki należy odwirować ponownie przy 3000 g przez 15 minut i przenieść do kubka, w celu usunięcia zawieszonych cząstek i agregatów fibryny, mogących spowodować fałszywie dodatnie wyniki.

4. Na oznaczenie nie wywiera wpływu obecność do 200 mg/l bilirubiny, 90 g/l albuminy, poziom lipemii odpowiadający 36 g/l trioleiny (trójgliceryd), ani hemoliza wynosząca do 5 g/l hemoglobiny.

R1a: Cząstki paramagnetyczne opłaszczone rekombinowanymi białkami (NS3/NS4)i peptydami kapsydowymi, zawieszone w buforze TRIS z < 0,1% azydkiemsodu

R1b: Rozcieńczalnik próbek < 0,1% azydkiem sodu.

R1c: Rozcieńczalnik koniugatu z surfaktantem < 0,1% azydkiem sodu

R1d: Kozie anty-ludzkie IgG z fosfatazą alkaliczną w buforze TRIS z surfaktantem i< 0,1% azydkiem sodu oraz < 0,1% ProClin 300**


Materiałdostarczony

R1 Pakiet odczynników Access HCV Ab PLUS.

Inne niezbędnemateriały

1. Kalibratory: Access HCV Ab PLUS Calibrators zawiera jedną surowicę ujemną i jedną surowicę dodatnią pod względem przeciwciał anty-HCVnr kat. 34335

2. Kontrola jakości: Access HCV Ab PLUS QCnr kat. 34339 - lub inna komercyjnie dostępna surowica kontrolna

3. Access Substrate nr kat. 81906

4. Access Acces 2: Wash buffer: Access Wash Buffer II, nr kat. A16792

5. UniCel DxI: Wash Buffer: UniCel DxI Wash Buffer II, nr kat. A16793

6. Systemy:Access, Access2, UniCel DxI.

Uwagi doprocedury

1. Należy zapoznać się z właściwą instrukcją obsługi aparatu i/lub systemem Help, które zawierają informacje dotyczące instalacji, rozpoczynania pracy, zasady działania, charakterystyki uzyskiwanych wyników, obsługi aparatury, procedur kalibracji, ograniczeń i środków ostrożności związanych z działaniem systemu, zagrożeń, konserwacji oraz rozwiązywania problemów w trakcie użytkowania.

2. Na każde oznaczenie potrzeba 25 μl próbki (bez uwzględnienia martwej objętości).3. Oznaczenie przebiega w 37°C i trwa 55 minut.

Procedura Należy zapoznać się z instrukcją obsługi używanego systemu i/lub systemem Help w celu uzyskaniainformacji na temat postępowania z próbkami, testów konfiguracyjnych, testów konfiguracji oznaczenia,egzekucji i przeglądu wyników oznaczenia.

Szczegółykalibracji

Wszystkie testy wymagają „aktywnej” krzywej kalibracyjnej. Dane kalibracyjne do oznaczenia wartościcut-off są ważne przez 28 dni. Konsekwentnie, dla testu Access HCV Ab PLUS wymagana jestkalibracja, wykonywana co 28 dni, przy pomocy C0 i C1 z zestawu kalibratorów Access HCV Ab PLUSCalibrators. Instrukcja obsługi i/lub system Help aparatu zawiera informacje teoretyczne na tematkalibracji, konfiguracji kalibratorów, wprowadzania testu kalibracji i przeglądu danych kalibracyjnych.

Kontrolajakości

Zaleca się wykonywanie kontroli jakości co najmniej co 24 godziny oraz przed każdą próbką poponownym włączeniu aparatu. W tym celu należy użyć kontroli Access HCV Ab PLUS QC lub innychsurowic wzorcowych. Surowice wzorcowe należy rekonstytuować i przechowywać zgodnie zzaleceniami producenta. Każde laboratorium powinno wyznaczyć średnią oraz zakres wartościakceptowanych by monitorować oznaczenia zgodnie z jego charakterystyką analityczną. Surowicewzorcowe, które dają wyniki nie mieszczące w akceptowanym zakresie wartości, mogą wskazywaćuzyskiwanie nieprawidłowych wyników. W takim przypadku należy sprawdzić wszystkie wynikiuzyskane od czasu ostatniej akceptowanej wartości dla surowicy wzorcowej dla danego parametru.

W celu uzyskania optymalnych wyników badań, kalibracja próbkowa i opracowywanie próbki pacjentapowinny być prowadzone w zbliżonych warunkach temperaturowych. Jeżeli temperatura otoczenia wlaboratorium waha się o więcej niż ± 5°C, w porównaniu z temperaturą kalibracji, proszę sprawdzićkontrolę jakości wyników badań i, jeżli to koniecznie, ponownie przeprowadzić kalibrację.Kompletne informacje na temat wyników dla surowic wzorcowych znajdują się w instrukcji obsługi i/lubsystemie Help aparatu.


Wyniki Wyniki testu pacjenta są automatycznie obliczane przez program przy pomocy wartości cut-off [cut off =średnia kalibratorów dodatnich (RLU) x 0,23] oznaczonej w procesie aktywnej kalibracji. Wynik(sygnał/wartość cut-off = S/CO) zostaje wydany jako: „próbka reaktywna” lub „próbka nie reaktywna” wporównaniu z wartością cut-off (czyli sygnał wyższy lub równy albo niższy od wartości „cut-off”).Niemniej jednak próbki, których wynik mieści się w zakresie 10% poniżej wartości cut-off, należyinterpretować ostrożnie i zaleca się powtórne oznaczenie takich próbek w duplikacie przed ostatecznąinterpretacją. Próbki takie lokują się w tzw. szarej strefie (od 0,9 do mniej niż 1,0), którą użytkownikpowinien zaprogramować w systemie (patrz instrukcja obsługi i/lub system Help, aby uzyskaćinformacje na temat szarej strefy w testach jakościowych). Wyniki mieszczące się w szarej strefie sąwtedy automatycznie zaznaczane, dzięki czemu możliwa jest ich szybka identyfikacja. Wyniki próbekpacjenta są wyświetlane na ekranie „Sample Results”. Należy zapoznać się z instrukcją obsługi i/lubsystemem Help w kwestii przeglądu wyników oznaczenia.

Dowolna próbka o współczynniku (S/CO) niższym niż 0,9 jest uznawana za nie reaktywną w teścieAccess HCV Ab PLUS. Próbki o współczynniku (S/CO) równym lub większym niż 1 są początkowouważane za reaktywne w teście Access HCV Ab PLUS i przed ostateczną interpretacją zaleca się ichpowtórne oznaczenie w duplikacie.

Wszystkie próbki, które są początkowo reaktywne lub ich wyniki mieszczą się w szarej strefie, powinnyzostać powtórnie oznaczone w duplikacie, stosując test Access HCV Ab PLUS:

• Jeżeli wyniki powtórzeń wynoszą < 1,0 S/CO, próbka musi zostać uznana jako nie reaktywna (ujemna) w teście HCV Ab PLUS.

• Jeżeli jeden z dwóch wyników wynosi 1,0 S/CO, początkowy wynik nie jest powtarzalny i próbka jest uznana jako „reaktywna” w teście Access HCV Ab PLUS.

Tym niemniej, zalecane jest, aby każdą powtarzalnie reaktywną próbkę oznaczyć z użyciem drugiegotestu EIA oraz metodą potwierdzającą, aby jednoznacznie zatwierdzić wynik dodatni.

Ograniczeniatestu

Test Access HCV Ab PLUS jest przeznaczony wyłącznie do wykrywania przeciwciał przeciwko HCV wludzkiej surowicy lub osoczu. Dodatni wynik testu Access HCV Ab PLUS należy interpretować razem zdanymi klinicznymi i potwierdzić innymi testami diagnostycznymi, w tym testem potwierdzającymimmunoblot przed zgłoszeniem wyniku dodatniego świadczącego o zakażeniu.

Biorąc pod uwagę różnorodność reakcji immunologicznych u pacjentów zainfekowanych wirusemzapalenia wątroby typu C (zwłaszcza w czasie serokonwersji), można zaobserwować różnice dotyczącewykrywania między testami, zależne od rodzaju zastosowanych białek antygenowych. Wynik ujemnytestu przesiewowego nie wyklucza możliwości ekspozycji lub zakażenia wirusem zapalenia wątrobytypu C.

W przypadku stosowania wszystkich metod ELISA można otrzymać wyniki fałszywie dodatnie. Zalecasię sprawdzenie swoistości reakcji dla każdej próbki, dla której otrzymywane są powtarzalne wynikidodatnie, przy pomocy odpowiedniej metody w celu potwierdzenia obecności przeciwciał anty-HCV.

Interpretacja wyników testu HCV Ab PLUS

WynikWspółczynnik: sygnał/ wartość cut-off Interpretacja Testy uzupełniające

S/CO < 0,9 nie reaktywnaS/CO 1 reaktywna Powtórzenie w duplikacie

S/CO: 0,9 - 1,0 szara strefa Powtórzenie w duplikaciePonowny test: S/CO < 1 nie reaktywna

Ponowny test: jeżeli jeden z 2 wyników 1 reaktywna Metoda potwierdzająca


Charakterystykatestu

CzułośćCzułość testu Access HCV Ab PLUS została oceniona po przetestowaniu 511 udokumentowanychdodatnich próbek:

101 dodatnich w teście PCR surowic od pacjentów z przewlekłą infekcją HCV, 145 dodatnich surowic odpacjentów zainfekowanych wirusem HCV, 77 HCV RNA dodatnich w teście PCR próbek osocza z próbdodatnich z panelu BBI, 122 genotypowane próbki pozytywne w kierunku HCV.

Panel SFTS 97 zawierał 36 dodatnich próbek, 26 genotypowanych i HCV RNA dodatnich w teście PCR;10 dodatnich (ujemnych w teście PCR) próbek z reaktywnością HCV Ab na poziomie przynajmniej 2.

Dołączonych zostało również 30 dodatnich próbek z badań przekrojowych.

Wszystkie te próbki reprezentowały różne profile serotypów (izolowana reaktywność, 2 lub 3reaktywność) i najbardziej rozpowszechnione genotypy HCV 1 do 4 i kilka mniej rozpowszechnionychgenotypów 4c /d i 5.

Wszystkie te próbki oznaczono jako dodatnie w teście Access HCV Ab PLUS.

Nie stwierdzono widocznej różnicy w wykrywaniu różnych badanych genotypów HCV.

Czułość Access HCV Ab PLUS badano także z użyciem 74 paneli serokonwersyjnych.

Spośród 29 przebadanych komercyjnych paneli, test Access HCV Ab PLUS wykrył przeciwciała antyHCV tak szybko jak test komplementarny RIBA 3.0 lub niewiele później (kilka dni).

Wśród 45 badanych przez ekspertów paneli Access HCV Ab PLUS był dodatni w tym samym czasie(dodatni z tej samej próbki) jak inne bardziej czułe testy użyte do porównania. Tylko 2 serokonwersjezostały wykryte kilka dni później i odwrotnie, 2 serokonwersje zostały wykryte wcześniej jako dodatniew Access HCV Ab PLUS.

25 dodatkowych, swiezych HCV pozytywnych próbek (w ciagu 1 dnia od pobrania krwi) zostaloprzetestowanych i wszystkie okazaly sie pozytywne. SwoistośćSwoistość testu została oceniona:

• Na 99,83% (95% przedział ufności: 99,7% - 99,9%) z populacji 5995 nieselekcjonowanych dawców krwi

• Z populacji 472 hospitalizowanych pacjentów, 469 było ujemnych i 3, które nie zostały określone w teście Chiron Riba HCV 3.0, okazały się nisko dodatnie w teście Access HCV Ab PLUS.

Analiza 108 próbek od pacjentów z różnymi patologiami nie związanymi z zapaleniem wątroby typu C(zapalenie wątroby A lub B, Herpes, EBV, czynnik reumatoidalny...) nie wykazały znaczących reakcjikrzyżowych.PrecyzjaDokładność testu Access HCV Ab PLUS określono podczas oznaczania próbek ujemnych, słabododatnich i silnie dodatnich. Powtarzalność wewnątrz-testową określono oznaczając 4 próbki 30 razy wtym samym teście; powtarzalność między-testową określono oznaczając 4 próbki w triplikacie, 2 razy nadobę, w czasie 5 dni. Wyniki przedstawiają tabele:


Powtarzalność wewnątrz-testowa

Współczynnik zmienności dla próbek dodatnich jest niższy niż 5%.

Powtarzalność pomiędzy-testowa

Współczynnik zmienności dla próbek dodatnich jest niższy niż 10%.

Access, UniCel i DXI sa znakami towarowymi firmy Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos jest znakiem towarowym Lumigen, oddzial firmy Beckman Coulter, Inc.

** ProClin jest znakiem towarowym Rohm and Haas Company, ich oddziałów i filii.

N = 30 NEG 1 NEG 2 POS 1 POS 2

Średnia (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

C.V.% 4,05 3,19 2,93 2,45

N = 30 NEG 1 NEG 2 POS 1 POS 2

Średni współczynnik(Próba/cut-off)

0,07 1,34 3,18 4,42

S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


HCV Ab PLUS CALIBRATORSNR KAT. 34335

Zastosowanie Access HCV Ab PLUS Calibrators jest to zestaw kontroli do testu Access HCV Ab PLUS,przeznaczonego do wykrywania przeciwciał anty-HCV w ludzkiej surowicy lub osoczu przyzastosowaniu Immunoenzymatycznych Systemów Access (Access, Access 2, UniCel® DxI®).





Znaczeniekliniczne

Kalibratory z zestawu Access HCV Ab PLUS Calibrators służą do kalibracji (wyznaczenia wartościcut-off) w teście Access HCV Ab PLUS. Na podstawie porównania natężenia światła wydzielanegoprzez próbkę z wartością cut-off można wnioskować o obecności lub braku w badanej próbce przeciwciałanty-HCV.


Zestaw Access HCV Ab PLUS Calibratorsnr kat. 34335: C0–C1, fiolki 1 ml• Odczynniki są gotowe do użycia. • Należy je przechowywać w temp. +2-10°C. • Przed użyciem wymieszać przez odwracanie. Unikać wprowadzania pęcherzyków powietrza. • Odczynniki w otwartej fiolce, przechowywane w temp. +2-10�C, są trwałe zgodnie z datą ważności. • Uzyskanie dla kontroli wartości poza zakresem pomiaru może świadczyć o nie przydatności

odczynników do użycia.r

C0: Ludzka surowica ujemna (nie reaktywna) pod względem przeciwciałanty-HCV, konserwowana < 0,1% azydkiem sodu.

C1: Ludzka surowica dodatnia (reaktywna) pod względem przeciwciałanty-HCV, inaktywowana, konserwowana < 0,1% azydkiem sodu

Karta kalibracyjna:

1



• Odczynniki służą wyłącznie do diagnostyki in vitro.• Ludzkie surowice, użyte do sporządzenia kontroli, były ujemne pod względem antygenu

powierzchniowego wirusa hepatitis B (HBs Ag), przeciwciał przeciwko wirusom HIV (anty-HIV-1 i anty-HIV-2) i przeciwciał przeciwko wirusowi hepatitis C (anty-HCV), z wyjątkiem kalibratora C1, dodatniego pod względem przeciwciał anty-HCV. Ponieważ nie ma metod absolutnie wykluczających obecność czynników zakaźnych, odczynniki oraz próbki powinny być traktowane jako materiał potencjalnie zakaźny.

• Azydek sodu może reagować z miedzią i ołowiem, tworząc azydki metali o właściwościach wybuchowych. Aby zapobiec akumulacji azydku w zlewie i rurach, po wylaniu zinaktywowanych odczynników zawierających azydek należy spłukać zlew dużą ilością wody.12

Procedura Informacje dotyczące procedury kalibracji znajdują się w instrukcji obsługi właściwego aparatu i/lubsystemie Help.

Szczegółykalibracji

Zestaw Access HCV Ab PLUS Calibrators zawiera: kalibrator ujemny (nie reaktywny) C0 i kalibratordodatni (reaktywny) C1, sporządzone odpowiednio ze zbiorczej surowicy ujemnej i ze zbiorczejsurowicy dodatniej pod względem przeciwciał anty-HCV, inaktywowanej.

Test Access HCV Ab PLUS wymaga kalibracji (wyznaczenia wartości cut-off) co 28 dni, w celuuzyskania „aktywnej” krzywej kalibracyjnej tylko dla jednego zestawu odczynników, rozpoznawanegopo kodzie kreskowym. Po zakończeniu okresu 28 dni lub w przypadku wprowadzenia nowego zestawuodczynników do systemu krzywa staje się automatycznie nieprawidłowa.

Do kalibracji testu Access HCV Ab PLUS potrzeba 225 μl/kubek (5 kropli) (Access / Access 2) lub 305μl/kubek (7 kropli) (UniCel DxI) każdego kalibratora (wartość cut-off = średnia RLU C1 x 0.23);zaprogramowana kalibracja dla testu Access HCV Ab PLUS polega na trzykrotnym oznaczeniuwykonanym dla kalibratorów C0 i C1.



HCV Ab PLUS QCNR KAT 34339

Zastosowanie Access HCV Ab PLUS QC jest to zestaw kontroli jakości pracy aparatu w trakcie wykonywanegooznaczenia do testu Access HCV Ab PLUS.





Znaczeniekliniczne

Kontrole z zestawu Access HCV Ab PLUS QC służą do monitorowania pracy aparatu w trakciewykonywanego oznaczenia do testu Access HCV Ab PLUS lub podobnego testu serologicznego dowykrywania przeciwciał anty-HCV. Zastosowanie kontroli pozwala na wykrycie i eliminację błędówspowodowanych przez odczynniki użyte do oznaczenia, personel lub aparaturę. Nastawianie kontrolijakości należy do zasad Dobrej Praktyki Laboratoryjnej.15, 16, 17, 19, 21, 22 Jedną ujemną i jedną słabododatnią kontrolę zastosowano by umożliwić monitorowanie prawidłowego oznaczania próbek wzakresie najodpowiedniejszym do zakresu dynamicznego.


Zestaw Access HCV Ab PLUS QCnr kat. 34339: fiolki po 2,5 ml• Odczynniki są gotowe do użycia. • Przed użyciem wymieszać przez delikatne odwracanie. Unikać wprowadzania pęcherzyków

powietrza. • Odczynniki przechowywane w temp. +2-10°C są trwałe do daty ważności na etykiecie. • Odczynniki w otwartej fiolce są trwałe przez 30 dni w przypadku odpowiedniego przechowywania.

QC 1: Ludzka surowica ujemna (niereaktywna) pod względem przeciwciał anty-HCV,konserwowana < 0,1% azydkiem sodu.

QC 2: Ludzka surowica dodatnia (reaktywna) pod względem przeciwciał anty-HCV,konserwowana < 0,1% azydkiem sodu, inaktywowana

Karta wartości QC:

1



• Odczynniki służą wyłącznie do diagnostyki in vitro.• Ludzkie surowice, użyte do sporządzenia kontroli, były ujemne pod względem antygenu

powierzchniowego wirusa hepatitis B (HBs Ag), przeciwciał przeciwko wirusom HIV (anty-HIV-1 i anty-HIV-2) i przeciwciał przeciwko wirusowi hepatitis C (anty-HCV), z wyjątkiem kalibratora QC2, dodatniego pod względem przeciwciał anty-HCV. Ponieważ nie ma metod absolutnie wykluczających obecność czynników zakaźnych, odczynniki oraz próbki powinny być traktowane jako materiał potencjalnie zakaźny.

• Azydek sodu może reagować z miedzią i ołowiem, tworząc azydki metali o właściwościach wybuchowych. Aby zapobiec akumulacji azydku w zlewie i rurach, po wylaniu zinaktywowanych odczynników zawierających azydek należy spłukać zlew dużą ilością wody.12

Procedura Kontrole z zestawu Access HCV Ab PLUS QC należy traktować podczas testu w ten sam sposób, jakbadane próbki i analizować zgodnie z instrukcjami zawartymi w zestawie dołączonym do stosowanegoinstrumentu. Uwaga: W przypadku stosowania Systemów Immunoenzymatycznych Access należy zapoznać się zinstrukcją obsługi używanego systemu i/lub systemem Help w celu uzyskania informacji na tematkonfiguracji kontroli jakości, zgłaszania testu próbek i przeglądu wyników oznaczenia. Do jednegooznaczenia w teście Access HCV Ab PLUS na Systemach Immunoenzymatycznych Access potrzeba conajmniej 175 μl (4 krople) / kubek (Access, Access 2) lub 255 μl (6 kropli) / kubek (UniCel DxI) każdejkontroli (pojedyncze oznaczenie).

Ograniczeniaprocedury

Zanieczyszczony mikrobiologicznie lub mętny odczynnik nie nadaje się do użycia.

Wartościoczekiwane

Wartości dla każdej serii kontroli Access HCV Ab PLUS QC podano na karcie „QC Data card”,dołączonej do opakowania. Indywidualny poziom reaktywności dla laboratorium, powinien zawierać sięw zakresie wartości akceptowanych, tym niemniej każde laboratorium, po zebraniu wystarczającej ilościdanych, powinno oznaczyć własną średnią reaktywność i zakres wartości akceptowanych.18

Poziom reaktywności może różnić się w testach różnych producentów, pomiędzy procedurami, seriamiodczynników i pomiędzy laboratoriami. Każde laboratorium powinno ustalić własny poziom swoistejreaktywności oraz zakres wartości akceptowanych18,19,20,21 Zakres wartości akceptowanych powinienzawierać wszystkie wartości w zakresie ± 2 SD średniej uzyskanej dla 20 zliczeń z 20 oznaczeń naprzestrzeni 30 dni.22

BIO-RAD GWARANTUJE, IŻ DOSTARCZONE ODCZYNNIKI DZIAŁAJĄ ZGODNIE ZOZNAKOWANIEM I DOSTARCZONĄ LITERATURĄ. BIO-RAD NIE BIERZEODPOWIEDZIALNOŚCI ZA ZASTOSOWANIE ODCZYNNIKÓW W INNYM CELU ISPOWODOWANE PRZEZ TO USZKODZENIA.


Literatura1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis





recipients with acute and chronic non-A non-B hepatitis N. Engl. J. Med., 1989, 321: 1994-1500.


10 Japanese Red Cross Non-A, Non-B Hepatitis Research Group. Effect of screening for hepatitis C virus antibody and hepatitis B virus core antibody on incidence of post-transfusion hepatitis. Lancet 1991, 338: 1040-1041.


12 DHHS (NIOSH) Publication No. 78-127, August 1976. Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Dostępny pod adresem http://www.cdc.gov/niosh.







11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Faks: + 33 (0) 1 47 41 91 33

=Tą3


Página 1


Finalidade doteste

O teste Access HCV Ab PLUS utiliza uma técnica imunoenzimática quimioluminescente de partículasparamagnéticas para detecção de anticorpos dirigidos contra o vírus da Hepatite C no soro ou plasmahumano, através dos Sistemas de Imunoensaio Access (Access, Access2, UniCel® DxI®).

Diagóstico in vitro

Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema degarantia da qualidade, desde a recepção das matérias-primas até à comercialização do produto final. Cada lote de produto final é objecto de um controlo da qualidade, sendo comercializado apenas quandoem total conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e controlo de cada lote conserva-se arquivada pela nossa empresa.

Resumo eexplicação do

teste

O vírus da hepatite C (HCV) é actualmente considerado como responsável pela maioria das hepatitesnão-A não-B (HNANB) pós-transfusão, bem como as transmitidas por via parentérica não transfusão(toxicómanos, hemodialisados, transplantados) (1,2,3,4,5,6,7). Estas hepatites são caracterizadas pelo factode 50 a 60% dos doentes infectados serem susceptíveis de desenvolver uma hepatite crónica, com riscode evolução para uma cirrose e um hepatocarcinoma (8,9).

A obrigatoriedade de despiste de anticorpos anti-HCV em cada dador de sangue permitiu reduzir demaneira significativa os riscos de transmissão (10,11).

O teste Access HCV Ab PLUS foi concebido para detectar os anticorpos anti-HCV eventualmentepresentes no soro ou no plasma humano, contribuindo assim para a prevenção das contaminaçõesparentéricas. Apresenta igualmente interesse para o diagnóstico de uma infecção pelo HCV. Em todos oscasos, a interpretação dos resultados deve ser associada aos dados clínicos e outros marcadoresserológicos.

Princípios doteste

O teste Access HCV Ab PLUS é um teste imunoenzimático de tipo EIA indirecto. Este teste põe emevidência, numa cuba reactiva, uma amostra (soro, plasma ou controlo), partículas magnéticassensibilizadas com um peptido, reproduzindo epítopos imunodominantes da região capsida e proteínasrecombinantes situadas nas regiões NS3 e NS4. Durante a incubação, as IgG e IgM presentes na amostrasão captadas pela fase sólida. Após a incubação, a separação num campo magnético e as lavagenspermitem eliminar produtos não associados à fase sólida. Numa segunda etapa, um conjugado deanticorpos de cada anti-IgG humanos, ligados à fosfatase alcalina, é adicionado à cuba. Após novaincubação, o excesso de conjugado é eliminado por lavagem. Um substracto quimioluminescente(Lumi-Phos* 530), é adicionado e os fotões produzidos pela reacção enzimática são medidos por meio deum luminómetro. A intensidade do sinal emitido é proporcional à quantidade de conjugado enzimáticopresente no final da reacção e, portanto, ao título de anticorpos anti-HCV presentes na amostra testada.Por comparação com o valor de cut-off determinado aquando da titulação do teste no instrumento,pode-se assim concluir pela presença ou ausência de anticorpos anti-HCV na referida amostra.


Página 2

Informaçõessobre o produto

Kit de reagentes Access HCV Ab PLUS

Nº Cat. 34330: 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem

• Fornecido pronto a utilizar. • Conservar as embalagens em posição vertical e guardá-las no frigorífico, à temperatura de 2-10°C,

antes de as carregar ou de as conservar no aparelho. • Uma Embalagem de Reagentes mantém-se estável até ao termo do prazo de validade inscrito na

etiqueta, quando conservada a 2-10°C.• Durante o primeiro carregamento no equipamento, agitar a Embalagem até re-suspensão completa das

partículas. • Após a abertura, deixá-la carregada no aparelho em funcionamento ou conservá-la a 2-10°C e utilizar

nos 28 dias que se seguem. • Os sinais de deterioração possível são a ruptura da camada de elastómero da Embalagem ou a

obtenção de valores de controlo fora dos intervalos de confiança.

Avisos eprecauções

• Ao efectuar o primeiro carregamento no dispositivo, agitar a Embalagem de reagentes atére-suspensão completa das partículas.

• Destinado a utilização para diagnóstico in vitro.• A azida de sódio pode reagir com a tubagem de chumbo ou de cobre, formando azotetos metálicos

altamente explosivos. Na eliminação dos líquidos, verter grande volume de água a fim de evitar aformação de tais azotetos (12).

• O ProClin** 300 é uma substância potencialmente alergénica. Evitar qualquer projecção de reagentena pele ou no vestuário. Em caso de contacto com o reagente, lavar abundantemente com água.

Colheita epreparação da

amostra

1. Natureza da amostra: soro ou plasma (heparina, EDTA ou citrato).2. Aplicar as normas seguintes no que diz respeito à manipulação e tratamento das amostras de

sangue 13,14:• Recolher as amostras de sangue observando as precauções de rotina relativamente à punção venosa.• Deixar as amostras séricas coagular completamente antes da centrifugação, no mínimo 1 hora. • Manter os tubos sempre tapados. • Centrifugar a amostra durante 15 minutos, a um mínimo de 1500 g.

3. Aplicar as normas seguintes no que diz respeito à conservação das amostras sanguíneas (13,14):• Não conservar as amostras à temperatura ambiente durante mais de 8 horas. • Se o teste não tiver terminado nas 8 horas seguintes, guardar a amostra no frigorífico, a 2-10°C.• Se o teste não terminar nas 48 horas seguintes, ou em caso de transporte das amostras, congelar a

-20°C(13).• Descongelar as amostras apenas uma vez, em descongelação rápida por aquecimento durante

alguns minutos em banho-maria, a 40°C para limitar a precipitação de fibrina.• Após descongelação, centrifugar de novo a amostra durante 15 minutos a 3000g e transferir para

um poço para efectuar o teste, a fim de eliminar as partículas ou agregados de fibrina em suspensãoque possam fornecer resultados falsamente positivos.

R1a: Partículas paramagnéticas sensibilizadas com proteínas recombinantes (NS3 e NS4) e um peptido (Capside) em suspensão numa substância-tampão Tris, de azida de sódio (< 0,1%).

R1b: Diluente de amostra, contendo azida de sódio (< 0,1%).

R1c: Diluente conjugado contendo um surfactante, de azida de sódio (< 0,1%).

R1d: Conjugado = anticorpos (cabra) anti-IgG humanas/fosfatase alcalina (bovino) em suspensão numa substância-tampão Tris e contendo um surfactante, de azida de sódio (< 0,1%) e ProClin** 300 (< 0,1%).


Página 3

4. As amostras contendo 200 mg/L de bilirrubina, 90 g/L de albumina, as amostras contendo o equivalente a 36 g/L de trioleína (trigliceridos) as amostras hemolizadas contendo até 5 g/L de Materiais fornecidos

Materiaisfornecidos

R1 Kits de reagentes Access HCV Ab PLUS

Materiaisnecessários masnão fornecidos

1. Calibradores: Access HCV Ab PLUS Calibrators Constituídos por um soro negativo em anticorpos anti-HCV Código. 34335

2. Controlo de qualidade: Access HCV Ab PLUS QC Código.34339 - ou outros soros de controlo disponíveis no mercado.

3. Substrato: Access SubstrateNº Cat. 81906

4. Access, Access 2Tampão de lavagem: Access Wash Buffer II, Nº Cat. 16792

5. UniCel DxITampão de lavagem: UniCel DxI Wash Buffer II, Nº Cat. 16793

6. SistemasAccess, Access 2, UniCel DxI

Comentáriossobre o

procedimento

1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter uma descriçãoespecífica dos capítulos seguintes: instalação, accionamento, princípios de funcionamento,características dos desempenhos do sistema, instruções sobre o funcionamento, procedimento decalibração, limitações e precauções operacionais, riscos, manutenção e resolução de problemas.

2. Utiliza-se 25 µL de amostra para cada teste (além do volume morto). 3. O teste é realizado a 37°C e dura 55 minutos.

Procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre agestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dostestes.

Detalhes decalibração

É necessário dispor de uma curva de calibração activa para todos os testes. Os dados de calibração quedeterminam o valor de cut-off do teste são válidos durante 28 dias. Assim, para o teste Access HCV AbPLUS é necessário efectuar, em cada 28 dias, uma calibração a partir dos controlos de calibração C0 e C1do dispositivo Access HCV Ab PLUS Calibrators. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre osmétodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes doscalibradores e a visualização de dados de calibração.

Controlo dequalidade

Recomenda-se a realização de controlos de qualidade no mínimo de 24 em 24 horas e ao inicializar o sistema, antes do tratamento das amostras dos doentes. Utilizar o produto proposto "Access HCV Ab PLUS QC" ou incluir soros de controlo de qualidade provenientes de outras fontes. Seguir as instruções do fabricante no que diz respeito à eventual reconstituição e à conservação. Cabe a cada laboratório validar um valor médio e intervalos de confiança para acompanhar os desempenhos analíticos do teste. Os resultados dos soros de controlo que não se situem dentro dos intervalos de confiança podem indicar falsos resultados. Nesse caso, examinar todos os resultados de testes efectuados desde o último controlo de qualidade validado para esse parâmetro.

Para obter os melhores resultados, deve realizar a calibração do ensaio e analisar as amostras, utilizandocondições de temperatura semelhantes. Se a temperatura ambiente do laboratório variar mais do que+/- 5°C em relação á temperatura de calibração, examine os resultados do controlo da qualidade e, senecessário, volte a calibrar.


Página 4

Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre comovisualizar os resultados do controlo de qualidade.

Resultados Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo programa informático dosistema que utiliza o "valor de cut-off" (valor cut-off = média dos calibradores positivos (RLU) x 0,23).Os resultados (Sinal/Cut-Off = S/CO) são classificados como "reactivo" ou "não reactivo" em função dasua relação com o "valor cut-off " (sinal superior e igual ou inferior ao "valor cut-off", respectivamente).No entanto, os resultados situados ~10% abaixo do "valor cut-off" devem ser interpretados com prudên-cia e testados em duplicado. Esta zona cinzenta (entre 0,9 a menos de 1,0) deve ser introduzida no soft-ware do sistema pelo utilizador (consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajudapara obter instruções completas relativamente à zona cinzenta para um teste qualitativo). Deste modo,uma marca distintiva reportada automaticamente permite identificar rapidamente um resultado situado nazona cinzenta. Os resultados dos testes de doentes podem ser novamente visualizados utilizando o ecrãResultados da Amostra. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obterinstruções completas relativamente à revisualização dos resultados.As amostras que apresentem um sinal (S/CO) inferior a 0,9 são consideradas como não reactivas com oteste Access HCV Ab PLUS. As amostras com um sinal (S/CO) superior ou igual a 1 são consideradascomo inicialmente reactivas com o teste Access HCV Ab PLUS, devendo por isso ser novamente testadasantes da sua interpretação final.

Todas as amostras consideradas como inicialmente reactivas ou com resultados na zona cinzenta devemser novamente testadas em duplicado com o teste Access HCV Ab PLUS:

• Se os resultados dos duplicados forem <1,0 S/CO, a amostra deverá ser considerada como "nãoreactiva" (negativa) para o teste HCV Ab PLUS.

• Se um dos 2 resultados for > 1,0 S/CO, o resultado inicial não será reprodutível e a amostra édeclarada "reactiva" para o teste Access HCV Ab PLUS.

É, no entanto, aconselhável analisar todas as amostras "reactivas" em segunda intenção, por um segundométodo EIA e por uma técnica de validação, a fim de estabelecer claramente a sua positividade.

Limitações doprocedimento

O teste Access HCV Ab PLUS limita-se estritamente à detecção de anticorpos anti-HCV no soro ou noplasma humano. Um resultado positivo obtido com o teste Access HCV Ab PLUS deve ser confrontadocom as informações clínicas e confirmado por outros testes de diagnóstico, incluindo um teste devalidação (mancha imune) antes de ser declarado positivo para infecção. Dada a diversidade de reacçõesimunológicas dos doentes infectados pelo vírus de hepatite C (especialmente durante as seroconversões),podem ser observadas algumas diferenças de detecção entre os testes, dependendo do tipo de proteínasantigénicas utilizadas. Um resultado negativo obtido com um teste de rastreio não exclui a possibilidadede exposição ou infecção pelo vírus de hepatite C.

Interpretação dos resultados do teste HCV Ab PLUS

ResultadoRelação: Sinal/cut-off

Interpretação Testes suplementares

S/CO < 0,9 Não reactivo

S/CO > 1 Reactivo Testar de novo em duplicado

S/CO: 0,9 a 1,0 Zona cinzenta Testar de novo em duplicado

Novo teste: S/CO < 1 Não reactivo

Novo teste: se um dos 2 resultados for > 1

Reactivo Teste de confirmação


Página 5

Todas as técnicas ELISA são passíveis de produzir falsas reacções positivas. Aconselha-se a verificar a especificidade da reacção para todas as amostras que se considerem ser positivas reprodutíveis, utilizando um método adequado para comprovar a presença de anticorpos anti-HCV.

Característicasespecíficas dedesempenho

Sensibilidade

A sensibilidade do teste foi avaliada testando 511 amostras bem documentadas, das quais:

101 soros PCR positivos provenientes de doentes com hepatite C crónica, 145 amostras positivas dedoentes infectados por HCV, 77 amostras HCV RNA PCR positivas de BBI, 122 amostras de genotiposHCV positivos.

O painel SFTS 97 constituído por 36 amostras positivas, das quais 26 de genotipo e 10 amostras positivascom, pelo menos, 2 reactivas com anticorpos HCV PCR negativos.

Bem como as 30 amostras comprovadas como positivas em estudos prospectivos.

Todas estas amostras são representativas dos diferentes perfis de serotipos (reactividade isolada, 2 ou 3reactividades) e são representativas dos genotipos 1 a 4 habitualmente mais encontrados, bem comogenotipos menos frequentes, 4c/d e 5.

Todas estas amostras foram comprovadas como positivas com ACCESS HCV PLUS.

Não foi demonstrada qualquer diferença na detecção dos genotipos testados.

A sensibilidade do teste Access HCV Ab PLUS foi testada em 74 painéis de seroconversão.

Entre os 29 painéis comerciais de seroconversão testados, Access HCV Ab PLUS detecta os anticorposanti-HCV com a mesma precocidade que o teste RIBA 3.0 ou com um atraso de alguns dias.

Entre os 45 painéis testados pelos especialistas, Access HCV Ab PLUS é positivo nas mesmas amostrasque os testes comerciais que fornecem os melhores desempenhos. Apenas 2 seroconversões foramdetectadas alguns dias mais tarde e, inversamente, 2 seroconversões foram detectadas mais precocementecom Access HCV Ab PLUS.

Foram testadas 25 amostras adicionais positivas frescas de HCV (no espaço de 1 dia após a colheita dosangue) e foram todas consideradas positivas.

Especificidade

A especificidade do teste foi calculada:

• em 99,83% (99,7% a 99,9% com intervalo de confiança de 95%) numa população de 5995 dadores desangue.

• numa população de 472 doentes hospitalizados, 469 amostras foram classificadas como negativas e 3amostras indeterminadas com o teste CHIRON RIBA HCV 3.0 foram classificadas como fracamentepositivas com Access HCV Ab PLUS.

Não se observou nenhuma reacção não-específica em 108 doentes atingidos por outras infecções virais(hepatites A ou B, herpes, EBV, factor reumatóide...)

Precisão

A precisão do dispositivo Access HCV Ab PLUS foi determinada por análise de amostras negativas epositivas.

A repetibilidade foi avaliada por análise destas amostras testadas 30 vezes durante uma mesmamanipulação; a reprodutibilidade foi avaliada por análise das amostras testadas em triplicado, em 5 diasdiferentes, à razão de 2 testes diferentes por dia.

Os resultados estão sintetizados nos quadros seguintes:


Página 6

Repetibilidade (intra-teste)

Os coeficientes são inferiores a 5%.

Reprodutibilidade (inter-testes)

Os coeficientes são inferiores a 10%.

Access, UniCel e DxI são marcas registadas da Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos é uma marca registada da Lumingen, Inc., uma filial da Beckman Coulter, Inc.

** ProClin é uma marca registada de Rohm and Haas Company ou suas filiais.


Média (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243

D.P. 10202 43987 320857 309281

C.V. % 4,05 3,19 2,93 2,45


Média das razões

(Sinal/Valor cut-off) 0,07 1,34 3,18 4,42

D.P. 0,01 0,09 0,21 0,39

C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


Página 7


Finalidadedo produto

Os Calibradores Access HCV Ab PLUS CALIBRATORS destinam-se a ser utilizados com o teste AccessHCV Ab PLUS para detecção de anticorpos dirigidos contra o vírus da Hepatite C, no soro e plasmahumano, utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access (Access, Access 2, UniCel® DxI®).

Diagnóstico in vitro


Resumo eexplicação

do produto

Os Access HCV Ab PLUS Calibrators são utilizados para estabelecer a calibração (para determinar o"valor cut-off ") para o teste Access HCV Ab PLUS. Comparando a intensidade da luz gerada por umaamostra com o "valor cut-off ", é possível determinar a presença ou a ausência de anticorpos dirigidoscontra o vírus da Hepatite C na amostra.


Access HCV Ab PLUS Calibrators

Nº Cat. 34335: C0–C1, 1 mL/recipiente

• Fornecido pronto a utilizar. • Conservar à temperatura de 2 - 10ºC.• Misturar lentamente os conteúdos por inversão, antes de utilizar. Evitar a formação de espuma. • Uma vez abertos, os controlos mantêm-se estáveis até ao termo do prazo de validade indicado nas

etiquetas dos frascos, quando conservados à temperatura de 2 - 10°C. • Os valores dos controlos de qualidade situados fora do intervalo de confiança constituem indício de

possível deterioração do produto..

C0: Soro humano negativo em anticorpos anti-HCV, com azida de sódio (< 0,1% NaN3)

C1: Soro humano positivo em anticorpos anti-HCV, com azida de sódio (< 0,1% NaN3) e inactivado fotoquimicamente

Cartão de calibração

1


Página 8


• Destinado a utilização para diagnóstico in vitro.• O material de origem humana utilizado na preparação do calibrador negativo foi testado e

comprovado como não reactivo quanto ao antigénio de superfície do vírus da hepatite B (Ag HBs), aanticorpos dirigidos contra o vírus da hepatite C (anti-HCV) e a anticorpos dirigidos contra o vírus daimunodeficiência humana (anti-HIV-1 e anti-HIV-2). O material de origem humana utilizado napreparação do calibrador positivo foi testado e comprovado como não reactivo quanto ao antigénio desuperfície do vírus da hepatite B (Ag HBs), a anticorpos dirigidos contra o vírus da hepatite C(anti-HCV) e a anticorpos dirigidos contra o vírus da imunodeficiência humana (anti-HIV-1 eanti-HIV-2). Uma vez que nenhum método de teste conhecido pode oferecer garantia absoluta deausência de agentes infecciosos, todos os reagentes, bem como todas as amostras de doentes, deverãoser considerados como potencialmente infecciosos e manipulados com as devidas precauções deutilização.

• A azida de sódio pode reagir com a tubagem de chumbo ou de cobre, formando azotetos metálicosaltamente explosivos. Na eliminação dos líquidos, verter grande volume de água a fim de evitar aformação de tais azotetos (12).

Procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre osmétodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes doscalibradores e a visualização de dados de calibração.

Detalhes dacalibração

Os Calibradores Access HCV Ab PLUS Calibrators são fornecidos sob duas formas: controlo decalibração negativo C0 e calibrador positivo C1, preparados a partir de uma base de soros humanosnegativos e uma base de soros humanos positivos em anticorpos anti-HCV, inactivadosfotoquimicamente. O teste Access HCV Ab PLUS requer uma curva de calibração (determinação do "valor cut-off "). Acurva de calibração está "activa" no aparelho Access durante 28 dias, para um único lote de reagentes,identificado pelo respectivo código de barras. Ao fim de 28 dias ou se for introduzido um outro lote dereagentes no aparelho, a curva é automaticamente invalidada. É, por isso, necessário dispor de uma"calibração" activa, em cada 28 dias. Uma calibração do teste Access HCV Ab PLUS requer cerca de 225 µl (5 gotas) / cadinho (Access,Access 2) ou 305 µl (7 gotas) / cadinho (UniCel DxI) de cada um dos 2 calibradores (valor cut-off = RLUC1 x 0,23).



Página 9


Finalidade doproduto

O controlo de qualidade Access HCV Ab PLUS QC é um soro de controlo de qualidade que permite aoslaboratórios controlar a precisão analítica do teste Access HCV Ab PLUS.

Diagnóstico in vitro


Resumo eexplicação

do produto

O controlo de qualidade Access HCV Ab PLUS QC destina-se a ser utilizado como soro de controlo dequalidade, para controlo, em laboratório, da precisão analítica do teste Access HCV Ab PLUS, ou outrosmétodos serológicos de despistagem de anticorpos anti-HCV. A utilização de um controlo de qualidadeestá indicada para detecção e correcção de erros de procedimento inerentes à manipulação dosdispositivos, à sua qualidade ou aos instrumentos utilizados, e faz parte integrante das boas práticas delaboratório (15, 16, 17, 19, 21, 22). São fornecidos um controlo negativo e um controlo fracamente positivo para permitir controlar osdesempenhos na zona mais pertinente do espectro analítico destes testes.


Access HCV Ab PLUS QC

Nº Cat. 34339: 2,5 mL/recipiente

• Fornecido pronto a utilizar. • Misturar lentamente os conteúdos por inversão, antes de utilizar. Evitar a formação de espuma. • O controlo de qualidade mantém-se estável até ao termo do prazo de validade indicado nas etiquetas

dos frascos, quando conservados à temperatura de 2 - 10°C. • Uma vez abertos, os frascos mantêm-se estáveis durante 30 dias, quando devidamente manipulados e

conservados. .

QC 1: soro humano com azida de sódio (< 0,1% NaN3). Negativo (não-reactivo) para os anticorpos anti-HCV.

QC 2 soro humano com azida de sódio (< 0,1% NaN3). Positivo (reactivo) para os anticorpos anti-HCV, inactivado fotoquimicamente.

Cartão de valores QC

1


Página 10


• Destinado a utilização para diagnóstico in vitro.• O material de origem humana utilizado na preparação do controlo negativo foi testado e comprovado

como não reactivo quanto ao antigénio de superfície do vírus da hepatite B (Ag HBs), a anticorposdirigidos contra o vírus da hepatite C (anti-HCV) e a anticorpos dirigidos contra o vírus daimunodeficiência humana (anti-HIV-1 e anti-HIV-2). O material de origem humana utilizado napreparação do controlo positivo foi testado e comprovado como não reactivo quanto ao antigénio desuperfície do vírus da hepatite B (Ag HBs), a anticorpos dirigidos contra o vírus da hepatite C(anti-HCV) e a anticorpos dirigidos contra o vírus da imunodeficiência humana (anti-HIV-1 eanti-HIV-2). Uma vez que nenhum método de teste conhecido pode oferecer garantia absoluta deausência de agentes infecciosos, todos os reagentes, bem como todas as amostras de doentes, deverãoser considerados como potencialmente infecciosos e manipulados com as devidas precauções deutilização.

• A azida de sódio pode reagir com a tubagem de chumbo ou de cobre, formando azotetos metálicosaltamente explosivos. Na eliminação dos líquidos, verter grande volume de água a fim de evitar aformação de tais azotetos (12).

Procedimento Os controlos de qualidade Access HCV Ab PLUS QC deverão ser tratados da mesma maneira que asamostras de doentes e testados seguindo as instruções contidas no dispositivo que acompanha oinstrumento utilizado.

Nota: Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobreconfiguração, pedidos de QC e determinação dos valores de controlo.

Para utilizar o controlo de qualidade Access HCV Ab PLUS QC nos Sistema de Imuno-análise Access, énecessário um volume mínimo de 175 µl (4 gotas) / cadinho (Access, Access 2) ou 255 µl (6 gotas) /cadinho (UniCel DxI) para cada um dos dois controlos (determinação realizada uma vez).

Limitações doprocedimento

Se for observável uma contaminação microbiana ou uma floculação excessiva num frasco, pôr o frascode lado e não o utilizar.

Valoresesperados

Os valores esperados para o controlo de qualidade relativamente ao teste Access HCV Ab PLUS sãoindicados, para cada lote, no cartão de "QC" incluído na embalagem Access HCV Ab PLUS QC. Osvalores obtidos para os laboratórios utilizadores deverão situar-se dentro dos intervalos de confiançaindicados. No entanto, caberá a cada laboratório determinar o seu próprio valor médio e os seusintervalos de confiança, uma vez realizado um número suficiente de medições. Relativamente a outros testes (não Access), a taxa de reactividade específica poderá variar de umfabricante de reagentes para outro, de um procedimento para outro, de um lote para outro, ou até de umlaboratório para outro, pelo que cada laboratório deverá determinar a taxa de reactividade específica eestabelecer os seus próprios intervalos de confiança (18, 19, 20, 21). O intervalo de confiança poderá serdefinido em função de todos os valores compreendidos em ± 2 DP em relação à média de 20 pontos,correspondentes a 20 medições distintas, obtidas ao longo de um período de 30 dias (22).

A BIO-RAD GARANTE OS SEUS PRODUTOS PARA A UTILIZAÇÃO DESCRITA NO RÓTULODO PRODUTO E NO FOLHETO INFORMATIVO INCLUSO. A BIO-RAD DECLINA QUALQUERRESPONSABILIDADE NO CASO DE VENDA OU DE UTILIZAÇÃO PARA QUALQUER OUTROFIM. EM NENHUMA CIRCUNSTÂNCIA DEVERÁ A BIO-RAD SER RESPONSABILIZADA PORQUAISQUER DANOS NÃO ABRANGIDOS POR ESTA GARANTIA FORMAL.



Página 11

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitisgenome Science, 1989, 244: 359-362.

2 Choo QL., Richman KH., Han JH., et al. Genetic organization and diversity of the hepatitis C virus Proc. Natl. Acad. Sci USA,1991, 88: 2451-2455.

3 Kuo G., Choo QL., Alter HJ., et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human non-A non-Bhepatitis. Science 1989, 244: 362-364.












11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A33603CSida 1


Avseddanvändning

Testet Access HCV Ab PLUS använder en immunoenzymatisk teknik för detektion av antikropparriktade mot hepatit C virus i humant serum eller plasma med hjälp av Access Immunoanalys system(Access, Access 2, UniCel® DxI®).

För in vitro-diagnostik

Alla tillverkade och marknadsförda reagens ingår, från mottagandet av råmaterial till slutgiltig produkt, iett komplett kvalitetssystem.

Varje batch undergår kvalitetskontroll och släpps ej ut på marknaden förrän den följer satta kriterier föracceptans.

Dokumentation relaterad till produktion och kontroll av varje enskild batch finns tillgänglig på vårtföretag.

Samman-fattning och

förklaring

Hepatit C viruset (HCV) anses idag ansvara för såväl majoriteten av posttransfusionella nonA - nonBhepatiter (NANBH) som de överförda på annat sätt (narkomaner, hemodialyspatienter, transplanteradepatienter).1,2,3,4,5,6,7 Femtio till sextio procent av de patienter som är infekterade med hepatit C riskeraren kronisk hepatit med komplikationer som cirrhos eller hepatocellulär cancer.8,9

Införande av screening för anti-HCV antikroppar på alla blodprodukter har sänkt överföringsriskenmarkant.10,11

Testet Access HCV Ab PLUS är utformat för att spåra anti-HCV-antikroppar som finns i humant serumeller plasma, och bidrar på så sätt till att förebygga parenteral smitta. Testet kan med fördel användas fördiagnos av HCV-infektion. I dessa fall skall tolkning av resultat vara förenligt med kliniska uppgifter ochandra serologiska markörer.

Principernabakom

proceduren

Access HCV Ab PLUS är en enzymatisk immunoanalys, s.k. indirekt EIA-teknik. Provet (serum, plasmaeller kontroll) tillsätts i en brunn med paramagnetiska partiklar sensibiliserade med en peptid som härmarimmunodominanta epitoper från kapsidregionen och rekombinerade proteiner (NS3 och NS4). Underinkubationen binds IgG och IgM som är närvarande i provet till den solida fasen. Efter inkubationenfångas den solida fasen upp i ett magnetfält och obundet material avlägsnas genom tvätt. I det andrasteget tillsätts (get antihuman IgG antikroppar märkta med alkaliskt fosfatas) till brunnen. Efter nyinkubation avlägsnas överskott av konjugat genom tvättning. Ett kemiluminescent substrat,Lumi-Phos 530*, tillsätts och fotoner genererade av den enzymatiska reaktionen mäts med hjälp av enluminometer. Signalens intensitet är proportionell med mängden av enzymatiskt konjugat närvarande islutet på reaktionen och således med anti-HCV antikropp koncentrationen i det testade provet. Genom attjämföra tröskelvärdet som fastställts vid kalibrering av testet, med provets värde kan man bestämmanärvaro eller frånvaro av anti-HCV antikroppar i detta prov.

A33603C Access HCV Ab PLUSSida 2

Produkt-information

Access HCV Ab PLUS ReagensförpackningNr 34330: 100 bestämningar, 2 förpackningar, 50 prover/förpackning• Levererade klara för användning.• Förvaras upprättstående och i kylskåp vid 2 till 10 °C innan de används i apparaten.• Under dessa förhållanden är en reagensförpackning stabil till det utgångsdatum som anges på

etiketten.• Blanda innehållet vid den första laddningen av reagensförpackningen genom att försiktigt vända

förpackningen flera gånger så att partiklarna resuspenderas fullständigt. • Efter öppning, låt den vara laddad på apparaten eller förvara den i kylskåp (upprättstående) och

använd den inom 28 dagar. • Tecken på en möjlig försämring är en bristning av den elastomeriska packningen på förpackningen

eller kontrollvärden utanför godkända intervaller.

Varningar ochförsiktighets-åt

gärder

• Vid den första laddningen i karusellen, skaka reagensförpackningen så att partiklarna fullständigt resuspenderas.

• För in vitro-diagnostik.• Natriumazid kan reagera med rörledningar av bly eller koppar och bilda högexplosiva metallazider.

Undvik aziduppbyggnad genom att skölja med mycket vatten om vätskor slås ut i avloppet.12

• ProClin 300** är potentiellt allergiframkallande. Undvik all kontakt av reagens på hud eller kläder. Skölj med rikligt med vatten, i fall av kontakt med reagensen.

Provsamlingoch beredning

1. Serum eller plasma (heparin, EDTA eller citrat) är rekommenderade prover.2. Applicera följande normer för hantering, behandling och förvaring av blodprover13, 14:

• Ta blodprov enligt föreskrivna rutiner för venpunktion.• Låt proverna koagulera helt före centrifugering, minst 1 timme.• Förvara alltid rören förslutna.• Centrifugera provet, 15 minuter vid 1 500 g minimum.

3. Applicera följande normer för förvaring av blodprover13, 14:• Förvara ej prover mer än 8 timmar i rumstemperatur.• Om testet ej slutförs inom 8 timmar, kyl ner prover i +2–10 °C.• Om testet ej slutförs inom 48 timmar, eller för transport av prover, frys in i –20 °C.13

• Tina proverna endast en gång genom snabb uppvärmning i några minuters varmbad vid 40 °C.• Efter upptining, centrifugera prover i 15 minuter vid 3 000 g och överför i en brunn för att avlägsna

fibrinpartiklar eller aggregat som kan ge felaktiga positiva resultat.4. Prover innehållande upp till 200 mg/L bilirubin, upp till 90 g/L albumin, lipemiska prover

innehållande motsvarande 36 g/L triolein (triglycerid) och hemolyserade prover innehållande upp till 5 g/L hemoglobin påverkar ej resultatet.

Förseddamaterial

R1 Access HCV Ab PLUS Reagensförpackning

R1a: Paramagnetiska partiklar sensibiliserade med rekombinanta proteiner (NS3/NS4)och peptid (kapsid) i suspension med TRISbuffert, med <0,1 % natriumazid

R1b: Provförtunning, med <0,1 % natriumazid

R1c: Konjugatförtunning, med tensid, <0,1 % natriumazid

R1d: Konjugat get antihuman IgG antikroppar märkta med alkaliskt fosfatas i TRISbuffert, med tensid, <0,1 % natriumazid och <0,1 % ProClin 300**


Material sombehövs men

som inteförsetts

1. Access HCV Ab PLUS Calibrators för kalibrering: Levererad i form av ett negativt serum och ett serum positivt för anti-HCVKod. 34335

2. Material för kvalitetskontroll: Access HCV Ab PLUS QCKod. 34339 – eller andra kommersiella kontrollserum

3. Substrat: Access SubstrateKod. 81906

4. Access, Access 2 :Tvättbuffert: Access Wash Buffer II, Kod. A16792

5. UniCel DxI:Tvättbuffert: UniCel DxI Wash Buffer II, Kod. A16793

6. System:Access, Access 2, UniCel DxI.

Procedur-mässiga

anmärkningar

1. Se lämpliga instrument manualer och/eller hjälpsystem för speciella beskrivningar av installering, uppstart, driftsprinciper, systemprestationsegenskaper, bruksanvisningar, kalibreringsprocedurer, driftsbegränsningar och försiktighetsåtgärder, risker, underhåll och felsökning.

2. Tjugofem (25) μL av provet används för varje bestämning (utöver död volym).3. Testet utförs vid 37 °C och tar 55 minuter.

Procedur Se lämpliga instrument manualer och/eller hjälpsystem för information om hur man behandlar prov,konfigurerar tester, gör förfrågningar om tester och granskar testresultat.


En aktuell kalibreringskurva krävs för alla tester. Kalibreringsuppgifterna för fastställande av testetströskelvärde är giltiga under 28 dagar. Följaktligen krävs kalibrering för Access HCV Ab PLUS-testet var28:e dag med C0 och C1 från kitet Access HCV Ab PLUS Calibrators. Se lämpliga instrument manualeroch/eller hjälpsystem för information om kaliberingsteori, konfiguration av kalibratorer,kalibratortestönskemål och granskning av kalibreringsdata.

Kvalitets-kontroll

Kvalitetskontroll rekommenderas minst var 24:e timme och vid systemets start före patientprovernasbehandling. Använd rekommenderad produkt ”Access HCV Ab PLUS QC” eller inkludera något annatkommersiellt kvalitetskontrollserum. Följ fabrikantens instruktioner gällande rekonstitution ochförvaring. Varje laboratorium måste validera ett medelvärde och konfidensintervall för att följa testetsanalytiska prestationer. Resultat från serumkontroll som hamnar utanför godkänt intervall kan indikerafelaktiga testresultat. I sådant fall, undersök alla genomförda testresulat från den senast valideradekvalitetskontrollen för denna parameter.

För optimalt resultat bör kalibrering och patientprovstester utföras under samma temperaturförhållanden.Om den omgivande temperaturen i laboratoriet avviker mer än ± 5 °C från kalibreringstemperaturen, skakvalitetskontrollresultaten granskas och omkalibrering utföras vid behov. Se lämpliga instrument manualer och/eller hjälpsystem för information om granskning avkvalitetskontrollresultat.

Resultat Patientprovens resultat fastställs automatiskt med systemprogrammet som använder ”tröskelvärdet”[tröskelvärdet = medelvärdet av positiva kalibratorer (RLU) x 0,23] som fastställts vid aktuellkalibrering. Resultat (signal/tröskelvärde= S/CO) rapporteras som ”reaktivt” eller ”ej reaktivt” beroendepå dess förhållande till ”tröskelvärdet” (signal som är större än respektive signal som är lika med ellermindre än tröskelvärdet). Resultat som ligger ~10 % under ”tröskelvärdet” bör dock tolkas medförsiktighet och omtestas i duplikat. Denna rekommenderade gråzon (mellan 0,9 och mindre än 1,0) skallsparas av användaren i systemets mjukvara (se lämpliga instrument manualer och/eller hjälpsystem förfullständig information om gråzon för en kvalitativ test). På så sätt rapporteras en karakteristiskmarkering automatiskt, vilket gör att resultat i gråzon snabbt kan uppmärksammas. Patientprovernas


resultat kan tas fram via skärmen för provresultat. Se lämpliga instrument manualer och/eller hjälpsystemför fullständig information om granskning av resultat.

Prov med en kvot (S/CO) som är lägre än 0,9 anses vara ej reaktivt med testet Access HCV Ab PLUS.Prover med kvot (S/CO) som är lika med eller större än 1 anses initialt vara reaktiva med testet AccessHCV Ab PLUS och sådana prover ska omtestas i duplikat före slutlig utvärdering.

Alla prover som initiellt är reaktiva eller som har resultat i gråzonen ska omtestas i duplikat med hjälp avAccess HCV Ab PLUS:

• Om resultaten av duplikaten är <1,0 S/CO ska provet anses ej reaktivt (negativt) för testet HCV Ab PLUS.

• Om ett av de 2 resultaten är 1,0 S/CO är det initiala resultatet inte reproducerbart och provet betraktas som ”reaktivt” för testet Access HCV Ab PLUS.

Vi rekommenderar dock att ett reproducerbart reaktivt prov omtestas med en andra serie EIA-analys ochmed en bekräftande metod för att säkerställa det positiva resultatet.

Procedurensbegränsningar

Testet Access HCV Ab PLUS är strängt begränsat till dektektion av anti-HCV antikroppar i humantserum eller plasma. Positivt resultat som erhållits med testet Access HCV Ab PLUS skall överensstämmamed klinisk information och bekräftas genom andra diagnostiska tester, inklusive ett konfirmationtest(immunoblot) innan det rapporteras som positivt för infektion.

Med hänsyn till de olika immunologiska reaktionerna hos patienter som är infekterade med hepatitC-virus (i synnerhet under serokonversion) kan vissa detektionsskillnader mellan tester iakttas beroendepå vilket slag av antigena proteiner som används. Ett negativt resultat med ett screeningstest utesluter intemöjligheten för exponering eller infektion av hepatit C-virus.

Alla ELISA-tekniker kan ge falskt positiva svar. Vi rekommenderar att reaktionens specificitet verifierasför ett prov som befunnits vara upprepat positivt med hjälp av en lämplig metod så att närvaron avanti-HCV antikroppar kan påvisas.

Specifikaprestations-egenskaper

KänslighetKänsligheten hos Access HCV Ab PLUS har utvärderats genom att testa 511 väldokumenterade positivaprover inklusive:

101 PCR-positiva serum från uppföljningar av patienter med kronisk HCV, 145 positiva prover frånHCV-infekterade patienter, 77 HCV RNA PCR-positiv plasma från BBI, 122 genotyp-HCV-positivaprover.

SFTS 97-panelen består av 36 positiva prover, 26 genotypprover och HCV RNA PCR-positiva prover; 10positiv (PCR-negativa) prover med minst 2 HCV Ab-reaktiviteter.

30 positiva prover från prospektiva specificitetsstudier undersöktes också.

Alla proverna är representativa för de olika serotypprofilerna (isolerad reaktivitet, 2 eller 3 reaktiviteter)och för de mest utbredda HCV-genotyperna 1 till 4, plus ett fåtal ovanliga 4c/d- och 5-genotyper.

Alla proverna befanns vara positiva med Access HCV Ab PLUS.

Tolkning av resultat från testet HCV Ab PLUS

ResultatFörhållande: Signal/tröskelvärde Tolkning Kompletterande tester

S/CO <0,9 Ej reaktivtS/CO 1 Reaktivt Ska omtestas i duplikat

S/CO: 0,9–1,0 Gråzon Ska omtestas i duplikatOmtest: S/CO <1 Ej reaktivt

Omtest: om ett av de 2 resultaten är 1 Reaktivt Bekräftande metod


Ingen uppenbar skillnad påvisades vid detektion av de olika HCV-genotyper som testades.

Känsligheten hos Access HCV Ab PLUS har utvärderats genom att testa 74 serokonversionspaneler.

Bland de 29 kommersiella paneler som testades detekterade Access HCV Ab PLUS anti-HCV Absamtidigt som RIBA 3.0 kompletterande test eller kort senare (några få dagar).

Bland de 45 testade panelerna av experterna, var Access HCV Ab PLUS-testet positivt samtidigt (dvs.positiva med samma blod) som de mer känsliga test som användes vid jämförelsen. Endast 2serokonversioner detekterades några dagar senare och omvänt var 2 serokonversioner tidigare positivamed Access HCV Ab PLUS.

25 extra, färska HCV-positiva prover (inom 1 dygn efter blodprovtagning) testades och befanns alla varapositiva.

SpecificitetTestets specificitet har utvärderats till:

• 99,83 % (99,7 till 99,9 med 95 % konfidensintervall) hos en population av 5 995 icke utvalda blodgivarprover

• hos en population av 472 sjukhuspatienter befanns 469 negativa och 3, vilka var obestämda med Chiron Riba HCV 3.0, befanns lågt positiva med Access HCV Ab PLUS.

Analysen av 108 prover från patienter som uppvisade andra sjukdomar som inte var relaterade till hepatitC-virus (hepatit A eller B, herpes, EBV, reumafaktor…) visade ingen signifikant icke-specifikkorsreaktivitet.

NoggrannhetTestet Access HCV Ab PLUS noggrannhet har fastställts genom analys av negativa och positiva prover.Repetabilitet (intraförsök) har utvärderats genom att testa 4 prover 30 gånger under ett och samma försök.Reproducerbarhet (interförsök) har utvärderats genom testning av 4 prover i triplikat, 2 ggr dagligenunder 5 dagar. Resultaten redovisas i nedanstående tabeller:

Repetabilitet (intraförsök)

C.V. är mindre än 5 %.

Reproducerbarhet (interförsök)

C.V. är mindre än 10 %.

Access, UniCel och DxI är varumärken inom Beckman Coulter, Inc.

* Lumi-Phos är ett varumärke inom Lumigen, Inc., ett dotterbolag till Beckman Coulter, Inc.

** ProClin är ett varumärke inom Rohm and Haas Company eller dess dotterbolag eller filialer.


Medelvärde (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

C.V.% 4,05 3,19 2,93 2,45


Medelvärde kvot(prov/tröskelvärde)

0,07 1,34 3,18 4,42

S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


KALIBRATORERNA HCV Ab PLUS CALIBRATORSREF 34335

Avseddanvändning

Access HCV Ab PLUS Calibrators skall användas med Access HCV Ab PLUS för detektion avantikroppar riktade mot Hepatit C virus i humant serum och plasma med hjälp av Access Immunoanalyssystem (Access, Access 2, UniCel® DxI®).





Samman-fattning och

förklaring

Access HCV Ab PLUS Calibrators används för att fastställa kalibrering (fastställa tröskelvärde) förAccess HCV Ab PLUS-testet. Genom att jämföra ljusintensiteten som genereras av ett prov medtröskelvärdet kan man fastställa förekomsten eller frånvaron av anti-HCV antikroppar i provet.

Produkt-information

Kalibratorerna Access HCV Ab PLUS CalibratorsNr 34335: C0–C1, 1 mL/ampull• Levereras klar för användning. • Förvara vid 2–10 °C.• Blanda försiktigt innehållet genom att vända flaskan före användning. Undvik skumbildning. • Innehållet i öppnad flaska är stabilt fram till det utgångsdatum som finns på flasketiketten vid

förvaring i +2–10 °C.• Kvalitetskontrollvärden som befinner sig utanför intervallet är tecken på en möjlig produktförsämring.r

C0: Negativt (icke-reaktivt) humant serum för anti-HCV-antikropp, med <0,1% natriumazid.

C1: Positivt (reaktivt) humant serum för anti-HCV-antikropp, inaktiverat,med <0,1 % natriumazid.

Kalibreringskort:

1



gärder

• För in vitro-diagnostik.• Material av humant ursprung som används för beredning av kalibratorerna har testats och befunnits ej

reaktivt för ytantigener av hepatit B virus (HBs Ag), antikroppar riktade mot humant immunbristvirus (HIV-1 och HIV-2) och antikroppar riktade mot hepatit C virus (HCV) med undantag för positiv kalibrator C1 som är positiv för HCV antikroppar. Eftersom ingen känd testmetod fullständigt kan garantera frånvaron av smittämnen bör reagens och patientprover hanteras som potentiellt smittsamma.

• Natriumazid kan reagera med rörledningar av bly eller koppar och bilda högexplosiva metallazider. Undvik aziduppbyggnad genom att skölja med mycket vatten om vätskor slås ut i avloppet.12

Procedur Följ anvisningarna i tillämpliga systemhandböcker och/eller hjälpsystem.


Access HCV Ab PLUS Calibrators levereras i två former: negativ kalibrator C0 (preparerad från humannegativ serumpool) och positiv kalibrator C1 (preparerad från humant serum positivt för anti-HCVantikropp), inaktiverad.

Access HCV Ab PLUS-testet kräver en kalibreringskurva (bestämning av tröskelvärde) var 28:e dag föratt erhålla en aktiv ”kalibrering” för endast ett reagensparti, identifierat genom streckkoden. Efter dessa28 dagar, eller om ett annat reagensparti laddas i instrumentet, ogiltigförklaras kurvan automatiskt.

En kalibrering av Access HCV Ab PLUS-testet fordrar minst 225 μL (5 droppar)/kopp (Access / Access2) eller 305 μL (7 droppar)/kopp (UniCel DxI) av varje kalibrator (tröskelvärde = RLU C1 X 0,23); denprogrammerade kalibreringen för Access HCV Ab PLUS testar C0 och C1 i triplikat.




Avseddanvändning

Access HCV Ab PLUS QC är avsett för monitorering av analytisk precision hos Access HCV Ab PLUS.





Samman-fattning och

förklaring

Access HCV Ab PLUS QC kontroll är avsett för monitorering av analytisk precision hos Access HCVAb PLUS för detektion av anti-HCV antikroppar. Kvalitetskontrollen är ämnad för upptäckt ocheventuell korrigering av procedurfel i samband med kitets hantering, personal och instrumentet och ingårsom en del av god laboratoriesed (GLP).15, 17, 16, 19, 21, 22 En negativ och en låg positiv kontrollnivåtillhandahålls för monitorering av precision i det mest relevanta intervallet av det dynamiska intervalletför sådana tester.

Produkt-information

Access HCV Ab PLUS QCNr 34339: 2,5 mL/ampull• Levereras klara för användning. • Blanda försiktigt innehållet genom att vända flaskan före användning. Undvik lödderformation. • Kontrollen är stabil fram till det utgångsdatum som finns på flasketiketten vid förvaring i +2–10 °C.• Innehållet i öppnad flaska är hållbart i 30 dagar vid korrekt hantering och förvaring.

QC 1: Humant serum med <0,1 % natriumazid. Negativ (ej reaktiv) för anti-HCVantikroppar.

QC 2: Humant serum med <0,1 % natriumazid. Positiv (reaktiv) för anti-HCVantikroppar, inaktiverad.

Kvalitetskontroll värdekort:

1



gärder

• För in vitro-diagnostik.• Material av humant ursprung som används för beredning av reagenset har testats och befunnits ej

reaktivt för ytantigener av hepatit B virus (HBs Ag), antikroppar riktade mot humant immunbristvirus (HIV-1 och HIV-2) och antikroppar riktade mot hepatit C virus (HCV) med undantag för QC2-kontroll som är positiv för anti-HCV. Eftersom ingen känd testmetod fullständigt kan garantera frånvaron av smittämnen bör reagens och patientprover hanteras som potentiellt smittsamma.

• Natriumazid kan reagera med rörledningar av bly eller koppar och bilda högexplosiva metallazider. Undvik aziduppbyggnad genom att skölja med mycket vatten om vätskor slås ut i avloppet.12

Procedur Kvalitetskontrollen Access HCV Ab PLUS QC skall behandlas på samma sätt som testade patientprovergenom att följa de instruktioner som bifogas med instrument och kit. Not: Se lämpliga instrument manualer och/eller hjälpsystem för information om kvalitetskontrollteori,kontrollkonfiguration, önskemål om kvalitetskontrollprovets test och granskning av kvalitetskontrolldata.För att använda kvalitetskontrollen Access HCV Ab PLUS QC på Access Immunoanalys systemet åtgåren volym på minst 175 μl (4 droppar)/kopp (Access/Access2) eller 255 μL (6 droppar)/kopp (UniCelDxI) för var och en av kontrollerna (enkelt fastställande).

Procedurensbegränsningar

Om det finns tecken på mikrobisk kontamination eller överdriven grumlighet i en kontroll skall flaskankasseras.

Förväntadevärden

De förväntade värden av kvalitetskontrollen för testet Access HCV Ab PLUS anslås, för varje parti, pådet ”QC datakort” som finns i förpackningen. De värden som erhålls av användningslaboratorierna skallbefinna sig inom indikerade godkända intervaller. Varje laboratorium måste emellertid fastställa sitt egetmedelvärde och sina godkända intervaller, när tillräckliga uppgifter har insamlats.18

Eftersom den specifika reaktivitetsgraden varierar från en reagenstillverkare till en annan, från enprocedur till en annan, från ett parti till ett annat eller från ett laboratorium till ett annat, måste varjelaboratorium fastställa den specifika reaktivitetsgraden och etablera sina egnareferensintervaller.18,19,20,21 Referensintervallen kan t.ex. definieras som medelvärdet av 20 datapunkterav 20 bestämningar ± 2 SD under en 30-dagars period.22

BIO-RAD GARANTERAR DESSA PRODUKTERS FUNKTION FÖR ANVÄNDNING ENLIGTBESKRIVNING OCH MÄRKNING SAMT BIFOGAD LITTERATUR. BIO-RAD AVSÄGER SIGALLT ANSVAR I FALL AV FÖRSÄLJNING ELLER ANVÄNDNING PÅ ANNAT SÄTT. I INGAFALL KAN BIO-RAD HÅLLAS ANSVARIG FÖR SKADOR FÖREKOMMANDE UTANFÖRDENNA FORMELLA GARANTI.


Referenser1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis






virus core antibody on incidence of post-transfusion hepatitis. Lancet 1991, 338: 1040-1041.







16 Benson, E.S., Freier, E.F. 1963. Quality Control. Postgraduate Medicine, 34: A-58.17 Levy, S., Jennings, E.R. 1950. The Use of Control Charts in the Clinical Laboratory, Am. J. Clin. Path., 20: 1059.18 Youden, W.J. 1951. Statistical Methods for Chemists, John Wiley & Sons, Inc., PLUS York.19 Cembrowski, G.S., Carey, R.N. 1989. Laboratory Quality Managment: QC & QA, ASCP Press, 1989.20 Westgard, J.O., Koch, D.D., Oryall, J.J., Quam, E.F., Feldbruegge, et al. 1990. Selection of Medically Useful QC Procedures

for Individual Tests done in a Multitest Analytical System, Clin. Chem, 36: 230.21 Garrett, P.E., 1994. Quality is quantitative: so how do we QC qualitative tests? Journal of Clinical Immunoassay, 17: 23122 Internal Quality Control: Principles and Definitions. 1987. Tentative NCCLS Guideline. National Committee for Clinical


11/2010

Bio-Rad


92430 Marnes-la-Coquette, Frankrike

Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

Access HCV Ab PLUS A44298CSayfa 1

HCV Ab PLUSKAT. NO: 34330

KullanımAmacı

Access HCV Ab Plus tahlili, Access Immunoassay Sistemlerini (Access, Access2, UniCel® DxI®)kullanarak insan serum veya plazmasındaki Hepatit C virüsüne karşı olan antikorları saptayanimmunoenzimatik bir yöntemdir.

In Vitro Diagnostik Kullanım içindir

Üretilen ve satışa sunulan bütün reaktifler, ham maddelerin kabulünden ürünün son satış aşamasına kadartamamıyla kalite sistemi gözetimindedir. Her bir parti kalite kontrole tabi tutulur ve yalnızca kabulkriterlerine uyanlar piyasaya çıkarılır.

Her bir partiyle ilgili üretim ve kontrol kayıtları şirketimiz bünyesinde muhafaza edilir.

Özet veAçıklama

Hepatit C virüsü (HCV), post-transfüzyonel yollarla birlikte transfüzyonel olmayan parenteral yollarla(toksikomanlar, hemodializ hastaları, transplant hastaları)1,2,3,4,5,6,7 bulaşan non-A ve non-BHepatitlerinin (NANBH) başlıca sebebi olarak düşünülür. Hepatit C bulaşan hastaların %50 - ila %60'ıkronik hepatit olma eğilimi gösterir ve siroz veya hepatohücresel karsinom gelişimi riski taşırlar.8,9

Her kan donörüne zorunlu olarak tarama uygulaması (anti-HCV antikorları için) enfeksiyonlu kantransferi riskini büyük ölçüde azaltmıştır.10,11

Access HCV Ab PLUS tahlili, insan serum veya plazmasındaki anti-HCV antikorlarını tespit etmeyi veböylelikle parenteral kontaminasyonu önlemeye katkı sağlamayı amaçlar. Ayrıca HCV enfeksiyonununteşhisi için de faydalıdır. Her iki durumda da sonuçların, klinik veriler ve diğer serolojik belirteçlerleberaber yorumlanması gerekmektedir.

ProsedürünPrensipleri

Access HCV Ab PLUS tahlili dolaylı bir immünoenzimatik tahlildir. Örnek (serum, plazma veyakontrol), rekombinant proteinler (NS3 ve NS4) ve kapsit bölgesinin immünodominant epitoplarını takliteden bir peptit ile kaplanmış paramanyetik parçacıklar içeren bir reaksiyon kabına eklenir. Inkübasyonsüresince örnekte bulunan hem IgG hem de IgM, katı faz tarafından yakalanırlar. Inkübasyondan sonra,katı faz manyetik bir alanla toplanır ve bağlanmamiş materyaller bir dizi yıkama ile ortamdanuzaklaştırılır. Ikinci adımda, konjugat (alkalin fosfataz isimli anti-insan IgG keçi antikoru) reaksiyonkabına eklenir. Inkübasyonu takiben, başka yıkama serileri ile fazla konjugat ortamdan uzaklaştırılır. Birkemiluminesan substrat olan Lumi-Phos 530* eklenir ve enzimatik reaksiyonla oluşan fotonlar birlüminometre aracılığıyla ölçülür. Yayılan sinyalin yoğunluğu, enzim konjugat varlığının miktarıyla ve busuretle de test edilen örnekte bulunan anti-HCV antikorlarının titresi ile orantılıdır. Tahlil kalibrasyonu ileoluşturulmuş cut-off değerinin örnekteki sinyalle karşılaştırılması sonucu örnekte anti-HCV antikorununvarolup olmadığı tespit edilir.

A44298C Access HCV Ab PLUSSayfa 2

Ürün Bilgisi Access HCV Ab PLUS Reagent PackKat. No. 34330: 100 test, 2 paket, 50 test/paket• Kullanıma hazır. • Dik bir şekilde saklayın ve cihazda kullanmadan önce 2 -10ºC arasında buzdolabında bekletin. • Bu koşullar altında bir reaktif paketi etiketin üzerinde belirtilmiş son kullanma tarihine kadar stabildir. • Reaktif paketinin ilk yüklemesi sırasında parçacıklar tamamıyla çözülene kadar paketi nazik bir

şekilde ters yüz edin. • Ilk kullanımdan sonra cihazda yüklenmiş olarak bırakın veya buzdolabında (dik bir şekilde) saklayın

ve 28 gün içinde kullanın. • Paketteki kırık bir elastomerik katman veya aralık dışında çıkan kontrol değerleri olası bir bozulmanın

göstergesidir.

Uyarılar veÖnlemler

• Reaktifi, karusele yüklemeden önce tüm parçacıklar tamamıyla çözülene kadar sallayınız.• In vitro diyagnostik kullanım içindir.• Sodyum azid, kurşun ve bakır tesisat ile reaksiyona girip yüksek patlayıcı özelliği bulunan metal

azidler oluşturabilir. Sıvıların atılması esnasında azid birikimini engellemek için bol miktarda su ile yıkayınız.12

• ProClin 300** potansiyel bir deri duyarlaştırıcısıdır. Bu reaktifin deri veya giysilerle temasından kaçınınız. Teması halinde bol su ile iyice yıkayınız.

ÖrnekToplama Ve

Hazırlık

1. Serum veya plazma tavsiye edilen örneklerdir (heparin, EDTA veya sitrat).2. Kan örneklerinin alınmasında ve hazırlanmasında aşağidaki önerilere uyunuz:13, 14

• Kan almak için (venipuncture) gerekli rutin tedbirlere uyunuz.• Santrifüj işleminden önce en az 1 saat örneklerin yeterli miktarda pıhtılaşmasını sağlayınız.• Tüpleri her zaman kapalı şekilde saklayınız.• Örnekleri en az 15 dakika 1500 g'de santrifüj edin.

3. Kan örneklerinin saklanması için aşağıdaki standartlara uyunuz:13, 14

• Örneği oda sıcaklığında 8 saatten fazla saklamayınız.• Tahlil 8 saat içinde tamamlanmayacaksa örneği +2-10ºC muhafaza ediniz.• Tahlil 48 saat içinde tamamlanmayacaksa veya örnekler nakil edilecekse -20oC'de dondurunuz.13

• Örnekleri yalnız bir kere çözünüz, 40ºC'lik su banyosunda birkaç dakikalık hızlı çözülme.• Çözülmeden sonra örneği 15 dakika 3000g'da santrifüj edin ve fibrin parçacıklarından veya yanlış

pozitif sonuç verebilecek kalıntılardan arındırmak için bir tahlil kabına transfer ediniz.4. 200 mg/l'ye kadar bilirubin, 90 g/l'ye kadar albumin içeren numuneler, 36 g/l'ye eşdeğer miktarda

triolein (trigliserit) içeren lipemik numuneler ve 5 g/l'ye kadar hemoglobin içeren hemoliz olmuş örnekler sonuçları etkilemezler.

R1a: <%0,1 sodyum azidli TRIS tamponunda peptit (Kapsit) ve rekombinantproteinlerle (NS3/NS4) kaplı paramanyetik parçacıklar

R1b: <%0,1 sodyum azidli numune sulandırıcısı

R1c: <%0,1 sodyum azidli, surfaktanlı konjugat sulandırıcısı

R1d: <%0,1 sodyum azidli ve <%0,1ProClin300** içeren surfaktanlı TRIStamponunda keçi anti-human IgG alkaline fosfataz konjugatı


SağlananMateryaller

R1 Access HCV Ab PLUS Reaktif Paketi

Gerekli AncakSağlanmayan

Materyaller

1. Kalibrasyon için Access HCV Ab PLUS Kalibratör : Anti-HCV antikoru için negatif ve pozitif serumKat. No. 34335

2. Kalite kontrol materyalleri: Access HCV Ab PLUS QCKat. No. 34339 - veya başka bir ticari kontrol serumu

3. Access SubstrateKat. No. 81906

4. Access, Access 2:Yıkama Tamponu: Access Wash Buffer II, Kat. No. A16792

5. UniCel DxI:Yıkama Tamponu: UniCel DxI Wash Buffer II, Kat. No. A16793

6. Sistemler:Access, Access 2, UniCel DxI.

ProsedürelTavsiyeler

1. Kurulum, çalıştırma, çalışma ilkeleri, sistem performans özellikleri, çalıştırma talimatları, kalibrasyon işlemleri, çalıştırma sınırlamaları ve önlemler, zararlar, bakım ve sorun giderme ile bilgiler için konu hakkındaki sistem kılavuzuna ve / veya Yardım menüsüne bakınız.

2. Her ölçüm için 25 μl numune kullanılmıştır.(ölü hacme ek olarak)3. Tahlil 37ºC de inkübe edilir ve 55dakika sürer.

Prosedür Örneklerin idaresi, testlerin ayarlanması, test istemi ve test sonuçlarının kontrol edilmesi hakkındaki bilgiiçin sistem kılavuzuna ve / veya Yardım menüsüne bakınız.

KalibrasyonBilgileri

Tüm testler için aktif bir kalibrasyon eğrisi gereklidir. Cut-Off değerini belirleyen kalibrasyon verileri 28gün geçerlidir. Bundan dolayı, Access HCV Ab PLUS testi için Access HCV Ab PLUS Calibratorskitinde bulunan C0 ve C1 kullanılarak her 28 günde bir kalibrasyon yapmak gereklidir. Kalibrasyonteorisi, kalibrasyon konfiğürasyonu, kalibratör testi istem girişi ve kalibrasyon verilerinin kontroledilmesi hakkındaki bilgiler için konu ile ilgili sistem kılavuzuna ve/veya Yardım menüsüne bakınız.

Kalite Kontrol Kalite kontrollerin en az her 24 satte bir ve de hasta örneği çalışmadan önce sistem ilk açıldığındaçalıştırılması önerilir. Önerilen ürün Access HCV Ab PLUS QC veya başka kaynakların kontrolserumlarını kullanınız. Tekrar kullanımı ve saklanması için imalatçının talimatlarına uyunuz. Herlaboratuvar, analizin analitik performansını takip edebilmek için ortalama değer ve kabul edilebiliraralıklar belirlemelidir. Kabul edilebilir sınırlar içinde okunmayan kontrol sonuçları hatalı test sonuçlarınaişaret edebilir. Bu durumda, bu parametre ile ilgili kabul edilebilir son kalite kontrol sonucundan itibarençalışılmış bütün test sonuçlarını inceleyin.

Optimal sonuç için tahlil kalibrasyonu ve hasta numunesi testi işlemleri benzer sıcaklık koşulları altındayapılmalıdır. Ambiyant laboratuvar koşulları, kalibrasyon sıcaklığından ± 5°C daha fazla değişirse, kalitekontrol sonuçlarını tekrar gözden geçirin ve gerekli ise yeniden kalibre ediniz.Kontrol serumu sonuçlarını kontrol etmek hakkındaki bütün bilgiler için konu hakkındaki sistemkılavuzuna ve / veya Yardım menüsüne bakınız.


Sonuçlar Hasta test sonuçları otomatik olarak sistem yazılımı tarafından aktif kalibrasyonla belirlenmiş cut-offdeğeri [Cut-off değeri=pozitif kalibratörlerin ortalaması (RLU) x 0,23] kullanılarak otomatik olarakhesaplanır. Sonuçlar (Sinyal/Cut-Off= S/CO), "cut-off" (sırasıyla, cut-off değerinden büyük sinyal veyacut-off değerinden küçük veya eşit sinyal) ile olan ilişkilerine göre "reaktif" veya "reaktif olmayan"olarak rapor edilir. Ne olursa olsun, cut-off değerinin ~%10'u altındaki sonuçlar dikkatle incelenmeli vemutlaka test iki defa tekrarlanmalıdır. Tavsiye edilmiş gri alan (0,9 - 1,0 arası) kullanıcı tarafından sistemyazılımında (konu ile ilgili sistem kılavuzundaki ve/veya Yardım menüsündeki kalitatif bir analiz içinbütün şüpheli bölge talimatlarına bakınız) saklanmalıdır. Otomatik rapor edilen belirgin işaret, şuphelibölgedeki sonuçların hemen gösterilmesini sağlar. Test Sonuçları ekranı kullanılarak hasta sonuçlarıgözden geçirilebilir. Konu ile ilgili sistem kılavuzundaki ve/veya Yardım menüsündeki sonuçları kontroltalimatlarına bakınız.

Access HCV Ab PLUS analizi ile herhangi bir örneğin oranı (S/CO) 0,9'dan küçük ise reaktif olmayanolarak kabul edilir. Oranı (S/CO) 1'e eşit veya büyük olan örnekler Access HCV Ab PLUS analizi ilereaktif olarak kabul edilir ve nihai yorumlamadan önce örnekler iki defa tekrarlanmalıdır.

Ilk olarak reaktif veya şüpheli bölgede sonuçlanan bütün örnekler Access HCV Ab PLUS analizikullanılarak iki defa tekrarlanmalıdır:

• Çift tekrarın sonuçları < 1,0 S/CO ise, örnek Access HCV Ab PLUS testi için reaktif olmayan (negatif) olarak kabul edilmelidir.

• 2 sonuçtan biri 1,0 S/CO ise, ilk sonuç tekrar edilemezdir ve örnek Access HCV Ab PLUS testi için "reaktif" olarak açıklanır.

Yine de, pozitifliği onaylamak açısından ikinci sıra bir EIA tahlili ve bir onaylayıcı yöntem ile yenidentest edilmesi önerilir.

ProsedürünLimitleri

Access HCV Ab PLUS tahlili kati olarak sadece insan serum veya plazmasındaki anti-HCV antikorunukesin olarak belirlemek için kullanılır. Access HCV Ab PLUS tahlili ile elde edilmiş pozitif bir sonuç,infeksiyon açısından pozitif olarak belirtilmeden önce klinik veri ve onaylayıcı bir yöntem içeren(immünoblot) başka bir diyagnostik test ile onaylanmalıdır.

Hepatit C Virüsü ile infekte olmuş hastaların vermiş oldukları immünolojik reaksiyonların çeşitliliği(özellikle serokonversiyonlar süresince) açısından, kullanılan antijenik proteinlerin türüne bağlı olaraktestler arasında tespit yönünden bazı farklılıklar gözlenmiştir. Tarama testi ile elde edilen negatif birsonuç, Hepatit C Virüsüne maruz kalınmış olduğu veya infeksiyonun gerçekleşmiş olduğu olasılığınıortadan kaldırmaz.

Bütün ELISA teknikleri yanlış pozitif sonuçlar verme olasılığı vadır. Tekrarlanabilir pozitif bulunanherhangi bir örneğin anti-HCV antikorlarının varlığının tespit etmek için uygun bir yöntem kullanılarakreaksiyonun spesifisitesinin doğrulanması tavsiye edilir.

HCV Ab PLUS analizi sonucunun yorumlanması

SonuçOran: Sinyal/Cut-Off Yorum Destekleyici testler

S/CO < 0,9 Reaktif değilS/CO 1 Reaktif Çift çalışma

S/CO: 0,9 - 1,0 şüpheli bölge Çift çalışma

Test tekrarı: S/CO < 1 Reaktif değilTest tekrarı: 2 sonuçtan biri 1 ise Reaktif Onaylayıcı test


SpesifikPerformans

Özellikleri

HassasiyetAccess HCV Ab PLUS’in hassasiyeti, 511 adet tamamı dökümante edilmiş pozitif örnekten test edilerekdeğerlendirilmiştir:

101 adet PCR ile pozitif olan takip altındaki kronik HCV hasta serumu, 145 adet HCV enfeksiyonutaşıyan pozitif serum, 77 adet BBI panelinden HCV RNA PCR pozitif plazma ve 122 adet genotiplemesiyapılmış HCV pozitif numune toplanmıştır.

SFTS 97 paneli, 36 adet numuneden oluşan, bunların 26 tanesi genotiplemesi yapılmış HCV RNA PCR'ıpozitif numuneler ve en az 2 adedi HCV Ab reaktif olan 10 adet pozitif (PCR negatif) numunelerdir.

Ayrıca, yapılan hassasiyet çalışmalarına 30 adet pozitif numune de dahil edilmiştir.

Tüm bu numuneler, değişik serotip profilleri (reaktivitesi izole edilmiş, 2 veya 3 reaktiflikte) ihtivaetmekte olup bunların çoğu yaygın olarak bulunan 1'den 4'e kadar HCV genotipleri ve ilaveten birkaçnadiren görülen 4c/d ve 5 genotipleridir.

Tüm bu numuneler Access HCV Ab PLUS ile pozitif bulunmuştur.

Test edilmiş değişik HCV genotipleri tayininde açık bir farklılık gözlenmemiştir.

Access HCV Ab PLUS hassasiyeti, 74 adet serokonversiyon panelin test edilmesiyle belirlenmiştir.

Test edilen 29 adet ticari panel arasında Access HCV Ab PLUS, tıpkı tamamlayıcı test olan RIBA 3.0 gibiveya çok kısa bir gecikmeyle (birkaç gün) anti-HCV Ab'leri tespit etmiştir.

Uzmanlar tarafından test edilen 45 panel arasında Access HCV Ab PLUS testi, aynı zamanda (aynı kanalma ile pozitif) pozitifi yakalamış ve karşılaştırma kullanılan testler içerisinde en hassas test olduğubelirlenmiştir. Access HCV Ab PLUS ile sadece 2 serokonversiyon birkaç gün sonra tayin edilmiş vebunun tersine 2 serokonvensiyon ise erken tayin edilmiştir.

25 HCV kesin pozitif numunesi daha (kan almadan sonraki 1 gün içinde) test edilmiş ve tümü pozitifbulunmuştur.

SpesifiteTestin spesifitesi aşağıdakilerle değerlendirilmiştir:

• 5995 örnekten % 99,83'i (%95 CI: 99,7 - 99,9) seçilmemiş donörden • 472 adet hastanedeki hastalardan 469 tanesini negatif ve 3 tanesini de Chiron Riba HCV 3.0 ile

negatifliği belirlenemeyen, Access HCV Ab PLUS kiti düşük pozitif olarak tespit etmiştir. Hepatit C virüsü ile ilgili olmayan (hepatit A veya B, Herpes, EBV, Romatoid faktör ...) değişikpatolojiler gösteren 108 hasta örneğinden alınan analizler spesifik olmayan belirsiz çapraz reaksiyongöstermişlerdir.

KesinlikAccess HCV Ab PLUS doğruluğu negatif ve pozitif numunerlerin analiziyle belirtilmiştir. Analiz içitekrarlanabilirlik, aynı çalışma içinde 4 örneğin 30 kez test edilmesiyle değerlendirilmiş; analizler arasıtekrarlanabilirlik, 4 örneğin üç defa 5 gün süresince günde 2 kez test edilmesiyle bulunmuştur. Testsonuçları aşağıdaki tablolarda belirtilmiştir:


Analiz içi tekrarlanabilirlik

C.V.'ler %5'den küçüktür.

Analizler arası tekrarlanabilirlik

C.V.'ler %10'dan küçüktür.

Access, UniCel ve DxI, Beckman Coulter Inc.’ın ticari markalarıdır.

* Lumi-Phos, Lumigen, Inc.'in ticari bir ürünüdür, Beckman Coulter, Inc. bağlı kuruluşudur.

** ProClin, Rohm and Haas Company'nin veya iştirakinin veya üyesinin ticari bir ürünüdür.

n = 30 NEG 1 NEG 2 POZ 1 POZ 2

Ortalama (RLU) 251824 1378166 10966900 12615243S.D. 10202 43987 320857 309281

%C.V. 4,05 3,19 2,93 2,45

n = 30 NEG 1 NEG 2 POZ 1 POZ 2

Oranların Ort. (Numune/Cut-Off)

0,07 1,34 3,18 4,42

S.D. 0,01 0,09 0,21 0,39%C.V. 9,9 6,89 6,64 8,78


HCV Ab PLUS KALIBRATÖRKAT. NO: 34335

KullanımAmacı

Access HCV Ab PLUS Kalibratör, Access Immunoassay Sistemleri (Access, Access2, UniCel® DxI®)kullanarak insan serum veya plazmasındaki anti- HCV antikorlarının saptanması için kullanılır.


Üretilen ve satışa sunulan bütün reaktifler, ham maddelerin kabulünden ürünün son satış aşamasına kadartamamıyla kalite sistemi gözetimindedir.

Her bir parti kalite kontrole tabi tutulur ve yalnızca kabul kriterlerine uyanlar piyasaya çıkarılır.


Özet veAçıklama

Access HCV Ab PLUS Kalibratör, Access HCV Ab PLUS analizini kalibre etmek (cut-off değerininbelirlenmesi) için kullanılır. Bir örneğin meydana getirdiği ışık yoğunluğu ile cut-off değerinikarışlaştırarak, örnekte anti-HCV antikorlarının olup olmadığını tespit etmek mümkündür.

Ürün Bilgisi Access HCV Ab PLUS KalibratörKatalog No. 34335: C0-C1, 1 ml / şişe• Kullanıma hazır. • 2-10°C arasında saklayın. • Kullanmadan önce içeriği nazik bir şekilde ters yüz ederek karıştırın. Köpük oluşumundan kaçının. • Açılmış şişedeki kalibratör 2-10°C arasında saklamak koşuluyla şişe üzerinde belirtilmiş olan son

kullanma tarihine kadar stabildir. • Aralık dışındaki çıkan kontrol değerleri olası bir bozulmanın işaretidirr

C0: anti-HCV antikoru için negatif insan serumu

< %0,1 sodyum azid içerir

C1: anti-HCV antikoru için pozitif (reaktif) insan serumu pozitiftir(reaktifitir), inaktif hale getirilmiştir, < %0,1 sodyum azid içerir

Kalibrasyon Kartı:

1


Uyarı veÖnlemler

• In vitro diyagnostik kullanım içindir.• Kalibratörlerin hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı materyaller test edilmiştir ve Hepatit B

yüzey antijenine (HBs Ag), Hepatit C virüsü (HCV) antikorlarına ve Insan Bağışıklık Yetmezliği virüsü (HIV-1 ve HIV-2) antikorlarına reaktif bulunmamıştır, HIV-1 antikorlarına karşı pozitif olan Calibrator C1 hariç. Bilinen hiçbir test infeksiyöz ajanların varlığına karşı tam bir güvence veremediğinden dolayı, reaktiflere ve hasta numunelerine infeksiyöz hastalık bulaştırabilirmiş gibi muamele edin.

• Sodyum azid, kurşun ve bakır tesisat ile reaksiyona girip yüksek patlayıcı özelliği bulunan metal azidler oluşturabilir. Sıvıların atılması esnasında azid birikimini engellemek için bol miktarda su ile yıkayınız.12

Prosedür Kalibrasyon prosedürleri için konu ile ilgili sistem kılavuzundaki ve/veya Yardım menüsündekitalimatları izleyin.

KalibrasyonDetayları

Access HCV Ab PLUS Kalibratörleri iki şekilde sağlanmıştır: Negatif kalibratör C0 (negatif insan serumhavuzundan hazırlanmış) ve inaktif hale getirilmiş pozitif kalibratör C1 (anti-HCV antikoru için pozitifinsan serumlarından hazırlanmış), .

Access HCV Ab PLUS analizinin etkin bir "kalibrasyona" sahip olması açısından, yalnızca tek bir lotnumarası ile tarımlanmış reaktif barkodu için her 28 günde bir kalibre (cut-off değerinin belirlenmesi)edilmesi gerekir. 28 günün sonunda veya başka bir lot numararlı reaktifin sisteme yüklenmesi durumundaeğri otomatik olarak geçersiz olacaktır.

Bir Access HCV Ab PLUS kalibrasyonu, her bir kalibratörden (Cut-off değeri=RLU'lar Cl X 0,23) en az225 μl (5 damla)/kap (Access / Access2) veya 305 μl (7 damla)/kap (UniCel DxI), gerektirir;programlanmış Access HCV Ab PLUS kalibrasyonu C0 ve C1 üç defa test edecektir.

Access, UniCel ve DxI, Beckman Coulter Inc.’ın ticari markalarıdır.


HCV Ab PLUS QCKAT. NO: 34339

KullanımAmacı

Acces HCV Ab PLUS QC , Access HCV Ab PLUS testinin sistem performansını izlemek için kullanılır.


Üretilen ve satışa sunulan bütün reaktifler, ham maddelerin kabulünden ürünün son satış aşamasına kadartamamıyla kalite sistemi gözetimindedir.

Her bir parti kalite kontrole tabi tutulur ve yalnızca kabul kriterlerine uyanlar piyasaya çıkarılır.


Özet veAçıklama

Access HCV Ab PLUS QC kontrol, anti-HCV antikorlarının belirlenmesi için kullanılan Access HCV AbPLUS testinin sistem performansını izlemeyi amaçlar. Kalite kontrol materyallerinin kullanımı; testkitlerinden, personelden ve cihazlardan kaynaklanan kritik test hatalarının tespit edilmesi ve potansiyelolarak çözülmesi ve de iyi bir laboratuvar çalışmasının ayrılmaz parçası olarak gösterilir.15,17,16,19,21,22

Bir negatif ve bir düşük pozitif kontrol seviyesi, böyle bir analizin en geçerli dinamik aralık alanındakiperformansın takip edilmesi için sunulur.

Ürün Bilgisi Access HCV Ab PLUS QCKat. No. 34339: 2,5 mL/şişe• Kullanıma hazırdır. • Kullanmadan önce şişeyi nazik bir şekilde ters yüz ederek karıştırın. Köpük oluşumundan kaçının. • QC, 2-10°C arasında saklamak koşuluyla şişe üzerinde belirtilmiş olan son kullanma tarihine kadar

stabildir. • Açılan şişedeki kontrol serumu, doğru bir şekilde muamele edildiğinde ve saklandığında 30 gün

boyunca stabildir.

Uyarı veÖnlemler

• In vitro diagnostik kullanım içindir.• Kalibratörlerin hazırlanmasında kullanılan insan kaynaklı materyaller test edilmiştir ve Hepatit B

yüzey antijenine (HBs Ag), Hepatit C virüsü (HCV) antikorlarına ve Insan Bağışıklik Yetmezliği virüsü (HIV-1 ve HIV-2) antikorlarına reaktif bulunmamıştır, anti-HCV antikorlarına karşı pozitif olan QC2 Kontrolleri hariç. Bilinen hiçbir test infeksiyöz ajanların varlığına karşı tam bir güvence veremediğinden dolayı, belirteçleri ve hasta numunelerini infeksiyöz hastalık bulaştırabilirmiş gibi muamele edin.

QC 1: anti-HCV antikoru için negatif (reaktif değildir) insan serumu, < %0,1 sodyumazid içerir.

QC 2: anti-HCV antikoru için pozitif (reaktiftir) insan serumu, < %0,1 sodyum azidiçerir, inaktive edilmiş.

Data kartı: 1


• Sodyum azid, kurşun ve bakır tesisat ile reaksiyona girip yüksek patlayıcı özelliği bulunan metal azidler oluşturabilir. Sıvıların atılması esnasında azid birikimini engellemek için bol miktarda su ile yıkayınız.12

Prosedür Access HCV Ab PLUS QC kontrolüne, hasta örneği gibi muamele edilmeli ve cihazın kullanımıyla ilgilisağlanan talimatlara uygun şekilde çalıştırılmalıdır. Not: kontrollerin ayarlanması, kalite kontrol numune testi istem girişi ve kalite kontrol verilerinin gözdengeçirilmesi hakkındaki bilgiler için konu ile ilgili sistem kılavuzuna ve/veya Yardım menüsüne bakınız.Access HCV Ab PLUS QC kontrolünü, Access Immunoassay Sisteminde çalışmak için her 2 kontroldende en az (tek test) 175 μl (4 damla)/kap (Access / Access 2) veya 225 μl (6 damla)/kap (UniCel DxI)gereklidir.

ProsedürünLimitleri

Kontrol’de mikrobiyal kontaminasyon veya bulanıklık oluşursa şişeyi imha edin.

BeklenenDeğerler

Access HCV Ab PLUS analiz için kontrol bilgileri her lot için 'QC değer kartı' olarak kutunun içindeverilmiştir. Kullanıcı laboratuvarların kendi ortalama reaktivite seviyeleri uygun kabul edilebilir aralıktaolmalı, ancak her laboratuvar yeterli bilgi topladıktan sonra kendi ortalama reaktivite değerlerinibelirlemelidir.18

Verilen spesifik reaktivite seviyeleri, değişik üreticilerin analizlerinde, değişik uygulamalarda, değişik lotnumaralarında ve değişik laboratuvarlarda farklılık gösterebilir, bu yüzden de her laboratuvar kendireaktivite seviyelerini ve de kendi kabul edilebilir değer aralığını belirlemelidir.18,19,20,21 Kabul edilebiliraralık, 30 günlük bir dönemdeki 20 saptamanın 20 veri noktasına işaret eden ortalamanın ±2 StandartSapması içindeki bütün verileri içermelidir.22

BIO-RAD BU ÜRÜNLERI N ETI KETTE BELIRTILDIĞ I VE VERI LM IŞ LITERATÜRDEKI GIBIPERFORMANS SAĞ LAYACAĞ INI GARANTI EDER. BIO-RAD BAŞ KA HERHANGI BIRAMAÇ IÇIN HIÇ BIR GARANTI VEYA ORTALAMA KALITE VEYA UYGUNLUK BELIRTMEZIMA ETMEZ. HIÇBIR DURUMDA BIO-RAD YUKARIDA SÖZÜ EDILEN SARIHTEMINATLARDAN ORTAYA ÇIKAN DOLAYLI HASARLARDAN SORUMLU DEĞ I LDIR.

Access, UniCel ve DxI, Beckman Coulter Inc.’ın ticari markalarıdır

Referanslar1 Choo QL., Kuo G., Weiner AJ, et al. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis









Committee for Clinical Laboratory Standards, 3rd edition.







11/2010

Bio-Rad



Tel. + 33 (0) 1 47 95 60 00

Fax: + 33 (0) 1 47 41 91 33

0459

HCV Ab PLUS - REF 34330 HCV Ab PLUS CALIBRATORS - REF ...€¦ · R1 Access HCV Ab PLUS reagenční...

Documents

Transcript of HCV Ab PLUS - REF 34330 HCV Ab PLUS CALIBRATORS - REF ...€¦ · R1 Access HCV Ab PLUS reagenční...