Genska ekspresija

mikro RNA (miRNA)

u mijelodisplastičnom

sindromu – san ili java?

Mirjana Mariana Kardum ParoKlinički zavod za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu

Klinička bolnica Merkur

Referentni centar Ministarstva zdravstva za izradu i primjenu bioloških referentnih intervala medicinskobiokemijskih pretraga

prema Circulation Research. 2011;108:219-234. (van Rooi E et al.)

otkriće miRNAu C. Elegans

otkriće miRNA u humanim

uzorcima

prve korelacije miRNA i

nastanka tumora

povezivanje miRNA s bolesti

miRNA iz transgeničnih

miševa

otkrivanje miRNA u

plazmi

otkriće prvih genetskih delecija specifičnih miRNA

miRNA u plazmi -biljeg kardijalne

bolesti?

prva istraživanja o biogenezi i

funkciji miRNA

miRNA u terapeutske

svrhe?

miRNA

Genska ekspresija miRNA

Genska ekspresija miRNA u MDS-u

Autor Broj bolesnika/

broj zdravih osoba

Porijeklo

miRNA

Metode određivanja

genske ekspresije miRNA

Literaturni izvor

Hussein i sur. 24 / 3 mononuklearne stanice

RT-PCR Leuk Res

2010;34:1169-74.

Sokol i sur. 44 / 17 mononuklearne stanice

metoda mikrorešetke Br J Haematol 2011;153:24-32.

Erdogan i sur. 10 / 10 mononuklearne stanice

metoda mikrorešetke Exp Hematol 2011;9:915-26.

Merkerova i sur. 43 / 9 CD34+ stanice koštane srži

RT-PCR Eur J Hum Genet 2011;19:313-9.

Votavova i sur. 7 / 5 CD34+ stanice koštane srži

RT-PCR J Hematol Oncol 2010;4:1.

Hussein i sur. 25 / 10 mononuklearne stanice

RT-PCR Ann Hematol 2010;90:307-13.

Genska ekspresija miRNA u MDS-u

zatajenje KS

progresija u AML

trombocitopenija neutropenija

anemija

Trombocitopenija

Displazijatrombocitoza

prema Eur J Haematol 2016;96:553-63..

Genska ekspresija miRNA u MDS-u

lošija prognoza!

učestaliji relaps!

klaster miR-125a/99b/let-7a

povećana genska ekspresija

miR-99b u 30% MDS

povećana genska ekspresija

miR-125a u MDS = lošija

prognoza!

snižena genska

ekspresija u MDS

(IPSS-HR)

povećana genska

ekspresija u MDS

(IPSS-LR)

Metode određivanja genske

ekspresije miRNA

prema Analytica Chimica Acta 2011;699:134-152. (de Planell-Saguera M et al.)

Metoda Mehanizam djelovanja Prednosti Nedostaci

Nothern blot

komplementarna

oligonukleotidna

sonda se veže na ciljnu miRNA

uhvaćenu na nitroceluloznu

membranu

široko primjenjiva

kvantitativna

zadovoljavajuće specifičnosti

nisko osjetljiva

potrebne velike količine

uzorka

vremenski zahtjevna

analiza

mikropostroja

hibridizacija nukleinskih

Kiselina između miRNA i

odgovarajuće komplementarne

sonde imobilizirane na

mikropostroj

profiliranje višestrukih miRNA

istovremena analiza više miRNA

brza računalna analiza podataka

nisko osjetljiva

nisko specifična

in situ hibridizacija

detekcija miRNA hibridizacijom

komplementarnog lanca

nukleotidne sonde na sekvencu

od interesa

razlučivost na staničnoj /

substaničnoj razini pomoću

neradioaktivnih sondi

dugotrajna

semikvantitativna

kvantitativno

određivanje

lančanom reakcijom

polimeraze

reverzna transkripcija ciljane

miRNA u komplementarnu DNA

uz umnažanje lančanom

reakcijom polimeraze što

rezultira fluorescencijom

visoko osjetljiva

kvantitativna

točna

jednostavna

visoko osjetljiva

specifična

financijski i vremenski

zahtjevna

preporuke .... 2017.

Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2017; Volume 55, Issue 5 (May 2017)

Special issue: miRNAs in human disease and their impact on laboratory medicine

Best practice recommendations to standardize preanalytical variables

in the detection of circulating and tissue miRNAs (Khan et al.)

Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 2017; Volume 55, Issue 5 (May 2017)

Special issue: miRNAs in human disease and their impact on laboratory medicine

miRNA assays in the clinical laboratory: workflow, detection

technologies and automation aspects (Kappel A et al.)

preporuke .... 2017.

dileme ... cell-miR-39 vs. miR-126?

miRNA stabilne u serumu/plazmi:

let-7a miR-92a miR-26b

let-7c miR-93 miR-423-5p

miR-21 miR-103a miR-222

miR-22 miR-126 miR-26a

miR-23a miR-145 miR-191

miR-24 miR-146a miR-25

različite genske ekspresije miRNA su ili odraz heterogenosti MDS-a ili posljedica različitih protokola istraživanja

smanjene genske ekspresije miR-146a, miR-150, let-7a, miR-23a, miR-103 i miR-126 u MDS-u

miR-125a, miR-99b i let-7a predstavljaju potencijalne prognostičke biljege rane dijagnoze i klasifikacije MDS-a

miR-144, miR-16, miR-25, miR-451, miR-651, miR-655 i let-7a mogući prognostički biljezi MDS-a normalnog kariotipa

daljnja istraživanja usmjeriti na otkrivanje genskih ekspresija specifičnih miR koje bi mogle pomoći u razlikovanju MDS-a visokog rizika (IPSS-HR) od MDS-a niskog rizika (IPSS-LR)

Zaključno ...

.... Hvala na pažnji!

»Referentni centar Ministarstva zdravlja za dijagnostiku i liječenjemijelodisplastičnog sindroma« (NN 47/09)

Centar izvrsnosti u mijelodisplastičnom sindromu (MDS Foundation)

Projekt “Prognostička vrijednost i dinamika cirkulirajuće mikroRNA u visokorizičnom mijelodisplastičnom sindromu liječenom 5-azacitidinom”(Hrvatska zaklada za znanost)

Baza projekata

Detalji projekta<< Pretraživanje

Naziv projekta:

Prognostička vrijednost i dinamika cirkulirajuće mikroRNA u visokorizičnom mijelodisplastičnom sindromu liječenom 5-azacitidinom

Voditelj: Vrsta natječaja:

Slobodanka Ostojić Kolonić Istraživački projekti

Rok: Šifra: Akronim: Trajanje:

2016-06 5842 MDSmicroRNA 20.03.2017 - 19.03.2021

Znanstvena područja: Biomedicina i zdravstvo

Znanstvena polja: Kliničke medicinske znanosti

Ustanova: Klinička bolnica "Merkur", Zagreb

Ključne riječi: myelodysplastic syndrome, microRNA, 5-azacitidine, prognostic factors, high risk