Ekstraksi

Fraksinasi Flavonoid

Penapisan Flavonoid

Simplisia 1 gram

++100 mL air panas

Dididihkan selama 5 menit

Disaring

Filtrat

Lanjutan...

Filtrat C

Filtrat C (5 mL)

++ Serbuk Mg ++ HCl pekat 1 mL

++ Amil alkohol Kocok kuat

Lapisan amil alkohol

Terbentuk warna

+ Flavonoid

Hasil

Amil alkohol

Air

Pegagan Binahong

Amil alkohol

Air

Ekstraksi Fraksinasi Flavonoid

Harbone, J.B. (1996) : Metoda Fitokimia, terjemahan K.

Padmawinata dan I. Soediro, Penerbit ITB, Bandung

Markham, K. R. (1988) : Cara Mengidentifikasi

Flavonoid, terjemahan K. Padmawinata, Penerbit ITB,

Bandung.

Sirait, Midian. (2007) : Penuntun Fitokimia Dalam

Farmasi, Penerbit ITB, Bandung.

Mabry, Flavonoid

Penetapan Kadar Flavonoid ??

Pemisahan Flavonoid

Kromatografi kolom

Kromatografi lapis tipis (KLT)

Kromatografi kertas (Kkt)

Kromatografi Kolom

Adsorben

Silika gel

Isoflavon

Flavanon

Dihidroflavonol

Flavon Yang mengalami metilasi dan asetilasi

Flavonol Yang mengalami metilasi dan asetilasi

O dan C-glikosida dari isoflavon

Kromatografi kolom

Eluen

Nheksan EtOAc (6:1)

Nheksan-CHCl3 (1:1)

CHCl3-MeOH (20:0,8)

EtOAc-MeOH (19:1)

Kromatografi Kolom

Selulosa

untuk semua kelas flavonoid

untuk Glikosida

Eluen

EtOAc-MeOH-Air

Asam asetat 2%

Asam asetat 5%

BAW (4:1:5)

Cara membuat BAW ???

KLT

Adsorben = Kromatografi kolom

Eluen = kromatografi kolom

CHCl3-MeOH (15:1)

Nheksan-ETOAc (3:1)

CHCl3-ETOAc (1:1)

Deteksi di Bawah Sinar lampu UV

Sinar lampu UV 366 nm

Sinar lampu UV 254 nm

Spot berwarna gelap (Fase diam silika)

Diuapi iodin

muncul sebagai bercak kuning coklat

AlCl3 (Metanol)

Kromatografi kertas

Eluen

asam asetat 2-60%

BAW (4:1:5)

Forestal (asam asetat-HCl-Air) 10:3:10

T-Butanol- Asam asetat-Air (3:1:1)

Penampak Bercak

FeCl 5% (MeOH)

Sinar lampu UV 366 nm

AlCl3 (MeOH)

Pereaksi semprot

AlCl3

Kompleks difenil-asam borat-etanolamin (Naturstoffreagenz A)

Asam sulfanilat yang terdiazotasi

Vanilin HCl

Sitroborat

AlCl3

AlCl3 5% dalam Metanol

Pada kromatogram

Disemprotkan dikeringkan

Menunjukan semua 5-hidroksi-flavonoid

Bercak berfluoresensi kuning

Pengamatan pada sinar UV 366 nm

Pemantauan Flavonoid

1 2 3 4 5

Fase diam silika gel GF254 pra salut, fase gerak BAW (4:1:5), 1: fraksi etilasetat

(0,1 mg), 2, 3, 4, 5: isolat TO-A (masing-masing 1, 2, 3, 5 g).

1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

UV 254 nm UV 366 nm AlCl3 5% UV 366 nm

Tampak visual DPPH 0,2%

1 2 3 4 5

H2SO4 10%

Kompleks AlCl3

Tampak Visual

+AlCl3 5%

AlCl3 5% Vs Sitroborat PADA KERTAS WHATMAN NO 3 DENGAN METODE DOT-BLOT TES

No Senyawa No Senyawa

1 Flavon 10 Asam-o-kumarat

2 3-OH-Flavon 11 Asam trans-m-kumarat

3 Luteolin-7-glukosida 12 Asam-p-kumarat

4 Apigenin-7-glukosida 13 Asam kafeat

5 kuersitrin 14 Asam ferulat

6 Rutin 15 Asam-o-hidroksi benzoat

7 -tokoferol 16 umbiliferon

8 Kuersetin 17 Saponin

9 Asam askorbat 18 Stigmasterol

1a 1b 2a 2b 3a 3b

4a 4b 5a 5b 6a 6b

7a 7b 8a 8b 9a 9b

10a 10b 11a 11b 12a 12b

13a 13b 14a 14b 15a 15b

16a 16b 17a 17b 18a 18b

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

Sinar UV 254 nm Sinar UV 366 nm

+AlCl3 pada Sinar UV 254 nm +AlCl3 pada Sinar UV 366 nm +Sitroborat pada Sinar UV 254 nm

+Sitroborat

pada Sinar UV 366 nm

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

13 14 15

16 17 18

1 (Flavon), 2 (3-OH-Flavon), 8 (Kuersetin)

Larutan Penampak Bercak Sitroborat?

Larutkan 5 g asam sitrat P dan 5 g asam borat P dalam

etanol hingga 100 mL

Farmakope Herbal Indonesia, Edisi 1 tahun 2008, hal 183)

Kompleks difenil-asam borat-etanolamin

(Naturstoffreagenz A)

1% dalam MeOH

Pada kromatogram

Disemprotkan dikeringkan

Menunjukan semua 3-4-dihidroksi-flavon dan

3-4-dihidroksi-flavonol

Bercak jingga (UV atau tampak)

4-hidroksi-flavon dan 4-hidroksi-flavonol

Bercak hijau kuning

Asam sulfanilat yang terdiazotasi

Asam sulfanilat 0,3% dalam HCl 8% (25 ml) dicampur

dengan natrium nitrit 5% (1,5 ml) tepat sebelum

digunakan.

Pada kromatogram

Disemprotkan natrium karbonat 20%

dikeringkan

Gugus hidroksi fenol terlihat sebagai bercak kuning,

jingga, atau merah

Vanilin HCl

5% dalam EtOH dicampur HCl pekat (4:1) tepat sebelum

digunakan.

Disemprotkan dipanaskan

Pola oksidasi lingkar-A floroglusinol dan lingkar-C jenuh (

umumnya pada kromatogram tidaktampak jika disinari

UV).

Untuk katekin dan proantosianidin muncul segera,

flavanon dan dihidroflavonol terbentuk lebih lambat.

1. Quercetin-3-O-gentiobioside

2. Kaempferol-3-O-gentiobioside

3. Quercetin-3-O-rutinoside

4. Vitexin-2-O-rhamnoside

5. Naringin and neohesperidin

6. Chlogenic acid

7. Orientin

8. Vitexin

9. Isorhamnetin-3-O-glucoside

10. Chlorogenic acid,

isochorogenic acid, caffeic acid

11. Isorhamnetin-3-Ogalactoside

12. Quercetin-3-O-rhamnoside

13. Kaempferol-7-O-rhamnoside

14. Caffeic acid and ferulic acid

15. Rutin, chlorogenic acid,

hyperoside.

Fase diam Silika gel GF254 pra salut, pengembang etil

asetat-asam format-asam asetat glasial-air (100-11-11-

27).

Penampak bercak NP/PEG.

UV 365 nm