Diagnóstico Imunológico

APLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOSAPLICAÇÕES DOS TESTES SOROLÓGICOS

Diagnóstico

Acompanhamento terapêutico

Epidemiologia

Diagnóstico de uma doença e a janela imunológica

DETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOSDETECÇÃO DE ANTÍGENOS E ANTICORPOS

AC SISTEMAREVELADORAG

Íntegro

Recombinante

Peptídeo

Monoclonais

PrecipitaçãoAglutinação

Enzima

Radioisótopo

Extrato

Policlonais

FluorocromoPurificado

Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes

Anticorpos - a chave para um diagnóstico

• Todas as reações de diagnóstico que usam Ag-Ac, têm por base a capacidade de um Ac reconhecer um dado epítopo- parte estrutural reativa de um antigénio.

• Tipos de Anticorpos:Monoclonais - reagem apenas com

um epítopo específico de um Ag.

Policlonais - ligam-se a vários epítopos de um antígeno.

• Os anticorpos monoclonais (década de 70): representaram um grande avanço na linha de diagnóstico imunológico dos laboratórios, com eles foi possível aumentar a especificidade dos "kits" e assim, obter resultados mais confiáveis.

• Anticorpos monoclonais: são anticorpos que possuem especificidade para apenas um determinado epítopo do antígeno, diferente dos anticorpos policlonais, onde temos varias imunoglobulinas respondendo a diferentes epítopos de uma mesma molécula antigênica.

Anticorpos Monoclonais (mAb)

Como é a nossa resposta humoral para um antígeno?

• Nossa resposta imunológica normal a um antígeno é uma resposta policlonal, ou seja, há uma estimulação múltipla de vários clones formadores de anticorpos, cujos produtos representam uma mistura de imunoglobulinas.

Estratégias para produção de mAbs

• Célula plasmática produtora do anticorpo de interesse.

• Objetivo: imortalizar linfócitos B - Fusão com mieloma.

• Mieloma: Linfócito imortal.

• Células de mieloma escolhidas devem ter características principais: (1) não produzir imunoglobulinas; (2) crescer em meio normal e não em meio de seleção.

Produção de Anticorpos Monoclonais

• Por fim, você terá hibridomas (células híbridas) que podem ser mantidas in vitro indefinidamente e que irão secretar anticorpos com especificidade definida.

OS ANTICORPOS PRODUZIDOS POR HIBRIDOMAS, DERIVADOS DE UM ÚNICO CLONE, SÃO CONHECIDOS COMO ANTICORPOS MONOCLONAIS (AcMo)

1- Imuniza-se o rato, camundongos ou hamsters com antígeno e retira-se o baço ou o linfonodo desses animais, ricos em linfócitos B.

2- Essas células são misturadas com o mieloma (não secretor de Ig e que não cresce em meio seletivo)

3- Os hibridomas são testados quanto à presença de anticorpos reativos para o antígeno usado na imunização

4- Assim que o sobrenadante do poço revela a presença de anticorpos, as células são clonadas e os seus sobrenadantes testados novamente;

5- Os poços positivos são reclonados para garantir a monoclonalidade e a isotipia

• Por que é necessário usar células de mieloma que cresça em meio de cultura normal, mas não cresça em meio “seletivo”?

CARACTERÍSTICAS DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS

Homogeneidade

Especificidade

Habilidade para ser produzido em quantidades ilimitadas

Diagnóstico e terapia de tumores

Imunodiagnóstico de doenças infecciosas

APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS MONOCLONAISAPLICAÇÕES DOS ANTICORPOS MONOCLONAIS

Identificação de marcadores fenotípicos e análise funcional de moléculas de superfície celular

Terapia para algumas doenças

• OKT3, se liga a molécula de CD3 na superfície de linfócitos T, é utilizado para prevenir rejeição aguda de órgãos transplantados, por exemplo, rim;