Post on 19-Jan-2016
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Facultas de Farmacia y BioquímicaEscuela de Farmacia y Bioquímica
QUÍMICA ORGÁNICA II
«IDENTIFICACIÓN Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE COMPUESTOS
ACTIVOS EN ANEMONAS,ERIZOS Y ESTRELLA DE MAR»
INTEGRANTES:
- Karen Kheyd, Chávez Dávila.- Arnaldo Joseph, Navarro Soto.- Carlos Alberto, Carreal Gómez.- Richard Kevin, Guerra Caballero.
PROFESOR: César Máximo, Fuertes Ruiton.
LUGAR DE LA RECOLECCION DE
LAS MUESTRAS
Playas de Ancón (Lima – Perú),exactamente en una lugar
llamado por sus pobladores como “Playa los descalzos” encontrado en esta zona una variedad de animales
marinos , sobre todo de invertebrados.
CARACTERISTICAS DE LAS MUESTRAS
Stichaster Striatus ( estrella de mar)
Familia: stichasteridae
Clase :asteroidea.
Phymactis papillosa (anémona de mar)
Familia: actiniidae.
Clase : anthozoa
Tetrapygus niger (erizo de mar)
Familia : equinodermos.
Clase : equinoideos
PARTE EXPERIMENTAL:
INVERTEBRADO: «Phymactis papillosa» (Anemona de mar) y Tetrapigus niger (erizo de mar)
1. PESADO DE LAS ANÉMONAS Y ERIZOS DE MAR :
18 anémonas de mar y 33 erizos de mar
2. SECADO :
Porcentaje de humedad: 78,64% (anémona), porcentaje de humedad (erizo): 85 %
PULVERIZADO DE LA MUESTRA
Una vez secada la muestra de estrellas de mar , se trituro manualmente y se pulverizo usando un mortero , convirtiéndolo hasta polvo (toda la muestra).
Anémona de mar
Estrella de mar
Erizo de mar
MACERADO DE LA MUESTRA
Se dejó reposar por una semana la muestra del pulverizado de la muestra, extrayendo los metabolitos que son afines en polaridad al solvente, estando entre estos los alcaloides
IDENTIFICACION DE ALCALOIDES
ESTRELLA DE MAR
ANEMONA DE MAR
ERIZO DE MAR
Cromatografía en capa fina silica gel.Fase móvil: cloroformo/metanol (3ml:1,5ml).
Anemona>Estrella> Erizo
Se uso reactivo de dragendorff.
AISLAMIENTO DE ALCALOIDES EN
ANEMONA DE MAR
El extracto etanólico se acidulo con HCl concentrado obteniendo el clorhidrato del alcaloide y luego se llevo a la pera de bromo .
La fase acuosa se alcalinizó con NaCO3, luego se lavo con cloroformo consecutivamente 3 veces obteniendo finalmente el alcaloide puro.
Proceso de la identificación y aislamientode saponinas en Estrellas de mar
1. PESADO DE LAS ESTRELLAS DE MAR :
Peso : 1247g
2. SECADO :
Peso después del secado:387,2 g Porcentaje de humedad igual a 68,95%.
19 estrellas de mar (stichaster striatus)
Se extrajo 1g de la muestra de estrella mar y se disolvió con una cierta cantidad de cloroformo en un tubo de ensayo, luego se procedió a agitarlo fuertemente y constantemente durante varios minutos , a final dio como resultado espuma que se mantuvo durante 1 minuto.
Prueba de índice afrosimétrico
MACERADO DE LA MUESTRA:
Se maceró 100g de la muestra en 200ml de etanol, dejándolo así durante una semana , agitándolo cada 24 horas para que el solvente extraiga los metabolitos de la muestra ( saponinas ).
FILTRADO DEL MACERADO
se hizo el filtrado del extracto etanólico obteniendo 130ml.
Se extrajo 10ml del extracto etanólico en un beaker y se evaporo en baño maria.
1 gramo y lo colocamos en un tubo de ensayo y le agregamos 6ml a 10 ml de agua y se procedió a hacer la prueba de espuma nuevamente, dando resultados positivos.
COMPROBACION DE SAPONINAS EN CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Se preparó el revelador : Reactivo de vainillina , para la comprobación de saponinas.
Fase estacionaria: placa silica gel
Se hizo 3 cromatografias en capa fina con diferentes sistemas de solventes:
Fase móvil A: Fase móvil B : Fase móvil C:(n-butanol; ácido acético; agua) (Acetato de etilo ; metanol; agua (2ml de acetato de etilo (7:1:2) y acido acético) (7.5:2 : 0.3:0.2) +4 gotas de metanol)
Cada placa fue revelada con el reactivo de vainillina usando el atomizador , los resultados dieron positivo con la fase móvil A , donde se halló presencia de saponinas en lugar del sembrado con el extracto etanólico.
Sembrado de las muestras
AISLAMIENTO DE SAPONINAS:
Se preparó la cromatografía en columna donde se uso: - Kieselgel 0.2 – 0.5 mm (30 – 70 mesL ASTM), (Silica gel para cromatografía en columna)-Lana de vidrio.b)Se pesó la silica gel ( en polvo) siendo su peso 15,4 g.
se preparó el sistema de solventes n-butanol , ácido acético y agua (7:2.1) . Total: 100ml.
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Se usó 79 viales donde cada vial tuvo aproximadamente 0.5ml de la muestra de saponinas aislada en el proceso del goteo.
Obtencion de l aislamiento.
IR
PARTE EXPERIMENTAL
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Se han propuesto muchas reacciones de color par detectar la presencia de estos compuestos, siendo los mas usuales: la reacción de Liebermann Burchard.
PROCEDIMIENTO:
Muestra problema pocas gotas de HOAc 3 ml de Ac2O/H2SO4 (50:1)
Las saponinas triterpenoide dan color rosado o purpura, mientras que las
saponinas esteroidales dan azul-verdoso
PARTE EXPERIMENTAL
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar) Prueba de
hemólisis
Se aplicó una gota de sangre
Luego de adicionar una gota de sangre se colocó
una gota de saponina
PARTE EXPERIMENTAL
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar) Índice
Hemolítico
MATERIALES :-Centrifuga, micropipeta , fiola , pipeta ,sangre humana, tubos de ensayo y suero fisiológico.
Centrifugado por 15 minutos
Se agrega los elementos
formes separado del plasma a la
fiola.
Se enrasa con suero fisiológico 9% hasta aprox.
100ml.Se agrega la M.S y M.E a los tubos en cantidades de 0.1,0.2,... Hasta 1ml, luego se completa hasta 5ml con la solución de la fiola. En total fueron 10 tubos para la M.E y 10 tubos para la M.S
RESULTADOS
RESULTADOS:
INVERTEBRADOS: «Tetrapygus niger» (erizo de mar), «Phymactis papillosa» (Anemona de mar) y «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Anémona de mar
Erizo de mar
Estrella de mar
RESULTADOS:
INVERTEBRADO: «Phymactis papillosa» (Anemona de mar)
Extracto clorofórmic
o
Extracto etanólico
Mancha naranja, obtenida después del
aislamiento
RESULTADOS:
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Prueba de
espuma
CCF con el reactivo de vainillina
sulfúrica
Prueba de cromatografía
en columna
Extracto clorofórmico
Extracto
etanólico
Siembra a partir de los viales con saponina
Espuma estable por más de 5
minutos
RESULTADOS:
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Prueba de Liebermann-Burchard
Se observó que en el orificio A cambió de coloración a un rojizo tenue evidenciando que la muestra posee saponinas de tipo triterpenoide
A B C
RESULTADOS:
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Prueba de hemólisis
Una gota de sangre diluida
Una gota de sangre diluida
Saponina
estándar
Saponina de la
estrella de mar
Una gota de sangre
diluida sin saponina
RESULTADOS:
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Índice Hemolítico
Actividad
Biológica
Muestra estándar , con resultado
positivo.
0,1; 0,2; 0,3;0,4; 0,5;0,6;0,7;0,8;0,9 ;1ml
0,1;0,2;0,3;0,4;0,5;0,6;0,7;0,8;0,9; 1mlLa muestra de las saponinas que
contenía 0.1g de nuestro muestra seca más 10ml de suero fisiológico.
1 2 3 4 ....
A partir del tubo 4 de la M.S , los tubos restantes mostraron hemolisis
de la sangre iguales que en la muestra estándar, tenían coloreado
de rojo (liberación de la Hb).Por tanto se considera un resultado
positivo.Tubo de ensayo numero 4
En esta imagen se muestra 2 tubos ( el de 0,1ml y el 0,2 ml) y se nota los eritrocitos que han sedimentado , ya que la muestra de saponinas en esos tubos se llenaron con una concentración baja , pareciéndose a la muestra en blanco. Se concluye que en nuestra muestra de saponinas a mayor concentración a un volumen determinado en los tubos surge la hemolisis .
En el tubo 1 , cuyo contenido es de 0,1ml de M.S ; se observa los eritrocitos que no han sido afectados y han precipitados.
En el tubo 2, cuyo contenido es de 0,2,ml de M.S , la coloración ha aumentado ,debido a la concentración de M.S.
Esta imagen pertenece a la muestra estándar , muestra pura de
saponinas, donde la
M.E. reacciono
con toda las saponinas.
Cálculos: Índice Hemolítico
0,1g saponina MP ------------------> 10ml suero fisiológico
X ------------------> 0,4 ml
X= 0,004 g
0,004 g ------------------> 5 ml
1 g ------------------> X
X = 1250,00 (I.H)
RESULTADOS:
INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)
Espectroscopia Infrarroja
(IR)
Se presume que entre las
señales 1385-1380 cm -1 se
encuentra el gen dimetilEste pico
demuestra el grupo -
OH
Discusiones y conclusiones
Discusiones
Aislamiento de
saponinas
Cromatografía en columna:
teoría de platos teóricos.
Desplazamiento (elución) con
eventual separación de constituyentes
Discusiones• Actividad hemolítica: interacción entre saponina y
membrana de eritrocito (lisis)
HEMÓLISIS
Discusiones• Alcaloides son los únicos metabolitos que pueden
pasar de medio ácido a básico y reestablecer su estructura
Sales (clorhidrato
s)Alcaloides
Discusiones
SAPONINA ESTEROIDAL
Absorciones del espiroacetal (4 bandas) entre 800 y 1000 cm-1
SAPONINA TRITERPENOIDE
Grupo “gem”(1380 cm-1 )
Conclusiones• % humedad: (erizo>anémona>estrella de mar)
CCF con Rvo Dragendorff : resultado positivo.
• Solventes utilizados: para saponinas: (n-butanol, ac. acetico y agua), para macerado (etanol y cloroformo)
Conclusiones
Identificación de
saponinas
Índice afrosimétrico
Ensayo de Lieberman-Bouchman
Espectroscopía IR
Cromatografía en columna
Conclusiones• Comprobación de actividad hemolítica,
característico de las saponinas, lo que indica que este animal tiene compuestos muy prometedores para el ámbito farmacéutico y a nivel de industria.