i
SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF
ANTIFUNGI DALAM MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH
HIJAU (Piper betle L.) DENGAN VARIASI KETINGGIAN
TEMPAT TUMBUH DI BALI TERHADAP Candida albicans
ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE
KLT BIOAUTOGRAFI
SKRIPSI
I GUSTI AYU ARYA TRISNADEWI
1208505089
JURUSAN FARMASI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS UDAYANA
2016
ii
iii
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena
atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“SKRINING GOLONGAN SENYAWA BIOAKTIF ANTIFUNGI DALAM
MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) DENGAN
VARIASI KETINGGIAN TEMPAT TUMBUH DI BALI TERHADAP
Candida albicans ATCC 10231 MENGGUNAKAN METODE KLT
BIOAUTOGRAFI” tepat pada waktunya.
Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan dari
berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan
terima kasih kepada:
1. Ni Luh Putu Vidya Paramita, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku dosen
pembimbing I yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi,
semangat, bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti
pendidikan di Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan
skripsi ini.
2. Putu Sanna Yustiantara, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing II
yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,
bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan
Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.
iv
iv
3. Drs. Ida Bagus Made Suaskara, M. Si., selaku Dekan Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.
4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Udayana.
5. Seluruh dosen dan staff pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis
selama penyusunan skrispi ini.
6. Orang tua kandung yang sangat saya cintai dan hormati, I Gusti Ngurah
Agung, S.E. dan Gusti Ayu Warni yang telah mengasuh dan membesarkan
penulis, membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skrispi
ini.
7. Kakak kandung saya yaitu I Gusti Ayu Ngurah Lestari, S.E., I Gusti Ayu
Agung Adi Putri, S.Pd., dan adik kandung saya I Gusti Ngurah Agung
Pengalasan yang selalu memberi motivasi dan dukungan.
8. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2012, mahasiswa
Bahan Alam 2012 yang saya banggakan, khususnya Tim penelitian sirih:
Sulys, Kak Suas, Cahyani, Utik, Pebri, Dek in, Budi, Inggrid serta sahabat
seperjuangan geng giri kencana: Gek in, Dwi, Eling, Cokti, Cahyani, dan
Nila yang selalu membantu dan memberikan semangat dalam penyusunan
skripsi ini.
v
v
9. Teman terdekat I Nyoman Triadnyana, S.Ikom., yang telah memberikan
motivasi, dukungan, doa, dan selalu setia membantu dalam penyusunan
skripsi ini.
10. Para laboran Kak Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak
membantu dalam penyusunan skrispi ini.
11. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan
skrispi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penyusunan skrispi ini masih belum sempurna.
Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat
membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis
berharap semoga skrispi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang
memerlukan.
Bukit Jimbaran, Mei 2016
Penulis
vi
vi
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii
KATA PENGANTAR ..................................................................................... iii
DAFTAR ISI .................................................................................................... vi
DAFTAR SINGKATAN ................................................................................ ix
DAFTAR ISTILAH ......................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... xv
ABSTRAK ...................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN ........................................................................... 1
1.1. Latar Belakang .......................................................................... 1
1.2. Rumusan Masalah .................................................................... 5
1.3. Tujuan ....................................................................................... 5
1.4. Manfaat .....................................................................................
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA .................................................................. 6
2.1. Sirih Hijau (P. betle L.) ............................................................ 6
2.1.1. Klasifikasi .................................................................... 6
2.1.2. Deskripsi tanaman ........................................................ 7
2.1.3. Kandungan kimia .......................................................... 7
2.2. Minyak Atsiri ............................................................................ 8
vii
vii
2.3. Minyak Atsiri Daun Sirih (P. betle L.) ..................................... 9
2.3.1. Sifat Fisika-Kimia ......................................................... 9
2.3.2. Kandungan Kimia ......................................................... 9
2.3.3. Aktivitas Antifungi ...................................................... 10
2.4. Kandidiasis ............................................................................... 10
2.5. Candida albicans ...................................................................... 12
2.5.1. Klasifikasi .................................................................... 12
2.5.2. Morfologi dan Karakteristik ......................................... 13
2.6. Destilasi Air .............................................................................. 14
2.7.Bioautografi Kontak ................................................................. 15
BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................ 17
3.1. Rancangan Penelitian ............................................................... 17
3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian .................................................... 17
3.3. Obyek Penelitian ...................................................................... 18
3.4. Bahan Penelitian ...................................................................... 18
3.5. Alat Penelitian ......................................................................... 18
3.6. Batasan Operasional ................................................................. 19
3.7. Prosedur Penelitian .................................................................. 20
3.7.1. Preparasi Tanaman dan Ekstraksi ................................ 20
a. Determinasi tumbuhan .................................................. 20
b. Ekstraksi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau (P. betle L.) 20
3.7.2. Preparasi Jamur C. albicans ......................................... 21
a. Penyegaran .................................................................... 21
viii
viii
b. Pembuatan Suspensi .................................................... 21
3.7.3. Penyiapan Sampel Uji................................................... 21
3.7.4. KLT Bioautigrafi Kontak ............................................. 21
a. Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis............... 21
b. Karakterisasi dengan Pereaksi Pendeteksi .................... 22
c. Uji Aktivitas Antifungi ................................................. 23
3.8. Analisis Data ............................................................................ 23
3.9.Skema Penelitian ...................................................................... 24
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 26
4.1. Determinasi Tanaman ............................................................... 26
4.2. Ekstraksi Minyak Atsiri dari Daun Sirih Hijau ........................ 26
4.3. Optimasi Jumlah Penotolan Sampel Minyak Atsiri Daun Sirih
Hijau ......................................................................................... 30
4.4. Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis .......................... 31
4.5. Karakterisasi dengan Pereaksi Pendeteksi ............................... 32
4.6. Uji Aktivitas Antifungi ............................................................ 34
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 39
5.1. Kesimpulan ............................................................................... 39
5.2. Saran ........................................................................................ 39
DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 40
LAMPIRAN ..................................................................................................... 46
ix
ix
DAFTAR SINGKATAN
AIDS : Acquired Immune Deficiency Syndrome
ATS 4 : Automatic TLC Sampler 4
ATTC : American Type Culture Collection
C. albicans : Candida albicans
CFU : Colony FormingUnit
GC : Gas Chromatography
HIV : Human Immunodeficiency Virus
hRf : Hundred Retardation Factor
KLT : Kromatografi Lapis Tipis
LAF : Laminar Air Flow
MIC : Minimum Inhibition Concentration
MTCC : Microbial Type Culture Collection
MS : Mass Spectrometry
p.a. : pro analisis
P. betle L. : Piper betle Linn
pH : Power of Hydrogen
SDA : Saboraud Dextrose Agar
SDB :Saboraud Dextrose Broth
UPCC : University of Portsmouth Culture Collection
UV : Ultraviolet
mm : Milimeter
x
x
DAFTAR ISTILAH
Kandidiasis : Istilah yang dipakai untuk infeksi kulit dan
selaput lendir yang disebabkan oleh jamur dari
genus Candida.
Candiduria : Invasi Candida pada saluran kemih yang dapat
diketahui dengan ditemukannya Candida pada
urin.
Gastrointestinal
candidiasis
: Penyakit jamur Candida yang mengenai
saluran pencernaan.
Fungi opportunistik : Organisme yang biasanya tidak menyebabkan
penyakit pada seseorang dengan sistem
kekebalan tubuh yang normal, tetapi dapat
menyerang seseorang dengan sistem kekebalan
tubuh yang buruk.
Hifa : Struktur biologis berupa berkas-berkas halus
yang merupakan bagian dari tubuh vegetatif
berbagai fungi.
Blastospora : Tunas yang tumbuh menjadi spora.
Pseudohifa : Rantai-rantai pertunasan yang memanjang dari
blastospora.
Sistem kohobasi : Air kondensat yang keluar dari separator masuk
kembali secara otomatis ke dalam ketel agar
xi
xi
meminimkan kehilangan air.
Resistensi : Perlawanan yang terjadi ketika jamur secara
bertahap kehilangan kepekaan terhadap obat
yang sebelumnya membunuh mereka.
Autoklaf : Alat pemanas tertutup yang digunakan untuk
mensterilkan suatu benda menggunakan uap
bersuhu dan bertekanan tinggi (121oC, 1 atm)
selama kurang lebih 15 menit.
Bioautografi : Suatu metode yang spesifik untuk mendeteksi
bercak pada kromatogram hasil kromatografi
lapis tipis atau kromatografi kertas yang
mempunyai aktivitas sebagai antibakteri,
antifungi, dan antiviral.
Inkubasi : Suatu teknik perlakuan bagi mikroorganisme
yang telah diinokulasikan pada media (padat
atau cair), kemudian disimpan pada suhu
tertentu untuk dapat melihat pertumbuhannya.
Inokulasi : Suatu proses penenaman jamur atau
memindahkan jamur dari suatu media ke media
lainnya.
Patogen : Agen biologis yang menyebabkan penyakit
pada inangnya.
Biosintesis : Suatu proses yang dikatalisis oleh enzim yang
xii
xii
terjadi dalam organisme hidup, dimana substrat
diubah menjadi senyawa lain (produk) yang
biasanya memiliki struktur lebih kompleks
Pour plate : Mencampur sejumlah suspensi bahan pada
media agar yang dicairkan, lalu dituang pada
cawan petri steril secara aseptik dan dibiarkan
memadat
Determinasi tumbuhan : Pedoman yang digunakan dalam
pengidentifikasian tumbuhan yang belum
diketahui dengan cara membanding-
bandingkan morfologi dan anatominya
xiii
xiii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 3.1. Pereaksi Pendeteksi Golongan Senyawa Bioaktif.......................... 22
xiv
xiv
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Tanaman sirih hijau (P. betle L.) ................................................ 6
Gambar 2.2 Candida albicans dan Ilustrasi morfologi Candida ................... 12
Gambar 3.1 Skema Umum Prosedur Penelitian ............................................. 24
Gambar 3.2 Skema Skrining Golongan Senyawa Bioaktif Antifungi
Dengan Metode KLT Bioautografi Kontak ................................ 25
xv
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Rendah ......... 47
Lampiran 2 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Rendah ............ 48
Lampiran 3 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Sedang .......... 49
Lampiran 4 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Dataran Sedang ............. 50
Lampiran 5 Hasil Determinasi Tanaman Sirih Hijau Pegunungan ................ 51
Lampiran 6 Hasil Klasifikasi Tanaman Sirih Hijau Pegunungan .................. 52
Lampiran 7 Sterilisasi Alat dan Bahan ........................................................... 53
Lampiran 8 Pembuatan Media ....................................................................... 54
Lampiran 9 Perhitungan Pembuatan Fase Gerak (eluen) ............................... 55
Lampiran 10 Perhitungan Pembuatan Pereaksi Pendeteksi ............................. 56
Lampiran 11Perhitungan Persentase Rendemen Hasil Optimasi Metode
Ekstraksi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau .................................. 57
Lampiran 12Perhitungan Persentase Rendemen Minyak Atsiri Daun
Sirih Hijau ................................................................................... 58
xvi
xvi
ABSTRAK
Daun sirih hijau memiliki aroma khas yang berasal dari minyak atsiri
dengan kandungan golongan senyawa fenol dan terpenoid. Kandungan senyawa
minyak atsiri dipengaruhi oleh variasi ketinggian tempat tumbuh. Penelitian
sebelumnya melaporkan bahwa minyak atsiri daun sirih hijau memiliki potensi
sebagai antifungi terhadap C. albicans, sehingga pada penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui golongan senyawa bioaktif antifungi minyak atsiri daun sirih
hijau dengan variasi ketinggian tempat tumbuh di Bali terhadap C. albicans
menggunakan metode KLT bioautografi kontak.
Penelitian ini bersifat eksploratif laboratorik untuk mengetahui golongan
senyawa bioaktif antifungi dalam minyak atsiri daun sirih hijau terhadap C.
albicans. Pemisahan kromatografi lapis tipis dilakukan menggunakan fase diam
silika gel GF254 dan fase gerak toluene:etilasetat (93:7)v/v. Selanjutnya,
karakterisasi golongan senyawa bioaktif dilakukan menggunakan pereaksi Folin-
Ciocalteu, FeCl3, dan Anisaldehid-asam sulfat. Sedangkan uji bioautografi kontak
dilakukan dengan menempelkan plat pada medium yang berisi suspensi C.
albicans selama 1 jam kemudian plat diambil dan media diinkubasi selama 18 jam
suhu 37oC. Nilai hRf hasil karakterisasi dibandingkan dengan nilai hRf KLT
bioautografi kontak.
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak terdapat pengaruh variasi
ketinggian tempat tumbuh di Bali dengan sampel pada dataran rendah, dataran
sedang, dan pegunungan. Hal tersebut dapat dilihat dari profil golongan senyawa
yang sama, yaitu golongan senyawa terpenoid dan fenol pada hRf 52 dan 66,
golongan senyawa fenol dengan inti katekol pada hRf 52 dan 66, dan golongan
senyawa fenol sederhana pada hRf 66. Jadi golongan senyawa bioaktif dalam
minyak atsiri daun sirih hijau yang berfungsi sebagai antifungi terhadap C.
albicans adalah golongan senyawa fenol dan terpenoid.
Kata Kunci : P. betle L., Minyak Atsiri, KLT Bioautografi Kontak, C. albicans,
Golongan Senyawa.
xvii
xvii
ABSTRACT
Piper betel leaf has a distinctive aroma that comes from its essential oil
which contain phenol and terpenoids compound (monoterpenes and
sesquiterpenes). The essential oil in a plant was affected by environmental
conditions. Previous study reported that P. betel essential oil has good potential as
an antifungal agent against C. albicans, so in this study aims to determine the
class of antifungal bioactive compounds in green betel leaf essential oil with a
height variation fungus grows in Bali against C. albicans using methods KLT
bioautografi contact.
Our exploration laboratory study aimed to determine the element of
antifungal bioactive compounds in P. betel leaf essential oil to the fungus C.
albicans. Separation by thin layer chromatography using silica gel GF254
stationary phase and the mobile phase toluene: ethyl acetate (93: 7) v/v.
Furthermore, the characterization of bioactive compounds was conducted using
detection reagent such as, Folin – Ciocalteu, FeCl3, and anisaldehyde-sulfuric
acid and test bioautografi contact is made by placing the plate on a medium which
already contains the suspension for 1 hour and then the plate is taken and the
media were incubated for 18 hours at 37°C. HRF value detection reagent
characterization results are then compared with the value HRF bioautografi TLC
contact inhibition zone.
The result of this study indicates that there is no influence of the variation of
altitude where Piper betel grows in Bali with a sample in the lowlands, plains, and
mountains. It can be seen from the profile the same classes of compounds, that is
terpenoids compounds and group phenolic compounds at the value of HRF 52 and
66, group of phenolic compounds with catechol nucleus at the value of HRF 52
and 66, and group of simple phenolic compounds at the value of HRF 66. So,
groups of bioactive compounds in P. betel leaf essential oil that serves as
antifungal against C. albicans is a type of phenol compounds and terpenoids.
Keyword : P. betle L., Essential oil, TLC bioautography Contact, C. albicans,
Group of Bioactive Compounds.
Top Related