Validering av kjemiske analysemetoder

Anders T. Halvorsen

Fagdag Kontroll og utvikling 01.04.2014

Validering ≠ Skjemautfylling

Validering ≠ Statistikk

Anscombes kvartett

A B C D

X Y X Y X Y X Y10,

08,04

10,0

9,1410,

07,46 8,0 6,58

8,0 6,95 8,0 8,14 8,0 6,77 8,0 5,7613,

07,58

13,0

8,7413,

012,7

48,0 7,71

9,0 8,81 9,0 8,77 9,0 7,11 8,0 8,8411,

08,33

11,0

9,2611,

07,81 8,0 8,47

14,0

9,9614,

08,1

14,0

8,84 8,0 7,04

6,0 7,24 6,0 6,13 6,0 6,08 8,0 5,25

4,0 4,26 4,0 3,1 4,0 5,3919,

012,5

012,

010,8

412,

09,13

12,0

8,15 8,0 5,56

7,0 4,82 7,0 7,26 7,0 6,42 8,0 7,91

5,0 5,68 5,0 4,74 5,0 5,73 8,0 6,89

y = 0,5x + 3,0

R2 0,667SE (b1)

0,118

Σ(y-y)2 13,75

n 11

x 9,0

SD x 3,32Σ(x-x)2 110,0

y 7,58

SD y 2,03

Anscombes kvartett

Validering = Kompetanse

Analytisk

Validering

Rapport

Medisinsk

Plan↔

Interferenser i LC-MS/MS analyse av MMA

MetylmalonsyreAnalytt

RavsyreInterferens

Analytisk og medisinsk kompetanse i validering

OOH

HOO

OOOHHO

Interferenser i LC-MS/MS analyse av MMA

Valproat

Pasienter på valproat produserer små syrer i

sera

Nyre- og leversvikt

Produserer har «skitne» sera

Medisinsk kompetanse

Interferenser i LC-MS/MS analyse av MMA

Analytisk kompetanse

Presisjon til en analytisk prosedyre

er den spredningen i resultater som

man får ved gjentatte målinger av

samme, homogene prøve under

gitte forhold.

Presisjonsstudier

Innen serie presisjon (repeterbarhet)Samme måling gjort under like omstendigheter

Total-presisjon (reproduserbarhet)Samme måling gjort over tid, av forskjellige operatører osv.

Presisjonsstudier

Nok data

Varier betingelser

Forsøksdesign (kjemometri)

Noen praktiske tips

Lot til lot variasjon

Små forskjeller

Inkluderes i presisjon

Store forskjeller

Korrigere metoden

Av kalibratorer og kritiske reagenser

Det er viktig at kunde (rekvirenten) ikke skal være avhengig av å

vite hvilke instrument, lotnr på reagenser osv som er brukt.

Jo mindre forskjell, jo flere målinger kreves for å estimere denne.

Linearitet til en analytisk prosedyre

er evnen til å gi et prøveresultat

som er direkte proporsjonalt med

konsentrasjonen av analytt i

prøven

Linearitet

Ikke alltid relevant

Ikke et krav at metoden skal være linear

Lineær i kalibreringsområdet

Linearitet

Metning av detektor

Deteksjonsgrense

Linearitet X/Y diagram

Linearitet residualdiagram

Linearitet konstant respons-diagram

Lineært område

Linearitet

Minst 6 konsentrasjonsnivåer, jevnt fordelt

QL til 120% av kalibreringsområdet

Anbefalte data

Linearitet

X/Y plott med lineær regresjon og korrelasjon

Residualer mot konsentrasjoner (X-verdier)

Residualer mot respons (Y-verdier)

Konstant-responsdiagram

Anbefalte diagrammer

Deteksjonsgrensen til en analytisk

prosedyre er den minste mengden

av analytt i en prøve som kan

skilles fra en blankprøve.

Deteksjonsgrense

Signal til støy-forhold (S/N)

Måling av blank

Fortynningsrekke ned mot deteksjonsgrensen

Deteksjonsgrense ved signal til støy

Støy

Signal

DL= 3 x støy-

signalet

Deteksjonsgrense ved blankmåling

~0,13 % av blanke vil gi et resultat >3s

(Dette er ikke helt sant)

Deteksjonsgrense ved blankmåling

Mulig feil

50% av resultatene vil bli satt lik 0

Deteksjonsgrense ved fortynningsrekke

Usikkerhet (σ) i skjæringspunktet

Usikkerhet (σ) i stigningstallet

DL=3,3 σStigningstall

Deteksjonsgrense: Måling av blank 1

Korrigerer ikke for snittmåling

av blank

DL = X + 3SD

Korriger for snitt ≠ 0

DL = 4,02

Nr. Resp1 3,172 2,633 3,444 2,595 3,286 3,297 2,748 3,189 2,73

10 3,4111 2,7212 2,5013 2,7514 3,1415 3,46SD 0, 34DL 1,02 (3xSD)

Deteksjonsgrense: Måling av blank 2

Estimert deteksjonsgrense

ligger lavere enn eneste måling

≠ 0.

For lite oppløsning i avlesning

til å gi et godt mål på variasjon

i blank.

Nr. Resp1 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,18 0,09 0,0

10 0,011 0,012 0,013 0,014 0,015 0,0

Snitt 0,0SD 0,03DL 0,09 (3xSD)

Kvantifiseringsgrensen til en

analytisk prosedyre er den minste

mengden av analytt i en prøve som

kan kvantifiseres med en gitt

nøyaktighet.

Kvantifiseringsgrense

Måling av blank

Fortynningsrekke

Måling av usikkerhet

Kvantifiseringsgrense ved blankmåling

50% av prøvene vil bli angitt som blank

Kvantifiseringsgrense ved blankmåling

0,13% av prøvene vil bli angitt som blank

Kvantifiseringsgrense ved blankmåling

Kvantifiseringsgrense ved usikkerhet

Krav til spredning (CV)

Kravet må være relatert til metodens bruk

Minst seks replikater nær

kvantifiseringsgrense

Deteksjonsgrense og kvantifiseringsgrense

Deteksjonsgrense viser at prøven ikke er

blank

Kvantifiseringsgrense er et resultat med

usikkerhet

Kvantifiseringsgrense kan presse ned mot

deteksjonsgrensen, om økt usikkerhet er

akseptabelt