UJI HA(Hemaglutination Assay)

Laboratorium Mikrobiologi dan ImunologiVeteriner

Fakultas kedokteran hewanUniversitas brawijaya

Pengertian

Uji serologis untuk mendeteksi mikrooganisme yang memiliki glikoprotein permukaan hemaglutinin dan sertauntuk mengukur titer mikroorganisme tersebut.

Ag bentuk partikel direaksikan dengan Ab spesifikmembentuk Aglutinasi

Faktor yang mempengaruhi: Muatan listrikprotein,molaritas medium,vaksositas media,danfenomena prozone

TujuanUntuk mengukur titer mikroorganisme (ag) yaitu

kemampuan m.o untuk menginfeksi yang ditandaidengan adanya hemaglutinasi eritrosit

Mengetahui keberadaan virus yang mampumenghemaglutinasi RBC.

Prinsip kerjaMikroorganisme yang memiliki glikoprotein

permukaan hemaglutinin dapat dideteksi melaluiadanya reaksi eritrosit yang mengalamihemaglutinasi setelah diberi antigen.

Alat danBahan

ALAT

Mikropipet berbentukU

Mikropipet

Yellow dan Blue Tip

Plastic Wrap

Mechanical Vibrator

BAHAN

PBS Steril

Antigen : ND

Eritrosit Ayam 0.5%

LangkahKerja

→Diisi sumuran pada mikroplet berbentuk u (A1-A12) dengan PBS sebanyak 25μl

→Dimasukan antigen sebanyak 25μl ke sumuranA1

→Dilakukan pengenceran berseri dengan caramengambil 25μl antigen dari sumuran pertama(A1) yang dilanjutkan ke sumuran berikutnya(A2) sampai sumuran akhir (A11), Lalu sisa 25μl dibuang.

→Ditambah semua sumuran dengan eritrosisayam 0.5% sebanyak 25 μl.

→Dicampur eritrosit dan antigen menggunakanmechanical vibrator, lalu diinkubasi pada suhuruangan 30 menit. (Sumuran A12 berfungsisebagai kontrol negatif yang hanya berisi PBS dan eritrosis sehingga tidak terjadi aglutinasi)

→Dibaca titer antigen setelah 30 menit

Hasil

Mikroplate dimiringkan, dan dibaca dari bawah plate. Jika dimiringkan ada aliran sel darah merah (tilt and flow)

Hemaglutinasi terlihat sebagai aglutinat, berupa lapisaneritrosit secara merata pada dasar sumuran denganpenjernihan dari cairan bagian atas, dan tidak terjadipengendapan eritrosit (berbentuk titik) di tengah dasarsumuran.

InterpretasiHasil

- Sumuran 1 sampai 6 menunjukan hasil positif (terjadiaglutinasi

- Sumuran 7 sampai 12 menunjukan hasil negatif

tilt and flow

InterpretasiHasil

InterpretasiHasil