TOPL4 - bioorganickachemiesite.upol.cz · Methanol Mechanismus účinku • kyselina...
Transcript of TOPL4 - bioorganickachemiesite.upol.cz · Methanol Mechanismus účinku • kyselina...
OPVK CZ.1.07/2.2.00/28.0184
Toxikologie omamných a psychotropn ích látek
OCH/TOPL 4
RNDr. Tom áš Gucký, Ph.D.ZS 2012/2013
Toxikologie těkavých látek II
Laboratorní diagnostika chronického
abúzu alkoholu.
CDT : Carbohydrate Defficient Transferin
TRANSFERIN:
plazmatický glykoprotein transportující Fe
syntetizován a metabolizován v játrech
molekulová hmotnost 79,750 Da
polypeptidový řetězec s dvěma oligosacharidovými řetězcipřipojených n- glykosidickou vazbou
oligosacharidové řetězce zakončeny kyselinou sialovou
Isoformy transferinu
asialotransferin disialotransferin trisialotransferin
} CDT
Klinický význam vyšetření CDT
samotný alkohol nezpůsobuje nárůst CDT
acetaldehyd snižuje aktivitu enzymů
při denní spotřebě více než 60 g alkoholu během 14 dní
metabolický polo čas – 14 dnůvysoká senzitivita (muži 83%, ženy 60%) p ři specifit ě (muži 97%, ženy 88%)spolu se stanovením GMT, MCV – p řesná diferenciálnídiagnostika
Vyšetření %CDT: falešná pozitivita
• syndrom karbohydrát-deficitních glykoproteinů (CDG I, CDG II)
• primární biliární cirhóza
• autoimunitní hepatitida
• hepatocelulární karcinom
• chronická nebo akutní hepatitida
• genetické varianty transferinu D3
CDT: Možnosti stanovení.
Imunoturbidimetrie:Příprava vzorku:
SPE na iontoměniči,
Imunoturbidimetrické stanovení CDT a celk.transferinu
Výpočet: % CDT = 15,7 x CDT/TT + 0,2
CUT OFF: 3%
HPLC:Příprava vzorku:
Selektivní precipitace proteinů
HPLC analýza, gradient.eluce
CUT OFF: 2,5%
Chromatogramy normálního a
patologického vzorku.
Norm ální sérum Pat ologické sérum
Genetická varianta D3
Norm ální sérum
Gen.varianta D3
Srovnání metod HPLC a IT stanovení%CDT.
Vzorek Imunoturbidimetrie
HPLC
1 4,0 1,61
2 4,2 2,15
3 3,1 1,26
4 3,9 0,81
5 3,6 2,37
6 3,2 1,71
7 2,9 0,49
8 3,1 1,99
Srovnání vybraných analytických
parametrů stanovení %CDT. HPLC vs. IT
Metoda Imunoturbidimetrie
HPLC Imunoturbidimetrie
HPLC
Parametr v šarži kontrolního materiálu
Normálníkontrola
Normálníkontrola
Patologickákontrola
Patologickákontrola
CV (%) 11,86 2,73 9,21 4,45
BIAS (%) 4,29 2,31 3,42 3,51
TEa (%) 28,01 7,76 21,85 12,41
Závěr: Výrazně lepší analytické parametry HPLC metody, výrazná úspora doby přípravy vzorku, minimalizace rizika náhodných chyb při přípravě,minimalizace rizika falešně pozitivních nálezů,ekonomická úspora
Methanol
Mechanismus účinku
• kyselina mravenčí způsobuje acidózu a blokádu oxidačního metabolismu zejména nervových buněk - vazba HCOOH na Fe3+ v enzymech ox. metabolismu, poškození očního nervu
Akutní otrava
• za 1 h po požití zmatenost, ataxie, velmi slabá opilost - účinky methanolu
• za 6 - 30 h symptomy otravy kyselinou mravenčí
– poškození zrakových nervů - pocit mlhy, sněhové vánice, dočasná nebo trvaláslepota
– poškození CNS - parkinsonismus, atetóza, chorea
– GI symptomy - vnitřní krvácení
Specifické antidotum
• ethanol - blokuje ADH, zabraňuje přeměně methanolu na formaldehyd
• Jinak léčba hemodialýzou
Glykoly, ethylenglykol
• Součásti nemrznoucích kapalin, Fridexy – obyvatelstvu dostupné
• Izomery propylenglykolu: méně toxický 1,2-propylenglykol (EKOFRIDEX), toxičtější
1,3-propylenglykol (vytváří kyselinu malonovou) – málo dostupný
• Dávka p. o. rychle vstřebána, rychlá distribuce, eliminace 20% PF močí
•• Metabolismus oxidacMetabolismus oxidacíí::
• ethylenglykol – glykolaldehyd – kys. glykolová – glyoxylová – šťavelová
OH
OH
OH
O
OH
O
OHO
O
OHO
O
OH
OH
Ethylenglykol
•• PPřřííznaky otravy:znaky otravy:• Útlum CNS, euforické opojení, narkotické účinky jako alkohol, později GI potíže, rozvoj
akutního renální selhání• S postupnou tvorbou toxických metabolitů –• s latencí metabolická acidóza, anurie, edém plic a mozku.
•• Terapie Terapie –– co nejdco nejdřřííve po dve po dáávce:vce:• Případné omezení vstřebávání noxy výplachem žaludku• Blokování tvorby toxických metabolitů – podání antidota ethanolu (p. o., i. v.)• monitorovat jeho hladinu 1-2 g/kg, pokud je v krvi zjistilelný EG a k. glykolová• Případná hemodialýza u vážných otrav • Korekce acidózy – natrium bikarbonát infuze
•• LaboratornLaboratorníí diagnostika:diagnostika:• Metabolická acidóza – neprodlenneprodleněě laboratorně ověřit možnost otravy glykolem
Teorie vzniku a typy závislostí
Adiktologie
Ad – dico: přiřknout
Addictus: otrok
Vybrané pojmy:
Craving, tolerance, racionalizace, bagatelizace
Kontrola pití a její ztráta, abstinen ční příznaky
Ranní doušek, ebrieta, palimpsest
Vývoj n ázorů na alkoholismus
MORALISTNÍPŘÍSTUP
MEDICÍNSKÝPŘÍSTUP
BEHAVIORÁLNÍPŘÍSTUP
Benjamin Rusch 1784Definice alkoholismuE.M.Jellinek
Z teorií I.P.Pavlova
Teorie vzniku z ávislostíBiologické teorie:
1979 Feuerlein: genetická teorie
Studium dědičnosti závislostí – rozporuplné výsledky, děti alkoholiků žijící v přirozeném prostředí vs. Děti alkoholiků z dětských domovů(otec – syn 29%, otec – syn – bratr 46%, matka – syn 6%)
Studium chování krys
Enzymové teorie: π – ADH
Dopamin-endorfinová teorie: tetraizochinolinové alkaloidy vytěsňují endorfiny
Teorie vzniku z ávislostíNeurobiologické - sociologické teorie:
1946 Bales: definice přístupu společnosti ke konzumaci alkoholu
- Abstinentní společnosti- Rituální konzumace
- Konviviální: pití odráží solidaritu a upevňuje společenské vztahy
- Utilitární: konzumace slouží uvolnění jedince a osobnímu uspokojeníDistribuce spotřeby alkoholu: log-normální (10% konzumentů spotřebuje 50%
celk.množství)
Bútora 1988: jasně prokázaná korelace mezi množstvím spotř.alkoholu/hlavu a rozšířením alkoholové závislosti
Teorie vzniku z ávislostíPsychologické teorie:
- Teorie redukce tenze
- Teorie inklinace k moci- Behaviorální psychologie, teorie učení
INTERVENUJÍCÍ PROMĚNNÉ FAKTORY
Klasické podmi ňování
Operativní podmi ňování
Učení nápodobou
FARMAKOLOGICKÝ STAV ORGANISMUENVIROMENTÁLNÍ PROVOKUJÍCÍPODNĚT
Typy abúzu alkoholu dle Jellineka
α: osoby s nevyváženou psychikou, řeší pitím vnitřní konfliktynebývá progrese nebo při významném zhoršení intervenujících faktorů
β: osoby s vysokou sociální konformitou, o samotě obvykle nepijí, riziko rozvojezávislosti velmi malé
γ: tzv. ANGLOSASKÉ PITÍ, nejčastější typ progredující závislosti na alkoholu,vyvíjí se při společném pití
δ: samotářské pití, často skryté až do pozdních stádií závislosti a poškozeníorganismu, typické spíše pro ženy
ε: epizodické pití, tahy, kvartální pití, často vazba na larvovanou psychózu
Stádia alkoholismu
I. PREALKOHOLICKÉ STÁDIUM
II. PRODROMÁLNÍ (VAROVNÉ STÁDIUM): objevují se palimpsesty, zvyšuje se tolerance, kontrola pití je přítomná, rozvoj obranných mechanismů
III. ROZHODNÉ STÁDIUM: tolerance nadále stoupá, na kocovinu reaguje nechutí k alkoholu, abstinence možná až v řádu týdnů, ztráta smyslu pro realitu, ublíženost, ztráta kontroly nad drogou, primární životní aktivitou je získat drogu (alkohol)
IV. TERMINÁLNÍ STÁDIUM: morální a osobnostní degradace, tolerance může klesat vlivem jaterního poškození, alkoholické psychózy, ranní doušky, tahy
Alkoholické duševní poruchy
DELIRIUM TREMENS – příčinou je převážně otok mozku, v prodormálním stadiu
poruchy spánku, třes, pocení, nechutenství (jako chřipka), event.až záchvat GM
Psychické příznaky: porucha orientace v prostoru a čase, vidiny (hmyz, oheň)
Trvání: 2-5 dní
Úmrtnost: neléčené cca 30%, léčené cca 2%
ALKOHOLOVÁ HALUCINÓZA
ALKOHOLOVÁ PARANOIDNÍ PSYCHÓZA
KORSAKOVOVA PSYCHÓZA
Základy řízení jakosti v klinických laboratořích
Nároky na klinickou laboratoř.
Produkce přesných a správných výsledků v čase adekvátním pro terapeutický zásah indikujícího lékaře.
požadavky statimové, nestatimové, TAT – turn around time.
Ekonomický chod: plynulost, kapacita, automatizace.
Řízení jakosti: IQC, EQC, dostatečný počet analýz určitého typu za jednotku času, kvalitní interpretace, systematická inovace, edukace pracovníků.
Trendy v laboratorních vyšetřovacích metodách:
CENTRALIZACE, KONSOLIDACE, POCT analyzátory
Kvalita laboratorního výsledku
LABORATORNÍVÝSLEDEK
PŘESNÝ ASPRÁVNÝ
PŘESNÝ ALENESPRÁVNÝ
NEPŘESNÝ ANESPRÁVNÝ
NEPŘESNÝ ALESPRÁVNÝ
Přesnost laboratorní metody
Míra shody mezi výsledky získanými opakovanou analýzou.
Opakovatelnost (repeatability) – přesnost v sérii.
Reprodukovatelnost (reproducibility) – přesnost v čase (mezi sériemi).
Mezilaboratorní reprodukovatelnost.
Míra přesnosti:
Směrodatná odchylka s
s
VARIAČNÍ KOEFICIENT: CV = ------ . 100 (%)
x
Správnost (pravdivost) laboratornímetody
Těsnost souhlasu mezi průměrnou hodnotou x a referenční (dohodnutou) hodnotou x0.
Míra pravdivosti: BIAS (vychýlení)
x – x0
Bias = ---------- . 100 (%)
x0
Chyba systematická
Chyba náhodná
Celková analytická chyba
TEa = 1,96 . s + bias (95% int.spolehlivosti)
Nejistota měření, kombinovaná nejistota měření
Návaznost (traceability) a referenční materiály
- primární ref.materiály
- sekundární (certifikované) ref.materiály
IVD-CE VÝROBKY
VYVINUTÍ, RESP.PŘEVZETÍVHODNÉ ANALYTICKÉ METODY,VALIDACE S VYUŽITÍM (C)RM
VALIDOVANÁ INSTRUMENTACE
KALIBRA ČNÍA KONTROLNÍ MATERIÁL
ZAJIŠTĚNÍ ZDROJE BM(nap ř. SÉRA)ZAJIŠTĚNÍ KONTROLY NEINFEKČNOSTI BMLYOFILIZÁTORVHODNÝ CRM K ZAJIŠTĚNÍ
METROLOGICKÉ NÁVAZNOSTI
ZAJIŠTĚNÍ VSTUPNÍ KONTROLYSTANDARDŮ A POMOCNÝCH CHEMIKÁLIÍ
CERTIFIKOVANÁ VÁHOVNAREAGENCIE
Vývoj IVD -CE produkt ů
ZAJIŠTĚNÍ VÝSTUPNÍ KONTROLY KONTROLA ANALYTICKÝCH ZNAK Ů REAGENCIÍEKONOMICKY VÝHODNÝ ZDROJ REAGENCIÍ
KOMPLETACE KITŮSTÁČÍRNASKLADOVÉ PROSTORYOBALOVÝ MATERIÁL
DOKUMENTACE VP CERTIFIKACE
Validace a verifikace lab.metod
VALIDACE – proces dokazování, že metoda vykazuje vlastnosti, jež jsou k danému použití požadovány.
Rozsah validace v KB:
opakovatelnost a reprodukovatelnost na min.2 hladinách (normální a patologická)
pracovní rozsah
meze detekce a stanovitelnosti
ověření interferencí
VERIFIKACE – zkrácená validace v případě IVD CE výrobku, ověření, že validační údaje výrobce platí v konkrétních podmínkách
Interní a externí kontrola kvality
IQC: min v každé sérii měření, jasné nastavení pravidel (např.za jakých okolností je nutné provést kalibraci, revalidaci atd.)
Westgardova pravidla
EQC: různé mezinárodní organizace Randox – Riqas, DGKL e.V., Instand e.V.
v ČR – SEKK (Systém externí kontroly kvality)