TEMA 10-1. Leucocitos. métodos generales y complementarios de estudio

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Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 10.1Tema 10.1

Tema 10.1Tema 10.1

LOS LEUCOCITOS. MÉTODOS DE ESTUDIO

GENERALES Y COMPLEMENTARIOS

BioquBioquíímica Clmica Clíínica i Hematologianica i Hematologia


Tema 10.1Tema 10.1

Hematopoyesis

Principios generales para el examen morfológico de médula ósea y la realización del mielograma

Semiología de los leucocitos de sangre periférica.

Normalidad

Anomalías más frecuentes

Métodos diagnósticos en hematología

LOS LEUCOCITOS. MÉTODOS DE ESTUDIO GENERALES Y COMPLEMENTARIOS


Tema 10.1Tema 10.1

Hematopoyesis

La hematopoyesis es el mecanismo fisiológico responsable de la formación continuada de los distintos elementos formes sanguíneos, que los mantiene dentro de la normalidad en la sangre periférica

En el adulto la hematopoyesis se lleva a cabo en la médula ósea, localizada en el interior de los huesos planos (cráneo, esternón, sacro, pelvis, etc)

En el hombre existe una célula madre pluripotente con capacidad de proliferación, diferenciación y autorrenovación: CFU-GEMM


Tema 10.1Tema 10.1

MEDULA ÓSEA SANGRE PERIFERICA

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Tema 10.1Tema 10.1

Principios generales para el examen morfológico de médula ósea y la realización

del mielograma


Tema 10.1Tema 10.1

SERIE GRANULOPOYÉTICA NORMAL EN MÉDULA ÓSEA


Tema 10.1Tema 10.1

SERIE MONOCÍTICA NORMAL EN MÉDULA ÓSEA


Tema 10.1Tema 10.1

SERIE LINFOIDE

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Tema 10.1Tema 10.1


Tema 10.1Tema 10.1DISTRIBUCIÓN DE LOS ANTÍGENOS DE SUPERFICIE EN LAS CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS EN SU DIFERENCIACIÓN


Tema 10.1Tema 10.1MÉDULA ÓSEA

Relación gránulo / eritroide : 3 / 1

15%

EosinófilosBasófilosLinfocitosPlasmáticasMonocitosHistiocitos /macrófagos

Otros

25%

ProeritroblastosEritroblastos basófilosEritroblastos policromatófiloEritroblasto ortocromático

Eritroblástica

60 %

MieloblastosPromielocitosMielocitosMetamielocitosBandasPolinucleares

GranulocíticaNeutrófila

ProporciónTipo de célulaSerie

MIELOGRAMA


Tema 10.1Tema 10.1

Semiología de los leucocitos de sangre

periférica.

Normalidad

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Tema 10.1Tema 10.1

LEUCOCITOS

Recuento del número total de leucocitos por unidad de volumen

FÓRMULA LEUCOCÍTICA no patológica

Expresión de las cinco poblaciones normales en percentagei valor absoluto.

Se realiza por análisis morfológico o por autoanalizador

FÓRMULA LEUCOCÍTICA patológica

Extensión de sangre periférica para valorar morfología

SERIE BLANCASERIE BLANCA


Tema 10.1Tema 10.1

INFORME AUTOMATIZADO DE UN HEMOGRAMAINFORME AUTOMATIZADO DE UN HEMOGRAMA


Tema 10.1Tema 10.1

EOSINOFILOS

NEUTROFILOS

LINFOCITOS

MONOS

Hemograma. Representación gráfica de las poblaciones

Poblaciones leucocitarias

Volumen

Tamaño del núcleo

Forma del núcleo

Regularidad del citoplasma

El espesor de las imágenes expresa la cantidad de células Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 10.1Tema 10.1

NEUTRÓFILOS

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Tema 10.1Tema 10.1SERIE GRANULOPOYÉTICA: NEUTRÓFILOS.

PRODUCCIÓN Y MADURACIÓN

MÉDULA ÓSEAProceso de proliferación y maduración (acelerado

en caso de infección)Almacenamiento

SANGRE

Vida media 6 horas

TEJIDOS

Emigran a pulmón, tubo digestivo y bazo

Vida media alrededor de 2 díasBioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 10.1Tema 10.1

EOSINÓFILO

BASBASÓÓFILOFILO


Tema 10.1Tema 10.1SERIE GRANULOPOYÉTICA:EOSINÓFILOS Y BASÓFILOS.

CARACTERÍSTICAS

Proceso de maduración similar al de los neutrófilosVida media en sangre 16 horasLos gránulos contienen peroxidasa, catalasa y flavoproteina

(peroxisomas): oxidación de lípidosMenor actividad antibacteriana que los neutrófilosPapel en la defensa contra helmintos

Los gránulos contienen glisosaminoglicanosReacciones de hipersensibilidad cutánea, bronquial, etc.

EOSINÓFILO

BASÓFILO


Tema 10.1Tema 10.1

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Tema 10.1Tema 10.1

SERIE GRANULOPOYÉTICA:MONOCITOS.

CARACTERÍSTICAS

MONOCITO

Funciones quimiotáctica y de fagocitosisSecreción de citoquinas (IL-1, TNF, interferón) y

factores de crecimientoMediadores en procesos de inflamación y defensa


Tema 10.1Tema 10.1

SERIE LINFOIDE

Linfocito


Tema 10.1Tema 10.1SERIE LINFOIDE

Mediano o grandeOcasionales

Menos densaMenor

Pequeño o medianoPresentes

Linfocito T colaborador (T4)Linfocito T supresor (T8)

DensaRelativamente acentuada

Características morfológicas:-Tamaño-Gránulos citoplasmáticos-Granulación azurófila

Gran tamaño y ubicación paranuclear:

Menor tamaño y localización múltiple:

-Cromatina-Basofilia citoplasmática

Síntesis de anticuerposInmunidad celularFunción colaboradora (T4)Función supresora (T8)Natural Killer (NK)

Función primordial

10-20%65-75%Porcentaje en sangre periférica

Corta (habitualmente)Larga (habitualmente)Longevidad

Médula óseaTimoAdquisición competenciaInmunológica

Célula madre pluripotentehematopoyética linfoide

Célula madre pluripotentehematopoyética linfoide

OrigenLINFOCITOS BLINFOCITOS T/ NKCARACTERÍSTICAS


Tema 10.1Tema 10.1

SERIE LINFOIDELinfocito grande granulado

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Tema 10.1Tema 10.1

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOSVALORES DE REFERENCIA EN ADULTOS

3- 100,1 - 1,014-20Monocitos

20 – 401,5 - 4,07-18Linfocitos

0,0 – 0,50,01 - 0,0512-14Basófilos

1 – 50,05 - 0,510-14Eosinófilos

45– 701,7 - 7,010-14Neutrófilos

4 - 10Leucocitos

Valor relativo( % )

Valor absoluto( x 109 L)

Diámetro ( μm )


Tema 10.1Tema 10.1RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

VALORES DE REFERENCIA EN NIÑOS

Valor absoluto ( x 109 L)

0,4 – 0,80,5 - 0,80,3 – 0,8Monocitos

1,5 – 7,02,5 – 8,03,0 – 9,0Linfocitos

0 – 0,010 – 0,01-Basófilos

0,2 – 0,40,2 – 0,40,2 – 0,4Eosinófilos

2,0 – 8,02,0 - 7,51,5 – 8,0Neutrófilos

4,5 - 126 - 126 – 16Leucocitos

6 a 14años

2 a 6años

Primeraño


Tema 10.1Tema 10.1

de médula ósea y la realización del mielograma

Semiología de los leucocitos de sangre periférica.

Anomalías más frecuentes

Cualitativas

Cuantitativas

Leucopenias

Leucocitosis


Tema 10.1Tema 10.1ALTERACIONES CUALITATIVAS

NEUTRÓFILOS

ANOMALÍA DE PELGER-HUËT

Segmentación ausente o disminuida

Clumping

Constitucional o adquirida

ANOMALIAS DEL NÚCLEO

CLUMPING

Anormal condensación de la cromatina

Disposición en extensos grumos

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Tema 10.1Tema 10.1


Tema 10.1Tema 10.1

NÚCLEO EN ANILLO

Hiposegmentación nuclear

Se observa un gran agujero central

HIPERSEGMENTACIÓN

Polinucleares con más de 5 segmentos

También puede afectar a los eosinófilos

ALTERACIONES CUALITATIVASNEUTRÓFILOS


APÉNDICES NUCLEARES EN PALILLO DE TAMBOR

Nódulos cromatínicos en forma de gota pendiente

Corresponden a cromosomas sexuales femeninos inactivados


Tema 10.1Tema 10.1

NNÚÚCLEO EN ANILLOCLEO EN ANILLO

HIPERSEGMENTACIHIPERSEGMENTACIÓÓNN


Tema 10.1Tema 10.1

HIPERGRANULACIÓN/ GRANULACIÓN TÓXICA

Granulación primaria con apetencia

tintorial alterada, se tiñe de manera

pronunciada

ALTERACIONES CUALITATIVAS NEUTRÓFILOS

ANOMALIAS DEL CITOPLASMADESGRANULACIÓN

LEUCOCITARIASigno dismórficoCitoplasma agranular y azuladoPuede ser artefacto

- PH inadecuado-discrasias plasmocelulares-frotis engrasados

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Tema 10.1Tema 10.1

DESGRANULACIDESGRANULACIÓÓN NEUTROFN NEUTROFÍÍLICALICA

( a veces pueden confundirse con ( a veces pueden confundirse con monocitos)monocitos)

HIPERGRANULACIHIPERGRANULACIÓÓN NEUTROFN NEUTROFÍÍLICALICA


Tema 10.1Tema 10.1

ANOMALÍA DE CHEDIAK-HIGASHI

Carácter hereditario

Gránulos anormales gigantes azul oscuros

Diámetro de 1 a 3µm

En todos los tipos leucocitarios

Patologia de los microtúbulos

Puede presentarse en Leucemias agudas mieloides (LAM)


ANOMALIAS DEL CITOPLASMA

CUERPOS DE DÖHLE

Inclusiones basófilos y pironinófilas

Forma ovalada o rectangular

y de 1 a 3µm diámetro

Agregados de reticuloendoplasmico


Tema 10.1Tema 10.1


Tema 10.1Tema 10.1

BASTONES DE AUER

Inclusiones formadas por fusión de diversos gránulos primarios

Azurófilas

En forma de bastoncillos



ASTILLAS

Inclusiones alargadas con extremos puntiformes

Azurófilas

Dispuestas en cúmulos, manojos o gavillas

Típico de la LAM Promielocítica

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Tema 10.1Tema 10.1

ASTILLASASTILLAS

(imagen para no olvidar)(imagen para no olvidar)


Tema 10.1Tema 10.1

Cromatina en grumos: Leucemia Linfática Crónica (LLC)

Núcleos irregulares, hendiduras: células de Sézary, centrocitos

Núcleos bilobulados: linfocitosis B policlonal

Segmentación radial: linfocitos estimulados o artefacto ( anticoagulantes)

Linfocitos estimulados: incluso con nucleolo

ALTERACIONES CUALITATIVASLINFOCITOS



Tema 10.1Tema 10.1

Vacuolas: células linfoblásticasComplejo ribosómico lamelar: tricoleucocitosInclusiones globulosas: naturaleza proteica

(inmunocitomas)

Amplitud citoplasmática: con basofilia y acoplamiento a los hematies: linfocitos activados(mononucleosis)

Proyecciones citoplasmáticas: linfocitos vellosos

ALTERACIONES CUALITATIVAS LINFOCITOS



Tema 10.1Tema 10.1

LINFOCITOS ESTIMULADOS / ACTIVADOSLINFOCITOS ESTIMULADOS / ACTIVADOS

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Tema 10.1Tema 10.1

Métodos diagnósticos en hematologíaCITOQUÍMICOS

INMUNCITOQUÍMICOS

CITOMETRÍA DE FLUJO

CITOGENÉTICA

BIOLOGÍA MOLEULAR

FISH

MICROARRAY


Tema 10.1Tema 10.1CITOQUÍMICOS

proceso químico aplicado a preparaciones de células en porta

intenta detectar componentes de las células: enzimas, principios inmediatos, o sustancias orgánicas

producto final presenta coloración visible al microscopio óptico

permite diferenciar distintos progenitores: mieloides, linfoides, monocitoides

TÉCNICAS: MIELOPEROXIDASAS: distinguen población mieloide granulocítica

ESTERASAS: distinguen población monocítica

OTRAS: lisozima, fosfatasa ácida (línea linfoide T), βglucoronidasa, etc

método menos utilizado que en el pasado


Tema 10.1Tema 10.1

INMUNOCITOQUÍMICOS O INMUNOHISTOQUÍMICOS

Se utilizan células frescas o muestras congeladaspreviamente fijadas

Se basan en la detección de antígenos celularesmediante anticuerpos monoclonales

Revelados mediante reacción enzimática que producen coloración

Muy laboriosas y requieren personal experimentado para su realización e interpretación

Complementaria a otras técnicas


Tema 10.1Tema 10.1

MIELOPEROXIDASA

Serie mieloide granulocítica

ESTERASA: alfa- naftil acetato esterasa

Serie monocítica

Anticuerpo CD61 que marca línea megacariocítica: plaquetas

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Tema 10.1Tema 10.1CITOMETRÍA DE FLUJO

Análisis celular multiparamétrico que precisa de sofisticados sistemas informáticos

Se basa en hacer pasar una suspensión de células alineadas y de una en una por delante de un haz de laser focalizado

El impacto produce una serie de señales que corresponden a diferentes parámetros de la célula y son recogidos por detectores, que convierten las señales en impulsos electrónicos y se digitalizan para permitir la medida simultánea de varios parámetros de la misma célula

Se combinan propiedades físicas con fluorescenciasBioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 10.1Tema 10.1

Se reconocen impulsos eléctricos por unidad de tiempo:- número de partículas- volumen de las mismas

El haz directo realiza el recuento celular por unidad de tiempo- número de partículas por dispersión- volumen de las mismas por difracción


Tema 10.1Tema 10.1Representación de dos parámetros físicos:

CUANTO MÁS GRANDE Y MÁS COMPLEJA ES LA CÉLULA, MÁS A LA DERECHA Y ARRIBA SE COLOCARÁ

violeta, células pequeñas y poco complejas correspondiente a los linfocitos.

rojo, basófilos que debido a la composición química de sus gránulos se comportan con patrones de dispersión similares a los linfocitos

verde, población de células grandes y mediana complejidad correspondiente a los monocitos.

amarillo, células complejas y grandes correspondiente a los neutrófilos

azul, las células más complejas de todas, correspondiente a los eosinófilos.


Tema 10.1Tema 10.1

Representación de un parámetro físico y una fluorescencia.

rojo linfocitos T colaboradores CD4+,

violeta resto de linfocitos.

Representación de dos fluorescencias

rojo linfocitos T colaboradores CD4+

violeta resto de linfocitos y linfocitos T supresores CD8++.

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Tema 10.1Tema 10.1CITOGENÉTICA

Imprescindible en el manejo de pacientes con enfermedades hematológicasDetectando cambios cromosómicos que implican a genes responsables de la

transformación neoplásica de las células hematológicasLas mutaciones originadas en precursores hematopoyéticos son observadas

en las células como:translocaciones (intercambio de material genético entre dos o más

cromosomas)deleciones (pérdidas de material cromosómico)duplicaciones (ganancias de material cromosómico)inversiones (reestructuración del material cromosómico)

El mayor impacto ha sido la demostración de que las anomalías cromosómicas son un indicador pronóstico independiente de otras variables (edad, recuento de leucocitos, fenotipo)

Ciertos cariotipos están asociados a buen pronóstico, mientras que otros indican malos resultados, lo que ha llevado a la administración de terapias alternativas


Tema 10.1Tema 10.1BIOLOGIA MOLECULAR

Estudia las bases ultraestructurales o submicroscópicas subyacentes a los procesos biológicos

Estudio a la escala molecular de los ácidos nucleicos DNA y RNAEs un área dentro de los campos de diagnóstico, pronóstico y tratamiento médicoMaterial de partida:

RNA, DNA de doble cadena y de cadena simple Técnicas:

Southern blotPCRPCR en tiempo realMicroarrays

Marcador molecular en un 40%-70% de las enfermedades hematológicasUtilidad:

Diagnóstico y Pronóstico Enfermedad mínima residual (EMR)/ monitorización del tratamientoFarmacogenética


Tema 10.1Tema 10.1FISH

Técnica FISH (Hibridación in situ con fluorescencia) supuso unsalto cualitativo en la caracterización de las distintas anomalías cromosómicas

Basada en la propiedad del ADN de cadena simple de hibridar específicamente con secuencias complementarias

Permite el empleo de sondas específicas para un cromosoma o un gen dado, aumentando la sensibilidad, eficacia y fiabilidad del análisis citogenético

Sirve de nexo de unión entre la genética molecular y los métodos citogenéticos clásicos

En los últimos años se han desarrollado otras: cariotipo multicolor, hibridación genómica comparada..., con la intención de resolver las carencias de las sondas convencionales y aportaruna mayor información


Tema 10.1Tema 10.1MICROARRAYS

Son dispositivos de pequeño tamaño (miniatura) que contienen material biológico genético . Sobre un soporte no poroso (vidrio o silicio) se crean micromatrices de sondas genéticas inmovilizadas, posteriormente son hibridadas con ácidos nucleicos libres y finalmente se realiza la lectura mediante scanner de alta precisión (microscopia confocal)

. Se estudian genes que se expresan de forma constante para asegurarse que las muestras son comparables. Se valora la intensidad, presencia o ausencia, incremento o descenso y cuantificación de la variación de señal respecto al control.

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Tema 10.1Tema 10.1


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TEMA 10-1. Leucocitos. métodos generales y complementarios de estudio

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