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Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de

soumission chimique

Julie Maublanc

SFTA - Réunion des Jeunes Scientifiques 11 juin 2013

GÉNÉRALITÉS

• Soumission chimique =« administration à des fins criminelles ou délictuelles d’un ou plusieurs produits psychoactifs, à l’insu de la victime

ou sous la menace »

• Objectif = altération de la vigilance, des • Objectif = altération de la vigilance, des capacités de jugement et du libre arbitre

• Véhicules▫ Boissons alcoolisées ou non▫ Aliments

Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de soumission chimiqueJulie Maublanc

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• Trois catégories de personnes particulièrement vulnérables

▫ les femmes → viols, ▫ les enfants → actes de pédophilie ou sédation,

GÉNÉRALITÉS

▫ les enfants → actes de pédophilie ou sédation,▫ les personnes âgées → vols, extorsions

• Agresseurs = souvent des proches ou des membres de la famille

3Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de soumission chimiqueJulie Maublanc

• Deux types de situations distinctes :

▫ les victimes « endormies » � sédation ou troubles de conscience suffisants pour compromettre toute résistance ou pour «

GÉNÉRALITÉS

pour compromettre toute résistance ou pour « avoir la paix »,

▫ les victimes « actives » � conscientes mais soumises ou désinhibées


PRISE EN CHARGE

• Rapide +++

• Doit comporter :

▫ Le recueil du/des témoignage(s)

▫ Un examen physique

▫ Une évaluation de l’état psychologique

▫ La réalisation de prélèvements

• Suivi psychologique et social à plus long terme


PRÉLÈVEMENTS

• Réalisation précoce

▫ ADN

▫ ToxicologiquesSang 2 x 10 mL sur tubes EDTA� Sang → 2 x 10 mL sur tubes EDTA

� Urine → 2 x 30 mL

� Cheveux → 4 mèches

� Accompagnés d’une fiche de renseignements


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QUELLES SUBSTANCES RECHERCHER EN PRIORITÉ ?

Selon les signes cliniques

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DesinhibitionNeuroleptiques

AmphétaminesBZDSédation


GHBCannabis Amnésie

HallucinationsLSD

AmphétaminesBZDEthanol

Kétamine

SédationNeuroleptiques

sédatifsAntihistaminiques

Opioïdes Anti-cholinergiques

QUELLES SUBSTANCES RECHERCHER EN PRIORITÉ ?Selon le délai entre les faits et la prise en charge


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• Sang si < 1 semaine• Urine si < 2 semaines• Au-delà → cheveux

QUELLES SUBSTANCES RECHERCHER EN PRIORITÉ ?

• Pour élargir fenêtre de détection, utilisation de techniques analytiques avec une importante sensibilité


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immunochimietechniques

chromatographiques

PLUSIEURS DIFFICULTÉS ANALYTIQUES

• Multiplicité et diversité des molécules devant être recherchées

éthanol

anesthésiques

antihistaminiques H1neuroleptiques

hypnotiquesbenzodiazépines

• À partir d’une quantité limitée d’échantillons

• À de faibles concentrations


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hallucinogènes ecstasyscannabis

anesthésiques (GHB, kétamine)

neuroleptiquessédatifs

OBJECTIFS

• 1 - développer une méthode de recherche de psychotropes en CL-SM/SM,▫ dans les cheveux, ▫ puis dans le sang et l’urine

• 2 - obtenir des LDD et LDQ faibles, ▫ pg/mg de cheveux ▫ µg/L de sang ou d’urine.


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OBJECTIFS



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• Détection et quantification simultanée des 35 principaux psychotropes utilisés en soumission chimique :

alimémazine, alprazolam, bromazépam, buprénorphine, clobazam, clonazépam, 7-amino-clonazépam, cyamémazine, diazépam,

diphenhydramine, doxylamine, flunitrazépam, 7-amino-

PSYCHOTROPES - CHEVEUX

diphenhydramine, doxylamine, flunitrazépam, 7-amino-flunitrazépam, halopéridol, hydroxyzine, kétamine,

lévomépromazine, loprazolam, lorazépam, lormétazépam, LSD, méthadone, midazolam, niaprazine, nordazépam, oxazépam,

prazépam, propoxyphène, scopolamine,témazépam, tétrazépam, tramadol, trazolam, zolpidem et zopiclone


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• Décontamination▫ But : éliminer contamination externe▫ Protocole : 2 x 2 min dans eau

puis 2 x 1 min dans dichlorométhane

• Segmentation▫ But : différencier une prise unique d’un traitement


▫ But : différencier une prise unique d’un traitement chronique▫ Adapter selon le délai entre les faits et les prélèvements

• Section fine▫ < 1 mm▫ À l’aide de ciseaux


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50 mg d’échantillon

EI : buprénorphine-d4, flunitrazépam-d7, LSD-d3, méthadone-d9 et scopolamine-d3+ 3 mL de KH2PO4 pH 5

centrifugation

Agitation planaire16hTempérature ambiante


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70 µL TF/ACN (90/10)

Évaporation

Flux d’azote, à T°ambiante

agitation

centrifugation

Élimination

+ 1 mL de NaOH+ 5 mL de dichlorométhane/éther (70/30)

• Chromatographie▫ 2 pompes Perkin Elmer series 200 micro LC pump▫ Injecteur automatique Perkin Elmer series 200 thermostaté à 9°C▫ Colonne = Atlantis T3, 2,1 x 150 mm, 3 µm (Waters™)

• Spectrométrie de masse en tandem


• Spectrométrie de masse en tandem▫ 3200 QTRAP (AB Sciex™)▫ Source ESI en mode positif▫ Analyseur : triple quadripôle▫ Acquisition :

� mode scheduled MRM� 2 transitions par molécule


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Phase mobile A : tampon formiate d’ammonium 2mM pH 3Phase mobile B : acétonitrile avec 10% de phase A


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• Données de validation :

▫ Absence d’effet de matrice

▫ Linéarité : de la LDQ à 500 pg/mg

▫ LDD et LDQ de 0,5 à 5 pg/mg (excepté pour lorazépam :


▫ LDD et LDQ de 0,5 à 5 pg/mg (excepté pour lorazépam :

10 pg/mg)

▫ Répétabilité et fidélité intermédiaire :

� CV% et biais relatif < 25 % à la LDQ� CV% et biais relatif < 20 % à la C2 et la Cmax


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Utilisation en routine

OBJECTIFS



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• Liste molécules ▫ 34 psychotropes précédents + 18 métabolites

1-hydroxymidazolam, 2-oxo-3-hydroxy-LSD, 3-hydroxybromazépam, 4-hydroxymidazolam, cétirizine, déhydronorkétamine, EDDP,

halopéridol réduit, hydroxyalprazolam, hydroxytriazolam, iso-LSD,

PSYCHOTROPES - SANG ET URINE

halopéridol réduit, hydroxyalprazolam, hydroxytriazolam, iso-LSD, norbuprénorphine, norclobazam, nor-iso-LSD, norkétamine,

nor-LSD, norpropoxyphène, O-desméthyltramadol

• → élargissement de la fenêtre de détection


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• Pré-traitement

▫ Échantillons sanguins� 1 mL de sang� + 2 mL d’ACN

▫ Échantillons urinaires� 1 mL d’urine� + 20 µL de β-glucuronidase+ 250 µL de tampon


� + 250 µL de tampon acétate de sodium pH 4,8

� 1 h au bain-marie à 56 °C


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Précipitation des protéines

Libération des formes glucuro- et sulfo-conjuguées

• extraction en phase solide sur cartouches Oasis HLB(Waters™)


2 mL de MeOH2mL d’H2O

Échantillon

2 mL d’H2O3 mL d’H2O/MeOH

3 mL de dichlorométhane/éther

(70/30)



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Conditionnement Dépôt et lavage Élution

Échantillon+ 4 mLd’H2O

70 µL TF/ACN (90/10)

Évaporation

• Effet de matrice ▫ = compétition d’ionisation entre des molécules endogènes et les molécules d’intérêt


HLBInteraction hydrophobe

MCXInteraction hydrophobe


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HLB• Interaction hydrophobe

MCX• Interaction hydrophobe• + échange de cations

• Extraction retenue : SPE sur cartouches Oasis MCX (Waters™)


2 mL de MeOH3 mL de KH2PO4

Échantillon+ 4 mL de

1,5 mL d’HCl2 mL d’H2O/MeOH

2 x 3 mL de dichlorométhane/éther/propan-2-ol (50/30/20)


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Conditionnement Dépôt et lavage Élution

+ 4 mL de KH2PO4

70 µL TF/ACN (90/10)

Évaporation



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OBJECTIFS



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0,5 à 5 pg/mg0,05 à 5 µg/L

CAS RÉELSCAS RÉELS

• JF, 25 ans, avec problèmes conjugaux,

• Dépôt de plainte à l’encontre de son mari pour viol

avec soumission chimique

• Signes cliniques : somnolence puis amnésie partielle

CAS N°1

• Signes cliniques : somnolence puis amnésie partielle

• TTT : prazépam (LYSANXIA), 3 cp à 10 mg / jour

• Faits : 3 semaines auparavant

• Prélèvement : 1 mèche de cheveux, d’environ 8 cm


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• Résultats

CAS N°1

Segments capillaires zolpidem prazépam nordazépam

- du cuir chevelu à 2 cm

0,9 pg/mg 416 pg/mg 229 pg/mg


29

cm

- de 2 à 4 cm non détecté 763 pg/mg 48,9 pg/mg

- de 4 à 6 cm non détecté > 1000 pg/mg 32,1 pg/mg

- de 6 cm à la pointe (≈≈≈≈ 8 cm)

non détecté > 1000 pg/mg 44,6 pg/mg

• Femme, 62 ans, retrouvée un matin somnolente et trèsconfuse, nue, sans aucun souvenir de la nuitprécédente

• La veille : dîner au restaurant

CAS N°2

• La veille : dîner au restaurant

• Hospitalisation aux urgences pour somnolence etdésorientation.


• Prélèvements sanguins et urinaires réalisés 40 heuresaprès les faits▫ Zolpidem = 1 µg/L de sang▫ Lorazépam = 56 µg/L de sang

Prélèvement capillaire réalisé 3 semaines après les

CAS N°2

• Prélèvement capillaire réalisé 3 semaines après lesfaits

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Segments capillaires Zolpidem Lorazépam Nordazépam - du cuir chevelu à 1,5 cm

0,5 pg/mg 0,5 pg/mg non détecté

- de 1,5 à 3 cm non détecté non détecté 3,3 pg/mg - de 3 à la pointe non détecté non détecté 7,7 pg/mg

Stratégie analytique lors de la prise en charge des cas de soumission chimique

Julie Maublanc

• Soumission chimique = problème de Santé Publique

• Information du public et des professionnels de santé primordiale pour une meilleure prise en charge

• Méthodes « psychotropes » intéressantes dans ce

CONCLUSION

• Méthodes « psychotropes » intéressantes dans ce contexte▫ Recherche simultanée des principales molécules utilisées en soumission chimique▫ LDD et LDQ faibles

• Mais l’interprétation est toujours délicate


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• En France, soumission chimique =▫ Simple élément de preuve du délit ou du crime

▫ Délit à part entière : « administration de substances nuisibles ayant porté atteinte à l'intégrité physique ou psychique d'autrui » (art 222-15 du Code Pénal)

CONCLUSION

psychique d'autrui » (art 222-15 du Code Pénal)

▫ Circonstance aggravante car notion de préméditation

• Les agresseurs sont très imaginatifs donc ces méthodes devront être continuellement enrichies avec de nouveaux psychotropes.


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