(NOMBRE :

TELEFONO PARTICULAR:

MATRICULA:

CLAVE :

J C A R R E R A :

TR IMESTRE :

Y’ HORAS POR SEMANA: , *- LUGAR DONDE SE LLEVARA

A CABO C.

c-. FECHA DE I N I C I O :

r- Jl?ECHA DE TERMINACION:

c. JNOMBRE DEL SUPERVISOR:

v,.. , t...

L

... c.-

I-

C...

~...

’ f- I L-

ACT IV IDADES :

F IRMA (ALUMNO) :

FIRMA ( S U P E R V I S O R ) : . /

Calderón Moreno Sa lvador

8 2 3 4 2 1 0 3 ‘35 -3.5.3 . $ 7 - I n g e n i e r í a Bioquímica I n d u s t r i a l

87-v

2 0 horas .

L abo r a t o r i o d e l I n s t i t u t o SEDUE

d e l á r ea de I n g e n i e r í a .

1P de j u l i o de 1 9 8 7

3 0 de diciembre de 19%

Ing. A le jandro Veraza Zavala

J e f e d e l Departamento de F a c t i b i

l i d a d de Proyectos Tecnológicos

y C i e n t i f i c o s .

Recopi lac ión de información b i - b l i o g r á f i c a .

A n á l i s i s b a c t e r i o l ó g i c o para ex-

c r e t a s y e s t i é r c o l animal.

Planeamiento de metodologías ad=

cuadas de a n á l i s i s y su comprobo

c ión.

Evaluar modelos de d i ges to re s - anaerobios a e s c a l a de laborato-

r i o .

CPLPIM M-Q A&. Calderón Moreno Salvador.

1:ng. fl e jandro Veraza Zavala .

ANAL ISLS E A C T E R I O L O G I C O D E UN DIGESTOR

A N A E R O E I O A N I V E L LABORATORIO

CELECCION D E U N A N A L I S I S E A C T E R I O L O G I C O

Y FISJCOíJUIMICO PARA EXCRETAS HUMANA5 Y

ESTIERCOL A N I M A L

J u a t i f i c a c l b n y N a t u r a l e z a d e l a s A c t i v i d a d e s ,

Como una m e d i d a e n l a p r e v e n c i ó n y c o n t r o l d e l a c o n t a m i n a c i Ó n am

b i e n t a l ; s e d e b e h a c e r un e a t u d i o p a r a l a u t í l i z a c i ó n de l a e x c r e

t a humana y a n i m a l .

L a e x c r e t a humana y a n i m a l p r i n c i p a l m e n t e c o n t a m i n a e l a g u a , e l

a i r e , no a 0 1 0 i n d i r e c t a m e n t e p o r m e d i o d e l s u e l a , a l n o t a m b i é n e n

f o r m a d i r e c t a . E s t a c o n t a m i n a c i ó n d i r e c t a , e s e n su mayo r p a r t e

c o n s e c u e n c i a d e l a s g r a n d e s d e n s i d a d e a d e p o b l a c i ó n humane y d e l a

o r g a n i z a c i b n u r b a n e , d e p e n d e d e q u e l a s a g u a s n e g r a s d e una cornuni

d a s r e v i e r t e n e n un c u r s o d e a g u a que a b a a t e c e a o t r a .

L a e x c r e t a humana y a n i m a l c o n t r i b u y e con g r a n d e s c a n t i d a d e s d e b a

c i l o a c o l i f o r m e s , mucho menos d e C l o s t r i d i u m p e r f r i n g e n s , con - S t r e p t o c o c c u a f a e c a l i s a l f a - h e m o l i t i c o s o E n t e r o c o c o s ; una g r a n v a

r í e d a d d e m i c r u o r q a n i e m o a p a t ó g e n o s s o n e x p u l a a d o a e n l a s h e c e a d e

p e r s o n a e i n f e c t a d a s y t r a n s m i s o r e s . E n t r e l o s mas comunes e s t á n - l a 6 b a c t e r i a s e n t & r i c a a p a t b q e n a a , como l a S a l m o n e l l a - S h i g e l l a .

-

A c t u a l m e n t e s e t í a r i e u n p r o b l e m a @n e l c e n t r o p o r c i n o de l a P i e -

d a d M i c h o a c a n , en a l t r s t a m i e n t o d e l a e x c r e t a d e c e r d a . L a e x c r g

t a g e n e r a d a c o n t a m i n a p r i n c i p a l m e n t e e l a g u a y e l s u e l o d e m i c r o -

o r g a n i s m o s p a t b g e n a a . E s t a e x c r e t a d e ce . rdo p u e d e s e r u t i l i z a d a - p a r a l a o b t e n c l b n d e b l o q a s ( m e t a n o , f e r t i l i z a n t e s o r g á n i c o s l o a

c u a l e s p u e d e n a e r i n c o r p o r a d o e a l a t i e r r a ) .

E l d i g e o t o r a n a e r o b i o n o s s i r v e p a r a t r r t a x l a s e x c r e t a s humanas

y r n í m a l e r , d e l a r c u a l e i a e p u e d e o b t e n e r un b i o g a a ( m e t a n o ) o

b i e n un a b o n o e n r i q u e c i d o [ :on n i t r ó g e n o , en f o r m a d e n i t r i t o a , - n i t r a t o r e l c u r l p u e d e s e r u t i l i z a d o en l a a g r i c u l t u r a .

P o r l o t a n t o e s n e c e s a r i o h s c e r l e un análisis f i s i c o q u f m i c o a l - r e s i d u o d e , NO2, NO.,, N a , 6 , C s , p , p a r a s a b e r e l b a l a n c e d e l -- c o n t e n i d o d e s e l e m m i n e r a l e s d e l e s t e . E s t e a n é l i s i a d e b e h a c e r

r e a l i n i c i a y f i r ( i 1 d e l a d i g e s t i ó n a n a e r o b i a .

+ + +t

Como e l e x p e r i m e n t a # e v a h a c e r P u n a e s c a l a d e l a b o r a t o r i o , r e

d e t e r m i n a r á tamti58n l a C i n & t i C a d e consumo d e c a r b o h i d r a t o 6 y l a

r í n t e i i s de p r o t e i n s s . Ademár s e m e d i r á l a v a r i a c i ó n d e l p H , l a

t e m p e r a t u r a i n t e r f l a y l a e x t e r n a e l DQO. L o s d a t o s o b t e n i d n r 4

s e e m p l e a r á n p i r a t r a t a r d e hacer un e s c a l a m i e n t o d e l d i g e s t o r a

n i v e l l a b o r a t o r i a a p l a n t a p i l o t b .

I NT R ODUCC I 04.

De l a n r e l a c i o n e s e n t r e l o a m i e m b r o s d e l a o p o b l a c i o n e s humanaa

q u e f a c i l i t a n l a t r a n s m i s i ó n d e l a s i n f e c c i o n e s , l a a q u e d epen -

d en d e l o a s u m i n i s t r o s d e a g u a y e l i m i n a c i ó n d e l a s a g u a a n e g r a s

o c u p a n uno d e l o a l u g a r e a mas i m p o r t a n t e s .

L E E e n f e r m e d m d e a t r a n s m i t i d a s p o r e s t o a m e d i o s s e l i m i t a n , n a t u -

r a l m e n t e a l g r u p a de l a 6 l l a m a d a s e n t é r i c a s , e n l a s q u e l a i n f e g

c l b n s e o r i g t n a p o r e l t u b o d i g e s t i v o y l o a m i c r o o r g a n l a m a s c a u -

s a n t e s s e e l t m i n a n c o n l a s h e c e a . E l m a t e r i a l c o n t e m i n a d o c o n h e

c e i e 8 1 n g e r l d Q p o r p e r s o n a s s u a c e p t i b l e a , q u i e n e s r e a u l t a n i n - -

f e c t a d a e , c u a n d o l a t r a n s m i a i b n s e e f e c t u a a t r a v é s d e l s u m i n i a -

t ro d e a g u a . F u 6 p i r b l í c a d a p o r A m e r i c a n P u b l i c H e a l t ( 1 ) .

6egÚn M t t c h e l R. ( 6 ) O b s e r v 6 p o r m e d i o d e s u a i n v e e t i g a c i o n e s - - q u e l o s r n i c r o o r g a n i s m o s p a t 6 g e n a s que l l e g a n a l o s d e p b s i t o s d e

a g u a , p r o c e d e n d e 18's d e s c a r g a s i n t e s t i n a l e a d e l hombre y an ima -

l e a . Adembs d e c i e r t a s e s p e c i e s d e b a c t e r i a s , p a r t i c u l a r m e n t e l a

f a m i l i a E n t e r o b e c t e r i s c e a s ( a f l a e r o b i s f a c u l t a t i v a ) , d e l o s C U B - -

l e a l o s s i g u i e n t c a g b n e r o a s e e n c u e n t r a n : E s c h e r i c h i a , Ca lmone - -

l l a ; S h l g e l l a , P r o t e d a .

Lds c o c o a g r a m p o e i t i v o s ( a n a e r o b i o s f a c u l t a t i v o s ) . C o m o s o n l a s

f a m i l t a M i c r n c o c o c á c e a a , g e n e r o S t a p h y l o c o c c u s .

f a m i l i a E s t r e p t o c o c á c e a s , g e n e r o S t r e p t o c o c c u s .

f a m l l i a P e p t o c o c á c e a s ( a n a e r o b i o a e s t r i c t o s ) ; l o a g e n e r u s q u e s e

e n c u e n t r a n a o n : P e p t o c o c c u s , P e p t o s t r e p t o c o c c u a , s a r c i n a .

f s m i l t a : B e c i l l á c e a s son b a c i l o s y c ü c o a q u e f o r m a n e n d o e s p o r a s ;

como e l g e n e r o C l o s t r i d i u m .

F a m i l i a m e t a n o b s c t e r i a c a a s (bacterias p r o d u c t o r a s de m e t a n o ) , - como s o n lrpa g e n e r o a M e t h a n o b a c t e r i u m , M e t h e n o e a r c i n a , M e t h a n o -

c o c c u s .

L e s c u a l e 8 , a l g u f i a s s o n h i b i t a n t e s n o r m a l e s d e l i n t e s t i n o g r u e s o

d e hombre6 y a n i m a l e s , e n c o n s e c u e n c i a a l e m p r e s e e n c u e n t r a n e n

10 m a t e r i a f e c a l .

D e l a e x c r e t a a n i m a l f u e r o n i n d e n t i f i c a d o a a l g u n o s m i c r o o r g a n i s -

mas p a t b g o n o e p o r Rlexaildrr e t . a l . 1468 ( 5 ) d e 4 4 e j e m p l o s a i a -

16:

1 0 e s p e c l e i de C l o i t r i d i u m

C 1 o 8 t r i dtum perf r i flgeni - II C h a u v o e i

- I1 nu' v y i

- II e o r d e l l i i

- It b u t y r i c i i m

- II C d C h ~ e a f i U M

m & l t , t F e r m e n t a n s

c a r n i s

I1 - - I1

- I1 t e t a n o m e r p h u m

- 11 k i a t a l y t l c u m .

d o s e a p e c i e a d e C o r y n e b a c t e r i u m

- C o r y n e b a c t e r i u m p y r o g e n e s

I1 e q u i

t r e s e a p e c l e a de S a l m o m e l l e

- S a l m o n e l l a b l o c k l e y

- I1 s a i n t - p a u l

- T y p h l m u r l u m v s r . copenhagen.

d o s e s p e c i e s d e m i c o b a c t e r l u m .

,I

E a t s e x c r e t a d e a n i m a l a l Eler p a s a d a p o r una f u e n t e d e c a l o r ; s e

o b s e r v a que s e é í i m i n a n a l g u n o s m l c r o o r g a n i s m o a p o t 6 g e n . j ~ . M e e s e r

e t . 1 9 7 1 ( 7 ) e s t u d i o l a c o m b i n a c i ó n de l a t e m p e r a t u r a - t i e m p o n e -

c e s a r i o s p a r a d e s t r u i r p a t ó g e n o a p o t e n c i a l e s , p o r e j e m p l o .

c c r L

r L

, P I U

c o r i

o c c c r

S i l m o n e l l I p u l l a rum 6

S i l m o n a l l a t y p h i m u r i u n 6

E n c h e r i c h i a c a l l 6

t o d o r l o r g e n e r o s . 1 6

L o s b r c t l o i c a l l f @ l m e o , e a un p g r u p o de b a c t l a s l n t s r t i n a l e s (i

. nimmoi f e r m e n t a n l a l i c tarta r i p

b i p i r a d r t o r m i n o r nu e x d . s t e n c 1

m f c r o a r g i n i r m o s a r t á n d i a t r i b u l

an e l s e n t i d o d a que l o r b a c i l o

r r i m e n t e e n l i s v í a . i n t a n t i n i l

de r a n g r e c a l i e n t a c i m o d a s 0 n g

P i r a su i d e n t i f i c r c i 6 n , en g e n s

d e c u l t i v o par# d i f é r ú n E 5 s P O E

d i f i c u t a d p r b c t i c i . S e h i r í d#

vo e a t a f s c t o r i o o , Slanr?tz 1 6 6 b

d s n c i a a p e r s i a t 5 r msi t i e m p o (J

p e n a s , p e r a no t e n t o c a m l a . E

número c o n a i d e r e b l e m a n t e minor

L s d i p i i t l b n . a n a e r o b l ~ 8 8 Un me de d e r p e r d i c i o m s a l i d o i ; a i f i n

c o n t l i n e n u t r i e n t r a pars I u s pI que p u e d e se r u t i l i z a d o como C D

i

O MUERTE !

, , ' TIEMPO DE RE.SIDENCIA l . OE L'A B A C T E R I A

.B O C 30 min.

.a @ C . 6 0 n i n .

. 3 a e . 3.0 m i n .

. o p c . 3 h o r a s . . I

u p 0 h i t e r o g e : n a o den r o d e l g r a n

r m n v g i t i v o e . E s t o i s m i c r o o r g '

d i m e a t e , p o r l o q u e i o una prue -

e n l a c o n t i a m t n m c i ó n f e c a l . E s t o

o s I n p l i s m @ n ~ t e , en t o d a s p a r t e s ,

c o l i f o r m e e s e e , n c u r n t r a n u n i v e r

i d e l hnmbne y a n i mb l e a , t a n t o

e f r i a , Ro.g$$endorf 1 9 7 6 ( 8 ) .

!

o1 l a f a l t a d e m e d i o s e a p e c i f i c o s

nt8r l o o e n t a r o c o o o s , h i s i d o una

e r r o l l e d o V a r i o s m e d i a s de c u l t i -

( * 4 ) . L a s e n t e r o c o c o i t i e n a n t e n -

e l l s b a c t r r i e a i n t e s t i n a l e s p a t o

11CLrrrnen s w r l o n e n c o n t r a r s e en un

u e l o r c o l i b a c i l o a .

~

C C i n h e n a p l i c a d o t r e d i c i o n a l m e n

I: I r fnrmactón de i n d o l a p a r t & * . -

d e m e t i l o , la r e a c c t ó n de V o g e i -

I u t i l i z a c i , ó n d a 1 C i t r a t o como - do 1 á i c a l d o r FK, S F , E d d y , 8. p I

adu e f i c i e n t e p a r a l a r e d u c c t b n I

1 1 de l a f e r m o n t s c i b n e l r e n i d u o

n t a a , ademlrs d e p r o d u c i r un g a s

b u s t i b l e .

i

r A- .- L

T-

L

c

c

v-

L

u-

- I-

A N T E C E D E N T E S .

Algunas b a c t e r i a s p a r t i c u l a r m e n t e L a c t o h a c i l o s , S t r e p t o c o c o s , - E a c t e r d i d e s , E s c h e r i c h i a C o l i y Z l o e t r i d i u m p e r f r i n g e n s , forman p a r t e de l a e x c r e t a a n i m a l de c e r d o a d u l t o . FEWINS, G.L. 1957.

L a d i g e s t i ó n a n a e r o b i a de m a t e r i a orgánica h a e t a b i ó x i d o d e -- c a r b o n o y metano d e n t r o d e l d i g e s t o r , y o t r o s e c o s i s t e r n s s ana= r o b i n s . L a s b a c t e r i a 8 que s e e n c u e n t r a n d e n t r o de l o a d i g e s t o

r e s , son predominantemente a n a e r o b i o s e s t r i c t o s . B R Y A N T M.P. - 1 9 7 7 .

d biéu t o . Te\. (\d.

Loa p r o c e s o s de c r e c i m i e n t o m i c r o b i o l Ó g i c o , se d i v i d e en c u a t r o

f a s e s s o n :

- L a p r i m e r a f a s e e s A c i d o g ' F n e s i s ; r o s monomeros son p r o d u c i d o s

p o r l a h i d r ó l i s i e d e l s u b s t r a t o y e s t o s son t r a n s f o r m a d o s a á c i dos g r a a o s ( á c i d o a c í t i c u , á c i d o p r o p i ó n i c o , á c i d o b u t í r i c o ) ; - a l c o h o l e s ( m e t a n o l , e t a n n l ) , g a s c a r b ó n i c o e hidrógeno .

- La segunda f a s e e s l a A c e t o g é n e s i s . Transforma a los p r o d u c -

t o a de l a A c i d o g é n e s i s en p r e c u r s o r e s d e l metano ( á c i d o a c é t i c o

á c i d o f Ó r m i c o , HZ, C O Z ) .

acumulación d e á c i d o s grosos v o l á t i l e s , d i f e r e n t e s a l á c i d o a c é

tito, los c u a l e s , a c o n c e n t r a c i o n e s muy e l e v a d a s s e c o n v i e r t e n

en i n h i b i d o r e s de l a m e t s n o g i n e a i s .

L a s b a c t e r i a s que i n t e r v i e n e n en e s t a f a s e son: D e s u l f o v i b r i o , C l o s t r i d i u m Thermoaceticurn, C l o s t r i d i u m f o r m i c o a c e t i c u m , A c e t o -

b a c t e r i u m woodi. E s t a s b a c t e r i a s v i v e n en s imbios i s con l a s

b a c t e r i a s metanógenas , consumidorae d e h idrogeno .

E s t a s r e a c c i o n e s permiten e v i t a r una

-

- F i n a l m e n t e l a f a s e M e t a n o q é n e s i s , c o n v i e r t e n e l á c i d o a c é t i c o b i ó x i d o de carbono e h i d r ó g e n o a metano. Las b a c t e r i a s que in- t e r v i e n e n son a n a e r o b i o s e s t r i c t o s . (Methanobacter ium thermoau t r o p h i c u m , M e t h a n o s a r c i n a b a r k e r i .

-

c .

I"

*__

L a s r e a c c i o n e s q u e i n t e r v i e n e n son:

r I

r: r-

L

GI

L

t 4 H x --- CHq t 2H20 coz C H 3 C O OH - - - CHq t COZ

E l pH Ó p t i m o e s t á c o m p r e n d i d o e n t r e 6.5-8.0

A l g u n a s b a c t e r i a s i n v o l u c r a d a s e n e l p r o c e s o n o p u e d e n s e r a i s l a - d a s . t s u a l m e n t e e l 1 2 % e s b a j o , d e l t o t a l d e l número d e b a c t e r i a s d e t e r m i n a d a s p o r e l m i c r o s c o p i o p u e d e n ser c l a s i f i c a d a s y c u l t i - v a d a s . B R Y A N T M.P. 1 9 7 9 .

Se a i s l a r o n b a c t e r i a s d e s d e e l e x c r e m e n t o d e c e r d o p a r a a l i m e n - t a r u n d i g e s t o r s u f i c i e n t e m e n t e p a r a p e r m i t i r l a t r a n s f e r e n c i a - d e c u l t i v o , p e r o n o l a c a r a c t e r i z a c i ó n d e l o s mismos . L o s f a c t o - r e s de c r e c i m i e n t o son s u b s t r a t o s c r u d o s , y los a c e p t o r e s d e -- e l e c t r o n e s s e e v a l u a n p o r c r e c i m i e n t o

E l c r e c i m i e n t o d e v a r i o s g r u p o s d e b a c t e r i a s y e l a i s l a m i e n t o - p u e d e n s e r i n c r e m e n t a d o s p o r un m e d i o q u e c o n t e n g a g l u c o s a , c e - l o b i o s a , a l m i d ó n s o l u b l e , p i r u v a t o , p e p t o n a , e x t r a c t o d e l e v a d 5

r a , m i n e r a l e s , á c i d o s v o l á t i l e s , v i t a m i n a s , b i c a r b o n a t o de s o - -

d i o , c i s t e l n a , y un d i g e s t o r d e f l u i d o s . E.L. I A N N O T T I J.R. - FISCHER 1981.

r-

O B J E T I V O S .

"EVALUAR LA D I G E S T I O N D E LA E X C R E T A DE C E R D O E N UN D I G E S T O R - A N A E R O B I O A N I V E L PLANTA P ILOTd" .

1.- D e t e r m i n a r l o a d i f e r e n t e a t i p o s de b a c t e r i a s de l a s e x c r e - ~

t a s de c e r d o .

2.- C u a n t i f i c a r e l e f e c t o de l a t e m p e r a t u r a t i e m p o e n los m i c r o - o r g a n i s m o s .

3 . - D e t e r m i n a c i ó n de s ó l i d a s t o t a l e s a l i n i c i a y f i n a l d e l a - f e r m e n t a c i ó n .

4.- D e t e r m i n a r l a s e c u e n c i a de o a r b o h i d r a t o s d u r a n t e l a f e r m e n -

t a c i ó n a n a e r o b i a de l a e x c r e t a de c e r d o .

5.- D e t e r m i n a r le s e c u e n c i a de p r o t e i n a u n í c e l u l a r (N -amon iaco ,

N - o r g á n i c o ) , adem&a l a demanda q u í m i c a de o x i g e n o (DUO); - t e m p e r a t u r a ( i n t e r n e y e x t e r n a ) y e l pH.

6 . - C u a n t i f i c a r a l i n i c i o y f i r í a l de l a f e r m e n t a c i ó n l o a f o e f a -

t o s t o t a l e s , NO;, NO;, E+:, H:

7.- Hacer u n a r e c o p i l a c i 8 n de l a i n f o r m a c i ó n o b t e n i d a , p a r a -- t r a t a r de h a c e r un p o s i b l e e s c a l a m i e n t o d e l f e r m e n t a d o r a

n i v e l l a b o r a t o r i o , a un f e r m e n t a d o r a n i v e l p l a n t a p i l o t o .

P R O G R A M A Y M E T O D O L O G I A D E T R A B A J O .

1 . - D e t e r m i n a r e l número d e b a c t e r i a s en e a t l é r c o l d e c e r d o .

a ) 5 e va a p e s a r 1 0 g r a m o s d e e x c r e m e n t o d e c e r d o , y a g r e -

g a n a l O O m l d e a g u a e s t é r i l . S e d e j a e n r e p o s o o b i é n

I se f i l t r a p o r m e d i o d e u n a g a s a .

b ) De e s t a s u s p e n r i b n a e v a n h a c e r u n a s e r i e d e d i l u c i o n e a

1 : 1 0 0 , 1 : 1 0 0 0 , 1:110000, 1 : 1 0 0 0 0 0 .

c ) D e s p u é s d e a g r e g a p 1 ml de i n ó c u l o a l a p l a c a , s e a g r e -

g e n a c a d a p l a c a 2 0 9 3Oml d e a g a F f u n d i d o .

L a p l a c e s e a g i t a s u a v e m e n t e p o r r o t a c l b n p a r a q u e s e - d i s t r i b u y a a d e c u a d a m e n t e e l i n ó e u l o e n e l m e d i o d e c u l -

t i v o .

d ) L a s p l a c a s s e c o l o c a n e n posición i n v e r t i d a e n una i n c u -

b a d o r a p o r 24 h r s . 6 mas.

a ) S e a e l e c c i o n a u n a p l a c a q u e conter igm d e 3 0 - 3 0 0 c o l o n i a s .

f ) E l número de c o l o n i a s q u e = e c u e n t a n e n l e p l a c a se mul-

t i p l i c a p o r l a d i l u c i ó n d e l a m u e s t r a a l número d e b a c t E

r i a s o o r mi l i l i t r o .

2 . - O b t e n c i ó n d e l c u i t i v o p u r o p o r m e d i d d e una p l a c a i n v e r t i d a .

a ) En e l t u b o A ( a g a r f u n d i d o y e n f r i a d o ) s e p o n e una p a r t e

p r o p o r c t o n a l d e l a a u s p e n a i ó n a r i g i n a l (1 f f s 8 ) . fie a g i t a

una v e z i n o c u l a d a . S e h a c e n t r a r í s f e r e n c i a s s i m i l a r e s d e l

t u b o R a l 8 y d e l ü a l C.

b ) E l c o n t e n i d o d e l o s t u b o s s e v a c i r en c a j a o p e t r i .

13 j

" "

r* L,

I .I

c.

-.

...<

-.

-_

E ) D e a p u é a d e l a i n c u b a c t b n l a s p l a c a s a e e x a m i n a n , s e

s e l e c c i o n a a q u e l l a q u e t e n g a l a a c o l o n i a s a i s l a d a s ; de

e s t a p l a c a s e p u e d e n aepapmir l a s c o l o n i a a , s e m b r a n d o e n

t u b o s e s t é r i l e s .

3 . - T é c n i c a d e f i l t r a c i ó n p o r membrene .

a ) Un d i s c o e s t é r i l a e p o n e e n l a u n i d a d d e f i l t r e c i b n .

b ) S e h a c e p a s a r un vo lumen d e a g u a p o r e l d l s c o f i l t r a n t e

l a s b a c t e r i a s s e r á n d e t e n i d a a en l a superficie d e l a mem

brans f i l t r a n t e . -

E) Se q u i t a e l d i s c o f i l t r a n t e y a e p a n e E Q b r e una a l m o h a d i - l l a a b s o r b e n t e q u e p r e v i a m e r í t e s e h a s a t u r a d o c o n e l me-

U i o d e c u l t i v o a p r o p i a d o . L a s a l m o h a d i l l a s a b s o r b e n t e s

c o n l o s d i s c o a P i i t r a n t e s 8 8 acomodan e n c a j a a p e t r i d e

t a m a f l i e s p e c i a l , l a s c u a l e a s e i r í c l i b rn .

d ) D e s p u é s d e l a i n c u b a c b b n , se d e s a r r o l l a r á n c o l o n i a a s o b r e

e l d i s c o f i l t r a n t e en C h ü ¡ q u í @ r l u g a r d o n d e hayan q u e d a d o

a t r a p a d a s d u r a n t e e¡ p r o c e s o d e f i l t r a c i ó n .

f ) S e c u a n t i f i c a n l a s b a c t e r i a s q u e c r e c i e r d n .

4 . - C u a n t i f i c a r e l e f e c t o de l a t e m p e r a t u r a - t i e m p o en l o a m i -

c r o o r g a n i s m o a .

a ) L a e x c r e t a humana o aríimal s e p o n d r á o una t e m p e r a t u r a - c o n a t a n t e T- 40EC.

b ) S e t o m a r á n m u e s t r a s c a d a 3 0 m i n u t o e ; s e a p l i c a r h n l o a miz moB m é t o d o s p a r a l a i d e n t l f i c a c i 6 n b a c t e r i o l Ó g i o a a n t e s

c l t a d o s .

c ) S e p r o c e d e r á a s e g u i r aumentando l a t e m p e r a t u r a un g r a d o

c e n t í g r a d o p o r c a d a d o c e h o r a s .

I r-

!

< .

d ) Se s e p u i r á n h a c i e n d o a n h i i s i s , h a e t a o b t e n e n u n r e d u -

c l d o nírmero d e b a c t e r i a s v l á b l e s .

f ) Se c u a n t i f i c a r á n r e s U l t ü d 0 a .

5 . - D e t e r m i n a c i ó n de s ó l i d o s t o t e l e a a l i n i c i o y f i n a l d e l a - f e r m e n t a c i ó n .

O E T E R M I N A C L O N DE SOLIDOS TOTALES

L o a 8 6 l i d O s t o t a l e s , r e p r e s e n t a n l a t o t a l i d a d d e l m a t e r i a l aua-

p e n d t d o y d i s u e l t o que c o n t i e n e el a g u a ; ' s e d e t e r m i n a e v a p o r a n

d o , s a c a n d o u n a m u a s t r a a una t e m p e r a t u r a d e f i n t d a .

a ) C á p s u l a d e p o r c e l a n a d e 1 0 0 m l .

b ) E e t u f a de s e c a d o (iúü - + 2mc). e ) Enno M a r i a a estiif 'a d e a e C B d u .

d ) D a a e c a d o r .

e ) B a l a n z a a n a i l t l c a .

f ) M u f l s .

P R O C E D I M I E N f O .

a ) Se l l e v a a i g n i c t b n l a c & p s U l a d e p o r c e l a n a a 5 5 0 2 500C por

1 h o r a en m u f l a .

b ) E n f r í e , d e s e q u e , p e s e y Co l oq i i e e n d e s e c a d o r h a s t a que s e u s e .

c ) T r a n s f e r i r el vo lumen d e m u e s t r a a d e c u a d o a l a c á p s u l a y a p o

r a d a y e v a p o r a r e s e q u e d a d en b a f l o M a r í a o e s t u f a d e s a c a d o .

E l v o l u m e n d e a g u a d e b e c o n t e n e r e n t r e 2 5 y 250mg de a ó l i d o s .

A u x i l i e s e c o n el v a l o r d e c o n d u c t i v i d a d . Si s e e v a p o r a en e o t u f a d e s e c a d o l a t e m p e r a t u r a d e b e a e r menor s l a t e m p e r a t u r a

I

!

d e e b 0 1 i i c i ó n p a r a p r e v e n i r p é r d i d a p o r p r o y h c c i o n e q .

d ) S e c a r l a m u e s t r a e v s p o r a d a 1 h o r a a103-105QC.

e) E n f r i a r e n d e s e c a d o r y p e s a r .

P ) R e p e t i t e l c i c l o d e s e c a d o a 103-105QC, d e s e c a d o y p e -

s a d o h a s t a o b t e n e r p e s o c o n s t a n t e .

C A L C U L O .

mg/l d e s ó l i d o s t o t a l e a .

= ( a - e ) x 1 0 0 0 m l d e mues t r a .

.

E n d o n d a i

A = p e s o del r e s i d u o + p e s o d e l a c á p s u l a .

ü - P e s o d e l a c á p e u l a .

6.- Osterminacl6n - de l a s e c l r e n c t e d s c a r b o h i d r o t o a t o t a l e s d u -

rante l a f e r m e n t a c i ó n a n a e r o b i a de l a e x c r e t a d e c e r d o .

S e e m p l e o el m é t o d o de D u b o i s p a r s a z ú c a r e s t o t a l e s , e a e o

p e c t r o c o l o r i m é t r i c o , se usa f e n a l , ác . s u l f ú r i c o , g l u c o s a .

METODO If.

P r o c e d i m l e n t o : C o l o c a r eri 7 t u b o s d e e n s a y o a l í c u o t a 6 d e l a s o -

i u c i b n d e a z ú c a r de O s 1 0 0 mcg/ml y l l e v a r a 2 m l con agua d e s - ! i

i d e j a r r e p o s a r 3Omin y l e e r en e l e s p e c t r o f o t Ó m e t r o (400-490nm) i

I

t i l a d a . A d i c i o n a r 0,l. m l d e f e n o l 80% y S m l da H2C04 c u i d a n d o - I

C U R V A TIPO DE AZUCARES.

. ", FENQL 80% AC.SULFURIC0 TUBO SOL. G L U C O S A A G U A

N O . ML . ML ML ML.

" -.

0.0

0.1

0 . 2

0 . 4

0 . 6

0 .8

1 . 0

2.0

1 . 9

1.8 1 . 6

1 . 4

1 .2

1.0

0 .1 I1

I1

11

11

I1

I1

* P o r f a l t a d e r e a c t i v o s s e u t i l i z ó e s t e m 0 t o d a .

7 . - D e t e r m i n a r l a s e c u e n c i a d e p r o t e i n 6 u n i c e l u l a r (N -de smo-

n i a c o ; N - o r g á n i c o ) ; l a t e m p e r a t u r e ( i n t e r n a , e x t e r n a ) ; e l pH y a demás l a demanda q u í m i c a d e o x t o e n o (DUO). E s t a s ann

p e r í o d i c a s .

a ) P a r a l a d e t e r m l n a c í Ó n d e hltrógeno a m o n i a c i l y o r g á n i c o

ee u t i l i z a e l M é t o d o K j e l d a h l

PRINCIPIO:

E n p r e s e n c i a d e H 2 5 0 4 , 6 SO4 y H g S 0 4 c a t a l i z a n 0 1 n í t r b g e n o d e

muchos m a t e r i a l e s o r g á n i c o a p a r a s e r c o n v e r t i d o a CNH ) SO - A m a n l o l i b r e y n i t r ó g e n o A m ó n i c o t a m b i é n e o c o n v e r t i d o a (NH,,)2

D u r a n t e l a d i g e s t i ó n d e m u e s t r a s un c o m p l e j o d e m e r c u r i o a m o n i o

e a f o r m a d o .

E s t e c o m p l e j o l u e g o e s d ~ s c o m p u e s t o p o r Ns S O e l amonio e s - d e s t i l a d o d e un m e d i o a l c a l i n a y a b s o r b i d o e n a c . b ó r í c o e l amo

2

4 2 4 '

s o 4 .

2 2 3 '

i- L

.- L-

.-- L

P‘

.... *-.

I n i o e a d e t e r m i n a d o c o l o r l m é t r i c a i n e n t e o p a r t i t u l a c i ó n c o n a c .

m i n e r a l e a t a n d e r d .

L a t l t u l 8 c t Ó H d e l d e a t t l a d U e a s e n s i b l e p e r a un amp150 r a n g o - d e c o n c e n t r s c i ó n N - o V g á n l d a .

N . A M O N I A C A L .

R e a c t l v o s :

.- M ! H 2 P 0 4

- H Z H P 0 4

- N a O H

- H 2 S 0 4

S o l u c l o n e a .

- S o l u c i Ó n a m o r t i g u a d o r a d e f o B f 6 t a a de pH 7 . 4 d i s u e l v a 1 4 . 3 g

d e f o a f a t o m o n o p o t á a i c o y 68 . 8 # de f b ü f a t o d i p o t 8 s i c o d i -

l u y a e 1 0 0 0 I t .

PRDCEDZMlENTO:

- S a toman l O m l d e m u e s t r a d e una d i l u c i ó n : E l s i t l o d e m e d i d a

d e l v o l u m e n d e m u e s t r a , en un P r a a c a H j e l d a h l d e B O O m l a e l e c -

c l o n e e l t amaño d e r n u e a t r a , s i g u i e n d o l a t a b u l a c l b n .

N o r g á n i c o Tamaño d e m u e s t r a . en m u e s t r a

mg/l .

0-1 5 0 0

1 -10 2 5 0

10 -20 100 20-50 50.0

50-100 2 5 . 0

Si e a n e c e s a r i o d t l u y a l a m u e s t r a a 300ml y n e u t r a l i c e a p H - 7 .

- E l i m i n a c i Ó n de a m o n t s c o : a d i c l d n e 25ml d e b o r e t o b u f f e r y en -

t o n c e s NaOH6N h a s t a pH= 9 . 5 . A d i c l o r i r u n a n c u e n t a s d e v l d r i o y

e b u l l i r c e r c a d e 300ml . S l d e s e a d e a t i l e e s t a P r a c c i Ó n y d e t e r

mine n i t r ó g e n o a m o n t e c a l . A l t e r n a d a m e n t e e l a m o n t a c o e s d e t e r m i

n a d o p o r e l m é t o d o dk d e l t l l a c i b n , u a e e l r e s i d u o e n e 1 f r a s c o

d e d e s t i l a c l 6 n p a r a d e t e r m i n a r l 6 n d e n i t f ó g e n o o r g h l c o .

P a r a l o d o s y m u e s t r a s e n s e d i m e n t a , p e s a r humeda l a m u e s t r a e n -,

c r i a o l o p e a a n d o e n f z a s c o , t r o n a f e r t r e l c o n t e n i d o a un f r a a c o

k j e l d a h l , d e t e r m i n e n l t r b g a n o k j e l d a h l . S i Q u l e n d o a l p r o c e d i - ;

m i e n t o a e m e j a n t e p a r a n i t r ó g e n o a m o n i a c a i y n i t r ó g e n o o r g á n i c o - d e t e r m i n a d o p o r d i f e r e n c i a . L a s d e t e r m l n e c i o n e a d e n i t r b g e n o o r -

g á n i c o k j e l d a h l e n l o d o y m u i s t r a a ' d e s e d i m e n t o , n o aon c o r r e %

t o s l o s r e s u l t a d o s s e c a n d o , p u e s a e p i e r d e n s a l e s d e a m o n i o . Me-

d i r p e a a n d o e n s e c o p o r c i o n e e s e p a r a d a s .

- D i g e a t i Ó n : e n f r i e y a d i c i n n e c u l d a d o s a m c r l t e 5Oml d e r e a c t i v o

d e d i g e s t i ó n ( s u b s t i t u y a , l O m i drr H2S04 c a n c e n t r a d o , 6 . 7 g H2504 y 1 .5ml HgS04) a l f r a a c o d e d e e t í l e c l b n , Si hey p r a n c a n t i d a d

de n i t r b g e n o l i b r e , m a t e g i s o r Q 6 n i O E p r e a e n t e a , ~ g r e g a r a d i c i o -

n a l m e n t e 5Oml d e r e a c t i v o d e d i g e s t i & n p o r c a d a g r a m o d e mate - -

r l a a b l l d a en l a m u e s t r a . A d i c i o n a r a l g u n a s c u e n t a a d e c r i a t a l y

d e a p u é s m e z c l e , c a l i e n t e b a j o campana o c o n e q u i p o a p r o p i a d o p a -

r a e l i m l n a c l b n d e g a i e ü d e SO3 - C o n t i n u e l a e b u l l l c i Ó n f u e r t e - h a e t a que l a s o l u d i 6 n sea c l a r a . E n t o n c e s d t g e r l r a d i c i o n a l m e n t e

30mln. d e j a r el f r a r c o y c o n t e n i d o e n f r i a r , d i l u i r a 300ml co n -

a g u a l i b r e d e a m o n i o , a d i c i o n a r 0.51111 d e f e n o l f ' t a l e t n a y m e z c l a r .

I n c l i n a r e l f r a a c o c u i d a d o s a m e n t e a d i c i o n a r s u f i c i e n t a h t d r b x l - d o - t i o a u l f a t o ( a p r o x i m a d a m e n t e 50m1/50ml d e r e a c t l v o d e d l g e s - -

t i ó n u e a d o ) e n f o r m a a l c a l i n a e n l a c a p a d e l f o n d o d e l f r a s o . Cg n e c t a r e l f r e s c o e n un a p a r a t o d e d e a t i l a c l b n a v a p o r y a g i t a r

e l f r a n c o a s e g u r a n d o p o r c o m p l e t o . A d i c i o n a r rnaa h i d r Ó x l d o - t i o -

a u l f a t o en l a m a n e r a p r e e s c r l t a s i e l r o j o d e f e n o l f t a l e i n a f a l -

t a d e a o a r e c e r en e s e e s t a d o .

- D e s t i l a c i ó n : D e s t i l a r y o o i e c t a r ’ 2 5 0 m l d e d e a t i L a d o b a j o l a - s u p e r f i c i e d e 50ml d e É c L d c b 6 r i c o . U s e h c i d o b b r i c o p u r o c u a n -

do e l a m o n í a c o e a d e t e r m i n a d a p o r r í e e a l e r i z a c i ó n y u a e i n d i c a n d o

á c i d o b b r i c o p a r a f i n e s v o l u m h t r i c o s . U a e 50ml d e H 2 S 0 4 0.04N - p a r a c o l e c t a r d e a t i l a d o p a r a m a n u a l f e n a t o y m é t o d o e d e e l e c t r o -

d o . E x t e n d e r l a d e a n d o e i c o n d e n s a d o r b a j o l a f u e n t e d e n i v e l d e

B c i d o b b r i c o y n o d e j a r q u e l a t e m p e r a t u r a s u b a p o r e n c i m a d e l o a

29uC. D i s m i n u t r el c o l e c t a d o d e d e s t i l a d o i i6re d e c o n t a c t o c o n

el t u b 0 y c o n t i n u a r l a d e s t i l a c i ó n d u r a n t e 1 6 2 mtn . , d e a p u é a - de l i m p i a d o e l c o n d e n a a d o r .

- M e d i d a d e amoniacm f i n a l : Unando e l m é t o d o v o l u m é t r i c o ( p . 3 6 1 ) .

b ) M e d i c i ó n d e l a t e m p e r a t u r a i n t e r n a y e x t e r n a .

E l f e r m e n t a d o r c u e n t a c o n u n d i s p o s i t i v o p a r i t o m a r l a t em pe -

r a t u r a i n t e r n a , 1 8 t e m p e r a t u r a e x t e r n a v a a mer a q u e l l a d e l

med i o a m b i e n t e .

c ) M e d i c l b n d e l - p H d e l a m u e s t r a .

Como l a m u e a t r a e a l í q u i d a , e s t e eff t o m a r & d i r e c t a m e n t e c o n - un p o t e n c i ó m e t r o .

4

*_

i-

c

2 ) P r i n c i p i o .

L a mayor ía de los d i f e r e n t e s t i p o s de m a t e r i a l e s o r g á n i c o s s e d e e :ruyen p o r ebullición ccin u n a mezcla de á c i d o s c r ó m i c o s y sulfúri C O .

E l metodo se b a s a e n e l r e f l u j o de una m u e s t r a con c a n t i d a d e s c o -

n o c i d a s de d i c r o m a t o de 7 o t a s i o y á c i d o s u l f ú r i c o , t i t u l a n d o 1?1

e x c e g o de d i c r o m a t o con s u l f a t o f e r r o s o arnoniaca l . La c a n t i d a d

de m a t e r i a o r g á n i c a o x i d a b l e , medida como o x í g e n o e q u i v a l e n t e e 5

p r o p o r c i o n a l e ? d i c r o m a t o consumido

F p a r a t o de R e f l u j o , que c o n s i s t e d e matraz Er lenmeyer de 2 5 0 a - 500ml con c u e l l o e s m e r i l a d o de 2 4 / 4 0 y r e f r i g e r a n t e F r i e d r i c h , - L i e b i g , West u o t r o e q u i v a l e n t e de 300rnm y u n i o n e s e s m e r i l a d a s - de 21*/40.

E l p l a t o de c a l e n t a m i e n t ; a p o r t a r á e n e r g í a s u f i c i e n t e p a r a p r o d u

- i r cuando menas 9 w a t t s p o r pulgada cuadrada d e s u p e r f i c i e de - c a l e n t a m i e n t o .

c ) R e a c t i v o s .

1) S o l u c i ó n e s t a n d a r d e d i c r o m a t o de p o t a s i o 0 . 2 5 N.

O i s o l v e r 12.2599 de H2Cr207, de grado p r i m a r i o e s t a n d a r , p r e v i a -

mente s e c a d o a 1 0 3 P C p o r 2 h o r a s , en agua d e s t i l a d a y d i l u i r a - l O O O m l .

,

2 ) R e a c t i v o d e Acido SulfjriEo I

S e d i s u e l v e n 22 .09 de s u l f a t o de p l a t a en 9 lbs, de H2S0,+ c o n c e n

t r a d o . Se r e q u i e r e n de 1 a 2 d í a s p a r a c o m p l e t a d i s o l u c i ó n .

Y

L..

L-

I-

r

ñ-

L.

L .. .

3 ' S o l J c i Ó n e s t á n d a r d e s u l f a t o f e r r o s o a m o n i a c a l , c r i s t a l e s d e

g r a d o a n a l í t i c o 0 .1 N .

Se d i s d e l v P n 9 8 g d e Fe (NH412 6H O e n a g u a d e s t i l a d a - A d i c i o n a r 2Dml. d e H2504 c o n c e n t r a d o , e n f r i a r y d i l u i r a 1000rnl. E s t a s3luciÓn debe e s t a n d a r i z a r s e c o n t r a l a s o l u c i ó n d e d i c ro rna - t o d e p o t a r i o d i a r i a m e n t e .

E s t a n d a r i z a c i ó n . D i l u i r 10.0 m l de s o l u c i ó n d e d i c r o m a t o d e PO--

t a s i o a p r o x i m a d a m e n t e a 100ml . A d i c i o n a r 30ml d e H25O4 c o n c e n t r a do y p e r m i t i r que e n f r i i ? . T i t u l a r c o n e l s u l f a t o f e r r o s o , u s a n d o 2 6 3 a o t a s (0.1 - 0.15 m i ) d e i n d i c a d o r d e f e r r o i n .

2

N a r m a l i d a d * m l d e K2&20, x 0.25 m l d e F e (NH,+)2(S04)2

4 ) S o l u c i ó n d e i n d i c a d o r d e F e r r o í n ,

D i s o l v e r 1 .485 g d e 1.10 f e n a n t r o l i n a m o n o h i d r a t a d a c o n 695rng - d e F e S O 4 . 7 H O e n a g u a y d i l u i r a 1 0 0 m l . 2

5; S u l f a t o d e P l a t a .

R e a c t i v o en p o l v o . Ver r e a c t i v o 2 .

6) S u l f a t o M e r c Ú r i c o .

C r i s t a l e a g r a d o a n a l í t i c o .

7 ) A c i d o s u l f á r n i c o g r a d o a n a l í t i c o .

PROCEDIMIENTO.

a ) C o l o c a r 0.4 g d e tig SO,, en un m a t r a z d e r e f l u j o . A d i c i o n a r

20.0rnl d e m u e s t r a , o u n a a l i c u o t a d i l u i d a a 20.0ml c o n a g u a d e a - t i l a d a y m e z c l a r . í i g r e g a r 10 .0 m l de s o l u c i ó n d e d i c r o m a t o d e p g

t a s i o y a l g u n a s p e r l a s cle v i d r i o p r e v i a m e n t e c a l b , t a d a s a 6 0 0 9 ~

p o r 1 h o r a .

C o n e c t a r e l m a t r a z a i c o n d e n s a d o r y a g r e g a r l e n t c - e n t e 30ml d e

H SO d e n s a d o r , m e z c l a n d o u i g u r o s a m e n t e m i e n t r a s se ag:?ga e l B c i d o .

M e z c l a r e l c o n t e n i d o d e l m a t r a z v i g o r o s a m e n t e a n t r s d e que s e - a p l i q u e e l c a l o r ; si n o se h a c e a s í , o c u r r i r e n c a l e n t a r n i e n t o s 10

c a l e s e n e l f o n d o d e l m a t r a z y p u e d e n s u c e d e r s e p r o y e c c i o n e s p o r

e l c o n d e n s a d o r .

c o n c e n t r a d o c o n t e n i e n d o Ag28Dq a t r a v é s d e . a b o c a d e l c ~ r , 2 4 -

Usar 0.4 g HgS04, p a r a c o m p l e t a r 40mg d e i Ó n c l o r u r o , Ó 2 0 0 0 m g / l

c u a n d o s e u a a n 20ml d e m u e s t r a . S i h a y mas c l o r u r o p r e s e n t e a d i - c i o n a r r a 6 H g S 0 4 p a r a m a n t e n e r u n a r e l a c i ó n H g C 0 4 : C1 d e 1O:l. - S i s e f o r m a un p r e c i p i t a d o l i g e r o no a f e c t a r á a d v e r s a m e n t e l a d e - t e r m i n a c i ó n .

b ) R e f l u j a r l a m e z c l a p o r 2 h o r a s o u s a r u n p e r i o d o mas c o r t o , - p a r a d e s e c h o s e n p a r t i c u l a r s i s e h a c o n c e n t r a d o que d i c h o p e r í g d o e a a d e c u a d o p a r a e n c o n t r a r D Q O máxima. E n f r i a r y l a v a r e l c o g d e n s a d o r c o n a g u a d e a t i l a d a .

c ) Diluir l a m e z c l a a c e r c a d e 150ml con agua d e s t i l a d a , e n f r i a r a t e m p e r a t u r a de c u a r t o , y t i t u l a r e l e x c e s o d e d i c r o m a t o c o n s o

l u c i ó n de e u l f a t o f e r r o s o a m o n i a c a l e s t á n d a r , u s a n d o f e r r o í n co - mo i n d i c a d o r . Tomar como p u n t a f i n a l d e l a t i t u l a c i l n el v i r e de a z u l v e r d e a c a f é r o j i z o , aunque el a z u l - v e r d e p u e d e r e a p a r e c e r

después de a 9 n o e m i n u t o s .

d ) R e f l u j a r un b l a n c o d e 2 0 m l d e a g u a d e s t i l a d a , e n l a misma f o r ma que l a s m u e s t r a s .

NOTA: P a r a muestras d e c a r a c t e r í s t i c a s e s p e c i a l e s u s a r un vo lumen de m u e s t r a entre 10.0 y 50.0 ml, c o n l o s v o l u m e n e s , p e s o a y n o r m a l i d a d e s a j u s t a d o s d e a c u e r d o a l a t a b l a a n e x a .

8. - C u a n t i f i c a r a l í n i c i o d e l e f e r m e n t a c i b n l o s f o a f a t o s t o t a -

l a ) C u a n t i f i c a c í Ó n d e l o o f o s f a t o s t o t a l e s d e l a e x c r e t a d e - . c e r d o .

Como p a r a l a d e t e r m i n a c i ó n d e f r r s f a t c s e s n e c e s a r i o p r i m e - r o u n a d i g e s t i ó n d a l a m u e s t r a , p e r l o q u e s e u t i l i z a e l M é t o d o d e d i g e s t i ó n d e l p e r s u l f a t o .

P a r a 1 s d e t e r m i n a c i ó n d e f o s f a t o s t o t a l e s s e u t i l i z a e l - M é t o d o C o l o r i m é t r i c o d e C l o r u r U e a t a n o a o ( S n C 1 2 ) .

1

I D E T E R M I N A C I O N COLORIMETRICA M E X O D O D E

SnCL2

P r i n c i p i o e 1 A c i d o M o l i b d o f o s f ó r i c o e s tomado y r e d u c i d o p o r e l

SnC12 h a e t a un c n l o r i n t e n s o d e a z u l d e m o l i b d e n o . E s t e m é t o d o

h a c e p o s i b l e m e d i c i o n e s d e 7 y g P/L h a s t a lOOug P/L; l a mfnima - c o n c e n t r a c i Ó n d e t e c t a d a e 6 d e 3 y g P/L l a s e n s i b i l i d a d d e 0 .3010

d e a b s o r b a n c i a en E a s i 10,ug P/C.

L e c t u r a 6 2 5 nm p a r a e x t r a c c i ó n con b e n c e n o i a o b u t a n o l .

I I

6 9 0 nm-para e x t r a c c i á n c o n a o i u c i a n a c u o s a . I

R e a c t i v o s .

B ) S o l u c i ó n i n d i c a d o r 8 d e f e n o l f t a l e í n a a c u o s a . I

1 b ) C o l u c l ó n d e á c i d o f u e r t e . I

A d i c i o n e r u a v e m e n t e 300ml d e H2C04 c o n c e n t r a d o a c a a i 600ml

d e H20 c u a n d o s e e n f r i s a d i c i o n e 4 . 0 m l HN03 y d i l u y a a 1 I t . I

c ) M o l i h d a t o d e Amonío r e a c t i v o I : D i s u e l v a 259 ( N H 4 1 S Mo7OZ4 . ~

I 2H O e n 1 7 5 m l d e a g u a d e a t i l a d a , c a u t e l o a a m e n t e a d i c i o n e - 280 m l d e H2S04 c o n c e n t r a d o a 4 0 O m l d e HZO e n f r i e , a d i c i o n e - l a s o l u c i ó n d e M o l l b d a t o d e a m o n f o y l l e v e a 1 l i t r o .

2

! l I I

L-I t- ... * .- * 1

*-

I..

. -. c

....

.e.

r..

_"

" Y

- - I *

d ) R e a c t í v o I d e SnCL2: D i a u e l v s 2 . 5 0 d e S n C L i 2 H 2 0 . f r e a c o e n 1

lOOrnL d e g L l c a r o l , c a l i e n t o e n baf io m a r i a h a a t a d l a a l u c i 6 n - a g i t a n d o co f l u n a v a r h l l a d e v i d r i o @ e e a t a b l e ; n o r e q u i e r e - c o n s e T v a d o r e s .

e ) S o l u c i ó n e s t a n d a r d e f u a f u t o s ,

f ) R s a c t t v o e p / e x t r a c c t Ó n .

1 ) S o l v e n t e b e n c e n o - i m o b U t r t í O l : m e z c l e l g u a l e a v o lumenea d e be'

2 ) R e a c t í v o I1 d e M o l i b d c i t n d e Amonlo: d i s u e l v a 40.19 ( N H 4 l 6 - c e n o y a l ~ o h o l 1 a o b U t a n o l ( a l t a m e n t e f l a m a b i e ) .

Mn70z4-4H O en a p r o x l m a d a m e n t e 500ml de a g u a d e s t i l a d a , R U E -

v emen t e a d i c i o n e 396ml d e l r e a c t i v o I., e n f r i e y d i l u y a a l l t . 2

3 ) S o i u c i b n A l c u h a l t c i l d e Ac. s u l f ú r i c o . c a u t e l o a a m e n t e a d i c i o n e

2 0 m l d e HzSü4 a980ml m e t a n u l , m e z c l a n d o c o n t i n u a m e n t e .

c e r o l . E a t a b l e p o r 6 m e a e a .

1 I t= 1 0 m l = 1 0 4 1

1 g - 1 0 mg = 1 0 Jg

4 ) R s a c t l v a X I d e S n C L 2 : M e z c l e Em1 d e l r e a c t i v o I con 5 0 m l Qlí-

3 6

3 6 1 ppm = 1 mg 1 t. 1000ppm- l g * 1 i t a 6 g ia i t = i o o o 9 = 10- t i o p-

M E T O b D SrrC12 P a r a d e t e r m i n a c i ó n

d e ( P O 4 )

D i g e s t t o n Me thod P e t a u l F a t a

R e ec t 1. v o o :

a ) S o i u c í Ó n i n d t c a d o r a d e C e n o l f t a l e i n a ( a c u o s a ) .

b ) ü o l u c i 6 n á c i d a s u l f ú r i c o : s d l c L M n e 3001111 H S O conc . a p r o x i - 2 4

mademente 600ml d e H20 d e s t i l a d a y d i l u y a a 1 l i t r o .

c ) P e r B u l f a t o de a m o n i o o ' p o t a e i o B b l i d o : , (NH4)ZS203H2C20a

d ) NaOH 1 N .

, .... ." ,..., ..,.,I,. , .

1: T"

U a e 5 0 m l o una porc ión a d e c u a d a d e m u e e t r a f u e r t e m e n t e a g i t a d a .

A d l c í o n e 0.05ml ( 1 g ó t 9 ) de 9rJíudi81I de f e n o l f t e l e í n a , a l a 8 d e - . a a r r o l l a un c o l o r roja e d i c t o n e H S O 4 (a011 g o t a a g o t a h a s t a d o

2 s a p a r e c e r e l c o l c r , d e a p u é a a d i c i o n e 1 m l e o l u c t ó n d e ti S O 4 y -- 0 . 4 Q d e ( N H ) S O 6 0.5 y H2S203 ab l i d n . H i e r v a s u a v e m e n t a a o -

b r e una p l a n c h a p o r 3 0 a 4 0 mi.nutoa 6 h a e t a a l c a n z a r un v o l u m e n

f l n i l de 10m1, e n f r í e , d í l u y s a 30ml con H 0 a d l c í c n a 0.05ml ( 1

g o t a d e f e n o l f t a L e í n e y n e u t r e l í c e E un color r o s a d é b i l c o n -- N a O H .

R l t a r n a t í v e m e n t e , c a l i e n t e p o r 8 m i n . ~n un a u t o c l a v e d e ( 9 8 a -- 137 K P a ) . ( 1 c n f r t e , a d í c i o r í e 0 . 0 5 m l ( 1 g o t a ) d e P e n a l f t a -

l e í n a y n e u t r a l t c e a r o j o a u 9 v e c o n NaOH l l e v e a l O O m l c o n H O .

Si. en a l g u n a m u e a t r a un p r e o í p i t a d o p u e d e f o r m a r s e en e s t a e t e p a

no f i l t r a r p a r a c u e l q u l c r L u b a e c u e n c i a s u b d i v i d a l a m u e s t r a (me-

n e a r b í e n ) .

E l p r e c t p í t a d o r p d t a o l v e r l u b a j a l a s c a n d i c l a n e s á c i d a s d e l r e a c

t í v a c ~ l o r f , m e t r í c o d e l e n s a y o dl< f l l n f a t o s h e g a l a c u r v a t i p o lle v a n d o l o a e s t a n d a r e s p o r l a d t g e a t i b t i ' .

2 4 2 2 8

2

2

-

PROCEDIMIENTO.

a ) T r a t a m t e n t o p r í r l t m í n a r d e l a m u e s t r á :

a 1 0 0 m l d e muentrr c U n t e n í 6 n d u no mea da Z 0 0 ) L g P y l i b r e de

c o l o r y t u r b t e d e d , a d í c i a n e 0.051171 ( 1 g o t a ) d e f e n o l f t a l e l n a .

6 1 l a m u e s t r e a e t o r n a r o sa a d i c i o n e e O l u c í Ó n d e b c í d o f u e r t e

g o t a a g o t a h a s t a d e s a p a r e c e r e l c o l o r . N i mas d e 0.25ml ( 5 - g o t a a ) s o n r e q u e r í d a s , tdme u n a m u e s t r e mas p e q u e ñ a y d l l U y a

a 1 0 0 ml. c o n H20, y d e a p u é s d e a s p a r e c e e l c e l a r c o n l a a o l .

á c i d a .

b) D e a a r r o i l n d e c o l o r I

A d í c l o n e c o n a g i t e c í ó n f u e r t e d e s p u é a de c a d a a d i c l ó n 4 m l d e l

r e a c t l v o 1 d e m c i i b d a t o y 0.5 m l ( 1 0 gotea. ) S n C l r e a c t i v o I ,

l a v e l o c i d a d d e l d e s a r r u l l o d e c o l o r e í n t r n a i d a d d e l c o l o r - 2

d e p e n d e d e l a t e m p e r a t u r a d e l a s o l u c i b n f i n a l ( 1 P C i n c r e m e n -

t a un 1% d e color),

c ) M e d i c i b n d e l color. Despuhs d e 1 0 m i n . pero a n t e s d e 1 2 m i n . u s a n d o el m i n m o i n - -

t e r v a l o p a r a t o d a a 1 a a d e t e r m i n a s i o n e a m i d a e l c o l o r n 690nm

y c o m p a r e c a n un8 c u r v a de c a i i b r a c i h n , u s a n d o un b l a n c o c o n

H 2 0 .

r a n g o P/mg/l.

0 . 3 - 2 -0.5cm p a s a d e luz. 0 .1 - 1 - 2 cm p a s a d e luz. 0 . 0 0 7 - 0 . 2 -10 cm p n r a d e l u z .

S i e m p r e c o r r a un b l a 6 c o de r e a c t i v e r y H20 d e s t i l a d a p a r q u e e l

c o l o r - s e d e o n r r o l l a p r o ~ r e e 5 v a m e M t e y l u e g o a d e a c a l o r a r s e . - T e n i e n d o i g u a l e s c o n d i c i o n e s p a r a m u e s t r a a e s t a n d a r e s .

E x t r a c c L Ó n : cuendo s e d e r e e i h E r e m e n t a r o d i s m i n u i r las i n t e r f e -

r a n c i a s : P i p e t s 40mL d e muestra , 6 uMl r d l f u s i ó n e ese v o l . e n un

embudo d e s e p a r a s i b n ( 1 2 5 m l ) r d i c í u n e 50ml de s o l v e n t e b e n c e n o -

i a o b u t a n o l y 15 m i d e l reilc!tivU I1 d e M ü l i b d a t o d e Amonio. c i e r r e

e l embudo y a g i t e v t q d r d u a m e n t e 15 a e g u f l d a s . n i 0 e c o n d e n s a f o a -

f a t o s , o l g u n e d o m o s r puede i n c r e m e n t a r e u ca6vens lC in a o r t o f o s f a

t o s . -

Romueva e l t a p 6 6 y i o p 8 f S 2 5 h i d e l a f e d e o S g b n t c a usendo u n a p i

p e t a con b u l b a t r d n a f í e r a 50 m i ¡% un m e t r a z , a d i c t o r r e 1 5 a 16ml

d e a a i u c i b n r í c 6 h o i . i c 9 HZSOk, d e v u e l t a s g í r a t o r i a i , a d i c i o n e - 0.51111 ( 1 0 g o t a s ) d e l r e a c t i v o I1 S n C l 2 , s i g a g i r 6 n d 0 y d i l u y a a

l a m a r c a c a n a o l u c i á n R i c o h o í t c a d e H S O 4 , m e z c l e f u e r t e m e n t e - d e s p u b a d e l O m i f l , p e r a a n t e e de 30mirí. l e a c o n t r a un b l a n c o a

625 nm; l e a u n , b l a n c o c o n t a d o n los r e a c t i v o a p e r o c o n H O .

2

2

Célculos: P r o c . d i r e c t e .

m q P/L = mgP ( e n a p r e x í m a d a m e n t e 104.5ml d e v o l f i n a l x 1 0 0 0 ) m l m u e s t r a .

' I

i !

E x t r a c c i ó n .

mg P/L =rrigp (en 5Uml F t n a l ) k 1 0 0 0 m l s imule .

b ) P a r a l a d e t e r n i n e c i ó n d @ NÓ2 c o m o n i t r 6 g e n o a e u t i l i z a r á l a S i Q U i e n t e t é c n i c a .

DETERMINACION DE NU; CüMO N I T R O G E N O .

PI? I N C I. P I O .

L o a N O 2 non d e t e r m i f l a d a r a t r a v s a de l a f o r m a c i ó n

r a c i ó n a z o p ú r p u r a r o j i z a , p r o d u c i d a a p H 2 . 0 a 2 . 5 qor j u n t a r a e

e a - í i c i d o a U l f a n f , l i c a d i a z 0 t i l i d o c a n e l d i h l d r o c l o r u r o d e e t i l e n -

d i a m i n o . E l m b t o d a e a a p r o p i a d o p a r e 1 8 d e t e r m l n a c i b n d e N O 2 p o r

a b a j o d e lyg NO;-- N/L.

d e una colo-

M e d i c i o n e s f o t o m é t r i c a a en e l +an40 d a 5 I 50 pg N/L ( V i a d e l u z

5 cm) y u a a n d o f i l t r o v e r d e e l d i e t e rna d e c o l a r o b e d e c e l a ley - d e Bee r p e n a c o n c e n t r a c i a n e a e r r l b a d e l 8 0 pa N/L c a n una v i a

d e 1 cm d e luz e 5 4 3 r im- Altar c o n c e n t r e c i o n e a p u e d e n s e r d e t e r

m i n a d a s p o r d i L i r c l b n d e r n u e s t i a a a 501111 e n e l t u b o d e N e s s l e r .

l n t e r f e r e n c i a a .

L a i n c o m p e t l v i l i d c d q d i ~ 5 C e h a c e i m p r e v e b i e q u e NO - c l o r u r o l i -

b r e , t r i c l d r u r a de N i t r o g e h o ( N C l 3 ) p u e d a n e u b a i a t i r j u n t o s en 1

l a muertra

2 ’

NCL3 i m p a r t e u n e a m l o P e c i b n P a l i a ( r o j a ) c u a n d o e l o r d e n n o r m a l

d e l a e d i o i b r i e i seC)Uida, aunque e s t e e f e c t o e e m i n i m i z a a l a d i -

c t o n a r t r i h i d r o f l o r u r a d e e t i l e n d i a m i n a p r i m e r o y l u e g o e l á c i d o

a u l f a m i l i o o , un c o l o r n a r a n j a a u n p u e d e r e s u l t a r cuando u n a a l t a

c o n c e n t r a c i á n de N C l j e o t a p r e s e n t e , b a j o t a l e s c i r c u n s t a n c i a e I-

c h e q u e c l o r u r o a ’ l i b r e d i a p o n i b l s a N C 1 3 r e a i d u s l .

L o s s i g u i a n t e a i o n e a i n t e r f i e r e n : .

..,,., ,., .. ...< , . , , . , . , ~ .

c

-- I.

... R e a c t t v a a :

.".. - S Y l f a n l l a r n i d a

- H C l

I." - D t h í d r a c l o r u r a e t 1 l e n d L e l m t n a

r- L-

P

L_

- N P ~ C ~ O ~

- F e (NH4)2 CSü)26H20

- NaNO p a r a eñsaya

- H M n O

4

2

- HZSO

L

g r a d o cm f f l e r c í a l ) 99%.

M a t e r i a l y E q u t p d

- E a p a c t r a f o t ó m e t r c .

- M a t e r i a l d e l a b a r o t o r i o .

P r e p a r a c i ó n de Sd lud t anes : I

- R a a c t i v o da S u l f a f i í l a m i d a : D í ü u e l v a 5 9 d e s u l f a n i l a m l d a en una

m e z c l a d e 5 0 m l H E 1 C d n d e ~ f t r a d a y 500ml d e HzO. s i r v e p a r v a r l a a

maaea.

- S a l u c i b n d e d i h l d r o c l a r u r o e t i l e n d i a m l n a . ( N - C l - n a f t t l ) - e t l l e n

d í a m l n a d i h i d r a c l o P u r o ) . D l ü ü a l v a 500 mg d e d l h i d r a c l n r u r o d e

E T D en 500ml d e Agua, g u a r d e e n f r e s c o amba r , r e m p l a c e m e n s u a l

m e n t e a c u e n d a a d q u i e r a una' c O l a r a C i ó n c a f é o a c u r a .

-

- HE1 1+3.

- O x a l s t a d e i n d i o 0 .05 N . D i e u e l v a 3.3509 Ma C ' O g r a d o p r i m a r i o 2 2 4

e e t a n d a r e n 1 , 0 0 0 m l de H20

c

..... ~, . . . . ..... .- ..

- F e r r o a u l f a t o d e a m c n i o U - O 5 N: D i a u e l v a 19.607g F e ( N H 4 ) 2 . - ( S O , , ) 2 - 6H20 m a U Z O m l d e H2S04 Cdr l c e r í t r ado en H20 y d i l u y a e

l O O O m l .

- S o l u c i ó n m a d r e d e n f t r i t o c i . D i s u e l v e 1 . 9 3 2 ~ NoN02 e n H20 y d i - .

l u y a a 1000ml un 1 m l - 2 5 ) U N . preserve c o n 1 m l CH C13 -

- - B o l u c i b n i n t e r m e d i a d e n i t r l t o a . C6lculo d e l volumen G d e l a - g o l u c l ó n m a d r e r e q u e r i d a p a r e h a c e r l a o a l u c i b n i n t e r m e d i a .

G - 12 .5/A A- mgN0;- N / m l err l a a o l u c l Ó n mad re ( o b t e n i d o d e

l a e m t s n d a r i z a c i 6 n ) .

D i l u i r G a un valumen C t n a l d e 2 5 0 m l con H20 ( p r e p a r e d l a r i a m e n -

t e ) .

- S o l u c i 6 n E s t a n d a r d e h , i t r i

i n t e r m e d i a d e N O 2 a l O O O m l

d i a r i a m e n t e ) .

Ma. d i l u y a 10.00ml d e l a s o l u c i 6 n - con H 2 0 1 m l - 0.500 N ( p r e p a r e -

E a t a n d a r t r a c t ó n de l a soluci6fi de F e r r o d u l f a t o d e Amonio. ( F A S ) .

P a r e e a t a n d a r t z a p o m p l o d r r a i u c l b n e e t a f i d s r d e VI Cr O como s i g u e .

D i l u y a 10.0 m l de 1 8 soilrlcl6M e s t a n d h r d e K Cr O a unoe 100m1,

a d t c i o n e 30ml d e H2S04 E o n c e n t r e d o y e n f r i e t i t u l e c o n FAS u o an -

d o 2 a 3 g o t a 6 d e 1 n d i c a d . a r d e Ferrotrí.

2 2 7

2 2 7

Nerrnaltdad d e FAC Y mt d e H21&IJ, 0.25 N s m p i e a d o a .

m l d e V A S u e a d a s err le t l t u l e c i b n x 0.25

9 o i u c i 6 n d e i n d i c a d o r d e f e r ro in .

Disuelva 3 . 4 8 5 ~ 1 . 1 0 - f e n a n f r o l i n i m o n o h l d r a t a d r y 695mg FeS04 - 7H O e n H O y d i l u y a a 1OOOml ( m e p u e d e e m p l e a r a l i n s t a n t e d e

2 2 prepa ra r ) .

E o t P n d a r S z a c t Ó n d e l a C a l u c i ó r i M a d r e de NO;.

p i p e t e e n o r d e n 5 0 m l d e HMnOk e s t a n d a r 0.05 N , 5 m l d e H2S04 - c o n c e n t r a d o y 50ml d e s o l u c i ó n madre N O - e n un C r a e c o de t a p b n

e s m e r i l a d o Ceumrrgs l e p i p e t a e n e l p e k n f a n a a n a t a . & d i d o a l a d i - c i o n a r l a ~ a l u c t a ~ ? m a d r e ) d s l i e d t e d e 7 0 m B O P C en una p a r r i l l a

y e l i m i n e e l c o l a r d e l p e r m i n g a n a t o con a d i c i ó n d e N a C O como

HMnO,, 0 . 0 5 N h a s t a o b t e n e r una c o l o r a c i ó n r o s a t e n u e .

C o r r a un b l a n c o can HzO l i b r e de N i t r i t o s i g u a l que con l a ao- l u c i b n medre da NO2 y h n g a l a correccibn.

2

2 2 4

d o n d e :

A= mgN0 - N / m l e n l a P o L u c i í r n m a d r e d e NO- 2 2

Ea m l t o t a l e m d e HMnQk e s t a n d a r u o a d d -

C- n o r m a l i d a d d e H M f i 0 4

D- ml de F A 5 a d l c i o f f a d ü s .

E- n o r m a l i d a d del , r a d u c t r n t e .

F= ml UESdQú en 1 8 t i t U l # C i b f l d e 1s S O l u C i h R m e d r e de NaNO 3

c a d a lml de HHnO,, 0.05 N concrumída p o r 1 0 s r J l u c i Ó n d e NaN02 co- r r e s p o n d e a 350 J J ~ N02-N.

CONSERVACZON DE MUECTRAB.

, . , , . . .. ".. I... < ,

nunca UBI ácidoir p a r a c d n a e r v a r l u s muestra8 s i s e van a p r e s e r -

v a r 1 b 2 d i e a a d t C t b M e H g C 1 2 &Omg/L y COn( lerve a 4 P C -

T I T U L f W I O N DEL PERNANGANATO ( E S T A N D A R I Z A C I O N ) .

- Na C 0 u a o p r i m a r i o e s t a n d a r Becar B 105aC t o d a 1s noche.

- HMnO,, 0 . 0 5 N C S t a n d a r ) d i a o l v e r 1 . 6 g hMnO4 en l O O O m l m a n t e n g a

en f r a r c o a m b e r t a p a d o , m a n t e n g a una semana a t n m o v e r . f i l t r e

i i n a g i t a r ( a a l u c i á n e s t a n d a r HMn04 exactsmente O.CJ5OON e s í-

e q u i v a l e n t e a 1.002 mg Ca/l ' m l .

2 2 4 - H2S0,, 1+1

, , I

..

I

- p e i e e x a c t a m e n t e 0.1 mp y 1 0 0 0 0 200 mg m u e a t r a e d e N i C O

h i d r o ( s e c a d o p r e v i a m e n t e ) S R v a n a s de & O O t n l e n E / v a a o en t u r n o

s d i c i o n e r l D O m t d e H20 d e t i t i l a d a y e g i t a r h a r t a d t a o l v e r . A d i k l o -

n a r l D m l H2S04 1+1 y caLen tP i r r l p í d a m g h t e

2 2 k B !

, ' a 9OPC t i t u l e r 6 - p i d a m e n t e c o n HNfi04 mig f i t r am a g i t a , ( c o l o r r oa@ s u a v e maa d e 1 - m i n u t o ) .

100 mg p u e d e n c o n a u M i I < 3 0 m l de B o l u c l b n éo r r e r un b l a n c o con -

Na C O --g2-2-4- ca-a) x 0.06701

Norm i íMnOqr

A- m l u a e d o s e n 1s t i t u l a c l Ó n

8- m l u s a d o s en b l a n c o .

c ) P a r a l a d e t e r m i n a c t b n d e n l t r a t o a (NO;) s e u t i l i z a l a s i g u i e n - t e t é c n i c a .

DETERMINACION DE NITROGEN0 DE

NO;

ANTECEDENTE:

L a t é c n i c a a e m p l e a r p a r a d e t e r m i n a r e l N d e n i t r i t o a e s t á e n -- f u n c i h n a L a c a n t i d a d d e m a t e r i a o r g á n i c a p r e s e n t e en l a m u e a t r e

l a proserte la d e interferencia a c o n c e n t r e c i b n d e nitrites p r e s a n - t e a en l e mRweat,ra d e a c u e r d o a lo a r r i b a d i c h o a e p u e d e n c o n s i d o

r i r i a a a t g . t é c n i c a s .

a ) T é c n i c a de ( U V ) que m i d e l a a b s o r b a n c i a d e NO; a 220nm como

l a t h c n i c a e s r e c o m e n d a b l e p a r a m u e s t r a a c o n b a j a c o n o m t r s c i b n

de m a t e r i a o r g L n i c a , a e p r e t e n d e t r a b a j a r , c m d i l u c l o n e a .

b ) l i h c n i c a d e l e l e c t r o d o d e NO;

lam m u e s t r a s c o n a l t o c o n t e n i d o de m a t e r i a o r g 6 n l c a .

e n t e m b t o d o e s e m p l e a d o p a r a --

METODO EEPECTOFOMETRIOO DE LUZ ULTRAVIOLETA

I . - Fundamento y DltacYst6Jl.

L o m e d l c l Ó n de & b a o r c l b n de UV ti 22Oflhi p e r m i t e una r á p i d a d e t e r -

m i n a c i ó n d e NO;.

L a c u r v a de c a l l b ~ a c i b n d e NO; s i g u e I r l e y de Beer p e r a c o n c e n -

t r a c i o n e s m a y o r e a i l l m g NZL. Y a que l a m a t e r l s o r g á n i c a d i a u e l

t a t a r n b í é n puede a h a o r v e r E zzanm y como 10,s NO; 275nm, u n a segundemedi'ción la 275nm puede d a r u n a c d r r e c c i b n p a r a

c o r r e g i r l o s v a l o r r < s de NO;. F a c t o r e s de c o r r e c c l 6 n p a r a l a sb-

s o r b u n c i a de materta o p g á n i e a puede 5 e r e s t a h l e c l d a p o r 81 m é t o d o

d e a d i c i o n e s en c o m b l n a c l b n c o n e 1 a n b l i s i a d e l c o n t e n l d o o r l g t -

n a l de c o n t e n l d c i d e NO;

L a f i l t p a c i b n de l a m u e s t r a e i r v e p e r a r e m o v e r p o s i b l e s i n t e r f e -

r e n c i a s de p a r t f c u l a a s u e p e n d i d a s .

L a A c i d i f t c a c i 6 n c o n H C 1 1 N e a t 6 d e s i g n a d a p a r a p r e v e n i r i n t e r f e - r e n c l s s de H i d r b k i d o s o c a r b o n a t o s c o n c o n c e n t r a c i o n e s r u p e r i o r s a

de 1 , 0 0 0 rng C a C 0 3 / L .

no a b r o r v e n a

p o r o t r o método.

I n t e r f e r e n c i e r :

M a t e r i a o r g b n i e a d i a u i l t a , a u r f a c t a n t e a , n l t r i t o s y c r o m o h e x a v a

l e n t e , C l o r i t o s , CLora toc i . L a s S u s t a f l C t a S i n o r g á n i e a s p u e d e n corn

p e n s a r s e p o r sl a n á l t s l i i n d e p e n d i e n t e de sus c c n c e n t r a c l o n e s y

p r e p a r a c i ó n de c u r v a n de c s r r e c c l 6 n l n d i v t d u a l .

-

R e a c t i v a r .

- A g u a ' l Y h r e de N i t ra to . .

- "O., - CHCl.,

- HC1 i

A p a v s t o i y M a t e r t e L .

- E a p e c t r o f o t ~ b s e t r u d.e' UV.

- C e I d e d e sll.5sa. E m 1.EM d.e l u . t ' d e pesa. - F t l t r o a ,

- Membraf ide pa.r8 f í . lt .rar dci 0 . 4 5 m d.e d i 4 m e t $ q de p u r u

- T u b o i d e Nea s l e r , 5 O m l d e t'erme c á r t a .

. .

Preparación d e R e a c t t v a e y S o l u d i o i f e s .

1 . - S a l u c i b n bfsdre d e N i t r a t o s : S e q u e K N O j s 105OC. p o r 2 4 h r a .

D i a u e l v s 0.7218 g e n Ague y d i l u y e a 1000ml. P r e o e r v e o o n 2ml CHCl,/L. 1 m l d o e m í u c i 6 n madre 1 0 0 g NO;-N S m i u c i 6 n e s t a b l e p o r mas d e 6 m o o e s .

2.- B s I u o í Ó n E a t a a d a r d de N i t r a t o s .

Q t l t í y a 50m1 d e l a aolucióm m a d ~ e a 50OmL corí HZO. 1 m l d e a a L 1 i c i 6 n e r t á n d a r d = 10 gN03-N.

\ 3 . - S ü l ü c i b f i d e HC1 1 N - d i s u e l v a 3 6 . 4 6 0 . g C e q u i v a l e n t e a vo lumen = V - 36.460

d

en kizO y l L e v e a 1 000 m l .

P r o c e d í m í e n t u :

a ) S r a t a m i e n t l de l a m u e o t r a .

a 50ml d e l a m u e i t z a f i l t r a d a a d i c i o n a r 1 m i d e H C I 1N. mez-

c l a r camp 1 etemen te.

t i ) P r a p s r r c t b n de la C U D V B e s t a n d a r d .

P r e p a r e l a c a l i b r a c i b n e s t a n d a r d d e O a 7mg N03N/L. 6 (O a - 3 5 0

menee de l a s o l u c t b n e s t a n d a r d e n l t r a t o o O . 1 , 2 , 4 , 7 , ... 35ml.

l a m u e s t r a .

g N ü 3 - N / 5 0 e l ) p a r a e l l o d i l u y a a 50mL loo s i g u i e n t e s v o l -

T r a t a r l o s e a t a n d a r e s d e N O 3 e n a e m e j a n t e manera que

d ) C á l c u l o

Correcclbn p a r a motost i a r g ú n i a a disueltr, o u d t r s e r 2 v e c a e 1

1 0 a b s e r l a ñ c f a l e i d a a 275 hm e 18 1 8 t d a I ZZOnm p a r i o b t e n o r

l a a b a o r v a n c t a d e b i d a B i - f i t r e t c a a s n v e r t l r e l V a l d r d e a b i o r -

v a n c i a a n i o b t i n i d o da N O ; e c o n c e n t r i c l ó n c a n l a c u r v a em-- t a n d a r d .

N o t i : s t e l v 6 l O r d e l a o o s e c c i f i n e s m i o que 10% d e l a l e f d e

a 2 2 0 nm no ne e m p l e e a t s métcldo.

MgNOJN/L ( UNO3 N/en 5 O m l d e VQlkIRlen F i n e l ) n e t o s .

$.- Evelura y g r a f i c a r r e a u l t a d o i o b t e n i d o s .

.. I... .. . . ., . . ... I.

t

-.

...

.... _. ,

B I E L I O G R A F I A . I

1 . American P u . b l í a H e e l t A a a o C í B t í U f i 1-976. S t a . n d B r d M e t h o d a f o r

T h e E x s m t n e t b e n of' W a . t e r and. W a a t e W a t e r . 1 4 T h , e d . A m e r í c a n

P u , h l . i e H.@sLth A s a r i c b a t i o n , W a a h i n g t o f i , 0.0.

2. B e r g , G . (Ed.,) 1 9 6 7 . b l T r a n a m i e a i o n o f v i r u s e s b y t h e W a t e r - - R o u t e " . I n t e r a c b e n c e , J a h n Witey & S O n E ? . , New ' f o r k .

3 . B e r g , G . e t . a , l . ( E d # ) 1 9 7 6 . f b V i r u o e a i n W a t e r A m e r i c a n P u b l i c

H e a l t h A s o o c t a t i o n , W a s h i n g t o n , D.C.

4 . S l a n e t z , L. W., a n d C.H. B a r t l e y 1 9 6 4 . " D e t e c t i o n a n d S a n i t a -

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