remidi sistohisto

download remidi sistohisto

of 1

description

axqwef

Transcript of remidi sistohisto

NAMA : EKA PRASETYANINIM: G1C214011Prosedur Pengecatan ImmunohistokimiaTahap I1. Dipotong ulang blok, diinkubasi pada oven dengan suhu 83C, 1X24 jam.2. Deparafinasi.3. Digojog dengan TBS sebanyak 2X masing-masing selama 5 menit.4. Ditetesi HO 5% selama 2-3 menit.5. Dicuci air mengalir selama 5 menit, digojog aquadest selama 5 menit.6. Digojog dengan TBS sebanyak 2x masing masing selama 5 menit.7. Buffer citrate & Tris EDTA dengan suhu 112,5 C pada oven selama 40 menit.8. Dikeluarkan dan dibiarkan samapai dingin.9. Digojog dengan TBS sebanyak 2x masing masing selama 5 menit.10. Ditetesi background sniper (Normal serum ) selama 20 menit. Dibersihkan tepi tepinya saja tanpa dicuci.11. Ditetesi dengan antibody primer selama 75 menit ( pada suhu kamar ), atau semalaman pada kulkas ( bukan freezer ).Tahap II1. Digojog dengan TBS sebanyak 2x masing masing selama 5 menit.2. Ditetesi Trekkie universal ( yellow )selama 15 menit.3. Digojog dengan TBS sebanyak 2x masing masing selama 5 menit.4. Ditetesi TrekaVidin HRP (orange ) selama 10 menit.5. Digojog dengan TBS yang baru sebanyak 2x, masing masing selama 5 menit.6. Ditetesi DAB (chromogen + substart ; 1:30 ) selama 6 menit.7. Ditetesi air mengalir selama 5 menit, dicat Mayer selama 3 menit.8. Dicuci air mengalir kembali selama 5 menit.9. Dilanjutkan pengecatan ( HE ) pada tahap akhir ( dehidrasi dan clearing )10. Mounting dengan entellan dan labelling.Catatan : chromogen + substart ( 1:30 ) = 10l chromogen + 300 l substrat. Antibody primer : 10l concentrate antibody + 990 l diluent