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Primeira aula
• Apresentação da Disciplina
• Características do sangue
• Coleta de sangue
• Extensão sanguínea e coloração
• Hemograma
Profa Elvira Shinohara
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Características do sangue
• Tecido líquido e renovável • Plasma Células sanguíneas • Eritrócitos • Leucócitos • Plaquetas
Tipos de leucócitos • Neutrófilos • Eosinófilos • Basófilos • Linfócitos • Monócitos
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Função do sangue
• Transporte (O2, CO2, nutrientes, metabólitos, etc)
• Defesa (fagocitose)
• Homeostase (temperatura, controle eletrolítico, etc)
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Células sanguíneas
• Eritrócitos ou Hemácias ou Glóbulos vermelhos
• Leucócitos
Neutrófilos
Eosinofilos
Basófilos
Linfocitos
Monócitos
• Plaquetas
Granulócitos
Agranulócitos
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Como visualizamos estas células?
• Extensão sanguínea
• Coloração da extensão sanguínea
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Células sanguíneas
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Células sanguíneas
Eosinófilo Neutrófilo Segmentado Linfócito
Plaquetas
Hemácias
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Células sanguíneas
Monócito Linfócito
Plaquetas Hemácias
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Células sanguíneas
Basófilos
Fonte: Hoffbrand & Pettit, 1991
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Células sanguíneas
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Células sanguíneas
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Volume sanguíneo nas mulheres
Volume de sangue nas mulheres 61,9 mL/kg
Exemplo:
Mulher de 55 kg (peso corpóreo)
Logo:
• Volume de sangue 3.404 mL
• O volume total de eritrócitos corresponde a 24,8 ml/kg de peso, ou 1.362 mL
(usou o Ht=40% para este cálculo)
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Volume sanguíneo nos homens
Volume de sangue nos homens = 62,4 mL/kg
Exemplo:
Homem de 75 kg (peso corpóreo)
Logo:
• Volume de sangue 4.680 mL
• O volume total de eritrócitos corresponde a 28,1 ml/kg de peso, ou 2.106 mL
(usou o Ht=45% para este cálculo)
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Coleta do sangue
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Locais de coleta de sangue
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Punção venosa
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Tubos à vacuo para coleta
A cor da tampa indica qual anticoagulante está sendo utilizado
Cor roxa = EDTA
Cor cinza = fluoreto de sódio
Cor azul = citrato de sódio
Cor verde = heparina
Cor vermelha/marrom = sem anticoagulante
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Anticoagulantes utilizados em hematologia
EDTA
• K3EDTA e K2EDTA são os anticoagulantes mais adequados para a rotina hematológica (hemograma)
• EDTA quela o cálcio do sangue
• É utilizado na seguinte proporção: 10 µL de anticoagulante/1mL de sangue.
Vantagens:
• não altera a morfologia das células (desde que a proporção anticoagulante/sangue seja mantida)
• não dilui o sangue e impede a agregação plaquetária
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Anticoagulantes utilizados em hematologia
CITRATO DE SÓDIO
• É o anticoagulante de escolha para os testes de coagulação e prova de agregação plaquetária.
O citrato de sódio reage com o cálcio formando um composto insolúvel.
• É utilizado na seguinte proporção:
1 mL de anticoagulante/ 9 mL de sangue.
ou
0,5 mL de anticoagulante/ 4,5 mL de sangue
• Desvantagem: altera a morfologia das células e dilui o sangue (uma parte de anticoagulante para 9 partes de sangue).
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Anticoagulantes utilizados em hematologia
HEPARINA
• A heparina age pela formação de um complexo com a antitrombina III plasmática, que inibe a trombina e outros estágios dos fatores de coagulação
Vantagens
• não altera a morfologia das células e não dilui o sangue
• Desvantagem: o preço do anticoagulante é maior do que o EDTA
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EXTENSÃO SANGUÍNEA análise da morfologia é essencial para o diagnóstico
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Plasma
Células sanguíneas
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Células sanguíneas
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Extensão Sanguínea
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COLORAÇÃO SANGUÍNEA
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Corantes do Tipo Romanovsky
• São misturas que contem eosina e azul de metileno dissolvidos em metanol
• Na solução envelhecida (após dias do preparo do corante), o azul de metileno se oxida em gradações diferentes, originando os azures de metileno
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Coloração do tipo Romanowsky
• O corante de Romanowsky (neutros) é uma solução alcoólica de um complexo de eosinato de azul e azures de metileno
• A diferença entre os vários corantes derivados do corante primitivo de Romanowsky acha-se na proporção que se emprega de azul-de-metileno e de eosina, ou no método de tratamento do azul-de-metileno, antes de sua combinação com a eosina
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Princípio da coloração
• Os componentes Azures em sua forma de dímeros ligam-se a moléculas aniônicas, exemplo os grupos fosfato do DNA
• Os grupamentos ácidos dos ácidos nucleicos e proteínas do núcleo celular e do citoplasma tem afinidade pelo corante básico Azul- de -Metileno
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Princípio da coloração
• A eosina na forma de monômero se liga aos sítios catiônicos das proteínas
• A presença de grupamentos básicos na molécula de Hb resulta na afinidade por corantes ácidos, corando-se pela eosina
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Principio da coloração
CORANTE CÉLULA
Azul de Metileno cora Núcleo (DNA)
(básico) (ácido)
Eosina cora Hb
(ácido) (básico)
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Nomenclatura usual
• Coloração Ortocromática: a célula cora-se com a mesma cor do corante
• Coloração Metacromática: a célula toma uma cor diferente daquela do corante
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Nomenclatura usual
• Estruturas celulares que se coram em pelo Azul de Metileno são chamadas de basófilas (corando-se de azul)
• Estruturas celulares que se coram pela Eosina são chamadas de acidófilas (corando-se em rosa)
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Tipos de corantes de Romanovsky
• May-Grunwald ou Jenner,
• Giemsa
• Leishman
• Wright
(Podem ser encontrados, no comércio, na forma de reagentes ou em soluções já preparadas pelo fornecedor)
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Células sanguíneas
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Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no
mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.
Campo muito grosso Campo adequado Campo muito fino
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Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no
mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.
Campo muito
grosso Campo adequado Campo muito fino
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Campos de leitura na extensão sanguínea
Corpo da extensão sanguínea
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Região grossa da extensão (cabeça)
Não deve ser feito contagem das células
nesta região da extensão sanguínea
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Região da cauda (muito fina)
Não deve ser feito contagem das células nesta região da extensão sanguínea
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Campos que NÃO devem ser analisados na extensão sanguínea
Região muito fina Cauda da extensão
Região muito grossa
Cabeça da extensão sanguínea
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Contagem relativa dos leucócitos
• É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.
A
A
B
A – Cerca de 25 células
B- Cerca de 50 células
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Contagem relativa dos leucócitos
As células não tem distribuição uniforme na extensão sanguínea
Cabeça Corpo Cauda
Os linfócitos predominam no meio da extensão
Neutrófilos e monócitos predominam nas margens e na cauda
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Problemas na coloração • Presença de precipitados do corante na extensão sanguínea
corada
• Uso de lâminas sujas com gordura
• Secagem durante o período de coloração
• Lavagem inadequada ao término da coloração
• Filtração inadequada dos corantes (vai aparecer os precipitados de corante)
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Precipitados de corante
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Coloração inapropriada
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HEMOGRAMA
Plasma
células
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HEMOGRAMA
Exame hematológico mais solicitado
Consiste na análise qualitativa e quantitativa das
células sanguíneas
Fornece parâmetros para controle e auxílio no
diagnóstico das anemias, de vários processos
infecciosos e de alterações no número das plaquetas
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Hemograma
• Eritrograma (avalia série vermelha)
• Leucograma (avalia série branca)
• Contagem de plaquetas
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Exemplo de um laudo de hemograma
eritrograma
leucograma
Contagem de plaquetas
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Bibliografia recomendada
. Dacie & Lewis. Practical Haematology. 8a Edition. Churchill Livingstone.
• Stiene-Martin EA, Lotspeich-Steininger, Koepke JA – Clinical Hematology- Principles, Procedures, Correlations. Editora Lippincott, 2edição, 1998.
• Lorenzi TF, D’Amico E, Daniel MM, Silveira PAA, Buccheri V – Manual de Hematologia – Propedêutica e Clínica. Editora Medsi 3 edição, 2003.