Protein Synthesis and Purification - bioneer.co.kr · 344 BIONEER J. Protein Synthesis and...

Protein Synthesis Service Phone: 042-930-8647 E-mail: [email protected]

Protein Synthesis and Purification Phone: 1588-9788 (ext.4 → 2) E-mail: [email protected]

JProtein Synthesis and Purification

01. Protein Synthesis

02. Protein Purification

03. Preparation of Template DNA for Protein Synthesis

04. Protein Service

Antibody Production Service Phone: 042-930-8695 E-mail: [email protected]

Gene to Protein Service Phone: 042-930-8793 E-mail: [email protected]

01. Protein Synthesis

Selection Guide ····························································· 343

Automatic Cell-Free Protein SynthesisExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit········································ 344ExiProgen™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit ·································· 346ExiProgen™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit ······························ 347ExiProgen™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit ····························· 348

Manual Cell-Free Protein SynthesisAccuRapid ™ Protein Synthesis Kit ·········································· 349AccuRapid ™ Protein Expression Kit ········································· 350AccuRapid ™ Disulfide bond Protein Synthesis Kit ·························· 351

Protein Synthesis & Purification InstrumentExiProgen™ → Go to M. Instruments & Devices

J. P

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ynth

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and

Pur

ifica

tion

www.bioneer.co.kr 343

개요바이오니아의 재조합 단백질 합성에 관련된 제품군 automatic type과 manual type으로 나뉘며, 용도에 따라 선택이 가능합니다.

■ Automatic type

1) 100 µg 내외의 단백질 합성

- ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit

(Cat. No. K-7300, K-7301, K-7302, Bioneer)

2) 500 µg 내외의 단백질 합성

- ExiProgen ™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit

(Cat. No. K-7310, Bioneer)

3) Tag이 제거된 단백질 합성

- ExiProgen ™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit


4) 2개 이상 이황화결합이 있는 단백질 합성

- ExiProgen ™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit


■ Manual type

1) 일반적인 단백질 합성에서 정제까지 수행

- AccuRapid ™ Protein Synthesis Kit


2) 단백질 합성만 수행

- AccuRapid ™ Cell-Free/Midi/Maxi Protein Expression Kit

(Cat. No. K-7250, K-7260, K-7270, Bioneer)

3) 2개 이상 이황화결합이 있는 단백질 합성

- AccuRapid ™ Disulfide bond Protein Synthesis Kit


과정 제품 종류 사용 장비 서비스

DNA Template

준비

Manual type

Automatic type

Two types of way

N-His primerN-8229

C-His primerN-8230

PlasmidK-7350

PCR kitK-7400

Template

AllInOneCycler ™ 96 wellPCR system [A-2041-1N]

GeneSynthesis

Gene SynthesisCustom Order

단백질

합성 / 정제 / 투석

MiniK-7250

MidiK-7260

MaxiK-7270

MegaK-7340

NormalK-7280

His-tagK-7200

GST-fusionK-7740Normal

K-7300

His tagK-7220

Disulfide bond

K-7290

DialysisK-7240

Protein GK-7710

Protein LK-7730

Protein AK-7720

MaxiK-7310

TagfreeK-7320

Disulfide bond

K-7330

Synthesis Purification

Dialysis

MagListo™ -2 MagneticSeparation Rack

(2ml x 8 holes) [TM-1010]

Gene toProtein

Synthesis

Gene to Protein SynthesisCustom Order

ExiProgen ™ [A-5041]

ProteinSynthesis

Standard Protein SynthesisService [S-2500]

Selection Guide

344 BIONEER

J. P

rote

in S

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and

Pur

ifica

tion 단 시간 내에 여러 종류의 단백질을 합성하고자 할 때

제품 개요

바이오니아의 ExiProgen ™ 장비를 이용하여 단백질을 전자동으로 합성

하는 kit입니다. 합성하고자 하는 template DNA를 첨가한 kit를 ExiPro-

gen ™에 장착하여 가동시키면 전자동으로 단백질이 합성되고, His-tag

을 이용하여 정제가 진행됩니다. 1회 반응으로 최대 16종의 서로 다른 고

순도의 단백질을 100 μg 내외로 얻을 수 있습니다.

(Protocol No. 902, 약 6시간 구동)

특장점 ■ 완전 자동화 시스템

Template DNA를 카트리지에 넣어준 후, ExiProgen ™에 장착하여 가동

시키면 전자동으로 단백질 합성 및 정제가 되어 약 6시간 이내에 목적 단

백질을 얻을 수 있습니다.

■ 고난이도 발현 단백질 합성

기존의 in vivo 방식으로 발현이 어려웠던 세포 독성 단백질, 막단백질 등

의 합성도 가능합니다.

■ 다양성

다양한 종류의 DNA(plasmid 또는 PCR product)로부터 다양한 크기

(10-150 kDa)의 단백질 합성이 가능합니다.

■ 재현성

자동화 장비의 최적화된 프로토콜로부터 재현성있게 단백질 획득이 가

능합니다.

응용 및 적용

연구용 및 상업용 효소를 포함하는 단백질의 연구개발에 사용될 수 있으

며, 특히 다수의 mutant screening 분석에 적용할 수 있습니다.

실험 자료

<Detection of color> <Detection of fluorescence>

sfGFP RFP AcGFP sfGFP RFP AcGFP

Figure 1. Detection of fluorescence emitted from fluorescent proteins

synthesized with ExiProgen ™.

This result indicates that these synthesized sfGFP, RFP, and AcGFP are func-

tionally active.

Left panel: Color of each protein elution samples detected with naked eyes.

Right panel: Fluorescence from protein elution samples detected with UV il-

luminator.

1 2 3 4 5 6 7 8 (well )

M E P E P E P E P E P E P E P E P

66 kDa45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

9 10 11 12 13 14 15 16 (well)


66 kDa45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

M1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M2

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

116 kDa97.4 kDa66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

Figure 2. Expression and purification of CAT.

Reproducibility is seen in all 16 wells with no detectable variation between

wells.

Lane 1 - 16: Number of the well

M: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Low) (Cat. No. D-2020, Bioneer)

E: Expression sample

P: Purification sample

ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit


Figure 3. SDS-PAGE data of various proteins synthesized from various templates (Plas-

mid DNA → 10 - 120 kDa proteins, PCR product → 10 - 60 kDa proteins).

Up to 16 types of proteins can be expressed and purified simultaneously with an average of

over 90% purity. Amount of loading sample is 1/35 of total sample.

M1: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Low) (Cat. No. D-2020, Bioneer)

1: CalmL3 (17.5 kDa), 2: RNase H (20 kDa), 3: DUSP3 (22 kDa)

4: CAT (24 kDa), 5: AcGFP (29 kDa), 6: EF-Ts (34 kDa)

7: VF (45 kDa), 8: Poly A polymerase (50 kDa)

9: M-MLV RTase (75 kDa), 10: BM3 (117 kDa)

M2: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Broad) (Cat. No. D-2010, Bioneer)

Figure 4. PAGE & enzyme activity data of DUSP3.

Left panel: Expression and purification of DUSP3 (protein tyrosine

phosphatase).

M: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Low) (Cat. No. D-2020, Bi-

oneer)

E: Expression sample, P: Purification sample

Right panel: DUSP3 synthesized with ExiProgen ™ has an enzyme

activity.

DUSP3 phosphatase activity was measured by incubating with 500

μM 3-O-methylfluorescein phosphate (OMFP).

(Reaction buffer: 100 mM Tris-HCl (pH8.2), 40 mM NaCl, 1 mM DTT,

20% Glycerol)

Figure 5. PAGE & enzyme activity data of M-MLV RTase.

Left panel: Expression and purification of M-MLV RTase.

M: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Broad) (Cat. No. D-2010, Bioneer)

E: Expression sample, P: Purification sample

Right panel: Amplification of GAPDH of Human total RNA with M-MLV

RTase was synthesized with ExiProgen ™.

Lane M: 100 bp DNA Ladder

Lane NC1: Negative control 1 (No-RNA)

Lane NC2: Negative control 2 (No-enzyme)

Lane Sample: 10 ng Human total RNA from HeLa cell

주문 정보

카탈로그 번호 제품명

K-7300 ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit, 16 rxns



ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit

1 2 3 4 5 6 7 8 (well )


66 kDa45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

9 10 11 12 13 14 15 16 (well)


66 kDa45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

M1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 M2

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

116 kDa97.4 kDa66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

M E P

166 kDa97.4 kDa

66 kDa45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

M NC1 NC2 Sample

GAPDH(500 bp)

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

M E P300

250

200

150

100

50

00 10 20 30 40 50 60 70

Time(min)

Base line

BSA

Negative control

DUSP3 sample

346 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 500 µg 이상의 단백질을 손쉽게 얻고자 할 때

제품 개요

바이오니아의 특허기술인 ExiProgen ™ 장비의 SECF (Stepwise Ex-

change Cell-Free) 단백질 합성법을 이용하여 전자동으로 반응 well 당

최대 500 μg, 순도 90% 이상의 단백질을 합성할 수 있는 kit입니다. 또

한 단백질 합성, 정제 및 투석까지 모든 반응이 전자동으로 이루어지며,

최종 목적 단백질은 원하는 storage buffer에 용해된 상태로 회수할 수

있습니다.


특장점 ■ 완전 자동화 시스템


시키면 전자동으로 단백질 합성 및 정제가 되어 약 25시간 이내에 목적

단백질을 얻을 수 있습니다.

■ 동시 다중 단백질 합성/정제/투석

1-8종의 단백질을 동시에 합성, 정제 및 투석을 할 수 있습니다.




■ 재현성

자동화 장비에 최적화된 프로토콜을 이용하여 재현성 있고, 손쉽게 약

500 μg 내외의 단백질 획득이 가능합니다.

응용 및 적용

연구용 및 상업용 효소를 포함하는 단백질의 연구개발에 사용될 수 있

습니다.

실험 자료Figure 1. Synthesis of various proteins.

Proteins can be expressed and purified simultaneously with an average of over

90% purity. Amount of loading sample is 1/80 of total sample.

M1: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Low) (Cat. No. D-2020, Bioneer)

Lane 1: CalmL3 (17.5 kDa)

Lane 2: DUSP3 (22 kDa)

Lane 3: CAT (24 kDa)

Lane 4: AcGFP (29 kDa)

Lane 5: RFP(30 kDa)

Lane 6: EF-Ts (34 kDa)

Lane 7: VF (45 kDa)

Lane 8: BM3 (117 kDa)

M2: AccuLadder ™ Protein Size Marker (Broad) (Cat. No. D-2010, Bioneer)

주문 정보


K-7310 ExiProgen ™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit, 8 rxns

ExiProgen ™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit


His-Tag이 제거된 원형의 단백질을 얻고자 할 때

제품 개요

바이오니아의 ExiProgen ™ 장비를 이용하여 His-tag이 제거된 단백질

을 전자동으로 합성할 수 있는 kit입니다. Template DNA를 첨가한 kit를

ExiProgen ™에 장착하여 가동시키면, 순도 95% 이상의 목적 단백질을

storage buffer에 용해된 상태로 회수할 수 있습니다.


특장점 ■ His-tag 제거된 단백질 회수

목적 단백질의 정제목적으로 사용된 His-tag이 제거된 형태로 단백질을

획득할 수 있습니다.

■ 완전 자동화 시스템





1 - 8종의 단백질을 동시에 합성, 정제 및 투석을 할 수 있습니다.




■ 재현성

자동화 장비의 최적화된 프로토콜을 이용하여 재현성 있고, 손쉽게 약

200 μg 내외의 단백질 획득이 가능합니다.

응용 및 적용

단백질의 구조분석이나, 단백질 의약품개발, 항원단백질 합성에 응용될

수 있습니다.

실험 자료

M 1 2 3 4

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

Expression sample

M 1 2 3 4

Puri�cation sample

Figure 1. Expression and purification of various proteins.


1: DUSP3 (22 kDa), 2: hGH (23 kDa), 3: CAT (24 kDa), 4: AcGFP (28 kDa)

Note) DUSP3: Dual specificity protein phosphatase 3, hGH: Human growth

hormone

1. SDS-PAGE Gel Data 2. Western Blot Data

M 1 2 3 2 3(k Da)

66

45

29

20.1

Figure 2. Data of SDS-PAGE and Western blot with His-tag antibody.


Lane 1: Expression sample of pBIVT-TEV-AcGFP

Lane 2: His tag-TEV-AcGFP (His-tagged sample)

Lane 3: AcGFP (His-tag free sample)

주문 정보


K-7320 ExiProgen ™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit, 8 rxns

ExiProgen ™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit

348 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 이황화결합을 가지고 있는 목적 단백질을 얻고자 할 때

제품 개요

바이오니아의 ExiProgen ™ 장비를 이용하여 2개 이상의 이황화결합

(disulfide bond)을 가지고 있는 목적 단백질을 합성하는 kit입니다.

Template DNA를 첨가한 kit를 ExiProgen ™에 장착하여 가동시키면,

목적 단백질을 storage buffer에 용해된 상태로 회수할 수 있습니다.


특장점 ■ 이황화결합 단백질 합성

단백질 발현 환경을 조절하여 단백질 내부의 이황화결합을 형성할 수 있

도록 제작되었습니다.






1 - 8종의 단백질을 동시에 합성할 수 있습니다.

■ 재현성

자동화 장비의 최적화된 프로토콜을 이용하여 재현성 있고, 손쉽게 약

50 μg 내외의 이황화결합 단백질 획득이 가능합니다.

응용 및 적용

Pharmaceutical protein, scFv 합성 및 항체 스크리닝에 응용될 수 있

습니다.

실험 자료

Figure 1. SDS- PAGE & enzyme activity data.

Left Pannel: Expression and purification of scFV and rtPA in ExiProgen ™


Lane 1: scFV containing 2 disulfide bonds

Lane 2: rtPA containing 9 disulfide bonds

* Amount of purification sample is 1/40 of total sample.

Right panel: rtPA synthesized has an enzyme activity.

1: Synthesis sample using ExiProgen ™ EC-Maxi Protein Synthesis Kit

2: Synthesis sample using ExiProgen ™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit

* rtPA activity was measured by incubating with chromogenic substrate

S-2288.

주문 정보


K-7330 ExiProgen ™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit, 8 rxns

ExiProgen ™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit


빠르고 쉽게 단백질 합성을 하고자 할 때

제품 개요

AccuRapid ™ Protein Synthesis Kit는 manual type으로 원하는 단백

질을 합성 후 정제할 수 있는 kit입니다. 본 kit 는 E. coli 무세포 단백질

합성 및 Ni-affinity 정제 실험에 사용되는 모든 구성품을 포함하고 있으

며, 반응당 정제된 목적 단백질을 100 μg 내외로 회수할 수 있습니다.

특장점 ■ 간단한 단백질 발현

세포를 이용하지 않고 시험관 튜브 내에서 손쉽게 단백질을 합성할 수 있

으며, 기존의 세포배양 방법으로 발현이 불가능했던 단백질도 합성이 가

능합니다.

■ 편리성

T7 시스템에서 발현이 가능한 다양한 종류의 template (plasmid 또는

PCR product) 로부터 원하는 단백질의 발현 및 정제 여부를 손쉽게 확

인할 수 있습니다.

■ 호환성

전자동 단백질 합성 장비, ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit와 호

환이 가능합니다.

응용 및 적용


습니다.

실험 자료Purification sampleExpression sample

Figure 1. SDS-PAGE data of various proteins synthesized from various

templates.


Lane 1: CalmL3 (17.5 kDa)

Lane 2: DUSP3 (22 kDa)

Lane 3: CAT (24 kDa)

Lane 4: AcGFP (29 kDa)

Lane 5: ERFP (31 kDa)

Lane 6: EF-Ts (34 kDa)

Lane 7: VF (45 kDa)

Lane 8: BM3 (117 kDa)

주문 정보


K-7280 AccuRapid ™ Protein Synthesis Kit, 5 rxns

AccuRapid ™ Protein Synthesis Kit

350 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 단백질 발현을 확인하고자 할 때

제품 개요

AccuRapid ™ Protein Expression Kit는 manual type으로 반응튜브

내에서 template DNA를 이용하여 3시간 이내에 단백질의 발현을 확인

할 수 있는 kit입니다. Template DNA만 있으면 손쉽게 목적 단백질의 발

현을 확인할 수 있습니다.

특장점 ■ 신속성

3시간 이내에 준비된 template DNA (Plasmid 또는 PCR product) 로부

터 단백질을 발현할 수 있습니다.

■ 간편한 사용

DNA로부터 단백질 발현에 필요한 모든 요소들이 kit 내에 준비되어 있

습니다.

■ 다양성

다양한 종류의 DNA(Plasmid 또는 PCR product) 로부터 다양한 크기

(10 - 150 kDa)의 단백질 합성이 가능합니다.

■ 고난이도 단백질 발현 가능

기존의 in vivo 방식에서 단백질 발현이 어려운 세포 독성 단백질, 막단백

질 등의 단백질도 발현이 가능합니다.

■ 호환성

전자동 단백질 합성 장비, ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit 제

품들과 호환이 가능하며, template DNA의 최적 농도를 찾는데도 유용

합니다.

응용 및 적용


습니다.

실험 자료

Figure 1. Positive control protein expression data of AccuRapid ™ Protein

Expression Kits (SDS-PAGE and Coomassie Brilliant Blue staining).


Lane 1,3,5: Negative control(No-DNA)

Lane 2,4,6: Positive control (pBIVT-AcGFP)

Note) K-7250 – 45 μl rxn, K-7260 – 1 ml rxn, K-7270-10 ml rxn

M 1 2 3 4 5 666 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

PTP18GFP

CAT

Figure 2. Various protein expression data (SDS-PAGE and Coomassie Bril-

liant Blue staining).

M : AccuLadder ™ Protein Size Marker (Low) (Cat. No. D-2020, Bioneer)

Lane 1,3,5: Negative control (No-DNA)

Lane 2: CAT (Chloramphenicol acetyl transferase)

Lane 4: GFP (Green fluorescence protein)

Lane 6: PTP1B(Protein tyrosine phosphatase 1B)

Figure 3. Determination of the optimal amount of template DNA for the

expression of pBIVT-GFP (SDS-PAGE and Coomassie Brilliant Blue staining).

M : AccuLadder ™ Protein Size Marker (Low) (Cat. No. D-2020, Bioneer)

Lane 1: Negative Control (No-DNA)

Lane 2: CAT (Chloramphenicol acetyl transferase)

Lane 3 - 8: pBIVT-GFP (50, 100, 200, 400, 600, 800 ng)

주문 정보


K-7250 AccuRapid ™ Cell-Free Protein Expression Kit, 45 μl x 24 rxns

K-7260 AccuRapid ™ Midi Protein Expression Kit, 1 ml x 5 rxns

K-7270 AccuRapid ™ Maxi Protein Expression Kit, 10 ml x 1 rxn

AccuRapid ™ Protein Expression Kit


이황화결합을 가지고 있는 목적 단백질을 얻고자 할 때

제품 개요

AccuRapid ™ Disulfide bond Protein Synthesis Kit는 manual type

으로 2개 이상의 이황화결합을 가지고 있는 목적 단백질을 합성 및 정제

를 하는 kit입니다.

특장점 ■ 이황화결합 단백질 합성

이황화결합을 가지고 있는 단백질을 합성 및 정제할 수 있으며, 정제된 단

백질은 고유의 활성을 나타냅니다.

■ 편리성

T7 시스템에서 발현이 가능한 다양한 종류의 template (plasmid 또는

PCR product) 로부터 원하는 단백질의 발현 및 정제 여부를 손쉽게 확

인할 수 있습니다.

■ 호환성

전자동 단백질 합성 장비, ExiProgen™ EC-Disulfide Protein Synthe-

sis Kit와 호환이 가능합니다.

응용 및 적용

Pharmaceutical protein, 다양한 항체 합성 및 항체 스크리닝에 응용

될 수 있습니다.

실험 자료

M

116 kDa97.4 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

1 2

Expression

3 1 2

Puri�cation

3

Figure 1. SDS-PAGE gel stained with Coomassie blue R-250. scFv is ex-

pressed using AccuRapid ™ Disulfide bond Protein Synthesis Kit at 30℃ for

3 hours. Reaction volumes is 750 μl. Plasmid and PCR product are used 3.4

μg/ml and 670 ng/ml, respectively. Samples are loaded 1.5 μl of total 750

μl, 7.5 μl of total 100 μl in expression and purification fractions, respectively.


Lane 1: Negative control (without template DNA)

Lane 2: Sample (with plasmid DNA)

Lane 3: Sample (with PCR product)

주문 정보


K-7290 AccuRapid ™ Disulfide bond Protein Synthesis Kit, 5 rxns

AccuRapid ™ Disulfide bond Protein Synthesis Kit

02. Protein Purification

Selection Guide ····························································· 353

Automatic Protein PurificationExiProgen™ His-tagged Protein Purification Kit ····························· 354ExiProgen™ Consumable SET ··············································· 355ExiProgen™ Dialysis Kit ······················································ 356

Manual Protein PurificationMagListo ™ His-tagged Protein Purification Kit ····························· 357MagListo ™ Protein G, Protein A and Protein L Kit ··························· 358ToxinCleanic Endotoxin Removal Kit ········································· 359

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion


개요바이오니아의 재조합 단백질 정제에 관련된 제품군은 automatic type과 manual type으로 나뉘며, 용도에 따라 선택이 가능합니다.

■ Automatic type

1) His-tag 정제

- ExiProgen ™ His-tagged Protein Purification Kit

(Cat. No. K-7220, K-7221, Bioneer)

2) MagListo ™ purification kit의 자동화 장비 연동 SET

- ExiProgen ™ Consumable SET (Cat. No. KA-3001, Bioneer)

2) Buffer 투석

- ExiProgen ™ Dialysis Kit (Cat. No. K-7240, Bioneer)

■ Manual type

1) His-tag 정제

- MagListo ™ His-tagged Protein Purification Kit


2) 항체 정제

- MagListo ™ Protein G Kit (Cat. No. K-7710, Bioneer)

- MagListo ™ Protein A Kit (Cat. No. K-7720, Bioneer)

- MagListo ™ Protein L Kit (Cat. No. K-7730, Bioneer)

2) Endotoxin 제거

- ToxinCleanic Endotoxin Removal Kit


과정 제품 종류 사용 장비 서비스

DNA Template

준비

Manual type

Automatic type

Two types of way

N-His primerN-8229

C-His primerN-8230

PlasmidK-7350

PCR kitK-7400

Template

AllInOneCycler ™ 96 wellPCR system [A-2041-1N]

GeneSynthesis

Gene SynthesisCustom Order

단백질

합성 / 정제 / 투석

MiniK-7250

MidiK-7260

MaxiK-7270

MegaK-7340

NormalK-7280

His-tagK-7200

GST-fusionK-7740Normal

K-7300

His tagK-7220

Disulfide bond

K-7290

DialysisK-7240

Protein GK-7710

Protein LK-7730

Protein AK-7720

MaxiK-7310

TagfreeK-7320

Disulfide bond

K-7330

Synthesis Purification

Dialysis

MagListo™ -2 MagneticSeparation Rack

(2ml x 8 holes) [TM-1010]

Gene toProtein

Synthesis

Gene to Protein SynthesisCustom Order

ExiProgen ™ [A-5041]

ProteinSynthesis

Standard Protein SynthesisService [S-2500]

Selection Guide

354 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion His-tag을 가지고 있는 단백질을 정제하고자 할 때

제품 개요

바이오니아의 ExiProgen ™을 사용하여 재조합 단백질이 발현된 E. coli

세포 파쇄액 또는 무세포 단백질 합성 시료로부터 his-tag을 가지고 있는

목적 단백질을 고순도로 정제하는 kit입니다.


특장점 ■ 다양한 샘플에 적용

in vivo (E. coli 발현) 또는 in vitro (무세포 발현)로 발현된 His-tag을 갖

고 있는 모든 재조합 단백질의 정제가 가능합니다.


단백질 정제에 필요한 모든 buffer가 들어있는 pre-filled cartridge가

제공되므로, 세포 파쇄액 또는 무세포 단백질 발현 시료만 준비하면 즉

시 사용이 가능합니다.

■ 자동화 시스템

설치된 프로토콜을 이용해서 누구나 쉽게 단백질을 정제 할 수 있습니다.

■ 동시 다중 단백질 정제

1 - 16종의 단백질을 동시에 정제할 수 있습니다.

응용 및 적용

His-tag을 갖는 목적 단백질이 발현된 E. coli cell lysate으로부터 목적

단백질을 정제하는데 사용될 수 있습니다.

실험 자료

M BI I

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

Figure 1. Recombinant E. coli cell with expressed of DUSP3.


BI; Pre-induction sample

I; Post-Induction sample

M CL P

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

Figure 2. Purification of DUSP3 with ExiProgen™.


CL: Sample of recombinant E. coli cell lysate (DUSP3 expression)

P: Sample of purification

주문 정보


K-7220 ExiProgen™ His-Tagged Protein Purification Kit, 16 rxns

K-7221 ExiProgen™ His-Tagged Protein Purification Kit, 32 rxns

ExiProgen ™ His-tagged Protein Purification Kit


MagListo ™ 단백질 정제 제품군을 ExiProgen ™에 연동시켜 단백질을 정제하고자 할 때

제품 개요

ExiProgen ™ Consumable SET는 자사의 MagListo™ 제품군을 Exi-

Progen ™에 연동시켜 전자동으로 단백질 정제를 수행하고자할 때 필요

한 일회용 제품 SET입니다. MagListo ™ kit의 구성품을 본 SET와 함께

사용하여 ExiProgen ™으로 구동하면 1 - 16종의 시료를 동시에 정제하

여 Human IgG의 경우 1시간 이내에 well 당 최대 600 μg 의 IgG를 얻

을 수 있습니다.

특장점 ■ 자동화 시스템

설치된 프로토콜을 이용하여 누구나 쉽게 단백질을 정제할 수 있습니다.

■ 동시 다중 단백질 정제

1 - 16종의 단백질을 동시에 정제할 수 있습니다.

■ 다양성

사용 목적에 맞게 1 - 20 mg의 bead 양을 설정하여 정제가 가능합니다.

■ 재현성

오차범위를 최소화한 자동 분주 시스템을 이용하여 재현성 있는 실험 결

과를 얻을 수 있습니다.

실험 자료

M116 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

6.5 kDa

lgG L 1 2 3 4 5 6 7

Human plasma puri�cation with Protein G beads

lgG116 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

6.5 kDa

L M 1 2 3 4 5 6 7

Human plasma puri�cation with Protein A beads

M116 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

6.5 kDa

lgG L 1 2 3 4 5 6 7

Human plasma puri�cation with Protein L beads

Figure 1. Human plasma purification using MagListo ™ Protein G, Protein

A, Protein L Kit and ExiProgen ™ Consumable SET. The volume of protein

samples loaded into each well is 7.5 μl/400 μl total elution samples.


IgG: purified human IgG 3 μg

L: loading sample (human plasma 500 μl)

Lane 1 - 7: amount of beads, 1, 2.5, 5, 7.5, 10, 15, 20 mg

주문 정보


KA-3001 ExiProgen ™ Consumable SET

관련 제품

K-7200 MagListo™ His-tagged Protein Purification Kit, 1 x 5 ml

K-7710 MagListo™ Protein G Kit, 1 x 1 ml

K-7711 MagListo™ Protein G Kit, 1 x 1 ml (* 4pk)

K-7720 MagListo™ Protein A Kit, 1 x 1 ml

K-7721 MagListo™ Protein A Kit, 1 x 1 ml (* 4pk)

K-7730 MagListo™ Protein L Kit, 1 x 1 ml

K-7731 MagListo™ Protein L Kit, 1 x 1 ml (* 4pk)

ExiProgen ™ Consumable Set

356 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 단백질의 storage buffer를 교환하고자 할 때

제품 개요

바이오니아의 ExiProgen ™ 장비를 이용하여 단백질을 전자동으로 dial-

ysis 할 수 있는 kit 입니다. 교환하고자 하는 buffer를 kit 내의 cartridge

에 넣어준 후 ExiProgen ™에 장착하여 가동시키면 buffer 교환이 전자

동으로 이루어지며, 최종 목적 단백질을 원하는 buffer에 용해된 상태로

회수할 수 있습니다.


특장점 ■ 효율성

적은 양의 buffer를 이용하여 원하는 buffer로 교환할 수 있습니다.

■ 경제적이고 편리한 사용

추가적인 냉장 시설 없이 자동화장비를 이용하여 저온에서 원하는 buf-

fer로 교환할 수 있습니다.


시료 로딩 후 설치된 프로토콜을 이용하여 전자동으로 모든 과정이 진

행됩니다.

■ 동시 다중 단백질 투석

1 - 16종의 단백질 buffer를 적합한 buffer로 동시에 교환할 수 있습니다.

응용 및 적용

단백질 buffer 교환, 단백질 최적 buffer screening에 사용될 수 있습니다.

실험 자료

Figure 1. Comparison of dialysis efficiency according to different protocol

using 500 mM imidazole.

Ⅰ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3

Ⅱ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3, 10% Glycerol

Ⅲ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3, 20% Glycerol

Ⅳ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3, 30% Glycerol

Ⅴ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3, 40% Glycerol

Ⅵ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3, 50% Glycerol

Ⅶ: PBS

Ⅷ: 100 mM HEPES (pH7.6), 100 mM NaCl, 0.2 mM EDTA, 0.05% NaN3

Figure 2. Comparison of dialysis efficiency between manual and automa-

tion using 500 mM imidazole.

Ⅰ: 50 mM Tris-Cl (pH7.6), 100 mM NaCl, 50% Glycerol.

Ⅱ: PBS

Manual dialysis: Dialyzed with dialysis buffer of 100-fold sample volume at 4℃

ExiProgen ™ Protocol No. 913: Storage_12

주문 정보


K-7240 ExiProgen ™ Dialysis Kit, 16 rxns

ExiProgen ™ Dialysis Kit


His-tag을 가지고 있는 단백질을 정제하고자 할 때

제품 개요

MagListo™ His-tagged Protein Purification Kit는 Ni-NTA magnetic

bead로 His-tag을 가지고 있는 단백질을 정제하는 kit입니다. 6X histi-

dine을 포함하는 목적 단백질은 Ni-NTA Magnetic Nanobead 표면의

Ni2+ 이온과 특이적으로 결합하여 기타 단백질로부터 분리된 후, 고농도

의 free imidazole 처리 시 bead로부터 용출됩니다.

특장점 ■ 신속한 정제

His-tag을 가지고 있는 단백질을 빠르고 쉽게 정제할 수 있습니다.

■ 고순도 단백질 획득

결합력이 우수한 Spherical Shape Magnetic Beads에 의해 고순도 단

백질을 획득할 수 있습니다.

■ 효율성

Crude cell lysate를 이용한 효율적인 screening 수행 가능합니다.

■ 다양한 샘플에 적용

in vivo (E. coli 발현) 또는 in vitro (무세포 발현)로 발현된 His-tag을 갖

고 있는 모든 재조합 단백질의 정제가 가능합니다.

응용 및 적용

본 kit는 manual type으로 His-tag을 갖는 목적 단백질을 정제하는데

사용될 수 있습니다.

실험 자료

Figure 1. Purification of 6X His-tagged protein.


L: Loading sample

Lane 1: Unbound sample

Lane 2: Eluted sample (MagListo ™ His-tagged Protein Purification Kit)

Figure 2. Protein size effect on purification.


Lane 1: Size 94 kDa His-tagged protein





제품 규격/사양

Mini scale Midi scale Maxi scale

Preparation time ~5분 ~17분 ~26분

Elution volume 0.2 ml 2 ml 5 ml

Binding capacity 30 - 40 mg His-tagged protein/1 g Ni-NTA beads

주문 정보


K-7200 MagListo™ His-tagged Protein Purification Kit, 1 ml x 5

MagListo ™ His-tagged Protein Purification Kit

358 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 빠르고 쉽게 항체 정제를 하고자 할 때

제품 개요

MagListo™ Protein G Kit, MagListo™ Protein A Kit 와 MagListo™

Protein L Kit 는 magnetic nano bead를 사용하여 항체를 정제하는

kit로써 magnetic nano bead와 항체 정제에 필요한 buffer로 구성되

어 있습니다. 각 제품은 95% 이상 고순도의 protein G, protein A 또는

protein L 이 코팅된 magnetic silica bead를 사용하고 있습니다.


magnetic nano bead의 강력한 자성력으로 실험을 보다 빠르고 손실 없

이 진행할 수 있습니다.

■ 우수한 결합력

평균직경 400 nm의 magnetic nano bead는 표면적이 넓고 결합력이

우수하여 높은 binding capacity를 보장합니다.

■ 특이성

균일한 구형의 nano bead로 비특이적 결합을 감소시켰습니다.

응용 분야 ■ 항체 정제 ■ Immunoprecipitation ■ 항원-항체 상호작용 연구 ■ 단백질 복합체 연구 ■ Cell separation

실험 자료

M 1 2 3

66 kDa

39.9

Bioneer Competitor L Competitor Q

60

40

20

0

19.725.5

45 kDa

29 kDa

20 kDa

µg H

uman

IgG

/mg

Bead

s

(A) (B)

Figure 1. Comparison of protein binding efficiency of MagListo™ Protein

G Kit with competitor’s kits.

A) Upper and lower bands are heavy (HC) and light chain (LC) of purified human

IgG in SDS-PAGE gel, respectively.

M: AccuLadder ™ Protein size marker (Low) (Cat. No. D-2010, Bioneer)

1: Bioneer, 2: Competitor L, 3: Competitor Q

B) Amount of bound IgG is quantified by UV-spectrophotometer. All reactions

are carried out for 1 hr at room temperature. Human IgG is purchased from

Sigma (Cat. No. I4506).

(A) (B) M IgG M scFv

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20 kDa

Heavy chain▲

Light chain▲

Figure 2. Purification of IgG and scFv using MagListo™ Protein A Kit.

▲

▲

66 kDa

M L BIONEE

R타사

M L BIONEE

R타사

45 kDa

29 kDa

20 kDa

66 kDa45 kDa

scFv29 kDa

20 kDa

(A) (B)

Figure 3. Purification of IgG and scFv using MagListo™ Protein L Kit.

제품 규격/사양Protein G Magnetic Nanobeads Protein A Magnetic Nanobeads Protein L Magnetic Nanobeads

Matrix Silica-coated Fe3O4 Silica-coated Fe3O4 Silica-coated Fe3O4

Concentration 40 mg/ml (4% suspension) 40 mg/ml (4% suspension) 40 mg/ml (4% suspension)

Binding capacity > 30 μg Human IgG/mg beads > 20 μg Human IgG/mg beads > 20 μg Human IgG/mg beads

주문 정보


K-7710 MagListo ™ Protein G Kit, 1 x 1 ml

K-7720 MagListo™ Protein A Kit, 1 x 1 ml

K-7730 MagListo™ Protein L Kit, 1 x 1 ml

MagListo™ Protein G, Protein A and Protein L Kit


단백질 내 endotoxin을 제거하고자 할 때

제품 개요

ToxinCleanic Endotoxin Removal Kit는 endotoxin의 대표적인 물질

인 lipopolysaccharide (LPS)를 제거하는 Kit 입니다.

LPS는 인간을 비롯한 동물의 면역 세포를 자극, 염증 반응을 유도하여 부

작용을 유발할 뿐만 아니라 세균의 성장 주기 동안 지속적으로 방출되어

주변을 오염시킵니다. 일반적으로 LPS는 200℃ 이상의 고온이나 0.1 M

이상의 강산 혹은 강염기 조건에서 몇시간 이상 반응시켜야 제거가 가능

하기 때문에 단백질로부터 LPS를 제거하는 것은 쉽지 않습니다.

그러나 본 kit의 resin에 목적 단백질을 반응시키면 resin 1 ml 당 최소

2,000,000 EU (1 EU=0.1 ng)의 endotoxin을 제거할 수 있습니다.

특장점 ■ 간편한 사용

Resin에 단백질 시료를 통과시켜 손쉽게 endotoxin을 제거할 수 있습

니다.

■ 경제적

5번 이상 안정적으로 재사용이 가능합니다.

■ 우수한 성능

대상 시료 내에 포함된 endotoxin을 최소 90% 이상 (≥ 2,000,000 EU/

ml of resin) 제거 할 수 있습니다.

응용 분야 ■ 샘플 정제 ■ 항체/면역 관련 ■ 세포 실험

실험 자료

1118158

4956

Blank Input

4933 1015613662 9612 6594 13278308272613512431 9229

fr1B N fr2 fr3

Bioneer

fr4 fr5 fr1 fr2 fr3

Competitor

fr4 fr5

1200000

1000000

800000

600000

Ex.

490

nm/E

m.5

25 n

m

400000

200000

0

LPS-FITC �uorescence

Figure 1. LPS-FITC conjugation sample에 대한 각 fraction 별 FITC 형광 값

측정 결과.

(Input: LPS-FITC 106 EU/ml – 2 ml, fraction volume – 1 ml, resin 사용량:

1 ml (50% slurry), Column volume – 1 ml)

LPS에 FITC (형광물질)가 conjugation된 sample의 flow fraction에 대한 형광값 측정

으로 분석한 샘플 통과 전/후 농도 감소율 90% 이상 확인함.

lgG recovery

160.2

264.6

4.7

fraction 1 fraction 1 fraction 1

300.0

250.0

200.0

150.0

lgG

conv

entr

atio

n (u

g/m

l)

100.0

50.0

0

Figure 2. Fraction 당 회수되는 lgG 농도.

(Input: IgG 500 μl/1 ml, flow fraction volume: 1 ml, column volume: 1 ml)

Human IgG의 flow fraction의 IgG 농도 측정 결과 85% 이상을 회수함 (280 nm Abs.

측정을 통한 IgG 농도 정량).

제품 구성

구성품 규격 보관 온도

ToxinCleanic Endotoxin Removal Resin 10 ml x 1 ea (50% slurry in 20% EtOH)2~8℃ 보관

10X Regeneration Buffer 10 ml x 1 ea

Manual 1 ea

ToxinCleanic Endotoxin Removal Kit

360 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 제품 규격/사양

특징 사양

Matrix Agarose resin

Volume 10 ml (50 ml slurry in 20% EtOH)

Min. Binding Capacity > 2,000,000 EU/ml of resin

Storage and StabilityResin and buffer can be stored at 2~8℃ until the expiration date.

Do not freeze or vortex vigorously.

주문 정보


K-7800 ToxinCleanic Endotoxin Removal Kit

ToxinCleanic Endotoxin Removal Kit

03. Preparation of Template DNA for Protein Synthesis

Overview ····································································· 362

ExiProgen ™ ProXpress PCR Template Kit ···························· 363

pBIVT Vector Set-1 ························································ 364

Protein Synthesis and Purification FAQs ····························· 365

362 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 개요

ExiProgen ™을 이용하여 목적 단백질을 합성하기 위한 무세포 단백질

발현용 template DNA는 다음과 같습니다.

Template DNA 구조 (그림 참조)

A) N-terminal His-tagged protein

B) C-terminal His-tagged protein

1) Plasmid DNA (Circular DNA)

발현 벡터는 바이오니아에서 판매하는 in vitro translation 전용 벡터인

pBIVT 벡터 (Cat. No. K-7350, Bioneer)에 cloning하여 사용할 수 있고,

그 밖에도 pK7, pIVEX, pET 벡터 등을 사용할 수 있습니다.

2) PCR product (Linear DNA)

PCR product로부터 cloning을 하지 않고 바로 template DNA를 제작

하려면 당사의 ExiProgen ™ ProXpress PCR Template Kit (Cat. No.

K-7400, 7401, Bioneer)를 이용하여 제작할 수 있습니다.

바이오니아에서는 template DNA를 in vitro translation vector에 cloning된 상태로 제공 받으실 수 있는 Gene Synthesis Service도 제공하고 있습

니다. 자세한 내용은 본 책자 ‘E. Gene Synthesis’, 또는 홈페이지(www.bioneer.co.kr)를 참조하시기 바랍니다.

A) 5’ end 6X His-tagged template constructs

T7 Promoter T7 terminatorRBS ATG 6X His-tag Target gene Stop

B) 3’end 6X His-tagged template constructs

ATG Target geneT7 Promoter T7 terminatorRBS Stop6X His-tag

Overview


단 시간 내에 단백질 발현용 template DNA를 얻고자 할 때

제품 개요

PCR 반응물을 이용한 무세포 단백질 발현(cell-free protein expres-

sion)용 template DNA를 제작할 수 있는 kit입니다. 표적 유전자 증폭용

First primer set를 제외한 template DNA 제조 반응에 필요한 모든 구

성품(Second primer set, PCR premix 등)이 kit에 포함되어 있습니다.

본 kit로 제작된 단백질 발현용 template DNA는 당사의 무세포 단백질

발현 제품군에 사용 가능합니다.


PCR 반응으로만 template DNA를 확보할 수 있어 많은 시간이 소요되는

cloning 과정을 생략할 수 있습니다.


단백질 발현용 template DNA 제작을 위한 모든 구성 요소가 포함되

어 있습니다. 단지 1차 PCR (목적 유전자 증폭)을 위한 primer set (N-

8229 또는 N-8230)만 준비하시면 다양한 크기와 원하는 위치에 His-

tag을 가진 template DNA를 제작할 수 있습니다.

■ PCR error 최소화

높은 fidelity 가진 PCR PreMix인 AccuPower ® ProFi Taq PCR PreMix

를 제공하여 PCR 반응시 생길 수 있는 error rate를 최소화 하였습니다.

응용 및 적용

무세포 단백질 발현용 template DNA 제작에 사용할 수 있습니다.

실험 자료2nd PCR

: Insertion of T7 promoter, RBS and T7 terminator1st PCR products

: Ampli�cation of target gene

M1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 M2M1 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Figure 1. Agarose gel data of template DNA synthesized by each PCR. Synthesis of linear template DNA with ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit.

M1: 100 bp DNA Ladder (Cat. No. D-1030, Bioneer),

M2: 1 kb DNA Ladder (Cat. No. D-1040, Bioneer)

Lane 1: SAV (Template – pT), Lane 2: RNase H (Template – BL21 (DE3) gDNA),

Lane 3: hGH (Template – pT), Lane 4: CAT (Template - pBIVT),

Lane 5: UDG (Template - BL21 (DE3) gDNA), Lane 6: AcGFP (Template – pBIVT)

Lane 7: EVO (Template – pT), Lane 8: RFP (Template – pIVEX),

Lane 9: Poly A polymerase (Template – pET15b)

Figure 2. SDS-PAGE gel data of synthesized proteins.

Each linear template DNA generated by ExiProgen ™ ProXpress PCR Template

Kit and those are used as template for protein synthesis with ExiProgen ™ EC

Protein Synthesis Kit.


Lane 1: SAV (13 kDa), Lane 2: RNase H (20 kDa), Lane 3: hGH (23 kDa)

Lane 4: CAT (26.5 kDa), Lane 5: UDG (28 kDa), Lane 6: AcGFP (28 kDa)

Lane 7: EVO (30 kDa), Lane 8: RFP (31 kDa), Lane 9: Poly A polymerase (54 kDa)

주문 정보


K-7400 ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit, 16 rxns

K-7401 ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit, 32 rxns

관련 제품

N-8229 First primer F/R sets (N-terminus 6X His-tag), each 5 nmole1

N-8230 First primer F/R sets (C-terminus 6X His-tag), each 5 nmole1

1 Oligo synthesis service 문의

ExiProgen™ ProXpress PCR Template Kit

364 BIONEER

J. P

rote

in S

ynth

esis

and

Pur

ifica

tion 바이오니아 무세포 단백질 발현 전용 벡터

제품 개요

바이오니아의 무세포 단백질 발현 전용 벡터인 pBIVT 벡터 세트(pBIVT-1, pBIVT-2)는 당사의 무세포 단백질 발현 및 합성의 모든 kit에 적용 가능합니

다. 본 벡터 세트는 N-terminal (pBIVT-1) 또는 C-terminal (pBIVT-2)에 6X His-tagging이 가능하며, 구조는 아래와 같습니다.

Not I

Not I

Sac I

Sac I

T7 Promoter

① pBIVT-1’s MCS (Multi Cloning Site) sequences

CATATGCACCACCACCACCACCACGGATCCGAGCTCAAGCTTGCGGCCGCATAGGTCGAC6X His-tag

CATATGGGATCCGAGCTCAAGCTTGCGGCCGCACACCACCACCACCACCACTAGGTCGAC6X His-tag

② pBIVT-2’s MCS (Multi Cloning Site) sequences

T7 terminatorMCS

pBIVT(3kb)

Kanamycin

pCU

ori

.

Nde

IB

am H

IS

ac I

Not

IS

al I

Nde I

Nde I

Bam H I Sal I

Sal IBam H I

응용 및 적용

무세포 단백질 발현용 template DNA 제작에 사용될 수 있습니다.

주문 정보


K-7350 pBIVT Vector Set-1

관련 제품

K-3030 AccuPrep ® Plasmid Extraction Kit, 200 rxns

K-3037 AccuPrep ® PCR/Gel Purification Kit, 200 rxns

D-1030 AccuLadder ™ 100 bp DNA Ladder, 500 μl (100 ng/μl)

D-1040 1 kb DNA Ladder, 500 μl (100 ng/μl)

E-3061 T4 DNA Ligase, 20,000 U

pBIVT Vector Set-1


1. 합성할 수 있는 단백질의 크기는 얼마인가요?

현재까지 10~150 kDa 분자량 범위의 단백질을 합성한 결과를 가지고 있습니다. 10 kDa 이하 또는 150 kDa 이상의 것도 합성이 될 수 있지만 보증

하지 않습니다.

- AccuRapid ™ Protein Synthesis Kit (Cat. No. K-7280, Bioneer) 를 이용한 단백질 합성

116 kDa

Expression sample Purification sample

M 1 2 3 4 5 6 7 8 M 1 2 3 4 5 6 7 8

97.4 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

116 kDa

97.4 kDa

66 kDa

45 kDa

29 kDa

20.1 kDa

14.4 kDa

Figure 1. SDS-PAGE data of various proteins synthesized from various templates.


Lane 1: CalmL3 (17.5 kDa), Lane 2: DUSP3 (22 kDa), Lane 3: CAT (24 kDa), Lane 4: AcGFP (29 kDa)

Lane 5: ERFP (31 kDa), Lane 6: EF-Ts (34 kDa), Lane 7: VF (45 kDa), Lane 8: BM3 (117 kDa)

2. Template DNA를 첨가한 후, 몇 시간 후 합성된 단백질을 얻을 수 있나요?

합성 kit에 따라 합성된 단백질을 획득하는 시간은 다릅니다. ExiProgen ™ EC Protein synthesis Kit의 경우에는 6시간 이내에 합성된 단백질을 얻을

수 있습니다. 그 외 kit에 대한 정보는 아래 표를 참고하시기 바랍니다. 또한, ExiProgen ™ 에서 단백질 합성 후 최종 정제된 목적 단백질은 냉각 블록

에서 저온상태(4~8°C)로 유지됩니다. ExiProgen ™을 overnight으로 가동시킬 경우에도 별도의 냉장장치 없이 단백질을 안정하게 보관 가능합니다.

Cell-Free Protein Synthesis and Purification

Product

Manual Kit Automatic Kit

Protein Synthesis Protein Synthesis & Purification Protein Synthesis & Purification

AccuRapid ™Cell-Free Protein

Expression Kit

1.1 ml * 1 reaction

AccuRapid ™Midi Protein

Expression Kit

1 ml * 5 reactions

AccuRapid ™Maxi Protein

Expression Kit

10 ml * 1 reaction

AccuRapid ™Protein Synthesis

Kit

5 reactions

AccuRapid ™Disulfide bond

Protein Synthesis Kit

5 reactions

ExiProgen ™EC Protein

Synthesis Kit

16/32/96 reactions

ExiProgen ™EC-Maxi Protein

Synthesis Kit

8 reactions

ExiProgen ™EC-Tagfree Protein

Synthesis Kit

8 reactions

ExiProgen ™EC-Disulfide Protein

Synthesis Kit

8 reactions

Cat. No. K-7250 K-7260 K-7270 K-7280 K-7290K-7300 / 7301 /

7302K-7310 K-7320 K-7330

Expressionsystem

E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli E.coli

Promoter / Terminator

T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter T7 Pro/ter

Positivecontrol DNA

AcGFP-histag AcGFP-histag AcGFP-histag AcGFP-histag scFv-histag AcGFP-histag AcGFP-histag AcGFP-histag scFv-histag

DNAconcentration

(µg/ml)

1.34 μg/1 kb(vector)




2 μg/1 kb(insert)




2 μg/1 kb(insert)

Expressionvolume

1.1 ml * 1 1 ml * 5 10 ml * 1 0.75 ml * 5 0.75 ml * 50.75 ml * 16/32/96

0.45 ml * 8 0.45 ml * 8 0.45 ml * 8

Protein yield (mg/ml)

up to300 ug/ml

up to300 ug/ml

up to300 ug/ml

up to100 ug/rxn

up to50 ug/rxn

up to100 ug/rxn

up to500 ug/rxn

up to200 ug/rxn

up to100 ug/rxn

Expressiontype

Batch Batch Batch Batch Batch Batch SECF SECF SECF

Actuationtime (h)

3 h 3 h 3 h <4 h <4 h 6 h 25 h 25 h 36 h

ExiProgenProtocol no.

X X X X X 902 903 904 905

Purification X X X ○ ○ ○ ○ △ ○

Protein Synthesis and Purification FAQs

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tion 3. 단백질 합성에 사용되는 template DNA는 어떻게 준비해야 하나요?

Template DNA는 공통적으로 아래 그림과 같이 T7 promoter, RBS, His-tag과 T7 terminator의 구조를 가지고 있어야 합니다. His-tag을 붙이는

위치에 따라 두 종류로 제작을 하여 발현과 folding, 분리 정제가 잘 되는 것을 선택할 수 있습니다. 이 때에 template 형태는 plasmid DNA와 PCR

product 두 가지 중 선택할 수 있습니다.

PCR product로 준비할 경우 빠르게 여러 종류의 template를 준비할 수 있는 장점이 있지만, 단백질 합성수율이 plasmid DNA에 비해 약간 떨어질 수

도 있습니다. 특히 대량발현을 위해 장시간 반응시키는 SECF 방식을 사용할 경우 template의 안정성이 중요하므로 plasmid template를 권장합니다.

ATG Target gene

T7 Promoter T7 terminatorRBS ATG His-tag Target gene StopN-terminal His-tag

T7 Promoter T7 terminatorRBS StopHis-tagC-terminal His-tag

1) Plasmid DNA를 template로 사용할 경우, in vitro translation 전용 vector인 pBIVT vector (Cat. No. K-7350, Bioneer)에 클로닝하여 사용

하는 것을 추천드립니다. 그 외에도 T7 system과 RBS, 정제 목적의 His-tag을 갖춘 발현 vector도 사용할 수 있습니다. 클로닝된 plasmid DNA는

AccuPrep ® Nano-Plus Plasmid Mini Extraction Kit (Cat. No. K-3112, Bioneer)를 사용하면 10분 내에 고순도, 고농도의 plasmid DNA가 추출이

되어 편리하게 준비할 수 있습니다.

2) PCR product를 template로 사용할 경우, ExiProgen ™ ProXpress PCR Template Kit (Cat. No. K-7400, Bioneer)를 사용하면 목적 유전자를

PCR로 증폭하여 클로닝 과정 없이 많은 수의 template를 손쉽게 준비할 수 있습니다. 준비된 template DNA의 순도는 A260/280 ratio가 1.8-2.0 범위

에 있는 것을 사용해야 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.

4. 단백질 합성에 사용되는 Template DNA의 양은 어떻게 되나요?

단백질 합성에 사용되는 template DNA의 양은 단백질 합성수율에 영향을 미치므로 적정량의 template를 사용하여야 합니다. 사용되는 template는

copy 수가 중요하므로 DNA 크기에 비례하여 정량적으로 넣어주어야 합니다. 일반적으로 plasmid DNA의 경우 1 kb당 1.34 μg/ml을 사용하며, PCR

product의 경우에는 1 kb당 670 ng/ml을 사용합니다. 자세한 내용은 FAQ 2. 의 답변을 참고하십시오.

예) ExiProgen ™ EC Protein Synthesis Kit (Cat. No. K-7300, Bioneer)는 단백질 발현 반응에 0.75 ml를 사용하고 있어, 5 kb의 plasmid DNA 사

용 시 5 μg/reaction을 준비합니다.

최적의 단백질 합성을 원하시는 경우 template DNA를 농도별로 단백질 발현량을 스크리닝 하는 실험을 추천드립니다.

5. Template DNA의 codon 최적화 여부는 단백질의 합성에 영향을 주나요?

단백질 합성 키트는 E. coli 기반 발현 시스템이기 때문에 E. coli codon으로 최적화된 DNA의 경우 단백질의 합성량과 성공률이 높아질 수 있습니다.

6. 단백질의 정제 원리는 무엇인가요?

ExiProgen ™에서 사용하고 있는 정제 방법은 바이오니아의 자체 특허기술로 만들어진 평균 직경 400 nm의 magnetic nano bead를 이용합니다.

magnetic nano bead 표면에 Ni-NTA가 고정화되어 있어서 목적 단백질의 His-tag에 강하게 결합하는 affinity purification 방법으로부터 단백질을

정제하게 됩니다. 이러한 정제 과정은 ExiProgen ™ 안에서 전자동으로 이루어집니다.

7. His-tag의 위치에 따라 정제 효율이 달라지나요?

단백질의 3차 구조로 인해 N-말단이나 C-말단에 위치한 His-tag이 외부로 노출되지 않아 단백질의 정상적인 folding을 방해하거나 일부만 노출될 경

우에 Ni-NTA는 His-tag을 인지하지 못하여 정제 효율이 낮을 수 있습니다. 그러므로 단백질 합성을 위한 template을 설계할 때 단백질 구조를 확인하

여 단백질의 표면으로 노출된 말단에 His-tag을 부착하여야 합니다. 단백질 구조가 알려지지 않은 경우에는 His-tag의 위치를 N-말단과 C-말단에 위

치한 것을 동시에 준비하여 발현과 정제가 잘 되는 것을 찾아야 합니다. 양쪽 말단에서 모두 발현 정제가 안되는 경우 His-tag의 histidine의 개수를 늘

려주는 방법으로 발현 및 정제 효율을 개선할 수 있습니다.

이런 방법으로도 발현정제가 안되는 경우에는 N-말단에 발현을 도와주는 단백질을 붙여서 soluble fusion 단백질을 만들어서 발현, 정제할 수 있습니

다. 바이오니아에서는 효율이 좋은 발현 시스템을 지속적으로 개발하고 있으니 발현이 실패할 경우 회사로 문의해주시기 바랍니다.



8. 단백질 정제량이 너무 적습니다.

대부분의 경우에는 단백질의 발현이 잘 되지 않아서 발생하는 문제입니다. Manual 키트인 AccuRapid ™ kit를 사용하여 적은 스케일로 template 최

적화 과정을 통해 최적의 발현조건을 찾아서 ExiProgen ™에서 같은 조건으로 구동시키면 단백질을 많이 얻을 수 있습니다. 그리고, 발현량은 많으나

정제효율이 낮을 경우 FAQ 7.과 같이 His-tag의 위치 변화를 통해 정제 효율을 증가시킬 수도 있습니다.

9. 제품 보관온도는 어떻게 되나요?

각각의 ExiProgen ™ 단백질 합성 kit들은 2개의 박스, Kit ①과 Kit ②로 구성되어 있습니다.

Purification Kit (Kit ①)는 4~8℃, Expression Kit (Kit ②)는 -20~-70℃에 각각 보관합니다. 장기보존시 Expression Kit (Kit ②) 내의 E. coli extract

는 -70℃ 보관을 권장합니다. 제품 박스와 매뉴얼에 표기되어 있으니 참조하시기 바랍니다.

10. 반응이 끝나고 남은 cartridge는 어떻게 보관하나요?

Cartridge는 4분할 사용까지 성능을 보장하고 있습니다. 4분할 사용을 원할 경우 overnight 사용은 권장하지 않으며, ExiProgen ™ 구동 후 cartridge

는 바로 권장온도에 보관해주시기 바랍니다. Cartridge는 커버를 덮은 상태로 cartridge ①은 4~8℃, cartridge ②는 -20~-70℃에 보관하시기 바랍

니다.

11. E. coli extract는 분할하여 사용할 수 있나요?

E. coli extract는 냉동과 해동을 반복할 경우 성능이 저하됩니다. 튜브에 1회분으로 포장되어 있으니, kit 구성품을 확인하시고 실험 계획에 맞게 사용

하시기 바랍니다.


04. Protein Service

Protein Synthesis ServiceStandard Protein Synthesis Service ········································· 369One-day Protein Synthesis Service ·········································· 370Protein Synthesis Service FAQs ············································· 371

Gene to Protein ServiceStandard Gene to Protein Service ··········································· 372Cloning-free Gene to Protein Service ········································ 373Gene to Protein Service FAQs ··············································· 374

Antibody Production ServiceMonoclonal Antibody Production Service ··································· 375

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서비스 개요

Protein Synthesis Service는 원하는 단백질을 최소 1주 이내에 공급

받을 수 있는 서비스입니다. 해당 서비스는 당사의 전자동 단백질 합성

장비(ExiProgen ™)를 이용하여 단백질을 합성해 드리는 서비스로, 다양

한 종류의 단백질(효소, 성장인자, hormone, 항원 단백질, 항체 등) 합성

이 가능합니다.

특장점 ■ 빠른 합성

E. coli 기반 무세포 발현법으로 발현한 단백질을 His-tag affinity를 이

용하여 정제하므로, 빠른 시간 내에 정제된 목적 단백질을 제공받으실 수

있습니다(His-tag이 제거된 상태의 목적 단백질도 합성이 가능합니다).

■ 다양한 단백질 합성

효소류, 성장인자, 호르몬, 항원 단백질, 항체 등 다양한 종류의 단백질 합

성이 가능하며, 세포배양 방법으로 생산이 불가능했던 독성 단백질 또한

합성이 가능합니다.

서비스 과정

Protein Synthesis Service는 의뢰하시는 template DNA의 종류에 따

라서 다음과 같이 두 가지 방식으로 분류되어 진행됩니다.

Type I) E. coli expression vectors (ex. pET 등의 T7-based 발현 벡터)

™을이용한

단백질 발현/정제

ExiProgen시료수거및

DNA 증량

주문접수및

견적서 발송

Note) Plasmid DNA의 전체 크기에는 제한이 없으나, ORF (open reading

frame)를 기준으로 0.3 kb~4.0 kb의 시료만 서비스가 가능합니다.

Type II) Non-expression vectors (ex. Cloning vector/ target gene)

™을이용한


ExiProgen시료수거및

Primers 제작

Template DNA(PCR product)

확보

주문접수및

견적서 발송

Note) ORF (open reading frame)를 기준으로 0.3 kb~1.5 kb의 시료만 서비스

가 가능하며, 1.5 kb 이상의 시료는 발현벡터로 구축한 후 의뢰하시기 바랍니다.

주문 정보

시료 제공량E. coli expression vector1) 10 μg 이상 (A260/280 : >1.7, A260/230 : >1.5)

Non-expression vector2) 2 μg 이상

서비스 결과3)1. Data report – 이메일 발송

2. Protein - 100 μg (0.1~1.0 mg/ml of solution form)

소요 기간4) 평균 7~14 영업일

1) Plasmid DNA의 양 또는 순도가 조건에 부합되지 않는 경우에는 DNA 증량 서비스가 추가되며, 추가비용이 발생할 수 있습니다.2) 일반 cloning용 vector 또는 PCR product로 의뢰가 가능하며, 이 때에는 First primer sets 및 template DNA 제작 서비스가 추가되어, 추가비용이 발생합니다.3) 서비스 비용은 단백질 100 μg을 합성해 드리는 비용이며, 이때 합성량은 목적 단백질의 순도와 관계 없이 전체 시료의 양을 의미합니다.4) DNA 시료 상태 또는 단백질 합성량에 따라서 증가할 수 있습니다.

Standard Protein Synthesis Service

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One-day Protein Synthesis Service

서비스 개요

One-day Protein Synthesis Service는 당사의 ExiProgen™ EC Pro-

tein Synthesis Kit를 사용하여 원하는 단백질을 합성해 드리는 서비스

로, 합성 결과를 단 하루 만에 받을 수 있습니다.


단백질 합성결과를 단 하루 만에 받을 수 있습니다.

■ 다양한 단백질 합성

효소류, 성장인자, 호르몬, 항원 단백질 등 다양한 종류의 단백질 합성이

가능하며, 세포배양 방법으로 생산이 불가능했던 독성 단백질 또한 합성


서비스 과정

Date report발송

시료수거

1 day

™을이용한


ExiProgen

주문 정보

시료 제공량 E. coli expression vector1) 10 μg 이상 (A260/280 : 1.7~2.0, A260/230 : >1.5)

서비스 결과2)1. Data report – 이메일 발송

2. Protein - 0.1~1.0 mg/ml of solution

소요 기간3) 1 영업일1) Plasmid DNA의 양 또는 순도가 조건에 부합하지 않는 경우에는 DNA 증량 서비스가 추가되며, 추가비용이 발생할 수 있습니다.2) Data report 및 1회 반응에서 합성된 단백질을 제공해 드립니다. 추가적으로 단백질이 필요한 경우에는, “Standard Protein Synthesis Service”로 전환됩니다.3) 시료배송에 소요되는 기간은 포함되지 않습니다.


1. 서비스를 의뢰하려면 어떻게 해야 하나요?

먼저 주문서를 작성하여 접수하신 후, 하기와 같은 조건의 template DNA 시료를 보내주시면 됩니다..

DNA 유형E. coli expression vector

(ex) pET 등 T7-based vector)

Non expression vector1)

(ex) Cloning vector, PCR product)

DNA 크기 (kb) 2) 0.3~4.0 kb 0.3~1.5 kb

DNA 양10 μg 이상

(A260/280 : > 1.7, A260/230: > 1.5)2 μg 이상

1) Non-expression vector의 경우, 단백질 합성용 template를 제작하는 과정이 추가되며, 이때 추가비용이 발생합니다.2) DNA 크기는 vector를 제외한 ORF (Open Reading Frame)의 크기를 의미합니다.

2. 서비스를 의뢰하고 싶은데, template DNA 시료 양이 충분하지 않은 경우 어떻게 해야 하나요?

당사에서 제공하는 DNA 증량 서비스를 이용하시면 되며, 추가 요금이 발생합니다.

3. 단백질 합성에 소요되는 기간은 얼마인가요?

일반적인 단백질의 경우 보통 1일이 소요되나 의뢰하시는 단백질의 양에 따라서 소요 기간이 길어질 수 있습니다.

정확한 소요 기간은 견적서를 통해 확인하실 수 있습니다.

4, Template DNA 시료는 어떻게 보내면 되나요?

서비스 의뢰 시, 담당 영업사원을 통해서 template DNA를 보내시거나 당사연계 택배회사인 롯데 택배를 통해서 아래의 주소로 보내주시면 됩니다.

보내실 곳: 대전광역시 대덕구 문평서로 8-11 ㈜바이오니아 단백질생산팀 (Tel: 042-930-8647)

5. 서비스가 가능한 단백질의 크기는 얼마인가요?

당사에서는 분자량 10~150 kDa 크기의 단백질들을 성공적으로 합성한 데이터를 가지고 있습니다.

이 범위를 벗어나는 단백질에 대해서는 실험을 통해 확인이 필요하므로 추가 비용이 발생합니다.

6. Template DNA가 없는 경우, 서비스가 불가능한가요?

Template DNA가 없는 경우, 유전자 합성부터 단백질 합성까지 일괄적으로 서비스를 해드리는 Gene to Protein Service를 이용하시면 됩니다.

이 경우 유전자 합성에 소요되는 비용을 추가적으로 부담하시면 됩니다.

7. 단백질 시료가 포함된 buffer의 조성은 어떻게 되나요? 또한 buffer 조성 변경을 원하는 경우 어떻게 해야 하나요?

기본적으로 제공되는 단백질을 다음의 buffer에 녹여서 공급합니다.

일반적인 단백질: 50 mM Tris-Cl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.05% NaN3, 50% Glycerol

Disulfide bond를 가지고 있는 단백질: 50 mM Tris-Cl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.05% NaN3, 50% Glycerol

만약, 특수한 buffer를 사용하시고자 하는 경우 주문서 접수 시 기록하여 보내주시기 바랍니다.

단백질을 특수한 buffer에 녹여서 공급하는 경우 추가적인 비용과 시간이 필요합니다.

8. 단백질 합성에 사용되는 키트는 어떤 것인가요?

단백질 합성 서비스에 사용되는 키트는 합성을 원하시는 단백질에 따라 달라지며, 다음과 같습니다.

단백질 종류 카탈로그 번호 제품명

일반적인 단백질 K-7300 ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit

Disulfide bond를 가지고 있는 단백질 K-7330 ExiProgen™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit

His-tag이 제거된 단백질 K-7320 ExiProgen™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit

9. Template DNA 유형에 따라서 단백질 합성 방법이 다른가요?

T7 promoter와 His-tag을 가지고 있는 E. coli expression vector의 경우, 시료 수령 후 추가 작업 없이 곧바로 단백질 합성이 진행됩니다.

반면, Non-expression vector의 경우 template DNA 상에 단백질을 발현, 정제할 수 있는 서열이 없기 때문에 발현, 정제에 필요한 sequence를 추가

적으로 DNA에 넣어주는 작업이 진행되어야 합니다.

따라서 primer design 후, 2단계의 PCR을 통해서 단백질 발현에 적합한 template DNA를 만드는 과정이 수행되며 PCR로 합성된 template를 정제

한 후 단백질 합성이 진행됩니다.

Protein Synthesis Service FAQs

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Standard Gene to Protein Service

서비스 개요

Standard Gene to Protein Service는 당사의 Gene Synthesis Ser-

vice를 기반으로 합성된 유전자를 E. coli 용 expression vector에 clon-

ing 한 후, 단백질 합성 서비스가 연계되어 진행되는 서비스입니다.

특장점 ■ 다양한 단백질 합성

효소류, 성장인자, 호르몬, 항원 단백질 등 다양한 종류의 단백질 합성이

가능하며, 세포배양 방법으로 생산이 불가능했던 독성 단백질 또한 합성


■ 정확한 품질

Automatic DNA sequencer (ABI 3730)를 이용하여 100% sequence

guarantee의 제품을 제공받으실 수 있습니다.

■ Codon optimization 서비스

KAIST 와 공동 개발한 codon optimization program을 이용하여 E. coli

codon에 최적화된 유전자를 합성함으로써, 단백질 발현 효율을 높일 수

있습니다.

서비스 과정

주문 및 접수 유전자 합성( Codon Optimized)

단백질 합성Gene 및 Protein 배송

E.coli

주문 정보

합성 기간1~1,500 bp 평균 20~35 영업일

1,501~3,000 bp 평균 30~40 영업일

서비스 제공 형태Gene 2~5 μg of plasmid DNA(vacuum dried form)

Protein1) 100 μg (0.1~1.0 mg/ml) of solution

* 주문 후 5일 이내 취소 시 gene 합성가의 50%, 5일 이후 취소 시 gene 합성가의 80%가 청구됩니다.

* High or low GC, repeat sequence, homo-polymeric runs 등이 sequence 내에 포함되어 있을 경우, 합성 단가 및 기간이 상향조정될 수 있습니다.1) 단백질 합성이 되지 않을 시, Data report 발송과 함께 set up charge 비용이 부과됩니다. 단, 합성된 유전자는 정상 제공되며 유전자 합성비용은 청구됩니다.


Cloning-free Gene to Protein Service

서비스 개요

Cloning-free Gene to Protein Service는 당사의 AccuGeneBlock

Service를 기반으로 유전자를 합성한 후, PCR product를 이용하여 단백

질 합성이 진행되는 서비스로, cloning 과정이 필요 없어 보다 빠른 시간

내에 결과를 받아 보실 수 있습니다.


Cloning, 세포배양 과정 없이 PCR product를 이용하여 단백질 합성이

진행되는 서비스로, 최소 2주 만에 원하는 유전자와 단백질을 받으실 수

있습니다.

■ Codon optimization 서비스

KAIST 와 공동 개발한 codon optimization program을 이용하여 E. coli

codon에 최적화된 유전자를 합성하므로, 단백질 발현 효율을 높일 수 있

습니다.

서비스 소요 시간 비교

Standard

Cloning-free

Gene Synthesis Service Cloning to expression vector

AccuGeneBlock Service ™ Protein Synthesis

4-7 weeks

2-3 weeks

ExiPreogen

주문 정보

합성기간 평균 10~15 영업일

서비스 제공 형태Gene 500 ng~1 μg of PCR Product (vacuum dried form)

Protein 100 μg (0.1~1.0 mg/ml) of solution

1) 단백질 합성이 되지 않을 시, Data report 발송과 함께 set up charge 비용이 부과됩니다. 단, 합성된 유전자는 정상 제공되며 유전자 합성비용은 청구됩니다.

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Gene to Protein Service FAQs

1. Gene to Protein 서비스 이용은 어떻게 하나요?

모든 서비스는 홈페이지에서 온라인으로 주문할 수 있습니다.

서비스 항목 선택 후 필요한 정보를 입력하시고 가격을 확인하신 후 장바구니에 담아서 결제를 진행하시면 주문이 확정됩니다.

2. Gene to Protein 서비스는 어떤 과정으로 진행되나요?

발현하고자 하는 단백질의 gene을 합성한 후에 ExiProgen ™으로 단백질을 발현시킨 후 정제하여 보내드리는 서비스입니다.

발현하고자 하는 단백질을 coding 하는 gene을 단백질 합성용 키트에 첨가하여 ExiProgen ™ 장비에 장착하고 매뉴얼대로 가동하면 손쉽게 정제된


3. Standard Gene to Protein Service와 Cloning-free Gene to Protein Service의 차이점은 무엇인가요?

Standard Gene to Protein Service는 gene 합성(300~3,000 bp) 후에 gene이 expression vector (pBT7-N0His or pBT7-C-His)에 cloning된

plasmid 형태로 단백질 합성용 키트에 첨가하여 protein 합성을 진행하는 서비스입니다.

Cloning-free Gene to Protein Service는 AccuGeneBlock 서비스(300~3,000 bp) 후에 gene을 PCR product 형태로 단백질 합성용 키트에 첨가

하여 Protein 합성을 진행하는 서비스입니다.

4. 단백질 시료가 포함된 buffer의 조성은 어떻게 되나요? 또한 buffer 조성 변경을 원하는 경우 어떻게 해야 하나요?

기본적으로 제공되는 단백질을 다음의 buffer에 녹여서 공급합니다.

일반적인 단백질: 50 mM Tris-Cl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.05% NaN3, 50% Glycerol

Disulfide bond를 가지고 있는 단백질: 50 mM Tris-Cl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.05% NaN3, 50% Glycerol

만약, 특수한 buffer를 사용하시고자 하는 경우 주문서 접수 시 기록하여 보내주시기 바랍니다.

단백질을 특수한 buffer에 녹여서 공급하는 경우 추가적인 비용과 시간이 필요합니다.

5. 단백질 합성에 사용되는 키트는 어떤 것인가요?

단백질 합성 서비스에 사용되는 키트는 합성을 원하시는 단백질에 따라 달라지며, 다음과 같습니다.

단백질 종류 카탈로그 번호 제품명

일반적인 단백질 K-7300 ExiProgen™ EC Protein Synthesis Kit

Disulfide bond를 가지고 있는 단백질 K-7330 ExiProgen™ EC-Disulfide Protein Synthesis Kit

His-tag이 제거된 단백질 K-7320 ExiProgen™ EC-Tagfree Protein Synthesis Kit


Monoclonal Antibody Production Service

서비스 개요

Phage display 실험법을 이용하여 단클론 항체를 제작해 드리는 서비

스입니다. Phage display 실험법은 현재 항체 의약품 연구, 개발에 널

리 사용되고 있는 방법으로 bacteriophage에 항체 유전자를 삽입하여

phage 표면에 항체를 발현시킨 후 타겟 항원과 결합하는 항체를 찾아내

는 실험법입니다. 기존 동물을 이용한 항체 제작 기간에 비교하여 약 7주

의 짧은 기간 내에 제작이 가능하며, 최소 20 μg의 소량 향원으로도 제

작이 가능합니다.


약 7주의 짧은 기간 내에 항체를 제작하여 제공(2주 내 Positive clone

결과 확인)

■ 경제적

기존 단클론 항체 제작 비용 대비 낮은 가격과 소량의 항원(20~100 μg)

으로 단클론 항체 제작 가능

서비스 과정

발현/정제 Antibody 배송항원 접수Panning &Screening

주문접수및

견적서 발송

주문 정보

항원 형태

단백질

최소 0.5 mg/ml의 농도, 20~100 μg

15 kDa 이하의 경우엔 carrier protein을 붙여 주시기 바랍니다. 이런 경우 carrier protein

도 별도로 제공을 하여 주셔야 합니다.

펩타이드

100 μg

합성 시 carrier protein을 합성하여 주시기 바랍니다. carrier protein은 별도로 20 μg 이

상 제공하여 주시기 바랍니다.

그 외 별도 문의

소요 기간 7주 (positive clone 결과 확인은 2주 내)

서비스 제공 형태

Data report 이메일 발송

Antibody

(2개 항체 보장)

scFv : 1 L 컬쳐 기준, 최소 500 μg 보장

Minibody : 100 ml 컬쳐 기준, 최소 500 μg 보장

Protein Synthesis and Purification - bioneer.co.kr · 344 BIONEER J. Protein Synthesis and...

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