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Formación para su uso

PRIOCHECK®

TRICHINELLA AAD


PRIOCHECK® TRICHINELLA AAD KIT

Contenido del kit

Tampón de digestión (20x)

Solución enzimática (lista para usar)

Aditivo para el tampón de digestión



1. Cilindro graduado2. Pipeta3. Erlenmeyer / Vaso precipitados4. Termómetro5. Agitador magnético con calentador6. Licuadora7. Embudo de separación8. Malla de acero inoxidable9. Tubo de vidrio10. Placa de Petri11. Temporizador12. Triquinoscopio / binocular13. Barra de agitación magnética

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PASO A PASO



1. PREPARACIÓN DEL BÚFER DE DIGESTIÓN

2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE CARNE

3. DIGESTIÓN

4. SEDIMENTACIÓN

5. DETECCIÓN


Preparación del buffer de digestión

A

B C

- Prepare 2 l de solución tampón de digestión mez-clando 100 ml de tampón de digestión (20x) con 1900 ml de agua del grifo.

contenga una barra de agitación magnética (A)- Agregue 0,5 ml de aditivo de tampón de digestión (B)- Añada 50 ml de enzima (C)

- Coloque el erlenmeyer o vaso de precipitados en el agitador magnético con calentador- Precaliente el tampón de digestión a 60ºC mientras agita (500 rpm, C)33 3

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Preparación de las muestras

PR OCHECK® TRICHINELLA AAD KIT



- Recoja 100 trozos de carne (1g por cerdo)- Pique la carne en la trituradora (se necesitan varios pases)




DIGESTIÓN

Añada la carne picada al tampón de digestiónprecalentado e incúbelo durante 20 minutos a




Filtrar la solución de digestión

A B C

- Tara el tamiz de acero inoxidable en la escala (A)- Vierta el tampón de digestión a través del tamiz de acero inoxidable en el embudo de separación (B)

del peso de la muestra inicial permanece en el tamiz (C)




Sedimentación 1

Deje reposar el tampón de digestión durante 30 minutos para sedimentar




Sedimentación 2

Retire rápidamente 75 ml de tampón de digestión del embudo de separación en un tubo de vidrio (A)

Consejo: dibuje dos líneas a 10 y 75 ml en el tubo

A

B

- Dejar reposar la solución de digestión durante 10 minutos- Extraer cuidadosamente 65 ml de sobrenadante y descartarlos (B)- Si quedan grandes cantidades de restos puede hacerse un lavado adicional añadiendo 30 ml de agua, dejándolo sedimentar durante 10 minutos y descartando 30 ml de sobrenadante.




Detección

- Vierta los 10 ml restantes de solución de sedimento en una placa de Petri o placa de conteo de larvas.- Enjuague el tubo de vidrio con 10 ml de agua y añádalo a la placa de Petri o placa de conteo de larvas.- Examine la muestra con el triquinoscopio o estereomicroscopio con un aumento de x15 o x20.




Interpretación de los resultados

- Si no se encuentran larvas durante el examen con triquinoscopio o binocular, la muestra se considera negativa.- Si se encuentran larvas, la muestra se considera positiva.- Se requieren investigaciones adicionales: identificación de las especies de larvas mediante la técnica de PCR.- Nota: Las larvas detectadas pueden tener que ser enviadas al Laboratorio Nacional de Referencia para Trichinella para su identificación a nivel de especie,

dependiendo de las regulaciones nacionales.




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