UNIVERSIDAD PRIVADA

ANTONIO GUILLERMO URRELO

Determinación de la actividad antifúngica in vitro del

aceite de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a

Sporothrix schenckii.

TESIS:

ASESORES:

Mg. Q.F. Jéssica Nathalie Bardales Valdivia.

Q.F. Jaime Alexander Quijada Acuña.

INVESTIGADORAS:

Bach. Cinthya L. Sánchez Soto.

Bach. Rosa D. Bustamante Bautista.

INTRODUCCIÓN:

ESPOROTRICOSIS

Infección micótica de evolución subaguda

o crónica, adquirida por inoculación

traumática o por inhalación de conidios

de Sporothrix schenckii.Se localiza principalmente en cara y en

extremidades torácicas y pélvicas.

INTRODUCCIÓN:

OMS

Más del 80 % de la población mundial

usa la medicina tradicional para cubrir sus

necesidades en la atención primaria,

En nuestro país existe alrededor de 80 mil

especies vegetales de las cuales solamente

2000 se vienen empleando con fines curativos.

Siendo necesario evaluar las propiedades

medicinales de estas plantas.

INTRODUCCIÓN:

POR TALES MOTIVOS

Se decidió determinar el efecto antifúngico

del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a

Sporothrix schenckii para contribuir con una

fuente de información acerca de su actividad

y a la disminución de la incidencia de este

problema que afecta a un alto

porcentaje de la población.

OBJETIVOS:

GENERAL:

Determinar la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena“Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii.

ESPECÍFICOS:

Extraer el aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua”.

Comparar los resultados obtenidos de la actividad antifúngica in vitro de las diferentes

concentraciones del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” apoyados

con una prueba estadística.

Comparar los resultados obtenidos de la actividad antifúngica in vitro de las diferentes

concentraciones del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a

los grupos controles apoyados con una prueba estadística.

Determinar la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de las hojas de Saturejanubigena “Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii.

MARCO TEÓRICO:

ESPOROTRICOSIS

EPIDEMIOLOGÍA

Esta micosis se conoce como cosmopolita

debido a su amplia distribución.

Brasil, México, Colombia, Perú, Uruguay,

Venezuela, Costa Rica, Guatemala y los Estados

Unidos de Norteamérica.

Países endémicos de América:

MARCO TEÓRICO:

ESPOROTRICOSIS

ETIOLOGÍA

El agente causal es Sporothrix schenckii, hongo dimórfico que vive como saprófito del

suelo, materia orgánica, vegetales y otros

sustratos.

Se adquiere principalmente por

inoculación traumática de conidios y

rara vez penetra por inhalación.

MARCO TEÓRICO:

ESPOROTRICOSIS

ETIOLOGÍA

Sporothrix schenckii.

Clasificación taxonómica:

Reino: FUNGI.

Phylum: ASCOMYCOTA.

Clase: EUASCOMYCETES.Orden: OPHIOSTOMATALES.

Familia: OPHIOSTOMATACEAE.

Género: Sporothrix.

Especie: S. schenckii.

MARCO TEÓRICO:

ESPOROTRICOSIS

ETIOLOGÍA

Sporothrix schenckii.

Fase filamentosa:

Crece a temperaturas inferiores a 37ºC.

Presenta colonias de crecimiento lento (3-5 días).

Inicialmente claras y húmedas, que

posteriormente se convierten en colonias

duras y arrugadas de color marrón o negro en

su totalidad o por zonas.

MARCO TEÓRICO:

ESPOROTRICOSIS

ETIOLOGÍA

Sporothrix schenckii.

Fase levaduriforme:

Crece a 37ºC en medios enriquecidos y en los

tejidos parasitados.

La colonia tiene aspecto cremoso y brillante

que se torna de color gris o crema.

MARCO TEÓRICO:

ESPOROTRICOSIS

CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS

Puede causar múltiples síndromes, el más

frecuente es la forma cutánea, que se

caracteriza por la aparición de nódulos

ulcerativos o verrucosos que afectan a piel,

tejido subcutáneo y sistema linfático

adyacente.

MARCO TEÓRICO:

Satureja nubigena “Pachachamcua”

CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA:

Reino: PLANTAE.

Filo: ANGIOSPERMAE.

Clase: MAGNOLIOPSIDA.

Orden: LAMIALES.

Familia: LAMIACEAE.

Género: Satureja.Especie: S. nubigena.Autor: (Kunth) Briq.

Altitud: 3000 y 4000 msnm.

Región: Sierra.

MARCO TEÓRICO:Satureja nubigena “Pachachamcua”

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS:

Planta herbácea, postrada, pequeña, de 10 – 25 cm

de largo y aromática, presenta tallos delgados y

radicantes, flores blancas y hojas pequeñas.

ORIGEN Y DISTRIBUCIÓN:

Originaria del Perú; se encuentra en la parte

alta de los andes, entre los 3000 y 4000 msnm;

crece entre pajonales, en espacios abiertos y

caminos abandonados.

UTILIDAD MÉDICA:

Usado contra el soroche o mal de atura y

para contrarrestar el frio y no es toxica.

MÉTODO DE INVESTIGACIÓN.

DEFINICIÓN DE LA MUESTRA:

Se trabajó con 15 kg de la especie la cual fue

obtenida del distrito José Sabogal, provincia de

San Marcos, departamento de Cajamarca.

Satureja nubigena “Pachachamcua”

Sporothrix schenckii

Se trabajó con cepas aisladas en el Laboratorio

de Referencia de Salud Pública de la DIRESA –

Cajamarca, de pacientes contaminados con el

hongo.

MÉTODO DE INVESTIGACIÓN.

EXTRACCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL:

La extracción del aceite esencial e las hojas se

realizo apoyadas con el equipo llamado alambique

destilador.

Transcurrido el tiempo de la

extracción, agregamos sulfato de

sodio para atrapar los restos de

agua. Posteriormente se midió y se

recogió el aceite esencial en un

frasco de color ámbar con tapa,

almacenándolo en refrigeración

hasta su utilización para evitar

reacciones oxidativas que pudieran

alterar su composición.

DILUCIÓN EN AGAR:

Esta prueba se basa en la inhibición del crecimiento fúngico, mediante la dilución de

la sustancias activas (aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena“pachachamcua”) en el agar, y posteriormente se evidencia por la ausencia de

crecimiento en las placas.

MÉTODO DE INVESTIGACIÓN:

LUEGO SE PROCEDIÓ A SEMBRAR E INCUBAR:

ELABORACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

DILUCIÓN EN AGAR:

CRECIMIENTO LEVADURIFORME

A 25ºC por 15 días.

CRECIMIENTO FILAMENTOSO

A 37ºC por 48 horas.

Aceite esencial de las hojas de “Pachachamcua”/Agar Sabouraud

RESULTADOS

FASE LEVADURIFORME (RESULTADOS OBTENIDOS A LAS 48 H)

Leyenda: (-) No crecimiento. (+) Crecimiento.

Gráfico Nº 01: Resultados obtenidos de todos los grupos de la forma de

crecimiento levaduriforme.

RESULTADOS

FASE FILAMENTOSA (RESULTADOS OBTENIDOS A LOS 15 DÍAS)

Leyenda: (-) No crecimiento. (+) Crecimiento.

Gráfico Nº 02: Resultados obtenidos de todos los grupos de la forma de

crecimiento filamentosa.

RESULTADOS

PRUEBA ESTADISTICA DE MANN - WHITNEY

FASES:

LEVADURIFORME Y FILAMENTOSA

GRUPO PROBLEMA (1-5) VS GRUPO PROBLEMA (1-5) P = 1,000

GRUPO CONTROL VS GRUPO PROBLEMA (1-5) P = 0,025

EVALUACIÓN DE MUESTRAS INDEPENDIENTES VALOR DE “p”

p ˂ de 0,05 = existe diferencia significativa

p ˃ de 0,05 = no existe diferencia significativa.

DISCUSIÓN

No se ha podido encontrar la suficiente información de los aceites esenciales de

Satureja nubigena para justificar el efecto obtenido en el presente trabajo de

investigación, pero posiblemente contenga algunos de los aceites esenciales

presentes en las diversas Saturejas estudiadas.

Algunos de los principales

fitoconstituyentes de la familia

Satureja son el timol y el carvacrol de

los cuales podemos mencionar que:

incrementan la permeabilidad de la membrana citoplasmática dejando que filtren los

constituyentes químicos que son esenciales para el metabolismo, tales como iones,

ATP, ácidos nucleicos y aminoácidos esenciales ocasionando la destrucción del hongo.

CONCLUSIONES:

1. Se determinó la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial de las hojas de

Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii, resultado que se

expresó en los grupos problema de las dos fases de crecimiento, en los cuales se

obtuvo resultado negativo para crecimiento.

CONCLUSIONES:

2. Se extrajo el aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua”

apoyados con el equipo llamado alambique destilador con el método de arrastre de

vapor.

CONCLUSIONES:3. Se comparó los resultados obtenidos de la actividad antifúngica in vitro de las

diferentes concentraciones del aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena“Pachachamcua” apoyados con la prueba estadística MANN-WHITNEY la cual arrojó

como resultados tanto para las comparaciones de la fase levaduriforme así como

para la filamentosa un valor de “p” de 1,000 valor mayor a 0,05 lo que indica que no

existe diferencia significativa en las diferentes comparaciones de los grupos

problema concluyendo que el aceite esencial de Satureja nubigena “Pachachamcua”

presenta actividad antifúngica tanto para la fase levaduriforme como para la fase

filamentosa en todas las concentraciones trabajadas.

vsPrueba estadística MANN-WHITNEY

P = 1,000

p ˃ de 0,05 = no existe diferencia significativa.

CONCLUSIONES:4. Se comparó los resultados obtenidos de las diferentes concentraciones del aceite

esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a los grupos

controles apoyados con la prueba estadística MANN-WHITNEY la cual arrojó como

resultados tanto para las comparaciones de la fase levaduriforme así como para la

filamentosa un valor de “p” de 0,025 valor menor a 0,05 lo que indica que existe

diferencia significativa en las diferentes comparaciones de los grupos problema

con los grupos control debido a que en los grupos control se presentó crecimiento en

cada una de las fases concluyendo que el aceite esencial de Satureja nubigena“Pachachamcua” presenta actividad antifúngica tanto para la fase levaduriforme

como para la fase filamentosa en todas las concentraciones trabajadas.

vsPrueba estadística MANN-WHITNEY

P = 0,025

p ˂ de 0,05 = existe diferencia significativa

CONCLUSIONES:5. Se determinó la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de las hojas de

Satureja nubigena “Pachachamcua” frente a Sporothrix schenckii la cual consistió en

la menor concentración utilizada “5µL/mL de agar” tanto para la fase filamentosa

como para la levaduriforme debido a que en todos los grupos problema se presentó la

actividad antifúngica.

vs vs

Fase levaduriforme Fase filamentosa

(+) (+)(-) (-)

No crecimiento. CrecimientoCrecimiento No crecimiento.

RECOMENDACIONES: Realizar estudios in vivo, ya que Sporothrix schenckii muestra una marcada

susceptibilidad in vitro frente al aceite de las hojas de Satureja nubigena“Pachachamcua”, y en su uso rutinario por parte de la población podría estar

ocurriendo lo mismo.

El aceite esencial de las hojas de Satureja nubigena “Pachachamcua”, posee una

importante actividad antifúngica; sin embargo sugerimos que su uso se limite a

pacientes con diagnóstico definitivo y prescrito por un profesional de salud.

Hacer de conocimiento los resultados obtenidos en el presente trabajo de

investigación a las autoridades Regionales de Salud de Cajamarca, para involucrar

en las medidas de prevención a tomar, previos estudios.

En base a estos resultados profundizar otras investigaciones, para determinar

factores de asociación, respecto a otro tipo de infecciones micóticas.

Investigar nuevas formas de tratamiento, para esporotricosis cutánea, en base a los

resultados obtenidos en la presente investigación.

Gracias.

GRACIAS.