Presentación de PowerPoint · 2017. 9. 29. · aumentaba la frecuencia de aberraciones...

Vínculo entre el estrés oxidativo, la relación dosis

efecto y los mecanismos de acción de la

ozonoterapia

5 Junio, 2014

gregorcuba yahoo.it

IV International Congress of AEPROMO

"For a Professional Practice of Ozone Therapy"

Spanish Association of Medical Professionals in Ozone Therapy

Gregorio Martínez Sánchez, Pharm.D, Ph.D.

Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

Vicerrectorado de Alumnos, Títulos Propios, Postgrado y Unidades Docentes Delegadas

Calle Tulipán s/n. 28933 Móstoles. Madrid

Especies Reactivas de Oxígeno

Introducción

ERO historia y conceptos generales.

ERO fundamentales y su formación.

Bases Bioquímicas de los Efectos del Ozono

Mecanismos Generales de Acción del Ozono

Ozono en el Dolor y la Respuesta Inmune

Relación Dosis Efecto. Dosis y Vías Recomendadas

Diagnóstico del Estrés Oxidativo

“Experto Universitario en Ozonoterapia y Factores de Crecimiento

Ozonizados”


Cómo obtenerlo?

1) Editorial Althaea (Chile) [email protected] 2) Editorial Aracne (Italia) [email protected] 3) Soc. Mex. de Ozonoterapia [email protected]

BIBLIOGRAFIA Gregorio Martínez Sánchez, Eduardo Candelario Jalil, Isabel García García, Olga Sonia León Fernández, Tania Bilbao Reboredo, Luis Ledesma Rivero. Ambiente Antioxidante/Pro-oxidante. Su impacto medico. Ed Aracne. ISBN 978-88-548-4636-4, 2012, pp 680.


ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO

RECUENTO HISTÓRICO

1775 Joseph Priestley, Antoine Laurent Lavoisier y Carl Wilhelm Scheele,

descubridores del oxígeno, sugirieron por primera vez que este gas

podría ser tóxico a las células

1900 Moses Gomberg demostró la existencia del radical

trifenilmetilo (Ph3C·)

1933 Linus Pauling (2 veces Premio Nobel) predijo la existencia del

radical superóxido (O2-•) basado en la teoría de la mecánica cuántica


ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO

RECUENTO HISTÓRICO (cont.)

1952 Conger & Fairchild (Proc Natl Acad Sci USA) demostraron por

primera vez que el daño oxidativo mediado por las Especies Reactivas de

Oxígeno ocurría en los organismos vivos pues al aumentar la

presión parcial de O2 aumentaba la frecuencia de aberraciones cromosómicas en

granos de polen

1954 Rebecca Gerschman et al. (Science) propusieron que la toxicidad

del oxígeno y el daño inducido por la radiación UV

tenían al menos un mecanismo común, posiblemente relacionado con la

formación de radicales libres


RECUENTO HISTÓRICO (Cont.)

1954-1969

Críticas al trabajo de Gerscham et al. debido al hecho de que los radicales libres

son extremadamente reactivos y poseen t½ muy cortos como para

poder tener algún impacto biológico.

1969

Joe McCord e Irwin Fridovich (Duke University, USA) demostraron que la

eritrocupreína (una proteína que se encuentra en altas concentraciones en los

eritrocitos) cataliza la descomposición del anión radical superóxido en H2O2 y O2. Esta

enzima se llamó más tarde Superóxido dismutasa.


Prof. Joe M. McCord, Ph.D.

Descubrimiento de la Superóxido Dismutasa

• Constituyó uno de los avances más importantes en la biología debido a que sugirió por

vez primera que los radicales libres de O2 se producen in vivo en

cantidades significativas

• Este hallazgo demostró que todos los organismos aerobios pueden sobrevivir

gracias a que tienen mecanismos antioxidantes de defensa contra las

ERO

• Representó un descubrimiento de gran importancia que revolucionó el

pensamiento científico y contribuyó a comprender muchos fenómenos y

procesos biológicos Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

Descubrimiento de la Superóxido Dismutasa

Prof. Joe M. McCord, Ph.D.


• Sobre la base de este descubrimiento se comenzaron a encontrar

evidencias que demostraban la generación in vivo de ERO y la

participación de las mismas en numerosas enfermedades humanas

• Millones de personas en el mundo están conscientes de la necesidad de

consumir frutas, vegetales, suplementos vitamínicos antioxidantes para

mantener una buena salud.


1973 Babior y colaboradores reportaron que una de las principales acciones bactericidas de los

leucocitos era la generación enzimática de radical superóxido, peróxido de

hidrógeno y otros productos oxidantes como el ácido hipocloroso. De esta forma se

demostró que las células inflamatorias pueden mediar tanto respuestas del

huésped al ataque de microorganismos (beneficiosas) como reacciones

inflamatorias adversas (J Clin Invest).

1978 El grupo de McCord y Fridovich demuestra que la toxicidad biológica del anión radical

superóxido se debe fundamentalmente a la formación del radical hidroxilo

(•OH).



Finales de los años 1990

Robert Furchgott, Lou Ignarro and Ferid Murad describieron la naturaleza

química y la vía biosintética de un mediador difusible de corto t½ responsable

de la relajación del músculo liso vascular, identificado como óxido nítrico (NO•)

• Representó el descubrimiento de un nuevo radical libre reconocido

como un mediador central del flujo sanguíneo y la entrega de O2 a los tejidos

• Demostró que las ERO juegan un papel crítico no sólo en la respuesta

inflamatoria y en el daño tisular sino que también regulan la transducción de

señales intracelulares

Dr. Gregorio Martínez Sánchez,

Ph.D.

ERO Antioxidantes

Accumulativo No. artículos por año

Fuente PubMed – MedLine 2013


China:

Rusia Canada

Japan

India

Europe

South Africa

México: 1

USA

Brazil

Grupos de Investigación Activos

Active:

Uruguay

Chile Argentina

Cuba


¿Qué son los radicales libres?

Los radicales libres son especies químicas capaces de una

existencia independiente que contienen uno o más electrones

no pareados en el orbital más externo. Sus tiempos de vida

medio (t½) son muy cortos (Halliwell & Aruoma, 1989).

+ +

Blanco del

ataque

Radical

libre Reducido (estable)

Oxidado (inestable)


ETAPAS DE LAS REACCIONES RADICALARIAS

Iniciación: R:R R• + R•

Propagación R• + H:H H• + R:H

Terminación H• + R• R:H

H• + H• H:H

R• + R• R:R


¿Quiénes son las Especies Reactivas del

Oxígeno (ERO)?

Radicales libres: especie con

existencia independiente que posee

uno o más electrones no pareados.

Radical t ½

O2 - Enzimática= 10-9

Espontánea= 10-5

OH 10-9 s (10-7-10-10)

L 10-8 s

NO 3-5 s

RO

10-6 s

ROO 7 s

No-radicales derivados del oxígeno

con una potente acción oxidante.

ERO

t ½

H2O2

Depende de

Enzima

ONOO-

0,05-1 s

HClO 10-6 s

Anión radical

superóxido

Radical

hidroxilo

Radical

lipídico

Óxido

nítrico

Radical

alcoxil

Radical

Alquil

peroxil

Peróxido de

hidrógeno

Peroxinitrito

Ácido

hipocloroso

ESTRÉS OXIDATIVO

Desbalance a corto o largo plazo del

equilibrio antioxidantes/pro-oxidantes

que provoca disrupción de los

sistemas de señalización y control a

consecuencia de favorecer los

procesos de pro-oxidación u

obstaculizar los mecanismos

antioxidantes.

H. Sies 1985. H.K.Bieslaski. (1997) Clinical Nutrition 16: 151-155. Jones 2006. Gregorio 2008

ANTIOXIDANTE

CUALQUIER SUSTANCIA QUE

PRESENTE A MUY BAJAS

CONCENTRACIONES COMPARADAS

CON LA SUSTANCIA OXIDABLE,

PREVENGA O RETARDE SU OXIDACIÓN

B. Halliwell 1990 Free Rad. Res.Comms 9

Nuevo concepto de estrés oxidativo

H Sies 1985

Estrés oxidativo: desequilibrio entre la generación de agentes oxidantes

y los mecanismos oxdantes………….

Jones 2006: .. Disrupción de los mecanismos de señalización y

control que forman parte de los ciruitos redox intercelulares…....

Inflamación Activ. Fisica

Cardiovasculares

Cancer

Enfermedades

Del SNC Dieta

Envejecimiento


1. Prolil hidroxilasa

HIF1a

564 402

VHL

HIF1a

3. Ubiquitinilación

CITOPLASMA

-OH

4. Degradación

por proteasoma

2. Binding Hippel-Lindau tumor

suppressor (VHL)

OH-

NUCLEO

HIF-1a se produce y degrada de manera

constitutiva via VHL.

Bruick RK. (2002) Science. 295:807-808

HIF1a

564 402

NORMOXIA 6% O2 40 mmHg

26S


La Prolil hidroxilasa es O2-dependiente

HIF1a

564 402

VHL

HIF1a

CITOPLASMA

-OH OH-

HIF1a

564 402

Degradación

Prolil hidroxilase

Fe2+, H2O2, O2-•

DEF, CAT, NO•

Activación

HIPOXIA

Angiogenesis

Metabolismo

Glucosa

Proliferación celular NUCLEO HIF1a

HIF1

HIF

+

Co-activadores CBP/p300

HIF HIF-1 es un heterodimero

HIPOXIA

Free Rad Res 2005 39:925-936/1353-1361

Inactivación


Interacción entre los sistemas antioxidantes Tomado de (Aruoma, 1994)

Daño

tisular

Ácido dehidro

ascórbico

HO

a tocoferol

OH

Ascorbato

caroteno

Radical carotenoide

Fe/Cu

NADP NADPH

GR

GSH GSSG Se

GPx

SOD

+ O2

-+ 2 H+

H2O + ½ O2

Cl-

Catalasa

HOCl

H2O2

Fe2+ O2

-

Peroxidación

Lipídica

Daño a proteínas

carbohidratos, ADN,

etc.

Ácidos grasos poli-insaturados RO RO2

-

Daño

a -SH

Daño tisular

H2O

MPO

Transferrina

Ceruloplasmina

Mecanismos reparadores

a tocoferol O•


Nomenclatura. Formula y Nombre recomendado por la IUPAC

Fórmula Nombre trivial (común)

H2O2 Peróxido de Hidrógeno

HO Radical hidroxilo

HOCl Acido hipocloroso

HOONO Acido peroxinitroso

NO Oxido nítrico

O2- Anión radical superóxido

OONO- Peroxinitrito

GS Radical glutatil

1O2 Oxígeno singlete

RO Radical alcoxilo

ROO Radical alquiperoxil

ROOH Alquil hidroperóxido

GSH Glutatión reducido

GSSG Glutatión oxidado


CRÓNICAS

Parkinson

Alzheimer

Hipertensión, Aterosclerosis Fibrosis cística

Rechazo crónico (transplantes)

Inflamación crónica

Cáncer

Envejecimiento

Entrenamiento sistemático

ENFERMEDADES EN CUYA FISIOPATOLOGÍA

ESTÁ INVOLUCRADO EL DESBALANCE

REDOX

AGUDAS

Trauma

Apoplejía

Daño IR

Síndrome Distrés Resp.

Rechazo agudo

(transplantes)

Inflamación Aguda

Paracetamol (sobre dosis)

Xenobióticos

Ejercicio agudo


EVITABLES

Metabolismo de

fármacos y

xenobióticos

Humo del cigarro y

contaminantes

ambientales

Radiaciones

PRINCIPALES FUENTES INDUCTORAS DEL

DESBALANCE REDOX

INEVITABLES

Transporte

electrónico

mitocondrial

Iones Metálicos de

transición

Inflamación

Enzimas

generadoras

Célula intacta Célula dañada por

ERO


• El otro mecanismo de producción de O2·- en la mitocondria es la flavoproteína NADH

deshidrogenasa

• El grupo flavina de esta enzima es reducido durante el transporte electrónico al radical

flavina semiquinona que al reaccionar con el O2 produce O2·- en una reacción similar

a la de la ubisemiquinona.

Producción de O2•- por la

NADH deshidrogenasa


FUENTES O MECANISMOS GENERADORES DE ERO

Iones de metales de transición

• •

• •


FUENTES O

MECANISMOS

GENERADORES DE

ERO

Fagocito activado

C5a

N-formil-Met-Leu-Phe

Complejos inmunes

LTB4

Cit b559 FAD

Ubiquinona

Cit b559

FAD

NADPH

Ensamblaje

Ubiquinona

NADPH

OXIDASA

(latente)

NADP+

O2

O2·-

(+)

· · · · · · · · · · · · ·

Mieloperoxidasa (Gránulos citoplasmáticos)

H2O2 + Cl- HClO

· · · · ·

·

· · ·

· · ·

MPO

SOD

Fe O2·-

H2O2 ·OH

· · · · ·

· · · · ·

· · ·

·

· · ·

· · · · · · ·

· ·

Lactoferrina

Defensinas

Catepsina G

NADPH

OXIDASA

(activa)

Elastasa

Colagenasa

Gelatinasa


NH3 + H2O2 +

HO

HO CHO

Ácido dihidroxifenil-

acético (DOPAC)

H3CO

HO COOH

Ácido homovanílico

(HVA)

Catecol-O-metil-

transferasa

(COMT)

MAO

O2 , H2O

·O

HO NH2

Dopamina

Semiquinona

O

O NH2

Dopamina

Quinona

Fe2+

Fe3+

O2

O2·-

Fe2+

Fe3+

O2

Auto-oxidación

de dopamina

NH2

HO

HO

Dopamina

CHO

HO

HO

3,4-dihidroxifenil

acetaldehído

O2·-

Producción de ERO por la Monoamino-oxidasa (MAO)

RCH2NH2 + O2 + H2O RCHO + NH3 + H2O2


El agente oxidante más importante en la atmósfera

terrestre es el ozono (O3).

Otro de los contaminantes atmosféricos de gran

importancia es el dióxido de nitrógeno (NO2), el cual

absorbe la luz UV generando otros compuestos con

elevada reactividad:

Los efectos tóxicos fundamentales del NO2 y el O3 ocurren fundamentalmente en las vías

respiratorias.

El O3 genera una cascada de ERO altamente reactivas e inestables (aldehídos, ozónidos,

H2O2, hidroperóxidos lipídicos) que casi instantáneamente reaccionan con componentes de

las membranas y del citoplasma celular.

FUENTES O MECANISMOS GENERADORES DE ERO

O· + O2

O3

NO2 NO· + O·

O3 + NO· NO2 + O2

Ciclo

fotolítico

del NO2

CONTAMINANTES AMBIENTALES


Paracetamol (Acetaminofeno)

Reacciones de conjugación

(glucurónico, sulfato)

Dosis terapéuticas

NO TÓXICO

Dosis altas

Oxidasas de función mixta Cyt P450 (2E1)

N-acetil--benzoquinona imina (NAPQI)

Conjugación con

GSH mercapturatos

Agotamiento severo

de GSH

Unión de la NAPQI a macromoléculas celulares

Estrés oxidativo

DAÑO CELULAR


MECANISMOS ANTIOXIDANTES

Mecanismos antioxidantes endógenos

a) Enzimas antioxidantes

SUPERÓXIDO DISMUTASA

Cataliza la dismutación del anión superóxido en H2O2 y O2.

O2·- + O2·- + 2H+ H2O2 + O2 SOD

Humanos

Cu/ZnSOD

MnSOD

EC-SOD (Cu/Zn)

Todas las isoformas catalizan

la dismutación del O2·- con

similar eficiencia

Única enzima que se conoce actúa sobre un radical !!!


CATALASA

Es un tetrámero que contien 4 subunidades de 60 kDa cada con un grupo hemo.


Mecanismos antioxidantes endógenos

a) Enzimas antioxidantes

Hemo

Hemo

Hemo

Hemo

Existen muchas formas de catalasa, la mayoría presenta Fe (grupo hemo), pero algunas

poseen Mn

La mayoría de las bacterias anaerobias NO presentan catalasa

Es una de las enzimas más eficientes que se conoce y de las más abundantes

Reacciona con el H2O2 para generar agua y oxígeno

Se localiza en la matriz de los peroxisomas y en la mitocondria (tejido cardiaco,

solamente), mientras que en eritrocitos se encuentra en citosol


Para que pueda mantenerse la actividad de la GPx es

necesaria la actividad de la Glutatión reductasa (GR), una

enzima que emplea el NADPH como cofactor. La GR tiene

una distribución celular muy similar a la GPx.

GSH

GSSG

NADP+

NADPH

GR Ruta de las pentosas

Glucosa

ROOH

ROH

GPx


HOOC-CH(NH2)-CH2-CH2-C-NH-CH-C-NH-CH2-COOH

O O

CH2

SH -glutamil

cisteinil

glicina


1817 Jons Jakob Berzelius y G Hahn descubre y nombró este elemento

en honor a la diosa de la luna Selene

1957 Dr. Klaus Schwarz. Establece el Se como nutriente esencial en la

nutrición animal

1973 Dr John Rotruck (Univ. Wisconsin) Demostró la incorporación de

Se a GPx

1980 Requerimientos diarios 50-200 g (Nat. Acad Sci. EEUU)

1989 Requerimientos diarios 75-55 g


ANTIOXIDANTES OBTENIDOS DE LA DIETA

Selenio Es un elemento esencial


Sitio de unión

del Fe Transferrina

Receptor de la

transferrina

anclado en la

membrana


Secuestro de Fe por la transferrina

F e I I I

O

O

O O

N h i s t i d i n a

O

a s p a r t a t o

C

O

Sitio de unión del Fe3+ a

la transferrina humana

tirosina

tirosina

En el humano, la proteína

transferrina mantiene

secuestrado prácticamente todo

el Fe extracelular debido a su

extremadamente alta afinidad

por este ion

FeIIITf(CO32-)

Fe3+ + Apo-Tf + CO32-

Kd 10-20 M




CAROTENOIDES

Estructura química de los carotenoides más comunes obtenidos de la dieta

-caroteno

HO

OH

Criptoxantina

OH

Luteína

Licopeno




Vitamina E

Descubierta en 1922 por Evans y Bishop al observarse que las ratas sometidas a una

dieta que contenía solamente grasas purificadas, proteínas, carbohidratos y minerales

presentaban problemas en la reproducción

En 1936 Evans et al. aislaron la vitamina pura y sugirieron el nombre de tocoferol, el cual

se deriva del griego tocos (nacimiento) y phero (portar). En el 1938 ya se había hecho la

caracterización de su estructura

La actividad biológica de la Vitamina E no se limita a un solo compuesto sino que es

compartida por varios derivados del 2-metil-2-(4’,8’,12’ trimetiltridecil)-6-cromanol,

conocido como tocol. Estos compuestos pertenecen a dos series que difieren en el grado

de insaturaciones en la cadena lateral fitil.

El a-tocoferol es el que presenta mayor actividad biológica y representa

aproximadamente el 90% de todos los tocoferoles presentes en los tejidos de los

mamíferos. Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

Vitamina E en los alimentos

Alimento mg/ 100 g UI

Aceite de germen de trigo 119-118 177-191

Aceite de Girasol 49 73

Aceite de maís 26 39

Aceite de oliva 13-22 19-32

Mayonesa 13 19

Germen de trigo 11 17

Cacahuete / maní 8,30 13

Espárragos 2 3

Espinaca fresca 1,8 2,7

Atún en aceite 1,7 2,6

Pollo frito 0,5 0,7

Camarón congelado 0,6 0,9

1 mg d-a-tocoferol = 1,49 UI / RDA 12 UI -15 UI Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

CH3

CH3

CH3

CH3 CH3 H H CH3 CH3

HO

H3C O

RRR-a-Tocoferol

2R 4’R 8’R

d-a-Tocoferol


CH 3 O

HO

H 3 C

H 3 C CH 3

CH 3

CH 3 CH 3

CH 3

H

H

CH 3

CH 3

CH 3 H H H 3 C

CH 3

CH 3

H H 3 C H 3 C H

H CH 3

CH 3

CH 3

H 3 C H

CH 3 O

HO

H 3 C

H 3 C CH 3

CH 3 O

HO

H 3 C

H 3 C CH 3

CH 3 O

HO

H 3 C

H 3 C CH 3

RRR

RSR

RSS

RRS

O

HO

H 3 C

CH 3

CH 3

CH 3

CH 3 CH 3

CH 3

H

H

CH 3

O

HO

H 3 C

CH 3

CH 3

CH 3

CH 3

CH 3 H

CH 3

H H 3 C

O

HO

H 3 C

CH 3

CH 3

CH 3

CH 3

CH 3

H H 3 C H 3 C H

O

HO

H 3 C

CH 3

CH 3

CH 3

H CH 3

CH 3

CH 3

H 3 C H

SRR

SSR

SSS

SRS

Vitamina E sintética: all rac-a-tocoferol


Tocoferoles Naturales

a-tocoferol

-tocoferol

-tocoferol

-tocoferol

CH3

CH3

CH3

H CH3 CH3 CH3 CH3 H

HO

H3C O

CH3

phytyl tail

CH3 CH3

CH3

HO

O

phytyl tail

CH3

HO

H3C O

phytyl tail

CH3 CH3

HO

O

phytyl tail

2R 4’R 8’R


Tocotrienoles Natulares

a-tocotrienol

-tocotrienol

-tocotrienol

-tocotrienol

CH3

CH3 CH3

HO

H3C O

CH3

CH3 CH3

CH3

HO

O

cadena

CH3

HO

H3C O

cadena

CH3 CH3

HO

O

cadena

CH3

Cadena insaturada

CH3

CH3 CH3


Actividad de la vitamina E

• Antioxidante scavenger

• Protege membrana lipídica

• Incrementa la respuesta inmune

• Regula la agregación plaquetaria

• Regula la activación de la proteína cinasa C


Vitamina E

Ruptura de

cadena

H H

=

R-OO-H

R-H ROO

Peroxyl Radical

Iniciación

Propagación

Terminación

via

Antioxidante

O2

Radical libre

Evento

Iniciador

R

aTO

aTOH

Reaccción

en cadena

R-OO-H

Hidroperóxido

Hidroperóxido

Acído graso poli-insaturado Burton & Traber Annu. Rev.

Nutr. 10: 357-382; 1990


a-Tocoferol en plasma en respuesta a la

suplementación

0

20

40

60

80

100

0 200 400 600 800

a-tocoferol en

Plasma

µM

a-tocoferol (mg/día)

all rac-

RRR-

a-tocoferol (a -T) y a-tocoferil

acetato (a -TAC):

1 IU RRR-a-TAC entre

1,36 = mg RRR-a -TAC

1 IU all rac a -TAC entre 2 =

mg 2R-a-TAC

400 IU Vitamin E =

294 mg RRR-a-TAC

ó 268 mg RRR- a -T

200 mg 2R- a TAC

ó 182 mg 2R- a -T

Devaraj et al. Arterio Thromb Vasc

Biol 17:2273, 1997




Vitamina C 1500 a.n.e se describen estados carenciales

(fatiga, inflamación bucal, caída de los dientes = escorbuto)

1700s Se descubre que el jugo de cítricos previene en los marinos el

escorbuto

1932 Fue cristalizada y obtenida en forma pura a partir del jugo de limón por

los bioquímicos norteamericanos C.G. King y W.A. Waugh

• Es el más potente antioxidante de fase acuosa presente en mamíferos

• Cumple una función muy importante en la regeneración del a-

tocoferol.

• La ingestión de vitamina C se ha asociado a una disminución del

riesgo de cáncer

• Los efectos a escala sistémica están relacionados con su actividad

antioxidante e inmunoestimulante.

Citrus, Collagen, Cold


Vitamina C en los alimentos

Alimento mg/ 100 g

Acerola / Cereza 1 300

Ají maturo 369

Brócoli 300

Guayaba 300

Fruta bomba / Papaya 168

Ají verde 130

Kiwi 100

Naranja 70

Freza 59

Limón 50

Toronja 40

Lima 37

RDA 60 mg Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

O

OH

OHO

HO

OH

O

OH

OHO

O

OH

O

O

OHO

O

OH

pK1 = 4.1 pK2 = 11.8

AscH2 AscH- Asc

2-

El ácido ascórbico es un Di-ácido

A pH 7,4; 99,95% de la vitamina C estará

presente como AscH-; 0,05% como AscH2 y

0,004% como Asc2-. Así, las propiedades

antioxidantes de la vitamina C se deben al

AscH- Dr. Gregorio Martínez Sánchez, Ph.D.

DOSIS

OBSERVACIONES:

0-10 mg

Riesgo de escorbuto, baja resistencia a las infecciones. Pequeñas hemorragias y

hematomas. Disminuye la velocidad de cicatrización.

10-20 mg

Previene el escorbuto.

35-50 mg

Dosis en niños de hasta 14 años.

60 mg

Dosis RDA

80 mg

Embarazo

100-150 mg

Lactancia

Elevación

de los Requerimientos

Fiebre, Enfermedades Virales, Alcoholismo, Estrés emocional, Estrés ambiental (Pb, Hg,

Cd, CO, Derivados del petróleo). Fumadores, Uso de corticoides, aspirina, sulfas,

estrógenos en la menopausia, anticonceptivos orales.

600-1200 mg

Estimado basado en la extrapolación de dietas vegetarianas

5 g

Elevación de la producción de interferón, acción antiviral

2-9 g

Dosis recomendada por Linus Pauling (Resfriados y Cáncer)

> 10 g

Signos tóxicos: Diarreas, Nauseas, Disuria, Sensibilización cutánea, hemólisis, Acumulación

de cálculos de oxalato de Ca en los riñones, Pérdida de Cu.

Niveles óptimos en suero: >50 mol/L

Ingesta de Vitamina C


Vegetal Cocido Refrig. 1 d Recalentado

Espárrago 86 82 66

Brócoli 88 68 60

Guisantes 88 52 43

Berza 73 44 33

Espinaca 52 48 32

Habas 83 41 29

Almacenamiento / Refrigeración - Contenido de Vit. C


Método %

Frita 76

Micro-ondas, poca agua 75

Hervida, poca agua 74

Micro-ondas, abundante agua 56

Hervida, abundate agua 44

Porcentaje de Vit. C en Brocoli cocido por varios métodos


1 2 3

Kiwis por dias

0

40

80

120

160

DN

A r

ep

ara

ció

n (u

nid

ad

es

arb

itra

ria

s)

P=0.001 P=0.03 P<0.001

Esimulación de los mecanismos de reparación del ADN durante la suplementación con Kiwi


Retos actuales de la O3 Terapia

Uso de generadores no aptos

Falta de homogeneización

Toxicidad del Ozono

Falta de datos científicos clínicos sólidos

Los charlatanes

Falta de regulaciones y desinterés de las

autoridades

Falta de financiamiento

Médicos escépticos o poco informados

Representación esquemática de los procesos que conducen in vivo

a la formación de O3 por parte de neutrófilos activados.

Babior BM, Takeuchi C, Ruedi J, Gutierrez A, Wentworth P, Jr. Investigating antibody-catalyzed ozone

generation by human neutrophils. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 Mar 18;100(6):3031-4.

Agua ozonizada Agua pH 7,00

Temperatura °C

Tiempo de vida del

ozono (min)

15 30

20 20

25 15

30 12

35 8

Agua 15 °C

pH

Tiempo de vida del

ozono (min)

7,6 30

8,5 10

9,2 5

10,19 2

10,4 1

Tiempo (min)

Concentración de O3 µM/L

Aplicaciones Médicas: Tratamiento y desinfección de heridas Para eliminar el pus y limpiar áreas necróticas Eliminar gérmenes en general Lavado de cavidades quirúrgicas Gastritis

Peroxidación

lipídica

CH3

COOH

CH3

COOH

OOH

Aceites ozonizados. Aplicaciones Clínicas

Germicida General

Analgésicos

Antinflamatorio

Vs. Celulitis

Anti envegecimiento

O3 y la síntesis de mediadores hormonales

Ozono rectal: T3/T4, creatinina, glicemia.

Autohemoterapia: colesterol y LDL.

Hemoglobina, hematocrito, proteínas totales, lactato

deshidrogenasa, triglicéridos, lipoproteínas, enzimas hepáticas,

bilirrubina, acido úrico, acido láctico y calcio, entre otras

O3 y la regulación metabólica

Saunas de ozono: hormonas del crecimiento y beta endorfinas

En pacientes hipertensos disminuye la presión arterial debido a que

reajusta el sistema renina-angiotensina-aldosterona.

Autohemoterapia: produce una regulación y estabilización del ciclo

menstrual.

Efectos Biológicos del Ozono

Sustrato Blanco Efectos

Eritrocito Más disponibilidad de O2 a los tejidos

Lípidos Leucocito Modula el sistema inmunitario

(liberación de citocinas)

Proteínas Plaqueta Libera factores de crecimiento

Carbohidratos Endotelio Libera eritrocitos superdotados

Ácidos

nucléicos

Médula Libera células madres

Otros

Modula las enzimas antioxidantes

El O3 es tóxico ??????? “La dosi marca la diferenca entre el veneno y el remedio”

Paracelsus (1493–1541)

Ozono Exposición crónica (0.7-0.77 mg / d) Toxicidad

V. Bocci. Toxicology and Applied Pharmacology 216 (2006) 493–504

Ozono Exposición aguda (1-10 mg / d)

Sangre

Órganos

blanco

Dosis + Blanco + Métodos = Eficacia terapéutica

L Re, Martínez-Sánchez G. Drug Response (2010)

ERO

(1O2, O

2, H2O2, OH, ONOO-, O3)

OOH OOH OOH

OOH

OOH

OOH OOH

OOH OOH

Fisiolog. LP

Estrés

oxidativo

fisiológico

Salud

Bajo LP

Señal de estrés

Inducción de

mecanismos

antioxidantes

Medio LP

Inducción de

Programa de

Muerte

Apoptosis

Alto LP

Daños

metabólicos y

estructurales

drásticos

Muerte

Necrótica

Peroxidación lipídica (PL) y mecanismos de transducción de señales

Luz, U.V., radiación, inflamación, auto-

oxidación, isquemia - reperfusión…

Generación de ERO

Inactivación de ERO

(alta reactividad / baja concentración)

Secuestro de metales de transición

Sustratos competitivos

Enzimas Antioxidantes

Secuestradores de RL

Antioxidantes

Proteínas -Amino ácidos

(baja reactividad / alta concentración)

OXIDACIÓN PROTEICA

Proteínas radical Proteínas - unidas a ERO Aldehídos,….

Productos Estables de la

DEGRADACIÓN OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS ACUMULACIÓN

EXCRECIÓN Amino ácidos oxidados RE-UTILIZACIÓN

(Síntesis proteica)

Cascada de Señalización /

Expresión génica

Diabetes

Arteriosclerosis

Neurodegenerativas

Gregorio M S, Redox Report. (2005)10(4):174-184

O3

L Re, Martínez-Sánchez G. Drug Response (2011)

Febrero 13, 2003

Bajas concentraciones de toxinas pasadas

por alto

Contaminantes potenciales y sus efectos beneficiosos a bajas dosis.

Octubre 17, 2003

HORMESIS: Bebiendo de un cáliz envenenado

Edward Calabrese, Profesor de la Escuela de Salud Publica y Ciencias de la Salud, Univ. de Massachusetts

Mayo 1, 2009 Rececibió el Premio Marie Curie por el trabajo:

Hormesis: Dosis bajas, Radiación y salud

Hormesis relación dosis / respuesta en la cual la respuesta a una dosis baja es opuesta al de una dosis alta. Como consecuencia, una respuesta hormética refleja curvas bifásicas y no monotónicas.

Misasa primavera caliente, Japan

HORMESIS y RADIACIÓN

Jpn J Cancer Res. 1994 Nov;85(11):1063-6.

Relación dosis respuesta, SOD y PL en corteza cerebral irradiada de rata

Yamaoka 1991

Mecanismos propuesto para explicar la Hormesis durante las exposición a

radiaciones

La radiación, un estímulo no fisiológico, a bajas dosis puede: -incrementar la actividad de la enzimas antioxidantes -incrementar la actividad de enzimas reparadoras del ADN -disminuir el daño oxidativo -disminuir la incidencia de cáncer -incrementar el tiempo de vida -incrementar la generación de RL

Estresantes pueden alterar la funcion genética

David A. Sinclair, Toward a unified theory of caloric restriction and longevity regulation Mechanisms of Ageing and Development

2005, 126(9):987-1002

Nutrición Estresantes ambientales

Estresantes pueden actuar en a célula a nivel genético

e incrementar la longevidad.

Ejercicio

Estrés

emocional

Estrés oxidativo

Respuesta Hormetica del O3

Respuesta

Farm

acoló

gic

a

Excepto para la vía inhatoria

1 mg/d

10 mg/d

Éxito Terapéutico del Ozono = ∑A(B +C/D + E + F) + G + H

A. Buenas Prácticas Clínicas

B. Calidad del O2/O3

C. Dosis

D. Diagnóstico Redox

E. Experiencia del médico

F. Selección de la vía de administración

G. Factores Externos (controlables) e.j. estado nutricional

H. Factores Internos (no controlables) e.j. factores genéticos

L Re and G Martínez-Sánchez (2010): Emergent Therapies: Ozone. Aracne Ed. ISBN: 978-88-548-3445-3

Ozono. Modulación del sistema inmune.

TNFa, IL-1, Otras citocinas,

Moléculas de adhesion ICAM-1, VCAM-1

Proteína de shock térmico HSP-70, Proteínas de fase aguda,

Óxido nítrico sintasa inducible (ONSi), SOD dependiente de Mn

Hematopoyetinas, Otras proteínas

Trascripción

Extracelular Extracelular

Intracelular

NUCLEO

O3 O3- Intermediarios

Lipoperóxidos

H2O2

Ozono

bloquea la

síntesis de

las caspasas

1, 8, 12

Eur J Phramacol 2009, 603:42-49

Cascada de las Caspase

Esos resultados indican que el ozono puede ser efectivo en la prevención del dolor neuropatico, actuando a través de un mecanismo antes no explorado, la modulación de caspasas cerebrales con efectos pro-inflamatorios y pro-apoptóticos

Foto de una paciente con dolor sub-escapular 1 min después de la inyección (puntos de inyección marcados con una X) con O2/O3 8 µg/mL, 2-3 mL. Nótese que en la zona en la cual se refería el dolor (central y derecha en la foto) aparece una coloración rosada (eritema) mientras que en la zona donde no refería dolor (izquierda en la foto) el eritema no aparece.

Lamberto Re, Gregorio M. Sánchez, Nabil Mawsouf. Clinical evidence of ozone interaction with pain mediators. Saudi Med J 2011; Vol. 32 (12) 1363:1367.

O3 inhibe dolor periférico

IL-1

IL-6

IL-8

TNF

J Bone Join Surg Am (2006)

Un estímulo inocuo

puede general una

respuesta amplificada

Sensibilización

al dolor

periférico COX-2-PG

PLA2

Arterioscler Throm Vasc Biol 2006

O3

La reacción del Ozono usualmente se aprecia mejor en la zona dolorosa

Lamberto Re, Gregorio Martínez Sánchez. Terapias emergentes: ozono. ¿Qué debe saber el paciente y cómo el médico debe actuar?. Ed. Aracne, Roma, Italia 2010. ISBN: 978-88-548-3706-5.

Mecanismo teórico para explicar la estimulación de la síntesis de 2,3 difosfoglicerato (2,3 DFG) por el ozono. ROOH, lipo-peróxido; ROH, alcohol; GSH, glutatión reducido; GSSG, glutatión oxidado.

Dosis de Ozono recomendada según la modalidad de

suministración (µg/mL) LOCAL

Dosis Observaciones

Alta Media Baja

Auricular 30 25 20 5 min

Agua ozonizada (lavados locales) 125-500 100-80 40-80 burbujear 10 min

Agua ozonizada (ingestión) 125 80 40 120 mL, burbujear 10 min

Vaginal 30-40 25 20 1-2 L/ 0,1-0,2 L/min

Vescico-uretral 20-25 15 10 1-2 L/ 0,1-0,2 L/min

Retal 30-40 20-30 5-10 100-150 mL

Bolsas 40-60 30 20 20-30 min

Sauna 10 8 5 20-30 min / Temp. 40-45 °C

AEPROMO. MADRID DECLARATION ON OZONE THERAPY. International Meeting of Ozone Therapy Schools. Madrid, Spain, 2010.

Vías no recomendada: inhalatoria

Dosis de Ozono recomendada según la modalidad de

suministración (µg/mL) SISTEMICA

Dosis Observaciones

Alta Media Baja

Gran Auto hemo-

trasfusión 30-40 20-30 10-20 50-100 mL

Auto hemo

Trasfusión menor 20-30 10-20 5-10 5 mL

Paravertebral 20 15 10 Aguja 22-27Gx1 ½, 5-20 mL

Subcutánea 10 8 5 1-2 mL máximo 100 mL/sesión

Intra-articular 20 10 5 1-2 mL (dedo), 5-20 mL otros

Acupuntura / reflexología 30 20 10 0,1 - 0,3 mL

AEPROMO. MADRID DECLARATION ON OZONE THERAPY. International Meeting of Ozone Therapy Schools. Madrid, Spain, 2010.

Vías no recomendada: itra venosa directa

Racional para el control de la dieta

Antes, Durante y Después de la ozonoterapia

Antes: Valorar estado nutricional y restablecerlo a

valores normales según los requerimientos

Durante: Mantener consumo basal de nutrientes

aportados por la dieta

Después: Proceder a la suplementación con los

nutrientes deficientes (Vit. E, C. Se, Mn, Cu, Zn)

Estudios Bioquímiocos Perfil de estrés oxidativo

Diganóstico del integral EO: Una foto del estado del EO en el paciente

Perfil Normal Perfil patológico

Diganóstico integrado del ERO

Tipos de Estudios:

Actividad Antioxidante Tota,

Enzimas,

Indicadores de daño a Biomoléculas

Antioxidantes de bajo peso molecular

Utilidad:

Diagnóstico de grupos de pacientes

Diagnóstico de pacientes individuales

Monitoreo de una intervención nutricional

Monitoreo de una intervención farmacológica

Los sistemas Ultra micro

analicos hacen posible un

anális rápido, con bajos

costos y automatiación.

Activación de

neutrófilos PRODUCION de EROS

Daño a

tejidos

H2O2

HOCl

Mieloperoxidasa

OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS

Formación de

Ditirosina

n

Oxidación de

SH

APOP

LDL

LDL oxidada

Arteriosclerosis

Limfocitos T y B

Célula endotelial

Monocito

Desregulación del sistema

Inmune

IL-1

TNF

IL-6

INFLAMACIÓN

CRÓNICA

Disminución de

los antioxidantes

Quimiotaxis

reclutamiento de

neutrófilos

Gregorio M S, Redox Report. (2005)10(4):174-184

PRODUCTOS AVANADOS DE LA OXIDACION DE

PROTEÍNAS

Valores PAOP M

Normal 12.13±0.93

Diabetes 19-21*

Colitis 29*

Bronchitis 95**

Ataxia 119**

Monitoreo de una intervención terapéutica

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

Principio Final Principio Final Tiempo de colecta de las muestras

Antibiótico Ozono Grupos

Concentración de glucosa en plasma (mM)

Razón CAT/SOD

Antibiótico

Ozono

Control

O2- + SOD H2O2 + CAT H2O

Diagnóstico clínico de grupos de pacientes

Diagnóstico clínico de grupos de paciente

Paciente con sobrecarga de Fe

Ancitividad Antioxidante Total

PP (7.320.56 ) 61.35 M MDA

Enzimas

SOD (1.450.15) 13.75 U·mL -1·min -1

CAT (161.512.5 ) 1545 U·mL-1·min -1

CAT/SOD (0.110.02 ) 0.11

Daño a Biomoléculas MDA (1.740.27) 6.56 M

ROOH (10317 ) 67.40 M

PAOP (12.130.93 ) 58.21 M

Antioxidantes de bajo PM Vit. C (30-150 ) 3.18 M

GSH (786-1146 ) 301.18 mg·L-1

Síndrome de

cansancio crónico

HC. 39 SHC

54 años ♀

Seguimiento de una Intervención Nutricional

International Journal of Vitamin and Nutrition Research (2005). 75(1):19-27.

Effects of increase micronutrients intake on oxidative stress indicators in

HIV/AIDS patients. Lidianis Luján, Lizette Gil, Gregorio Martínez, Attilia Giuliani, Ivón González, Alicia Tarinas, Alejandro

Álvarez, Randelis Molina, Maite Robaina, Rolando Tápanes, Alberto Nuñez, Jorge Pérez

Futuro: Diagnóstico automatizado

Datos

Lab.

Algoritmos

INTERPRETACION simplificada

Futuro cercano

1 Normal

2 Moderado / bajo

3 Alto

4 Crítico

Daño Eq. Variables

> 10% ± 10 %

Recomendaciones al médico

Datos Clínicos

Perspectivas

Preguntas

Gregorio Martínez Sánchez, Pharm.D, Ph.D.

Investigador Titular

Director científico Medical Center Beauty Benefit® srl

Contacte a:

gregorcuba yahoo.it

Presentación de PowerPoint · 2017. 9. 29. · aumentaba la frecuencia de aberraciones...

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