Pemeriksaan hb a1c secara ion exchange hplc 2
-
Upload
endang-siahaan -
Category
Documents
-
view
2.371 -
download
16
Transcript of Pemeriksaan hb a1c secara ion exchange hplc 2
LOGO
Add Your Company Slogan
Pemeriksaan HbA1c secara Ion-exchange HPLC
Metoda Kimia 2
Presentan: M. Endang Frida S
Pembimbing: dr. M. I. Diah P, Sp.PK, MSc
PPDS I Patologi Klinik FK UNS
Surakarta
Januari 2012
Tugas Stase Orientasi
No Stase Judul Metode Tanggal Pengampu
1Imunologi
Klinik
Metode Pemeriksaan IgM,IgG dan IgG aviditas
Toxoplasma28 Mei 2011
dr. B. Rina Sidharta,SpPK
2 Mikrobiologi Metode Kultur Pus 30 Juni 2011dr. B. Rina Sidharta,
SpPK
3 SamplingPatient Safety pada
Plebotomi28 Juli 2011 dr. Tahono, SpPK (K)
4 HematologiMetode Penetapan Kadar
Hemoglobin16 Sept 2011 dr. Tahono, Sp.PK (K)
5 SekresiMetode Pemeriksaan Cairan
Transudat dan Eksudat8 Nov 2011 dr. Yuwono, SpPK
6 Kimia 1Pemeriksaan Asam Urat
secara Metode DirectEquilibrium Uricase
15 Des 2011dr. M. I. Diah P,
Sp.PK, MSc
7 Kimia 2Metoda Pemeriksaan HbA1c secara Ion-exchange HPLC
25 Jan 2012dr. M. I. Diah P,
Sp.PK, MSc
Pendahuluan
Sultanpur, 2010
Penyakit metabolik
Kondisi hiperglikemik
Gambaran kadar gula plasma
Pendahuluan...
mg/dL = 18 x mmol/L
Billous, 2009
bulan
Pendahuluan...
βN-1-deoxyfructosyl-hemoglobin
HbA yang mengalami glikosilasi pada gugus valin rantai β-globin
Reaksi glikasi secara nonenzimatik
Ikatannya stabil
Pendahuluan...
glukosa
Pendahuluan...
Metoda pengukuran kadar HbA1c:
Ion exchange HPLC
Immunoassay
Boronat afinitas
Pendahuluan...
- Suatu alat kromatografi
- Stationary phase: material padat bermuatan ion
- Mobile phase: liquid
- Prinsip: ion-exchange
Hemoglobin akan dipisah menjadi fraksi-fraksi
berdasarkan muatan ionnya
Pendahuluan...
Ion-exchange HPLC
Bunner, 2010
Pendahuluan...
Pra Analitik
Tujuan
Mengukur kadar HbA1c
Menegakkan diagnosis DM
Menentukan panduan terapi DM
Menilai efek terapi DM
Mengetahui faktor risiko
komplikasi DM
Bio Rad D10TM
Sampel:
Darah EDTA
Penyimpanan:
15-30⁰C 3 hari
2-8⁰C 7 hari
Elution buffer 1:
Bis-Tris/Phospate (pH 6,0)
Elution buffer 2:
Bis-Tris/Phospate (pH 6,7)
Wash/diluent solution :
deionized water
Pra Analitik...
Persiapan pasien
Tidak ada persiapan khusus
PERKENI
(Perkumpulan Endokrinologi
Indonesia)
Setiap 3 bulan
Minimal 2x setahun
ADA
(American Diabetes
Association)
2x setahun
Tujuan terapi tercapai
Kadar gula terkontrol
4x setahun
Tujuan terapi tidak tercapai
Perubahan terapi
Pra Analitik...
Persiapan alat
Kalibrasi
Material:
Calibrator HbA1c
Calibrator Diluent
Dilakukan:
Saat pertama kali instalasi
Ganti/tambahan catridges analitik baru
Setelah maintenance atau perbaikan
Pra Analitik...
Quality control
Analisis 2 level kontrol HbA1c:
Low (HbA1c 4,6-6,0%)
High (HbA1c 9,0-11,0%)
Bahan:
Bio-Rad Lyphochek Diabetes Control
atau
Bio-Rad Liquichek Diabetes Control
Pra Analitik...
Analitik
Prinsip pemeriksaan
Ion-exchange HPLC
(cation-exchange)
Jinseokseo, 2011
Elution time
Am
ount
of
mat
eria
l
Metoda kerja
- Masukkan 1,5 mL diluent solution ke dalam tabung sampel
- Tambahkan 5µL darah EDTA
- Homogenisasi
- Letakkan dalam rak analisis
- Masukkan ke dalam alat HPLC
Analitik...
Schoenmakers, 2011
1
2
3
4
5
6
Injeksi sampel
Buffer
phosphat
Cation-
exchange
Photometer
Absorbansi 415nm
Hasil
Limbah
Analitik...
Paska Analitik
Hasil
- Dalam bentuk gelombang kurva
- Gelombang HbA1c berwarna hitam
- Nilai dalam persentase (%) dan mmol/mol
- Range: 3,8 – 18,5 %
IFCC-HbA1c (mmol/mol) = [NSGP-HbA1c (%) - 2.15] x 10.929
NGSP: National Glycohemoglobin Standardization Programme (US)
Paska Analitik...
Retention time
Am
ount
of
mat
eria
l
Interpretasi hasil
Kadar HbA1c
Non Diabetik 4-6%
Diabetik
Kontrol baik < 7%
Kontrol sedang 7-10%
Kontrol buruk > 10%Provan, 2010
Paska Analitik...
WHO (2011)
cut off 6,5%
ADA (2011)
> 6,5%
ADA: American Diabetes Association
Paska Analitik...
Paska Analitik...
HbA1c
Hemoglobin
Kadar HbLifespan eritrosit
Metoda
Co-elute
Faktor yang mempengaruhi hasil
Penurunan Palsu
• Anemia (hemolitik)
• lifespan eritrosit menurun
• Vitamin C dan E
• Kehamilan trim 2
• HbC, HbS
Peningkatan Palsu
• lifespan eritrosit memanjang
• Carbamylated Hb
• Alkoholisme
• Bilirubin yang tinggi
• Aspirin
• HbF
Paska Analitik...
Faktor yang mempengaruhi hasil
Faktor interference Kadar yang mempengaruhi
Ikterik > 20 mg/dL
Lipemik > 5680 mg/dL
HbF > 10%
A1c labil > 4%
Carbamylated Hb > 3,5%
Paska Analitik...
Karakteristik metoda
Merupakan metoda referensi IFCC
Spesifisitas kurang (pengaruh Hb varian)
Nilai presisi tinggi
Paska Analitik...
Simpulan
HbA1c merupakan komponen HbA yang mengalami glikosilasi.
HbA1c memberikan gambaran kadar glikemik seseorang selama 2-3 bulan yang lampau, oleh karena itu HbA1c dapat digunakan untuk mengetahui sejauh mana diabetes seseorang terkontrol.
HbA1c dapat diperiksa secara imunoasay, ion-exchange HPLC dan afinitas boronat. Cation-exchange HPLC merupakan metoda yang direkomendasikan oleh IFCC sebagai metoda rujukan untuk menilai kadar HbA1c.
Prinsip metoda cation-exchange HPLC adalah memisahkan hemoglobin berdasarkan muatan listrik yang terdapat pada permukaan molekul hemoglobin rantai globin yang akan berikatan secara ionik dengan muatan material.
Keuntungan metoda ion-exchange HPLC adalah nilai presisi yang tinggi.
Kerugian metoda ion-exchange HPLC adalah spesifisitas yang rendah, dimana pemeriksaan dipengaruhi oleh adanya Hb varian.
Simpulan...
Daftar pustakaAnonim. 2010. D-10 Hemoglobin A1c Program Instruction Manual. United States: Bio-Rad Laboratories Inc.
Bunn FH, Haney DN, Gabbay KH, Gallop PM. 1975. Further identification of the nature and linkage of the carbohydrate in hemoglobin A1c. Biochemical and Biophysical Research Communications. 67: 103-109.
Catrone D, Pipes G, Cauchon G, Wislon J. 2008. Ion exchange Chromatography. Available at: http://www.analyticalventura.com/iex-hplc.shtml. (Diunduh 28 Desember 2011).
Cowan D, Anand G, Engen J. 2010. HPLC Separation Modes. Available at: http://www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10049076&locale=en_IN. (Diunduh 28 Desember 2011).
Cuccia T. 2012. My Bio Rad D-10 Instrumentation. Available at: http://www.bio-rad.com/prd/en/US/CDG/PDP/b69d270d-0aef-473f-ae33-439a56d9128f/D-10%20Instrumentation. (Diunduh 5 Januari 2012).
Hicks J, Muller M, Panteghini M, John G. 2007. Consensus statement on the worldwide standardisation of the HbA1c measurement. Diabetologia. DOI 10.1007/s00125-007-0789-7.
Özçelik F et al. 2010. Comparison of Three Methods for Measurements of HbA1c. Turkish Journal of Biochemistry. 35 (4): 344-349.
Plapp FV. 2011. Hemoglobin A1c. Available at: http://www.clinlabnavigator.com/Test-Interpretations/hemoglobin-a1c.html. (Diunduh 19 Desember 2011).
Provan D. 2010. Oxford Handbook of Clinical and Laboratory Investigation. New York: Oxford University Press. 190-195.
Rudianto A, Lindarto D, Shahab A, Decroli E. 2011. Konsensus Pengendalian dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe 2 di Indonesia 2011. Jakarta: PERKENI.
Schoenmakers P, Janssen HG, Polite LN, Claessens H. 2011. How to Select The Technique. Available at:
http://www.chromedia.org/chromedia?waxtrapp=xqegzCsHqnOxmOlIEcCbC&subNav=yarwnEsHqnOxmOlIEcCxBWT. (Diunduh 7 Januari 2012).
Shroff S, Tharu R, Ravi T. 2011. Blood Sugar Chart. Available at: http://www.medindia.net/patients/calculators/bloodsugar_chart.asp. (Diunduh 4 Januari 2012).
Sultanpur CM. 2010. Comprehensive Review on HbA1c in Diagnosis of Diabetes Mellitus. International Journal of Pharmaceuical Sciences Review and Research. 2: 119-122.
World Health Organization. 2011. Use of Glycated Haemoglobin (HbA1c) in the Diagnosis of Diabetes Mellitus. Geneva: WHO Press.