EMB

Utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.

FundamentoLa diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Frmula (g/L)Instrucciones

Peptona10.0Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos hasta su disolucin. Esterilizar en autoclave a no ms de 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir agitando suavemente.

Lactosa5.0

Sacarosa5.0

Fosfato dipotsico2.0

Agar13.5

Eosina0.4

Azul de metileno0.065

pH final: 7.2 0.2

SiembraEn superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias aisladas.

IncubacinDe 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.Manitol Salado

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos.

Fundamento Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.

Frmula (g/L)Instrucciones

Extracto de carne1.0Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15 minutos.

Pluripeptona10.0

d-Manitol10.0

Cloruro de sodio75.0

Agar15.0

Rojo de fenol0.025

pH final: 7.4 0.2

SiembraSembrar en superficie un inculo denso de la muestra.

IncubacinDe rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.TSA

Medio utilizado para propsitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos.

FundamentoLa triptena y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en pptidos, aminocidos libres, bases pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya aporta tambin carbohidratos que estimulan el crecimiento de muchos microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.Adicionado con 5-10 % sangre, se logra un medio enriquecido y adecuado para observar reacciones de hemlisis.Cuando se prepara como agar chocolate, es til para el cultivo de Neisseria spp, Haemophilus influenzae y microorganismos exigentes similares. Incubado en forma anaerobia, permite el crecimiento de Clostridium spp y anaerobios no esporulados.

Frmula (g/L)Instrucciones

Triptena15.0Disolver 40 g de polvo deshidratado por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir durante 1 2 minutos hasta su disolucin. Distribuir y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 118-121C.

Peptona de soya5.0

Cloruro de sodio5.0

Agar15.0

pH final: 7.3 0.2

SiembraPor inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.

Saboraud Glucosado

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.

FundamentoMedio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.). En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

Frmula (g/L)Instrucciones

Pluripeptona10.0Suspender 65 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 118-121C. Mantener en lugar fresco, pues la exposicin al calor hidroliza los componentes. Distribuir en placas o en tubos con cierre hermtico

Glucosa40.0

Cloranfenicol0.05

Agar15.0

pH final: 5.6 0.2

SiembraDepende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa. Consultar referencias de mtodos recomendados.

Salmonella-Shigella

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp y de algunas especies de Shigella spp a partir de heces, alimentos y otros materiales.

FundamentoEs un medio de cultivo selectivo y diferencial.La selectividad, est dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.

Frmula (g/L)Instrucciones

Pluripeptona5.0Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Extracto de carne5.0

Lactosa10.0

Mezcla de sales biliares8.5

Citrato de sodio8.5

Tiosulfato de sodio8.5

Citrato frrico1.0

Agar13.5

Verde brillante0.00033

Rojo neutro0.025

pH final: 7.0 0.2

SiembraSembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.

IncubacinDurante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.TSI

Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.

FundamentoEn el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Frmula (en gramos por litro)Instrucciones

Extracto de carne3.0Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.

Pluripeptona20.0

Cloruro de sodio5.0

Lactosa10.0

Sacarosa10.0

Glucosa1.0

Sulfato de hierro y amonio0.2

Tiosulfato de sodio0.2

Rojo de fenol0.025

Agar13.0

pH final: 7.3 0.2

SiembraSembrar picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

IncubacinA 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.

MEDIOS DE CULTIVO

Yel-Zn