Kuliah 6 Penetapan Kadar Polifenol Dan Flavonoid

7/26/2019 Kuliah 6 Penetapan Kadar Polifenol Dan Flavonoid

1/27

FITOKIMIA II

Lusi Indriani, M. Farm, Apt

PENETAPAN KADAR FLAVONOID

DAN POLIFENOL


2/27

FLAVONOID

Flavonoid adalah senyawa yang terdiri dari 15

atom karbon yang umumnya tersebar di dunia

tumbuhan.

Lebih dari 2000 flavonoid yang berasal daritumbuhan telah diidentifikasi, namun ada tiga

kelompok yang umum dipelajari, yaitu

antosianin, flavonol, dan flavon.


3/27

Antosianin (dari bahasa Yunani anthos = bungadan kyanos = biru tua) adalah pigmen berwarna

yang umumnya terdapat di bunga berwarna

merah, ungu, dan biru .

Pigmen ini juga terdapat di berbagai bagiantumbuhan lain misalnya, buah tertentu, batang,

daun dan bahkan akar.

Flavonoid sering terdapat di sel epidermis.

Sebagian besar flavonoid terhimpun di vakuola

sel tumbuhan walaupun tempat sintesisnya ada

di luar vakuola.


4/27

PENETAPAN KADAR FLAVONOID

Metode 1. Spektrofotometri

Pereaksi

Larutan HMT : Larutan heksametilentetramin

0,5% b/v

Larutan asam asetat glasial 5% v/v dalam

metanol P

Larutan aluminium klorida : Larutan Aluminiumklorida 2% dalamAsam asetat glasial P


5/27

Larutan Uji

Kecuali dinyatakan lain timbang seksama

sejumlah 200 mg simplisia atau ekstrak

yang setara dengan 200 mg serbuk

simplisia, masukkan ke dalam labu alas

bulat, tambahkan berturut-turut 1 ml

Larutan HMT, 20 ml aseton P dan 2 mllarutan asam klorida P, refluks selama 30

menit.


6/27

Saring menggunakan kapas, masukkan filtrat ke

dalam labu tentukur 100 ml. Refluks kembali residu dengan 20 ml aseton P

selama 30 menit, saring dan campur filtrat ke

dalam labu terukur 100 ml.

Tambahkan aseton P sampai tanda.

Pipet 20 ml ke dalam corong pisah, tambahkan

20 ml air dan ekstraksi 3 kali, menggunakan 15

ml etil asetat P. Masukkan fase etil asetat dalam labu tentukur

50 ml tambahkan etil asetat P sampai tanda.


7/27

Enceran Larutan uji.

Pipet Larutan uji ke dalam labu tentukur25-ml, tambahkan larutan asam asetat

glasial 5% v/v dalam metanol P sampai

tanda.

Larutan uji dengan larutan aluminium

klorida.

Pipet 10 ml Larutan uji ke dalam labu

tentukur 25-ml, tambahkan 1 ml larutan

aluminium klorida dan larutan asam asetat

glasial 5% v/v dalam metanol P sampai

tanda.


8/27

Larutan Pembanding tanpa larutan aluminium

klorida.

Larutan Pembanding flavonoid 0,1% dalam etil

asetat P. Buat pengenceran hingga diperoleh serapan

yang mendekati serapan larutan uji.

Larutan Pembanding dengan larutan aluminiumklorida.

Larutan pembanding ditambah 1 ml larutan

aluminium klorida.


9/27

Pengukuran

Lakukan pengukuran 30 menit setelah

penambahan larutan aluminium klorida

menggunakan spektrofotometer pada

panjang gelombang yang sesuai seperti

tertera pada monografi.

Hitung kadar flavonoid total sebagai

flavonoid pembanding seperti tertera pada

monografi dengan rumus:


10/27

Rumus

% = CP (Au - Abu) x 1,25 x 100

(AP - Abp) Berat sampel

% = Kadar flavonoid total dihitung sebagai flavonoid

pembanding seperti tertera pada monografi

CP = Konsentrasi larutan pembanding

AU = Serapan Larutan uji dengan larutan aluminiumklorida

Abu= Serapan Larutan uji tanpa larutan aluminium

klorida

AP = Serapan Larutan pembanding dengan larutanaluminium klorida

Abp= Serapan Larutan pembanding tanpa larutan

aluminium klorida

1,25= Faktor Konstanta


11/27

Metode 2.

Larutan uji untuk simplisia

Timbang saksama lebih kurang 1 g serbuk

simplisia, ekstraksi dengan 25 ml etanol P

Kocok dengan kecepatan 200 rpm selama 24

jam.

Saring ke dalam labu tentukur 25-ml, tambahkanetanol 80% melalui penyaringan sampai tanda.


12/27

Larutan uji untuk ekstrak

Timbang saksama lebih kurang 0,1 1 g ekstrak Larutkan dalam 10 ml etanol 80%, sentrifus

1000 x gravitasi selama 10 menit.

Masukkan beningan ke dalam labu tentukur 25ml.

Ekstraksi residu dua kali, tiap kali dengan 5 ml

etanol 80%.

Kumpulkan beningan ke dalam labu tentukur

yang sama, tambahkan etanol 80% sampai

tanda.


13/27

Larutan uji untuk ekstrak cair

Ukur saksama sejumlah volume ekstrak cair,

encerkan dengan etanol 80% sampai kadar

yang sesuai untuk kolorimetri.Larutan pembanding

Timbang saksama kurang lebih 10 mg

pembanding, larutkan dalam etanol 80%,encerkan secara kuantitatif dan jika perlu

bertahap dengan etanol 80% hingga kadar 25,

50 dan 100 ug/ml.


14/27

Pengukuran

Pipet secara terpisah 0,5 ml Larutan uji dan

Larutan pembanding, tambahkan pada masing-

masing 1,5 ml etanol P, 0,1 ml aluminium klorida

P 10%, 0,1 ml natrium asetat 1 M dan 2,8 ml air

suling.

Kocok dan diamkan selama 30 menit pada suhuruang.

Ukur serapan pada panjang gelombang serapan

maksimum.

Lakukan pengukuran blangko dengan cara yang

sama, tanpa penambahan aluminium klorida,

buat koreksi seperlunya.


15/27

Metode 3

Larutan uji. Lakukan seperti yang tertera

pada Metode 2.

Larutan pembanding.

Timbang saksama lebih kurang 20 mg

pembanding, larutkan dalam metanol P,encerkan secara kuantitatif, jika perlu

bertahap hingga kadar 500, 1000 dan

2000 ug/ml.


16/27

Pengukuran.

Pipet secara terpisah 1 ml Larutan uji dan

Larutan pembanding, tambahkan pada masing-

masing 2 ml 2,4- dinitrofenilhidrazin P 1% dan 2

ml metanol P, panaskan pada suhu 50 0C

selama 50 menit, dinginkan pada suhu ruang. Tambahkan 5 ml kalium hidroksida P 1% dalam

metanol P 70%, sentrifus 1000 x gravitasi

selama 10 menit.

Masukkan beningan ke dalam labu tentukur 25-ml, tambahkan metanol P sampai tanda.

Ukur serapan pada panjang gelombang serapan

maksimum.


17/27

POLIFENOL

Polifenol adalah kelompok zat kimia yang

ditemukan pada tumbuhan.

Zat ini memiliki tanda khas yakni memiliki

banyak gugus fenol dalam molekulnya. Polifenol berperan dalam memberi warna pada

suatu tumbuhan seperti warna daun saat musim

gugur.


18/27

Pada beberapa penelitian disebutkan bahwa

kelompok polifenol memiliki peran sebagai

antioksidan yang baik untuk kesehatan.

Antioksidan polifenol dapat mengurangi risikopenyakit jantung dan pembuluh darah dan

kanker.

Terdapat penelitian yang menyimpulkan

polifenol dapat mengurangi risiko penyakit

Alzheimer.


19/27

PENETAPAN KADAR POLIFENOL

Spektrofotometri

Larutan uji.

Timbang saksama sejumlah simplisia yang telah

dihaluskan, masukkan ke dalam labu tentukur, encerkansecara kuantitatif dan jika perlu bertahap dengan

metanol P hingga kadar seperti yang tertera pada

masing-masing monografi.

Larutan pembanding.

Timbang seksama sejumlah asam galat, masukkan ke

dalam labu tentukur, encerkan secara kuantitatif dan jika

perlu bertahap dengan metanol P hingga kadar lebih

kurang 1 mg/ml.


20/27

Enceran Larutan pembanding.

Buat enceran larutan pembanding dengan kadar

berturut-turut lebih kurang 5; 15; 30; 50; 70; 100 bpj.

Prosedur. Pada masing-masing 1 ml Larutan uji dan Enceran

larutan pembanding dalam tabung reaksi, tambahkan 5

ml enceran Folin-ciocalteu Fenol LP (7,5% dalam air)

diamkan selama 8 menit, tambahkan 4 ml NaOH 1%,

inkubasi selama 1 jam.

Ukur serapan masing-masing larutan pada panjang

gelombang serapan maksimum lebih kurang 730 nm.

Buat kurva kalibrasi.


21/27

CONTOH JURNAL

EVALUASI KANDUNGAN TOTAL POLIFENOL

DAN ISOLASI SENYAWA FLAVONOID PADA

DAUN GEDI MERAH (Abelmoschus manihot L.)

Analisis kualitatif Analisis kuantitatif


22/27

Analisis kuantitatif

1. Penentuan Total Fenolik

Kandungan total fenol dalam ekstrak ditentukan

dengan metode Jeong et al. (2005).

Dalam sampel ekstrak sebanyak 1 mLditambahkan dengan 1 mL reagen Folin-

Ciocalteu (50%) dalam tabung reaksi dan

kemudian campuran ini divortex selama 3 menit.

Setelah interval waktu 3 menit, ditambahkan 1

mL larutan Na2CO3 2%.


23/27

Selanjutnya campuran disimpan dalam

ruang gelap selama 30 menit. Absorbansi

ekstrak dibaca dengan spektrofotometer

pada panjang gelombang 750 nm.

Hasilnya dinyatakan sebagai ekuivalen

asam galat dalam mg/kg ekstrak.

Kurva kalibrasi dipersiapkan pada cara

yang sama menggunakan asam galat

sebagai standar.


24/27

2. Penentuan Total Flavonoid

Prosedur penentuan kandungan total

flavonoid menggunakan metode Zhishen

et al. (1999).

1 ml ekstrak ditambahkan dengan 5,7 mL

aquades, 0,3 mL NaNO2 dan 3 mL

aluminium klorida 10%, divortek dan

didiamkan selama 5 menit.


25/27

Setelah 6 menit 2 mL campuran larutan tersebut

ditambahkan dengan 2 mL NaOH 1 M,

kemudian divortex dan dibaca pada 415 nm.

Kandungan total flavonoid dinyatakan sebagaiekuivalen kuersetin dalam mg/kg ekstrak.

Kurva kalibrasi dipersiapkan pada cara yang

sama menggunakan kuersetin sebagai standar.


26/27

3. Penentuan tanin Terkondensasi

Kandungan tanin terkondensasi sampel

ditentukan menurut metode Julkunen-Titto

(1985).

Sebanyak 0,1 ml larutan sampel

dimasukkan dalam tabung reaksi yang

dibungkus alumunium foil, lalu

ditambahkan 2 ml larutan vanillin 4% (b/v)

dalam etanol dan divortex.


27/27

Kemudian ditambahkan 1 ml HCL pekat dan

divortex lagi.

Absorbansi sampel dibaca pada 500 nm

setelah campuran itu campuran diinkubasiselama 20 menit pada suhu kamar.

Kandungan tanin terkondensasi dinyatakan

sebagai ekuivalen katekin dalam mg/kg ekstrak.

Kurva kalibrasi dipersiapkan pada cara yang

sama menggunakan katekin sebagai standar.

Kuliah 6 Penetapan Kadar Polifenol Dan Flavonoid

Documents

Transcript of Kuliah 6 Penetapan Kadar Polifenol Dan Flavonoid