Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel
description
Transcript of Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel
![Page 1: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/1.jpg)
Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel
Chankvetadze, B., Capillary Electrophoresis in Chiral Analysis, John Wiley & Sons, Chichester 1997.
Lammerhofer, M., J. Chromatogr. A, 2005, 1068, 31–57. Gáspár. A. Kapilláris elektroforézis, 2000
![Page 2: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/2.jpg)
Kapilláriselektroforézises készülék diagramja
Paraméterek: V, 0-30 kV; oszlop, 5-70 cm x 0,025 -0,100 mm, kvarc
![Page 3: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/3.jpg)
Kapilláriselektroforézis alapelve
A vándorlás hajtóereje az elektroozmotikus (EOF) áramlás,és az elektromos vonzás az ionok és az elektródok között.
![Page 4: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/4.jpg)
Kapilláris előnyei az elektroforézisben
![Page 5: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/5.jpg)
EOF és kromatográfiás áramlási profilok
Kvarc oszlopon az EOF nagysága függ pH-tól. Az EOF falra tapadó kationos detergennsel megfordítható.
![Page 6: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/6.jpg)
CE előnyei a királis analízisben
![Page 7: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/7.jpg)
Királis elválasztás feltételei CE-ben
Semleges szelektorral nem lehet semleges enantiomert elválasztani.Ellentétes töltésű szelektor és minta között nagy elválasztás várható.Az elválasztásnak maximuma van a szelektor koncent-rációjának függényében.
![Page 8: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/8.jpg)
![Page 9: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/9.jpg)
Királis elválasztás β-PMMACD szelektorral
Ellentétes töltésű szelektor és minta párosítások nagy elválasztást adnak.
![Page 10: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/10.jpg)
Végtelen elválasztás is elérhető a szelektor koncentrációjának hangolásával ellentétes
töltetű minta és szelektor esetén
S. Rudaz et al., Electrophoresis 24 (2003) 2633.
![Page 11: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/11.jpg)
Királis CE gyors módszer
Az oszlop regenerálási időt is figyelembe kell venni.
![Page 12: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/12.jpg)
CE alkalmas nyomnyi enantiomer szennyezés kimutatására
![Page 13: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/13.jpg)
Királis CE nyomelemzésre is alkalmas
![Page 14: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/14.jpg)
Nyomnyi királis szennyezés kimutatása CE-vel
![Page 15: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/15.jpg)
Nem-vizes közegű királ CE
T.F. Wang et al. J. Chromatogr. A 817 (1998) 121.
![Page 16: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/16.jpg)
Elektrodiszperzió leronthatja az elválasztás hatékonyságát
A probléma főleg ellentétes töltésű szelektor és minta esetén jelentkezik.A helyzetet rontja a többszörös töltés és a statisztikus szubsztitúció.
![Page 17: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/17.jpg)
CE-ben használt királis szelektorok
![Page 18: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/18.jpg)
Ciklodextrinek használata királis CE-ben
• Széles szelektivitási spektrum• Származékok széles köre• Olcsó ár• Csekély UV adszorpció
• Statisztikusan szubsztituált származékok: szélesebb szelektívitási spektrum, batch to batch eltérések, alacsonyabb szelektivitás bizonyos enetiomerekre, elektrodiszperzió kiküszöbölése nehezebb.
• Single izomer származékok: jó reprodukálható eredmények, szűkebb szelektivitási spektrum, nehezebb szintézis
![Page 19: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/19.jpg)
Statisztikusan szubsztítuált CD molekulasúly eloszlása
![Page 20: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/20.jpg)
CD szubsztitúciójának változása a migrációs sorrend megfordulását eredményezheti
![Page 21: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/21.jpg)
A szelektivitás változik a CD szubsztituáltság fokával és elrendezésével
![Page 22: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/22.jpg)
Disopyramide királis elválasztása
A két szelektor azonos fokban, de más elrendeződésben metilezett β-CD.
![Page 23: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/23.jpg)
METOPROLOL ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA -PhoCD-val
pH függés
Oszlop: 37 cm x 0,05 mm
Puffer: 100 mM foszfát
Szelektor: 15 mM -PhoCD
Feszültség: 25 kV
Hőm.: 20C
![Page 24: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/24.jpg)
METOPROLOL ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA -PhoCD-val
szelektor koncentráció függés
Oszlop: 37 cm x 0,05 mm
Puffer: 100 mM foszfátpH: 6,8Szelektor: -PhoCDFeszültség: 25 kVHőm.: 20C
![Page 25: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/25.jpg)
METOPROLOL ENANTIOMEREK ELVÁLASZTÁSA -PhoCD-val
metanol tartalom függés
Oszlop: 37 cm x 0,05 mmPuffer: 100 mM foszfátpH: 4,9Szelektor: 15 Mm -PhoCDFeszültség: 25 kVHőm.: 20C
![Page 26: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/26.jpg)
METOPROLOL GYŰRŰIZOMEREK ELVÁLASZTÁSA
Oszlop: 37 cm x 0,05 mm
Puffer: 100 mM foszfátpH: 4,9Szelektor: 15 Mm -CMCDFeszültség: 25 kV
Hőm.: 20C
![Page 27: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/27.jpg)
Az ionizálható CD-k ionizáltságuktól függően változtathatják szelektivitásukat
![Page 28: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/28.jpg)
Single-isomeric octa(6-O-sulfo)-γ-cyclodextrin szelektor
W.Zhu,G.Vigh, J.Chromatogr.A 987 (2003) 459–466
![Page 29: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/30.jpg)
Elválasztás singleisomeric CD additivvel
![Page 31: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/31.jpg)
Piretroid savak elválasztása
![Page 32: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/32.jpg)
Semleges enantiomerek elválasztása β-PMMACD szelektorral
![Page 33: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/33.jpg)
Néha a pozitív szelektorral is lehet pozitív enantiomereket elválasztani
![Page 34: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/34.jpg)
Többszörös pozitív töltetű szelektorok az EOF megfordulását eredményezhetik
A szelektor feltapad az oszlop falára, ezért az pozitív töltetű lesz.
![Page 35: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/35.jpg)
Királis elválasztás β-HDMACD szelektorral
Már 0,5 mMol szelektor elég az alapvonal elválasztáshoz.EOF fordított
![Page 36: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/36.jpg)
Single isomer CD szelektor
A hétszeri pozitív töltés miatt az EOF fordított
![Page 37: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/37.jpg)
Duál szelektor rendszerek
N. Matthijs etal., Analytica Chimica Acta525 (2004) 247.
![Page 38: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/38.jpg)
Duál CD szelektor CE-ben
min2 4 6 8 10 12 14
mAU
-20
-10
0
10
20
30
min2 4 6 8 10 12 14
mAU
-20
-10
0
10
20
30
min2 4 6 8 10 12 14
mAU
-20
-10
0
10
20
30
min 5 10 15 20 25
mAU
-10 -5 0 5
10 15 20
50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0
+ 1 mM MACD50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0
50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0
+ 10 mM PMMACD
50 mM acetic acid / TRIS; pH 5.0 + 1 mM MACD + 10 mM PMMACD
Kass : 100 – 370 M-1
Kass : 1.3 – 70 M-1
mecoprop, 2,4-DP, 3ClPPA
Fenoprop
4MePPA
PPA
R. Iványi et al.
![Page 39: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/39.jpg)
Két CD kombinációja hatásos szelektor
M. Beofur, J. Sep. Sci. 28 (2005) 529
![Page 40: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/40.jpg)
Migrációs sorrend a szelektor ionizáltságától függően
![Page 41: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/41.jpg)
Tocainide királis elválasztásai
γ-PhoCD fordított migrációs sorrend mint TRIMEB
![Page 42: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/42.jpg)
DDT és metabolitjainak királis CE analízise
![Page 43: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/43.jpg)
CE-ben használt makrociklusos antibiotikum CMA
T.J. Ward et al. J. Chromatogr. A 606 (2001) 73.
![Page 44: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/44.jpg)
Macrociklusos antibiotikum CMA-k
![Page 45: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/45.jpg)
Az antibiotikumok intenzív UV adszorpciója zavarhat
![Page 46: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/46.jpg)
Ellenáramú, részben feltöltött ( partially filling) technika
Nincs EOF (borított oszlop).Amire a minta a detektor az ablakhoz ér addigra onnan az UV aktív szelektor már távozik.
![Page 47: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/47.jpg)
Vancomicine szelektor részben feltöltött technikával
![Page 48: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/48.jpg)
![Page 49: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/49.jpg)
![Page 50: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/51.jpg)
Királ CE celluláz fehérje szelektorral
A fehérje szelektorok jobbak CMA-ként mint CSP-ként, mert az oldott állapot miatt gyorsabb az anyagátadás
![Page 52: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/52.jpg)
Királis CE epesav szelektorral
![Page 53: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/53.jpg)
Optimalizálás a királis CE-ben
![Page 54: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/54.jpg)
Királis CE módszer fejlesztés
![Page 55: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/55.jpg)
Chipek, mint kromatográfiás oszlopok
Mars szondán használt elektrokinetikus kromatográf
EKC
![Page 56: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/56.jpg)
CEC alapjai
Nyomás nélküli, EOF gerjesztette áramlás
![Page 57: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/57.jpg)
CEC oszlop vázlata
A töltet 1µm átmérőjű is lehet.
![Page 58: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/58.jpg)
CEC előnyei
![Page 59: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/59.jpg)
![Page 60: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/60.jpg)
Avidinnel borított CEC
Z. Liu et al. Electrophoresis 23 (2002) 2973
![Page 61: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/61.jpg)
![Page 62: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/62.jpg)
Nem vizes közegű királis CEC
A monolit CSP szelektora
![Page 63: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/63.jpg)
Királ CEC monolit CD alapú CSP-vel
J.Kang etal. Electrophoresis 23 (2002) 1116.
![Page 64: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/64.jpg)
Királ CEC monolit oszlopon
Ionpár kulcskölcsönhatások, nem vizes közeg
![Page 65: Királis elválasztás kapilláris elektroforézissel](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022062423/56814e95550346895dbc3d84/html5/thumbnails/65.jpg)
Üres cső CEC