Kandungan fenol, komponen fitokimia dan aktivitas ... · Pembacaan IC50 dengan Elisa reader e. Uji...

LAMPIRAN

Lampiran 1. Dokumentasi Penelitian

a. Preparasi sampel

Persiapan alat dan bahan

Pemotongan bahan

b. Analisis proksimat

Penimbangan sampel Analisis kadar lemak

Analisis kadar protein Analisis abu tak larut asam

c. Uji total fenol

Pengujian Total Fenol

d. Uji aktivitas antioksidan

Pemipetan

Sampel tanpa DPPH

Sampel ditambah DPPH

Pembacaan IC50 dengan Elisa

reader

e. Uji fitokimia

Tanin

Alkaloid

Fenol Hidrokuinon

Flavonoid

Saponin

Steroid dan Triterpenoid

Lampiran 2. Perhitungan Analisis Proksimat dan Abu Tak larut Asam

a. Kadar air

Sampel ulangan A (g) B (g) C (g) Kadar air (%) Rata-

rata

Enhalus

acoroides

1 5,30 19,75 20,58 84,34 84,38

2 5,20 18,34 19,15 84,42

Keterangan :

A = bobot sampel awal (g)

B = bobot cawan kosong (g)

b. Kadar abu

Sampel Ulangan A (g) B (g) C (g) Kadar abu (%) Rata-rata

Enhalus

acoroides

1 5,30 19,75 19,83 1,51 2,10

2 5,20 18,34 18,48 2,69

Keterangan :

A = bobot sampel (g)


C = bobot sampel + cawan setelah ditanur (g)

c. Kadar protein

Sampel Ulangan bobot

sampel (g) V HCl (mL) % N

Kadar

protein (%)

rata-

rata

Enhalus

acoroides

1 1,42 0,20 0,22637 1,25 1,1291

2 1,45 0,15 0,13495 0,92

Keterangan :

V blanko = 0 mL FP = 10 Mr HCl = 14.007

N HCl = 0.1002 FK = 6.25

d. Kadar lemak

sampel Ulangan W1 (g) W2 (g) W3 (g) Kadar

lemak (%)

Rata-rata

(%)

Enhalus

acoroides

1 5,12 74,47 74,48 0,19 0,88

2 5,12 77,71 77,63 1,56

Keterangan :

Wo = bobot sampel (g)

W2 = bobot sampel + labu setelah dioven (g)

W1 = bobot labu lemak kosong (g)

e. Kadar abu tidak larut asam

sampel Ulangan A (g) B (g) C (g) Kadar abu

TLA (%) rata-rata

Enhalus

acoroides

1 5 23,99 23,99 0 0,1

2 5 23,99 24,00 0,2

Keterangan :

A = bobot sampel (g)


C = bobot sampel + cawan setelah ditanur (g)

f. Kadar karbohidrat (by difference)

% Kadar karbohidrat = 100 % - (kadar air + kadar abu + protein + lemak)

= 100 % - (84,38% + 2,10% + 1,07% + 0,88%)

= 11,57%

Lampiran 3. Perhitungan Kadar Serat Pangan

a. Kadar serat pangan tak larut

Sampel A B C D E IDF (%) Rata-rata(%)

Enhalus

acoroides 0.3654 0.7501 0.7915 15.9931 16.0057 6.8966 6,7335

0.4916 0.6969 0.7461 18.6693 18.6826 6.5704

Blanko 0,6954 0,7021 15,2121 15,2153 0,0035

0,0036 0,7236 0,7301 16,9415 16,9443 0,0037

Keterangan : A = Berat sampel (g)

B = Berat kertas saring kosong (g)

C = Berat kertas saring + residu setelah dioven (g)

D = Berat cawan porselen kosong (g)

E = Berat cawan porselen + abu setelah ditanur (g)

b. Kadar serat pangan larut

Nama

Sampel A B C D E

SDF

(mg/100

g)

Rata-rata

(mg/100

g)

Enhalus

acoroides

0,3654 0.7611 0.8023 17.2181 17.2270 7.9912 7,9318

0,4916 0.7502 0.8019 16.0022 16.0121 7.8723

Blanko 0,6968 0,7011 16,9565 16,9581 0,0027

0,0031 0,7012 0,7066 18,1144 18,1163 0,0035

Keterangan : A = Berat sampel (g)

B = Berat kertas saring kosong (g)

C = Berat kertas saring + residu setelah dioven (g)

D = Berat cawan porselen kosong (g)

E = Berat cawan porselen + abu setelah ditanur (g)

c. Kadar serat pangan total

Kadar serat pangan total = Kadar IDF rata-rata + kadar SDF rata-rata

= 6,73 mg/100 g + 7,93 mg/100 g

= 14,67 mg/100 g

Lampiran 4. Perhitungan Rendemen Ekstrak E. acoroides

Pelarut Ulangan A (g) B (g) C (g) Rendemen

(%)

Rata-rata

(%)

Metanol 1 25 37,0050 38,4920 59,480 6,14

2 25 37,1538 38,7371 63,332

Etil

Asetat

1 25 37,1041 37,2761 0,6880 0,41

2 25 38,6243 38,6557 0,1256

n-

heksana

1 25 37,6919 37,7238 0,1276 0,09

2 25 36,8491 36,8627 0,0054

Keterangan :

A = bobot awal sampel (g)

B = bobot botol kosong (g)

C = bobot sampel+botol setelah ekstraksi (g)

a. Metanol

b. Etil Asetat

c. N-heksana

Lampiran 4a. Analisis Ragam Rendemen Ekstrak E. acoroides

ANOVA

Rendemen

Sum of

Squares Df Mean Square F Sig.

Between

Groups 46,383 2 23,191 296,039 0,000

Within Groups 0,235 3 0,078

Total 46,618 5

Lampiran 4b. Uji Lanjut Duncan Rendemen Ekstrak E. acoroides

Duncan

Pelarut

N

Subset for alpha = .05

1 2

N-heksana 2 0,091000

Etil asetat 2 0,406800

Metanol 2 6,140600

Sig. 0,341 1,000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2,000

Lampiran 5. Perhitungan Total Fenol Ekstrak E. acoroides

a. Standar asam galat

Konsentrasi

(ppm) Absorban

0 0,000

10 0,083

20 0,185

30 0,287

40 0,402

50 0,498

60 0,584

70 0,686

Grafik standar asam galat

b. Total Fenol

Sampel

bobot awal

(g) A

VP

(ml)

Bobot ekstrak

awal (g) X

Total fenol

(mg/ml)

Total fenol

(mg

GAE/1000 g)

m1 0.0084 0.381 2 1.487 39.05465 0.553088 553.09

m2 0.0088 0.384 2 1.487 39.35604 0.532022 532.02

e1 0.0031 0.149 2 0.173 15.74744 0.070305 70.30

e2 0.0029 0.123 2 0.173 13.13542 0.062688 62.69

h1 0.0089 0.097 2 0.0319 10.52341 0.003017 3.02

h2 0.009 0.09 2 0.0319 9.820173 0.002785 2.78 Keterangan : A = nilai absorbansi (Y)

VP = volume pengenceran

- Perhitungan X (ppm) ekstrak metanol (ulangan 1)

Y = A + BX

0,381 = - 0,00775 + 0,009954 X

X = 39,05 ppm

- Perhitungan X (ppm) ekstrak metanol (ulangan 2)

Y = A + BX

0,384 = - 0,00775 + 0,009954 X

X = 39,35 ppm

- Perhitungan X (ppm) ekstrak etil asetat (ulangan 1)

Y = A + BX

0,149 = - 0,00775 + 0,009954 X

X = 15,74 ppm

- Perhitungan X (ppm) ekstrak etil asetat (ulangan 2)

Y = A + BX

0,123 = - 0,00775 + 0,009954 X

X = 13,13 ppm

- Perhitungan X (ppm) ekstrak n-heksana (ulangan 1)

Y = A + BX

0,097 = - 0,00775 + 0,009954 X

X = 10,52 ppm

- Perhitungan X (ppm) ekstrak n-heksana (ulangan 1)

Y = A + BX

0,09 = - 0,00775 + 0,009954 X

X = 9,82 ppm

- Perhitungan total fenol ekstrak metanol

- Perhitungan total fenol ekstrak etil asetat

- Perhitungan total fenol ekstrak n-heksana

Lampiran 5a. Analisis Ragam Total Fenol E. acoroides

ANOVA

Fenol

Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Between

Groups 347935.386 2 173967.693 2079.887 .000

Within Groups 250.929 3 83.643

Total 348186.315 5

Lampiran 5b. Uji Lanjut Duncan Total Fenol E. acoroides

Duncan

Pelarut N Subset for alpha = .05

1 2 3

n-heksana 2 2.901032

etil asetat 2 66.496183

Methanol 2 542.555164

Sig. 1.000 1.000 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2.000.

Lampiran 6. Perhitungan Pengenceran DPPH, BHT dan Ekstrak E.

acoroides

a. DPPH 0,00013 M sebanyak 25 ml (Mr = 394 g/mol)

DPPH sebanyak 1, 3 g ditambahkan etanol sampai 25 ml

b. BHT 1000 ppm sebanyak 1 ml

BHT sebanyak 1 mg ditambahkan etanol sampai 1 ml

c. Larutan ekstrak

Ekstrak sebanyak 1 mg ditambahkan etanol sampai 1 ml

Pelarut Jumlah Ditambahkan Konsentrasi

Metanol

1 µl ekstrak 1000 ppm - 1000 ppm

1 µl ekstrak 1000 ppm 1 µl etanol 500 ppm



1 µl ekstrak 125 ppm 1 µl etanol 62,5 ppm

1 µl ekstrak 62,5 ppm 1 µl etanol 31,25 ppm




Etil

Asetat

1 µl ekstrak 1000 ppm - 1000 ppm









N-heksana

1 µl ekstrak 1000 ppm 1000 ppm








Lampiran 7. Perhitungan persen inhibisi dan penentuan IC50

Tabel 4. Uji aktivitas antioksidan BHT

Sampel Konsentrasi dan Inhibisi (%)

IC50

(ppm)

BHT 15,63 ppm 7,82 ppm 3,90 ppm 1,95 ppm 0,98 ppm 0,49 ppm

15,92 52,83 41,04 25,39 15,87 8,62 3,85

Tabel 5. Uji aktivitas antioksidan ekstrak kasar metanol

Sampel Konsentrasi dan Inhibisi (%) IC50

(ppm)

Metanol 500 ppm 250 ppm 125 ppm 62,5 ppm 31,25 ppm 115,79

18 80,3622 75,8503 51,7559 30,3419 20,6753

Tabel 6. Uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat

Sampel Konsentrasi dan Inhibisi (%) IC50

(%)

500 ppm 250 ppm 125 ppm 62,5 ppm 31,25 ppm

153,398

4 Etil asetat 64,2857 63,8322 50,0000 32,1996 23,0159

Tabel 7. Uji aktivitas antioksidan ekstrak n-heksana

Sampel

Konsentrasi dan Inhibisi (%) IC50 (%)

N-

heksana

900 ppm 850 ppm 800 ppm 750

ppm

700

ppm

650

ppm 937,614

6 51,6107 39,9367 24,8179

17,5843 11,505

7

6,0786

a. BHT Konsentrasi

(ppm)

abs

BHT

abs

blanko

Inhibisi

(%) Persamaan garis IC50 (ppm)

15,6250 0,208

0,441

52,8344

y = 14,497 ln(x)

+ 9,8741

15,9248

7,8125 0,260 41,0430

3,9062 0,329 25,3968

1,9531 0,371 15,8730

0,9765 0,403 8,6167

0,4883 0,424 3,8548

1) Persen inhibisi

2) IC50

y = 14,497 ln(x) + 9,8741

50 = 14,497 ln(x) + 9,8741

40,1259 = 14,497 ln(x)

ln (x) = 2,7679

x =15,9248 ppm

b. Contoh perhitungan ekstrak metanol

c. Contoh perhitungan ekstrak etil asetat

d. Contoh perhitungan n-heksana

Gambar 9 Grafik hubungan konsentrasi BHT dengan persen inhibisinya

Lampiran 7a. Analisis Ragam Aktivitas Antioksidan E. acoroides

ANOVA

IC50

Sum of

Squares Df Mean Square F Sig.

Between

Groups 861201,423 2 430600,711 107,724 0,002

Within Groups 11991,738 3 3997,246

Total 873193,161 5

Lampiran 7b. Uji Lanjut Duncan Aktivitas Antioksidan E. acoroides

Duncan

Pelarut N Subset for alpha = .05

1 2

Methanol 2 115,791803

etil asetat 2 153,398340

n-heksana 2 937,614609

Sig. 0,594 1,000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2,000

Kandungan fenol, komponen fitokimia dan aktivitas ... · Pembacaan IC50 dengan Elisa reader e. Uji...

Documents

Transcript of Kandungan fenol, komponen fitokimia dan aktivitas ... · Pembacaan IC50 dengan Elisa reader e. Uji...