Ekstraksi Kulit Kacang

Kulit kacang (75 g) dihilangkan lemaknya dengan heksana menggunakan ekstraksi soxhlet. Residu udara kering. Kulit dihilangkan lemaknya (60 g) diekstraksi tiga kali dengan 1 L dari 20% (v / v) metanol berair. Setelah masing-masing ekstraksi suspensi disaring setelah itu pelet menjadi sasaran ekstraksi berikutnya. Fraksi ketiga lalu dicampur dengan metanol 20 % (v/v), dipekatkan dengan penguapan dalam vakum dan lyophilised. Selama ekstraksi dan penguapan, cahaya dikeluarkan sebanyak mungkin dengan menggunakan tenda dan kertas timah. Partisi pelarut digunakan untuk pemurnian lebih lanjut. Ekstrak lyophilised dimasukkan ke dalam corong pemisah. Lalu 500 mL H2O dan 500 mL etil asetat ditambahkan. Hal ini ditempatkan dalam penangas ultrasonik selama 10-15 menit pada suhu kamar. Setelah pengadukan yang kuat, fase H2O dan fase etil asetat dikumpulkan secara terpisah. fase H2O dimasukkan kembali ke dalam corong dan prosedur partisi pelarut diulang dua kali yang mengakibatkan tiga fase etil asetat dan satu fase H2O. Fase etil asetat digabungkan dan kemudian diekstraksi dengan H2O (1: 1, v / v) dua kali. Fase etil asetat adalah vakum menguap, dilarutkan dalam H2O dan lyophilised.

Pemisahan Asam Galat dari biji anggur

Procyanidins biji anggur dilarutkan dalam buffer sodium asetat konsentrasi 0,1 M dan pH 0,5 lalu di inkubasi. Procyanidins dipisahkan dari asam galat dngan ekstraksi fase padat. Procyanidin selanjutnya di eluasi dengan metanol, evaporasi vakum dan dilarukan dengan air dan lyophilized

Fase normal HPLC

Fraksinasi dengan DP dilakukan pada kolom PREP-SIL 30 mm ID 250 mm dengan ukuran partikel 10 lm (GL ilmu Inc, Tokyo, Jepang). Bejana air dilengkapi dengan manajer sampel 2767 dan sebuah modul gradien biner 2525 serta sebuah detektor fotodioda array (PDA) 2996 dan manajer fraksi UV digunakan. Fase gerak biner terdiri dari (A) heksana dan (B) aseton. Elusi dilakukan sebagai berikut: 0-30 menit, 40-60% B; 30-50 menit, isokratik pada 60% B; 50-70 menit, 60-75% B, diikuti dengan tahap pencucian pada 98% B selama 3 menit, dan rekondisi kolom. Laju aliran adalah 27.22 mL / menit dan PDA spektrum 210-300 nm dicatat. Dalam lari, 10 mL (70 mg / mL dalam aseton / heksana / etanol (7: 3: 2)) ekstrak kulit kacang atau ekstrak biji anggur tanase diobati diterapkan. Fraksi yang mengandung dimer dikumpulkan 22,3-28,2 menit untuk ekstrak kulit kacang dan 28,2-38,1 menit untuk ekstrak biji anggur. Fraksi diuapkan di bawah vakum dan lyophilised.

Fase balik HPLCKolom XterraRP 50 mm ID x 100mm dengan ukuran partikel 5 m digunakan dengan laju alir 82.7ml/menit. Fraksi yang mengandung dimer kurang lebih 70 mg dianalisis dengan NP-HPLC. Sample dilarutkan dengan methanol menggunakan ultrasonic jika dibutuhkan dan difiltrasi dengan Spartan 0.45 m. Fase biner terdiri dari (A) H20 + 0.1 % (v/v) asam asetat dan (B) asetonitril + 0.1 % (v/v) asam asetat. Elusi untuk pemisahan dan isolasi dimer kulit kacang dilajutkan dengan isokratik 3 menit dalam 0% (B). 3-23 menit (B) secara linier 0-22%, 23-28 menit (B). secara linier 22-89% diikuti dengan pengaturan kembali kolomnya. Elusi untuk dimer biji anggur dilakukan dengan cara sebagai berikut: pertama isokratik 10 menit dalam 10% (B), 10-23 menit. (B): secara linier 10-50%, 23-27 menit. (B): secara linier 50-95 % diikuti dengan pengaturan kembali kolomnya. Spectra PDA direkam dari panjang gelombang 210-300nm. Fraksi yang diperoleh untuk kulit kacang : IP (15.716.6 min), IIP (17.618.7 min), IIIP (18.719.6 min), IVP (19.620.5 min), VP (21.222.0 min) and VIP (22.022.8 min).

Fraksi yang diperoleh untuk biji anggur : IG (10.012.2 min), IIG (13.013.7 min), IIIG (13.914.2 min), IVG (14.815.5 min), VG (15.715.9 min), VIG (16.116.3 min), VIIG (16.517.0 min) and VIIIG (17.417.8 min).Fraksi kemudian di evaporasi vakum. Fraksi dilarutkan dalam methanol untuk analisis selanjutnya. Fraksi 4 anggur mengandung 2 dimer proantosianidin, kemudian dimurnikan dengan alat Atlantis DC 18 (19mm ID x 100mm, ukuran partikel 5 m). fraksi sekitar 16 mg dilarutkan dalam 10ml 50% methanol berair, difiltrasi dengan Spartan 0.45m dan di injeksi. Laju alir 70.1 ml/menit. Fase biner terdiri dari (A) H20 + 0.1 % (v/v) asam asetat dan (B) metanol + 0.1 % (v/v) asam asetat. Dilanjutkan elusi 0-16.7 menit. (B): secara linier 5-45 %, 16.7-20 menit. (B): secara linier 45-60 %, 20-23.3 menit, isokratik pada 60% (B) diikuti dengan pengaturan kembali kolomnya. Fraksi yang diperoleh pada menit 9.5-10.5 menit (fraksi anggur I), dari 10.8 -12 menit (fraksi anggur II).

LCQ klasik digunakan bersama dengan ESI dikontrol dengan software Xcallibur. Detector dikombinasikan dengan system HPLC yang disebut splitter. Pengukuran dilakuakn dengan mode negative dengan semprot ion, tegangan 4.5 kV, kabel tegangan -5 volt dan suhu 2170C. penscan-an diatur dari m/z 100-2000.HASIL % RENDEMEN