Introduction à l’anatomie-pathologique

Pr Benoît Terris

Service de Pathologie, Hôpital Cochin, Paris

L’Anatomie-Pathologique – L’Anatomie et Cytologie Pahologiques- Pathologie – L’Anapath ! …

• Discipline médicale

• Interface de la clinique et de la biologie

• Les missions sont multiples:

• Diagnostic sur des prélèvements cellulaires ou tissulaires (microscopie, IHC, biologie moléculaire…)

• Éléments pronostiques

• Guider les choix thérapeutiques

• Actions de dépistage

• Mémoire de la pathologie

• Participer aux études épidémiologiques

• ….

CH Colmar et Argenteuil

Introduction à l’anatomie pathologique

• L’anatomie pathologique est l’étude des cellules et des tissus pathologiques (« anormaux »)

• Fait intervenir le raisonnement médical basé sur l’interprétation de paramètres cliniques, biologiques et d’imagerie

• Pour la pratiquer : connaître l’anatomie, l’histologie « normale » et la clinique

Introduction à l’anatomie pathologique

Tissu Epithélial

• Glandulaire :• Poumon

• Estomac, grêle, colon, foie, pancréas, sein, prostate, endocol utérin …

• Malpighien :• Peau, ORL, œsophage, anus, exocol

utérin …

• Para-malpighien• Vessie, uretères

Tissu non Epithélial

• Tissu conjonctif

• Tissu squelettique

• Tissu musculaire

• Populations cellulaires sanguines

• Tissu nerveux

Introduction à l’anatomie pathologique

• L’organisation et le type des cellules constituant le tissu permet de prédire la fonction et de reconnaitre les lésions.

• Morphologie d’une cellule indicatrice de sa fonction :• Persistance de cette fonction dans un processus tumoral permet de typer ce dernier

Introduction à l’anatomie pathologiquePorter un diagnostic

• Domaine d’application:• Cancérologie +++

• Rôle diagnostique et pronostique

• Distinction entre T bénigne et maligne

• Pathologie:• Inflammatoire

• Infectieuse

• Métabolique

• Malformative

• Des greffes

• Basé sur des prélèvements :

• Biopsies (endoscopie, stéréotaxique, sous écho ou TDM…)

• Pièces d’exérèse chirurgicale :• examen standard

• Extemporané

• Cytologie

• Autopsie (évaluation qualité des soins)

• CR = valeur médico-légale

Introduction à l’anatomie pathologiquePorter un diagnostic

Morphologie Examens « complémentaires »

Macroscopie

Microscopie optique : - Cytologie

- Histologie (technique standard)

Colorations spécialesImmunohistochimieHybridation in situ

Biologie moléculaire (mutation, amplification, translocation …)

Microscopie électronique

Introduction à l’anatomie pathologiqueExamen extemporané

• Examen anatomopathologique réalisé pendant une intervention et dont le but est d’adapter le geste opératoire au diagnostic

• Trois critères :• rapidité: < 30 min• fiabilité : modification du geste opératoire• sécurité : ne pas compromettre le diagnostic définitif

• Le prélèvement doit être adressé immédiatement, à l’état frais, sans fixateur ni sérum physiologique.

• examen extemporané est :• effectué sur un tissu frais durci par congélation (-20 °C)• coupé avec un microtome à congélation (microtome

dans une enceinte réfrigérée) et coloration rapide de la coupe.

• Indications : • établir un diagnostic modifiant le geste opératoire• déterminer si le prélèvement est suffisant pour faire un

diagnostic• confirmer la qualité des limites d’exérèse

• C’est une réponse provisoire• Réponse définitive apportée du fragment examiné en

extemporané après fixation et technique standard

Introduction à l’anatomie pathologiqueExamen histopathologique standard-1-

• Comporte différentes étapes :• Enregistrement du prélèvement

• Macroscopie :• Identifier et décrire les zones pathologiques

• Macroscopie à l’état frais :• Prélèvements microbiologiques

• Examen extemporané

• Prélèvements cryopréservés :

• Conservation acides nucléiques, protéines …

• Fixation des biopsies et pièces opératoires :• Plonger dans 15 fois son volume de fixateur (formol

tamponné à 10%, Toxicité du formol)

• (Ne pas mettre dans eau, alcool, serum phy …)

• Empêcher la putréfaction et la lyse cellulaire et tissulaire

• Entre 12 et 36H

• Fixation des sites antigéniques

• Macroscopie après fixation :• Effectuer prélèvements ciblés sur zones

pathologiques (tumeur, autres )

• Limites de résection

• Ganglion du curage

• Tissu sain adjacent

Introduction à l’anatomie pathologiqueExamen histopathologique standard -2-

• Comporte différentes étapes :• Inclusion en paraffine

• Coupe du bloc inclus en paraffine

• Coloration :

• coloration à l'hématoxyline et à l'éosine (souvent désignée coloration HE)

• technique standard de coloration d'usage en pathologie

• Hématoxyline = colorant cationique (ou basique), qui a une affinité pour les éléments cellulaires chargés négativement (= anioniques ou acides) dits basophiles. Il colore notamment les noyaux en bleu/violet, en se fixant sur les acides nucléiques

• Eosine = colorant anionique (ou acide) a une affinité pour les éléments cellulaires chargés positivement (= cationiques ou basiques) dits éosinophiles. Il colore le cytoplasme en rose

• Examen microscopique• Rédaction du compte-rendu

• Archivage des lames, des blocs d’inclusion et du double du compte-rendu

Introduction à l’anatomie pathologiqueCytologie

• Techniquement plus simple:• Fixation instantanée• Pas d’inclusion en paraffine, mais dépôt sur lame :

• rapidité (dg en un jour)• Coloration• Examen • Faible coût (dépistage)• Peu invasif

• Inconvénients :• Pas d’architecture tissulaire• Peu de techniques complémentaires possibles• Pas une preuve absolue en cancérologie

• Applications :• Dépistage (frottis du col utérin) :

• coloration de Papanicolaou• Liquides organiques : extension de cancers (ascite,

plèvre, urines …)• Ponction diagnostique à l’aiguille fine des tumeurs solides :

• Sein• Echoendoscopie (pancréas)

Introduction à l’anatomie pathologiqueImmunohistochimie (IHC)

• Technique qui permet de visualiser, in situ, une protéine, en se basant sur une réaction Ag-Ac dans le but d’aider à établir un diagnostic anatomo-pathologique

• Mises en évidence d’antigènes, sur des coupes tissulaires, à l’aide d’Ac spécifiques, révélés par une technique d’immunoperoxydase indirecte

• IHC permet :• Identifier et classer une tumeur en déterminant sa nature :

• Carcinome, lymphome, mélanome, tumeurs endocrines …

• Identifier des facteurs pronostiques

• Marqueurs de prolifération

• Identifier des marqueurs prédictifs :

• Réponse à un traitement

• Récepteurs hormonaux et HER2 dans le cancer du sein

• Thérapies ciblées (chimio dans cancer du poumon)

• Signes d’infection virale (CMV, HSV…)

Introduction à l’anatomie pathologiqueHybridation in situ

• Mise en évidence de séquences d’ARN ou d’ADN sur coupes tissulaires, grâce à des sondes d’acides nucléiques complémentaires couplées à une enzyme (sondes froides) ou à un fluorochrome (sondes fluorescentes) :

• Amplifications, délétions, translocations de gènes

Introduction à l’anatomie pathologiqueBiologie moléculaire appliquée aux tissus

• Nouveaux tests non morphologiques : caractérisés par la mise en évidence d’altérations somatiques (acquises) de l’ADN au niveau des cellules tumorales

• Majorité de ces nouveaux tests sont effectués à partir d’acides nucléiques extraits à partir de blocs fixés en formol et inclus en paraffine en utilisant des techniques de PCR permettant :

• Identifier et classer une tumeur en mettant en évidence une anomalie moléculaire caractéristique

• sarcomes, tumeurs pédiatriques

• Identifier des marqueurs de réponse à un traitement

• EGFR dans le cancer du poumon (inhibiteurs de EGFR)

• K-ras dans le cancer du côlon et du poumon (inhibiteurs de EGFR)

• b-raf dans le cancer du côlon et les mélanomes

• Développement de la médecine personnalisée : introduction des thérapies ciblées (cancérologie)

• Identification de marqueurs biologiques ayant une valeur nosologique, pronostique ou prédictive fait désormais partie intégrante de l’activité du pathologiste

Introduction à l’anatomie pathologiqueConclusion

• Interprétation des lésions élémentaires macroscopiques et microscopiques, en intégrant les données des examens cliniques et d’imagerie

• Dans la grande majorité, les analyses basées sur des techniques standards en histologie (coloration HE) ou cytologie (Papanicolaou, MGG…) suffisent

• Des techniques ou examens complémentaires sont parfois nécessaires (pathologie tumorale ou infectieuse) :• Immunohistochimie

• Etudes de biologie moléculaire :

• Diagnostic + pronostic + théranostic