IMPORTANCIA DEL ANÁLISIS POR CITOMETRÍA DE … · diferenciación y evolución de los linfocitos...
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Los Linfocitos T doblemente negativos (LTDN) son células post-tímicas maduras que se caracterizan por expresar el receptor CD3/TCRα/β clonal u oligoclonal, el cual reconoce antígenos peptídicos, que carecen de marcadores de superficie CD4/CD8. Dentro de sus funciones conocidas, se puede citar la inmunoregulación como inductores de tolerancia inmune, sin asociación de restricción con el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH), además de inhibir la actividad citotóxica de LTCD8+ autoreactivos y de inducir apoptosis. Se ha demostrado que en pacientes con enfermedades autoinmunes existe una alteración funcional o cuantitativa de las células encargadas de regular la tolerancia que incluye los LTDN. IMPORTANCIA DEL ANÁLISIS POR CITOMETRÍA DE FLUJO DE LOS LINFOCITOS T DOBLEMENTE NEGATIVOS (LT αβ CD3+CD4-CD8-) Los linfocitos T son células linfoides relacionadas con lainmunidad mediada por células. Sus precursores ingresan al timo, y dicho órgano les permite su maduración, representada por la adquisición de diferentes sustancias proteicas que en el futuro van actuar como receptores. Estos se ponen en contacto con diferentes antígenos o microorganismos cuando abandonan el órgano, y de esta forma quedan capacitados para iniciar su respuesta específica de inmunidad. Se originan a partir de células precursoras linfoides que migran de la médula ósea al timo y sufren un proceso de diferenciación bajo la influencia de las hormonas tímicas. Se han descrito varias subpoblaciones en el timo durante el proceso de diferenciación y evolución de los linfocitos T; los linfocitos inmaduros (timocitos) van adquiriendo diferentes moléculas de superficie, según el estado evolutivo, que caracterizan las diferentes poblaciones linfocitarias. Se denomina a estas moléculas CD (cluster of differentiation). Intervienen, fundamentalmente, en las reacciones inmunes de tipo celular. La respuesta inmune específica que adquieren al madurar en el timo es específica y funcional. Sus membranas expresan diferentes antígenos específicos. Se producen diferentes tipos de linfocitos, denominados linfocitos T, con sus variedades de linfocitos CD4, CD8, CD9, CD10 y CD11, los cuales tienen diferentes funciones. Los Linfocitos T que son doblemente negativos (LTDN) corresponden aproximadamente al 1-3% de los LT totales en sangre periférica, los cuales de forma general se pueden clasificar en vírgenes y en aquellos que han experimentado contacto con antígenos. Desde la producción específica de citocinas, estas células pueden tener un fenotipo T helper 1 (Th1), T helper 2 (Th2) o T regulador (Tr). Utilidad Clínica Se puede afirmar que en pacientes con lupus eritematoso sistémico (LES), artritis reumatoidea juvenil y en enfermedad mixta del tejido conectivo, existe un incremento en la frecuencia de LTDN productores de interleucina-4 (IL-4) y de interferón-gamma (INF-γ); de igual forma, en el síndrome linfoproliferativo autoinmune (SLPA), inmodeficiencia primaria (IDP) asociada a disregulación inmunológica y mutaciones en el gen Fas (CD95), se puede observar un incremento en los LTDN superior al 1.5% del total de linfocitos o mayor al 2.5% de los linfocitos CD3+, en asociación con citopenias, esplenomegalia y linfoproliferación. La explicación de la elevación de los LTDN en estos pacientes puede estar relacionada con un mecanismo de compensación frente al defecto en apoptosis. Actualmente se carece de estudios que aclaren aspectos relacionados con la participación de estas células en otras patologías autoinmunes. Volumen 8 Número 2 (Abril – Junio de 2014)
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Los Linfocitos T doblemente negativos (LTDN) son células post-tímicas maduras que se caracterizan
por expresar el receptor CD3/TCRα/β clonal u oligoclonal, el cual reconoce antígenos peptídicos,
que carecen de marcadores de superficie CD4/CD8. Dentro de sus funciones conocidas, se puede
citar la inmunoregulación como inductores de tolerancia inmune, sin asociación de restricción con
el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH), además de inhibir la actividad citotóxica de
LTCD8+ autoreactivos y de inducir apoptosis. Se ha demostrado que en pacientes con
enfermedades autoinmunes existe una alteración funcional o cuantitativa de las células encargadas
de regular la tolerancia que incluye los LTDN.
IMPORTANCIA DEL ANÁLISIS POR CITOMETRÍA DE FLUJO DE LOS LINFOCITOS T DOBLEMENTE NEGATIVOS (LTαβ CD3+CD4-CD8-)
Los linfocitos T son células linfoides relacionadas con
lainmunidad mediada por células. Sus precursores ingresan
al timo, y dicho órgano les permite su maduración,
representada por la adquisición de diferentes sustancias
proteicas que en el futuro van actuar como receptores.
Estos se ponen en contacto con diferentes antígenos o
microorganismos cuando abandonan el órgano, y de esta
forma quedan capacitados para iniciar su respuesta
específica de inmunidad. Se originan a partir de células
precursoras linfoides que migran de la médula ósea al timo
y sufren un proceso de diferenciación bajo la influencia de
las hormonas tímicas. Se han descrito varias
subpoblaciones en el timo durante el proceso de
diferenciación y evolución de los linfocitos T; los linfocitos
inmaduros (timocitos) van adquiriendo diferentes moléculas
de superficie, según el estado evolutivo, que caracterizan
las diferentes poblaciones linfocitarias. Se denomina a
estas moléculas CD (cluster of differentiation). Intervienen,
fundamentalmente, en las reacciones inmunes de tipo
celular.
La respuesta inmune específica que adquieren al madurar
en el timo es específica y funcional. Sus membranas
expresan diferentes antígenos específicos. Se producen
diferentes tipos de linfocitos, denominados linfocitos T, con
sus variedades de linfocitos CD4, CD8, CD9, CD10 y CD11,
los cuales tienen diferentes funciones.
Los Linfocitos T que son doblemente negativos (LTDN)
corresponden aproximadamente al 1-3% de los LT totales
en sangre periférica, los cuales de forma general se pueden
clasificar en vírgenes y en aquellos que han experimentado
contacto con antígenos. Desde la producción específica de
citocinas, estas células pueden tener un fenotipo T helper 1
(Th1), T helper 2 (Th2) o T regulador (Tr).
Utilidad Clínica
Se puede afirmar que en pacientes con lupus eritematoso
sistémico (LES), artritis reumatoidea juvenil y en
enfermedad mixta del tejido conectivo, existe un
incremento en la frecuencia de LTDN productores de
interleucina-4 (IL-4) y de interferón-gamma (INF-γ); de igual
forma, en el síndrome linfoproliferativo autoinmune (SLPA),
inmodeficiencia primaria (IDP) asociada a disregulación
inmunológica y mutaciones en el gen Fas (CD95), se puede
observar un incremento en los LTDN superior al 1.5% del
total de linfocitos o mayor al 2.5% de los linfocitos CD3+,
en asociación con citopenias, esplenomegalia y
linfoproliferación. La explicación de la elevación de los
LTDN en estos pacientes puede estar relacionada con un
mecanismo de compensación frente al defecto en
apoptosis. Actualmente se carece de estudios que aclaren
aspectos relacionados con la participación de estas células
en otras patologías autoinmunes.
Volumen 8 Número 2 (Abril – Junio de 2014)
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Teniendo en cuenta lo anteriormente citado, la medida
porcentual o cuantitativa de LTDN por citometría de flujo se
convierte en una herramienta que permite el acercamiento
diagnóstico en el contexto de la autoinmunidad. Sin
embargo, es importante recalcar que, de acuerdo con
estudios realizados recientemente, los valores de esta
población celular no se modifican frente al tratamiento
instaurado.
A continuación se puede observar un gráfico de puntos
(Dispersograma) en donde es evidente el incremento de
LTDN en un paciente con autoinmunidad (Gráfico 1).
Gráfico 1. Dispersograma en donde se observa un
incremento en la población de LTDN (Ver flecha).
Es importante citar que los LTDN comparten marcadores
de superficie con los LTγδ, al ser las dos poblaciones de
células CD3+ y CD4/CD8 negativas. Sin embargo, la
diferencia está en la expresión de un TCR α/β en los LTDN
como ya se mencionó anteriormente; por lo tanto, para el
procesamiento de las muestras de sangre de los pacientes,
se puede tener en cuenta, de forma opcional, que si no se
dispone de un anticuerpo monoclonal anti-α/β que
discrimine la población, se puede estimar la población de
CD3+, CD4/CD8 negativos restando el promedio del
porcentaje de LTγδ, el cual en pacientes con SLPA es de
4,1% o menor del 10% en población sana, con lo cual
tendríamos una medida indirecta de los LTDN, que en
promedio resulta ser mayor o igual al 11% en un grupo de
pacientes con SLPA, de acuerdo a una serie de casos
reportados en la literatura científica. En la Tabla 1 seilustran
los valores de referencia de LTDN para dos grupos etáreos.
Conclusión: La cuantificación porcentual o absoluta de LTDN
por citometría de flujo se ha convertido en una herramienta
que apoya el diagnóstico de los pacientes con
manifestaciones clínicas de autoinmunidad.
Tabla 1. Tomado de: Worth A. y col. “Autoimmune
lymphoproliferative syndrome: molecular basis of disease
and clinical phenotype”. Brit J Hematol. 2006; 133:124-140.
Referencias complementarias:
1. Worth A., Thrasher AJ., Gaspar HB. “Autoimmune
lymphoproliferative syndrome: molecular basis of disease
and clinical phenotype”. Brit J Hematol. 2006; 133:124-140.
2. Hillhouse EE., Lesage S. “A comprehensive review of
the phenotype and function of antigen-specific
immunoregulatory double negative T cells”. J Autoimmun.
2013; 40:58-65.
3. Tarbox JA., Molly P., Topcagic N., Mackin C., Ben
Abdallah M., Baszis K., White AJ., French AR. & Cooper MA.
“Elevated Double Negative T Cells in Pediatric
Autoimmunity”. J Clin Immunol. 2014.
Grupo etáreo
LTDN valor absoluto
LTDN valor porcentual
2-18 años < 35 células/ul < 2%
19-70 años < 35 células/ul < 3%
