Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage...
-
Upload
hirokazu-suzuki -
Category
Documents
-
view
218 -
download
0
Transcript of Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage...
![Page 1: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/1.jpg)
����������� �� �������� ��� � ���� ���������������������� ��� ������ ��� ������� ������������� � �� ��� ��� �� �������������� ������� ������� �������� �������������
���� � �� ���� ����!� ���� " ����� #��$�� ���� %��& '�(��� )������& *�� %���� �
�� *�� %������
���������� � � �������� �� ��� �� �������� ���� � �� ��� �� ���� � ���� ��� ��� ���� !"� ����
#$! $%"#� &���� ��'(������ � )�� �������� * �� +����� � ���� ��� * ��,�� $$- !!!.� &���
�������� �� �� � ����� ������ �� ��� � � ����� ������� �� � �� �������� �� ���������� ��� � � �� ��! !�"�� �#$�% �&�$'���&���������&����(�)�
������
+�������� ������������� �++*�� ���� � ����������� ��� ������� ��� ���(,+ � ��� �������
����� � ��������� ���� ������ � ������� ��� �� ���� ������- *�� ���� ++*� �� ��$�����
���$��� � � ������������ ����� ��� .+�/ ����� ����� ��� ������� ���� �� ������� ���(
$���� �� �����- ���� �� ������$� ��� ��������� �������� ��� �� �/%+ ������ � ���� ���(
����� �������������� ��� ������ ��� ������� ������� �����- *�� ������� �� ��� ���������
�������� � � ��0'*&� �� ������� 12(�/ ������ ��� ���� �� ��� ������� � ��� ����� ����
��� �����(,+ � ��� 1� � �(����3�� ���� � ��� 0(������� ����� � ���������- *��� �� �� �����(
,+��������� 0(�������� 1� � �(�(��������������- 4� ��� $��� � ��� ����� ��� ��� ��5������ �
��� ������� �� ��� �� ������ �/%+ ��� ������ � ������������ ������- *�� �����(���� ���(
������ ����� � ��� ���� �� ��� ������� �� �������� ����� ����� ��������� ����� �� �� �� ��������
���� ��� ����� $������ �� � ++* ���� �������$�� �� ��� ���� �������� ���� ������ �������
$����������- ���������������� ������� ����� ���$���� ����� ��� ����$���� ������������ ��(
���� ���$���� ��� �������� � ���� �/%+ � ��� ������� ��0'*&- *�� ������� ��� ��� ��5����� �
��0'*& ����� �� ��������� �&&6&17 ��������� � ���� � ++*� �� ����� ��� ++*(������� ��������
��5�����- + ����������� ������ ��������� ��� ��0'*& �� ��� ������ � �����(,+�$�� ������
�������������� �.8+*� ����� ��� � ++*- *��� �� ����� �3���� �� ����� �� ���� ���� ������
������ �� �������� ��$����� ������ ��� ��������� $������ � ��� .+�/ �����-
"������� �������� ������� �����(,+��������� 0(�������� 1� � �(�(�������������� ����(
�������� ����� $���������� .+�/ �����-
����������
*�� �%�� �� ��%#+�,#��������� ��%� ���� ��� �%�
�$�� ��� �%�� �� ��� ������ � $����%��$ �� �%���
�� ���-�. ���%����- ��$� /��� ���$����%. �� $�����#
�%. �� - ���%�� % �$�� ����. ���� � ��� ������������ ��
���% �0%&� �� + ����. ����.�� 0%&� �� ���. ����).
$� ����� �1 ���� �� ���. ����). ���������� ���(�/
�� ���. �"""� 2�3�&� �� ���. ����. ����. ����). �����%�����
�4�- �� ���. �""!). 5� % ����� �67,� � �� ���. �����
6�� �� �� ���. �"" ). �� �����%��� �2�#8�� � �� ���.
�"" )� ,%����-� ��� � �$ � �� ���� �� �� ����� ��%� ��#
�� ��� ���/ ��%� %�/ ��$�% ����� ���9��: ��������) /���
��� ���� . ���� �� � �/� ��-�%� ����� ��� ��;������.
#<===6# �$���� �) �� #6�101# �$���� �). ��--�����- ���
���� � ���%��� � �$ ��$$�� ����� % -��� �2�#8�� �
�� 6� >��. ����)� *���. ���-%� � ����� �$�%� �� ����
� ������ �� ����� ���� ��?�� ��%� ���� ��� �� ��
��� �� �� � ��� @,<6 �$�%� �A&�$ �� ���. �����
2�#8�� � �� 6� >��. ����� 2�#8�� � �� ���. �"" )� *��
@,<6 �$�%�$� �� �� � % -� �$�%� �� � ������ ������
�� /� �����%� ����$��� ��� ��� ���� ��� � -���$�
��� /��� &���� �����) 9:. ""�9����
""� � ���� @%�&/�%% 8��%�����- >��
���B �������C(����D#���=�������������
![Page 2: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/2.jpg)
������� ���� !� �%��� -���� �� ���� �$�%�� <�/��� .
$��� �� ��� ������$��% �%�� �� ����� @,<6 �$�%� $�$#
�� � � ��� �� �� ���� $�����
,��������� ��%� ���� ��� �,,*�) ��%�3� �-���#
����?� ��% � ���� � �$ ��%#+�, �� ��� -%�����% $����� ��
���������� �� �%� � �$�� ��� �%� �� 5�/� ��%� #
���� �A&�$ �� ���. ����)� *��� � . $�� ,,*� /���
����� ��� ��% ���� �����?����. ��% ������ �����?����.
�� �-�������?���� /��� ������ �� ��% � ���� ��� ����
�%���� �� ��;������� ,%% �� ��� &��/�,,*� �$�$�� �
�� ��� @,<6 �$�%� �� �� �� �� ��� ���-� �3�� ����
���- ��� ��%��) ��� �� ���%�-������%%� ��� ��� � �$
���� @,<6$�$�� � �A&�$ �� ���. ����)� E�����. %% ��
����� ,,*� �� � �����?� ��-��� � ��;�����. #4�1A+#
�$���� �). �� ���� � �$ � �� ���� ��. /���� ���%� �������#
��%%� �� ���� �� ��� �����?� ���%���� �� ����% ,,* -����
�� ��-� ��$�%�-�#���� �� ��-� �2�3�&� �� ���. ����)�
E� �� ���$��� �� ���� ���� ��� �%�������� ���/���
��� �����?���� �� ���%�-������� �� @,<6 $�$�� �. /�
��� �������� �� ��� ,,* ������� �D�*� �������. ���
��-� � �) ����%��� �� ��� ������������ �� �%����� �2�3�&�
�� ���. ����). � ��������� /��� �/� $%���% �� ���
�����% - ���. /���� �� ��������%� �� ��� �� %�� ��%� ����
�� ���� � ������� 5�/� �� 0� � ������%� ��� ��� �� ���
�6A, �%����- �� �� ��� �3���� �� $%���%#+�,B����#
����� D#0#-%�������#�� � �#0#$%���%� ���� �� �� �1 ����
��� �2�D�*�) �� ���/�� ��� ���� ��3�$� ���%�����%�
��%�3�� ��� $%���%���� �� ��� �� � �#��� ���% - ��� ��
�����$%���%�%����� �� � ����� $�����$%���%�%��#
��� �D�*� �������. ��-� � �� 2�3�&� �� ���. ����)� ,�
2�D�*� �� ��� �%� �� ��%�3� ��� �����;���� $%���%#
���� �� ��� �� � �#��� ���% - ��� �� $�����$%���%�%�����
����� ��� ������ $%���%����) �� � ����� �%�����. ���
������ $%���%���� �� ����-�� �� �� ��%�3�� �� �
��3�$� ��� $�� 2�D�*�) ��� �� �������� � �$ 2�D�*�
�2�3�&� �� ���. ����)� *���. /� ���� ���& ��� �6A, �%����-
�� ��%*��' ����- ��$�%�-�#���� �� ��-�� E� ����� ��
$�� ���$���. ��/��� . /� ��%�� �� ����� 2�D�*�
�6A, �� $��� �� ���� �� ��-�� E� ���� �����. /� �� �?��
2�D�*� � �$ �1 ������� 5�/� � �� ��$�-������ ��
�� ��� �3�� ��� �6A, �������� F� ?����-� ���%��
��� 2�D�*� �� ����% ,,* ��� �� ������ �� $���� � ��
��� � �$ � �� ���� �� , ���%�-������ �%���� ���/�� �
�����% ���%�-������ �������� �� 2�D�*� �� � ,,*.
��--�����- ��� 2�D�*� ����%� �� $� � �%��� �� ����%#
+�,B���3�%%����% ����%� ���� �� ��� ��� �� ,,*�
;������
/�� � ��� �� ��������� ,�� � ��%*��'
,� ��� �%����- �� ��%*��' �6A, �� $��� �� ��$�%�-�#
���� �� ��-� /� �����������% ���� 6���������). /�
�� �?�� ��� ��3�$� ��������%� �� D�*� ������� ��
�1 ������� 5�/� �. �� ��� �3�� ��. �� ���� $���� ���
� ��% $��� ��� ��;������� *�� ��3�$� /� ��� �$�%�
�����%� �� �������� �� ��� ������� �� �#$� �������#
��% /� �������% �� ��� ��?����� �� �?�����. � /� ���
��� �� 2�D�*�� *�� ��3�$� ���%� �� �� �?�� �� ��� �����
�*�%� �)� 2����$ ������% ��%���9��%�� �%$��� -�% �%��#
� ���� ���� �26298,1G) �� ��� �� �?�� ��3�$� ���/��
$(� � ����� ��� ��"D: �� ��� (��-��- � �$ ��%�� ����#
��-) /��� � ����$��� $�%���% $�� �� �� &6� *��
�%����� � �?%�� �� D�*� ������� �� ��- �� �$��- �����
�� �� $�� ��� �������� �+<*#E). 2��� ��� ��� �-. ��
���� H ��������� /��� ����� �� ��� ��#&6 � �����. �� ���#
��- ��� ���� ��#&6 � ����� /� ��������%� �� D�*�
�������� *�� ����� $�%���% $�� �� ��� �� �?�� 2��*�
/� ����$��� �� �� �D &6 �� -�% ?%� ���� �� 2��� ���
��� �- ��%�$�. ��������- ��� ��� ��3�$� /� $���#
$� ���
8� �?�� 2�D�*� ���������%� ���� �� $�����$%���%#
�%����� ���� *�%� � �� ����%�) � /�%% � �������
�#0 ��� �#0 �#���$ �%-%�������)#D#0 ��� � �#0 #$%���%-%�#
������) �$%���%��������� 2�3�&� �� ���. ����� �%����
�������. ���: �� $�����$%���%�%����� ���� ���
���� � ��� ����������)� <�/��� . �� ��� ��� ���/
D�*� ������� �� ��� � �������� �� $�����$%���%�#
%����� /��� �����$%���%�%����� /� ���� �
$%���% ������ � +������ �#0 ��� �#0 �#���$ �%-%���#
����)#D#0#-%������� ���������� 2�3�&� �� ���. ����).
<����� �- *�� %�� �/� ����� �� ��� ������������ ���/� �� �%����� �� �1 ��������@����$%���%�%����� ���� -��� ��� ? �� $%���%���� � ��� �� � �#�������� ��%�3�� �� 2�D�*� �2�3�&� �� ���. ����) �� � ����� $�����$%���%�%�����./���� �����;����%� ���� -��� ������$%���%���� � ��� �� � �#�������� ��%�3�� �� 2�D�*� ����� �����). %����- �� ��� � �������� �� �%������ *�� �� ���� ���� ��� ���������� � ���/� �� ���� 5��%��$ �� $��
2��� � ��� �� ��������� ,�� � � ��� ������ ��������������� ��� 2� ��%������ ��3��� ""D
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
![Page 3: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/3.jpg)
��% -������ �#0#-%�������. ��% -������ �.D#0#��-%���#
����. �� ��% -������ �#0 ��� �#0#$%���%-%�������)#D#0#
-%������� ��%�� �� �� �� � $%���% ������ �� +���� �#
��- ��% ���� �. 2�D�*� ���/�� ��� ��-���� �������
/��� $%���%#+�, �� /�& ������� /��� ����%#+�,
� �%���� �������. �: �� $%���%#+�, ���� ���� �
��� ����������). /�� �� $����%$%���%#+�,. �����#
��%#+�,. �#���$ ��%#+�,. ������%#+�,. �� ���3��%#
+�, ��%�� �� �� �� � ��% ���� �� *���. �� ���%� ��
����%���� ��� 2�D�*� �� $%���%#+�,B���������
D#-%������� �� � �#0#$%���%� ���� ��� *�� 2�D�*�
������� /� ��$�%���%� ��������� �� ��� ��%%�/��- $��%
���� ���� $�)B +���. +���. ����. <-��. �� I���� <�/��� .
��� ������� �� ���� $��% ���� �+��. +���. �-��. ����.A���. �� 2���) /� � ��-%�-��%�� *�� ������� /� �� ��-%�
��������� �� ��� $� +�,#2< � �$����- �������. �:) ��
� ��%%� ��������� �� ��� ��%%�/��- ��$������B ��� $�
����%#+�, ���:). � $� ������ ��� �� :). �� ���D $�
�����$%���%�%����� ���:)� , &������ �%���� ���/��
��� +�,#2< �� �����$%���%�%����� �� ��� � ���#
��� �������� �. /��� +� �%��� �� ��� � ��� �� �� ���� ��. ���������%�� 2�D�*� ������� /� �� ��-%� ���#
������ �� D $� 4#����%$%��$��� � �$����- �������.
�: ��� ��������� � ���+ �� �� $��) �� � ��%%� ��
� $� ������%�� �� ����� � �$����- �������. �":)
���� ��� �$� �����������
��4� �� �� ��������� �5����� � ��
��������� ,��
*�� ��#&6 � ����� ��� /� ��� ���� � �$ 26298,1G
-�%� �� ��-����� /��� %���%������������. � ���� ����
� ������%� �� ��(�/ �� ��� ��""")� *�� ���%���- ��������
/� � ��� ��� �� ��� ���#���� <8>+. �� ��$� �� ���
�� �?�� �������� /� � ���(����� �� ���$��� G�$�
��- ������ */� � ��% $��� ��� ��;������ /� � ���� #
$���� ���-� � �)B A4<E2�>6H<JJK �������� �) �� G16#
1EG,0J<>AG �������� �)� 0� ����-��� �/� ��-��� ���
� �$� � ���� �� ����� ��;������ �� � ��� ��� ��� ��
� ��� ������#��%�$� �� ���� ������ ��*#8+�) ����-
����� � �$� � �� ��%��,)� �A, ���%��� � �$ �1 ����
��� 5�/� � � ��$�%�� �� ����� �#&�� $�%�?�� 6A,
� -$���� L���- ��� � -$��� � � ���. ��� �6A, %�� �
�� ��� ��� �%���� /� �� ����� ���� ��-�#�� ��-����
����������. �� �! �������� �%���� /� � �������� *��
���� ��� �6A,� �� ����� �%���� /� � ����%���� ���� ���
�@K#+�J ��-�$�� ����� . �� ��� ���%������ ��;����� ��
��� %��-��� ���� � /� ���� $����� *�� ��%%#%��-�� �6A,
�1��@�& ,�������� ��$�� ,4� �!��) ������� � �����
��$� ���� �� ��! $��� ���� /��� �%��%��� $�%���%
$�� �� �� ��� 6� , � �$ � �� ���� � �%���� ���%�� ��
�� �� $�$�� �� ��� @,<6 �$�%�. (��-��- � �$ ���
� ������ �� $����� � �� � �� ��� ������� $��� ���
��;����� ���-� � �� ��� ��%�/ �� ����%�)� *���. ���� �6A,
/� ��������%� �� $�� ����-�'� *�� 2�,*��� � ����� /�
��� ����� ���� ��� *D � �$��� �� ������ �� � �� ���"
��%%� � � ��#� $� A#�� $��% ������ /��� ��<��#*-.
���%���- � $- �� ��� ���$����� � ����� � �$ �� % ��
��%�� �� E� /� ��%��%�. ��%����%%� ����� � ����� /���
� ����$��� $�%���% $�� �� �� &6 �� /� �� �?�� ��
�� ��� ��$�-������� *�� �� �?�� 2�,*��� ���/�� ��-#
��?��� D�*� ������� ���-� � �) ��%�3��- ��� $%���%#
+�,#��������� $%���% � ���� �� ��� �� � �#�������� ��
$�����$%���%�%����� �� � ����� �%����� �*�%� �)
*$�� � 8� �?����� ��$$ � �� 2�D�*� � �$ �1 ������� 5�/� �
8� �������� ���� *��% � ����� �$-)2������� ���������$�% ����� $-��) 8� �������� ���%�) 4��%� �:)
+ ��� ��� �� �D�� ��! ��� ���D�: �A<�)�2F� "D� ��! ��� �"6G,G92��� ��� ��� ��! ��� !��8����%92��� ��� �� �� �� ���+<*#E �� � D� ����2��� ��� ��� ���D �"� �" ���"���� H ����" ���� D�� ���
*$�� & K������ � $��� � �� ��� $%���% � ���� � �$$%���%#+�, �� $�����$%���%�%����� ��%�3�� �� ����� �� ���$�����2�D�*� � �< !�� �� ���+
G�3�$� ��� ������)
�%���%#+�, ������$%���%�%�����
+$ ���)���C+$
������ $���) +$ ���)
���C+$
������ $���)
A���� ��DD � ���! ��" � ��� !"�! D��� � ���� ���!����$����� ��2�,*���) ��!� � ��� ��� � ��� ��D D��� � "�� ���D
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
""� ) ���,� ��,�� �� %�
![Page 4: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/4.jpg)
/��� $��$�$ ������� � �< �D. � /� ���� ��� �� ���
����� 2�D�*�� *�� ���� ��3�$��� � ��� ���� ��
2�,*���. ���� � ��% ���� �����?����. ��% ������
�����?����. �� �������� �����?����. /� � �%���%� �%���
�� ����� �� ��� ����� 2�D�*�. � ���� ���� �����
*� �� ��� ���? $ ��� ��� 2�,*��� �6A, ������
������� ��� � ����� ��������%� �� D�*� ������� ��
�1 ������� 5�/� �. /� � ��� ��� �$$���%�-��% �#
%���� �� D�*� ������� �� � ��� ��� �� �� �1 �������
5�/� � ����- ���� ���#2�,*��� �$$���-%���� 1 �E-1)�
0���� � �%�� �%���� �� ��� � ��� ��� �� �� �1 �������
5�/� � ����- ���#2�,*��� E-1 ���/�� ���-%� �$$���#
�������� ��� �� � ����� /��� $�%���% $�� �� �� &6
���-� � �. %�� �). /���� �� �������� � �����%� �� ���
�%�� ���� $���� /��� 2�D�*� �� �?�� � �$ �1 ����
��� 5�/� �� 0���� � �%�� �%���� ����- E-1 %�� ���/��
��� ������ �� �$$��� ������ � ������ �� � ��� ��� ��
�� %���� �� /�� ��� ��������� ���-� � �. %�� �)� /1 ������
��� �� %���� �%�� ���-��� �� �� �1 ������� ���
�������� D�*� ������� �� ���$�%�� $%���%�������� �
$���$%���%��� ���������) � ��� � ���$���� ����#
����� ��� ���/� �� D�*� ������� �� �� ������ ��
��$%���%��� ���������� 0� %�� � ��� ��� �$$���#
� ���������� ������� �� D�*� ������� �� ��� � ��� ��� ��
�� �1 ������� 5�/� � ����- ���� ���#2�,*��� E-1� *��
���%�� ���/�� ��� D�*� ������� �� ��� � ��� ��� �� /�
�����?�%%� � ��������� /��� ��� ������� �� ����#�����#
���� $��� � D�*� ������� �� ��� ���� ���� /� ����#
�����%� /��� � ������ �� ��� ���#2�,*��� E-1 /�
����. /��%� ��%% D�*� ������� ���%% �$���� �� ��� ���� #
���� ���� ��� �$� ���������� ���-� � ��)� *���� ���%��
� ����� �������� �� ���/ ��� ��� �%���� �6A, �������
2�D�*�. /���� �� ��������%� �� D�*� ������� ��
�1 ������� 5�/� �� *���. �������-�'/� ��%� �#����-#
���� � ��%*��'�
6��� ��� �� ���� � �� /78
*� ��%��� ��� ��������% ��-��?���� �� ��%*��' �� �%#
����� ������������ �� �%�� 5�/� �. � -� �����?���� ��
����%��$���% ���-�� �� ��%*��' ��� ������ �� ��� �%#
�� �%�� /� � �%�3�� �� ;��������� �%#��$� 8+�. ��
��� ���%�� /� � ��$� �� /��� ����� �� ��%*���. /����
�� ��������%� �� ��� ? �� $%���%���� �� ��- �%�����
������������� *�� ��%*��' �� ��%*��� � ��� ���� /� �
���� �$������%� ;����?�� �� �%#��$� 8+� ����- ���%
<����� &- ,%�-�$��� �� ������� $��� ��� ��;������ �� 2�D�*� ����� �����). @G,* �,,+� ���). 2,,* �,,1�����). �� 2�D�*� �,,>D�D��)�E������% ������� ��� �%�& ��&- ����� *�� %������ �� $����� �9� � ���/� /��� � �� 8 ��% $��� ��� ��;������ �� �������� � �� � ���� $���� �� ����$��� G�$� ��- ����� � %�� ���/� ���� ��� 2�D�*� ��;������
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
2��� � ��� �� ��������� ,�� � � ��� ������ ��������������� ��� 2� ��%������ ��3��� ""!
![Page 5: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/5.jpg)
�A,� ��� ���� � �$ � ���� � -�� � ��$�%��� /���
� �$� � �����?� �� ��� ��������� �6A,� ���-� � �)� *��
��%*��' � ��� ��� /� ��� $��� ������ �� �� 5�/� �.
/��� ��� ��-���� %���% �� � ��� ������ ���� ��- � ��-� � ��
5�/� ����%��$���� F� ��� ���� ���. ��%� �$%%
$���� �� � ��� ��� ���%� �� ����� �� ����. ���$�. ��
%���� ���-� � ��)� *�� �����#���� � ��� ��� %���%� ��
��%*��' �� 5�/� � /� � �/� �� ?�� ��$�� ��-�� ���
����� �� ��%*��� �� ��-���� 5�/� ����%��$���� L���#
������%�. ������� �%� %���% �� ��%*��' � ��� ������
/� �������� �� /���� 5�/� �� *��� ���%� /� �� ���
�� ��� ��� �� 0���� � �%�����- �%���� �� ��� � ���
��� �� � �$ /���� 5�/� �. /���� ���%��� � �$$�����#
������ ��� /��� �%�3�� /��� ���#2�,*��� E-1 ����
���/�)� E$�� ���%�. ��/��� . ���� /� %�� ��� ��� ��
2�D�*�. �� /���� � �� ����%� � ��� ��� %���% /�
������?�� �� ��� /���� �%�� 5�/� � *���. ��� ���� � ��
��%*��' ��� ������ /� ���� �%� ���������� /��� ��� ��
��%*����
/� ���� ��������� �� �������� ��
*�� ������� $��� ��� ��;����� �� 2�D�*� ���-� � �)
�������� �/� ��-�%� ����� ��� ��;������ �� ��� @,<6
�$�%�. #<===6# �$���� �) �� #6�101# �$���� �)� L���#
������%�. ��/��� . ��� ��-��� � ��;����� #4�1A+# �$����
�� ��� ��� 2�D�*� ��;�����) ��� �� �����?�%%� ����
������?�� $��- ��� ��;������ �� ��� ,,*� �� ��� �$�%�
/� ��� ������?�� �� ��� 2�D�*� ��;������ �� ���� .
<����� 1- H��������� �%#��$� 8+� �� ��%*��' �� ��%*�����) ,- ��� -�% �%��� ���� ���� ���/��- ��� �����?���� �� � �$� � ���� ����� ������ �� � �$� ��$� � �� ��� ;��������� �%#��$� 8+�� A��%��������;������ �� 8+� � �$� � ���� �� ��� �����?� $�%�?����� �� � ��%�6A,� �� ��%*��' �� ��%*��� � ���� ���� �� ��� ������� ���� G��� �$���% � ����� ��� >�� �. )��EEE ��-��� �� �=�!� 6A,� ��%*��'B8+� $�%�?����� /� � ��� ��� /��� ��%*��'#�����?� � �$� � ����- ����� ��� ��%%�/��- ��$�%�� 6A,�B 8+. ��� �%�$�� �2�D�*� ���� G��� �#$���% � ����� ��)� A+. ��� �%�$�� �2�D�*� �2�3�&� �� ���. ����)� �� �.���% �A, ��� ���� � �$ �1 ������� 5�/� �� ��%*���B 8+� $�%�?�����/� � ��� ��� /��� ��%*���#�����?� � �$� � ����- ��� �� ��� ��%%�/��-��$�%�� 6A,�B 8+. �2�D�*�� A+. �2��*�� �� �. ���% �A, ��� ����� �$ �1 ������� 5�/� ����) *�� �%���� �����#���� � ��� ��� %���%� �� ��%*��� �/���� � �) ����%*��' ���-��% ������ � �) �� ��������% � -�� �� �1 ��������%��. ���� ���. ���$. %��. �� 5�/� � � �� �� ����%��$���% ��-�� ��B��-� �. %��� ��� D $$ �� %��-��. �%�#��-$������ �B ��-� �. �� ���$��%��� $$ �� %��-��. �����%� ������ �� ��%%� ��-$������ �2B ��-� �. ���%� ����%%� ���� �� ��%%� ��-$����� 5�/� � �� �8B ���%� �� ��%%� ���� �� ��%%���-$����� 5�/� )� 0����B /���� 5�/� � ��� ���$��%� �� $$ �� %��-��)�&�� � �$ ��%%� ���� ���� �� ��� ����� ��%���� �� �%�� /� � %���%�3�� �� ��� � ��� ������ �� ��%*��' �� ��%*���� ,�� -� �%����� ��� ����������� ���� $������� �� � ��� ������ %���%� � � �������/��� � � � � ��������- �2G��
<����� 9- E$$���� ���������� �%���� �� D�*� ������� �� �1 ����������%� /��� ���#2�,*��� E-1��) 0���� � �%�� �%���� /��� ���#2�D,*��� E-1 �� �� �- �� � ��������� ���� � �$ �1 ������� 5�/� � �%�� �). �� �- �� � ������ ��� ����� �$ /1 ��������� %���� �%�� �). �� ��� �- �� ���$����� 2�,*������ ����� �� �1 �� �%�� �)� *�� � ��� ��� �� �� /1 ��������� ���/��D�*� ������� ��� ��� ��� ���/ D�*� ����������) E$$���� ���������� �%���� �� D�*� ������� ��) �� D�*� �������� ) �� ��� � ��� ��� �� �� �1 ������� 5�/� � /��� ���#2�,*��� E-1�
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
"" ) ���,� ��,�� �� %�
![Page 6: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/6.jpg)
2�D�*� ���/�� ��%� %�/ ��;����� ��$�% ��� ���������.
��9��:) �� &��/� ,,* $�$�� � �� ��� �$�%�. ���%����-
2�D�*� ���:). ��� ��������� ��� ��-���� ��;����� ��$�#
% ��� �� ����%#+�,B���3�%%����% ����%� ���� �� �@G,*.
��: ��������). � ��3�$� ��� �� ����%��� �� ��� � ��������
�� ��%��%� ���3�% ����� �� 7���� � ���3�� 5�/� �
�6�� �� �� ���. �"" )� E�����. $�%���% ���%�-������
�%���� ��--����� ��� 2�D�*� �� $� � �%��� �� @G,*
��� ��� �� ,,* ���-� � D)� *���� ���� ������ %�� �� ��
��$��� ��� ����� �� /����� 2�D�*� �� �� @G,*#
�%��� ���������. ���� � ����� �� @G,*. ���3��%#+�,B���#
3�%%����% ���3��%� ���� �� �@G@*� 67,� � �� ���. ����).
<����� 0- ��%���% ���%�-������ � �� �� $��� ��� ��;������ �� ��� @,<6 �$�%��*�� � �� /� ����� ����� �� ��� ���-��� #(�����- $������ *�� %��-��� �� ��� %���� ������� ��� �%���� �������� ���/��� ������ A�$�� � ������� ������ ��%��� - ��� ��� ��� G�3�$�� ���� �� ��� %�-�$��� � � ��%%�/�B 2�D�*�. $%���%#+�,B��������� D#0#-%�������#�� � �#0#$%���%� ���� �� ���1 ������� ����� �����. ,4� �!��)� @G,*. ����%#+�,B���3�%%����% ����%� ���� �� �� 71 ���3�� �,,+� ���)� 2,,*. %����% ��%� ���� �� �� (����� � � ������ �,,1�����)� 6,*. ������%�����%��� �#0#����%� ���� �� �� 7���������� ����� �,,+""���)� �,*. $������������ �"#��� ���#0#����%� ��#�� �� � �$ 71 ����� �,,F��!��)� 2%,*. �%�� �����% !#0#����%� ���� �� �� /������ �� ����� �,,K!����)� 6$��*�. $%���%#+�,B����������� �#0#-%�������#�� �#0#$%���%� ���� �� �� �1 � �� �� �� �,4�" �")� 6$��*�. $%���%#+�,B����������� �#0#-%�������#�� �.�� �#0#��$%���%� ���� �� ���1 � �� �� �� �,4�" ��)� 2���*. $%���%#+�,B����������� �#0#-%�������#�� �#0#$%���%� ���� �� �� ���� ������� �,4�"����)� 6���*. $%���%#+�,B����������� �#0#-%�������#�� �#0#$%���%� ���� �� �� ���� � ��� �� � � �,�� "�� )� 8�D�*. $%���%#+�,B��������� D#0#-%�������#�� � �#0#$%���%#� ���� �� �� /1 ��������� ������%����� ���%��. ,���D���)� 2�D�*�. $%���%#+�,B��������� D#0#-%�������#�� � �#0#$%���%� ���� �� �� �1 ��������1��@�& ,�������� ��$�� . ,,>D�D��)� 2�,*��� ����� �����. ,4� �!�D)� 8��,*. ��� �������$��%#+�,B��������� �#0#-%�������#�� �#0#��%� ���� �� ��/1 ��������� �@,,"��!D)� 2��,*. ��� �������$��%#+�,B��������� D#0#-%�������#�� �#0#��%� ���� �� �� �1 ������� �,4�"D!�")� 1�D,*. ��� �������#$��%#+�,B��������� D#0#-%�������#�� � �#0#��%� ���� �� �� ��� �� �� 9�� �@,,!��� )� @,8*. �����%� �����%� ���� �� �� �1 ���� ���� �,,>"��D")�*@*. �#���3��%#!.��#������%������ EEE#�#0#���3��%� ���� �� �� �1 ���� ���� �,,1� ��")� 6@,*. ��#������%������ EEE#��#0#����%� ���� �� �� �1 ���� ���� �,,��!���)� *,*. �������% ����%� ���� �� �� �1 ���� ���� �,,����D�)� 6@A*@*. ��#4#�����3��%���% 4#���3��%� ���� �� �� �1 ���� �����,,�!D � )� A*2<�. �� ��� � ����� �� 4 �� �� ������� �*���!�)� @G@*. ���3��%#+�,B���3�% %����% ���3��%� ���� �� �� 71 ���3�� �,�D�����)� <+@*.��� �������$��%C���3��%#+�,B��� ��%�� 4#��� �������$��%C���3��%� ���� �� �� � ����� ����������� �+,@�����)� <+*. ��� �������$��% � ���� #�� � �$ 41 ������� �+,6�! ��)� ,+*. -$���� ���$ ��%� ���� �� � �$ )����� ������� �,,F!��!�)� *�,*. � ����������� �#0#����%� ���� �� ��(���� �� ���� ����� �@,,�����)� *�� ��%%�/��- � ������� ��%� ���� ��� /���� ������$��% ��������� � ��� �% �?��B @,@���"�. @,@��D� .@,@�����. @,@��D�". @,@���! . @,@�� ��. @,@�� ��. @,@�� �". @,@����". �� ,,@"D� � �� �1 ���� ��. �G>� �� 7���� � ��� �I!�D��). 6�,*"�" ���1 ��� �� � � �,,F����!). �� 8�,*� �� /��� � ���� �� �@,,"��D�)�
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
2��� � ��� �� ��������� ,�� � � ��� ������ ��������������� ��� 2� ��%������ ��3��� """
![Page 7: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/7.jpg)
�� %����% ����%� ���� �� �2,,*� ,� ��� �� ���. ����)�
<�/��� . ��� �%���� ���%�� ��� ������ ���3�%%����%
� ����� �� �� @G,* ��@G@*) �� �#�����% � ����� �� ��
2,,*) �� ��� � ����� ��� �� 2�D�*� /��� �� �� ���
��%%�/��- ��%#+�,� /� ���� � � ��% ���� ����� ��B
����%#+�,. ���3��%#+�,. $%���%#+�,. �#���$ ��%#+�,.
�� ������%#+�, ��� ��� ���/�)�
/��������
,����������� -%�������� ��� $�� �������% ����� ��
��3�$��� ��%����� E� ���. $�� ���������� ����� �
���� ��%���%��� �� $�./���� ��� �� �� �� ������$��%
��-��?���� �� 5�/� ��%� ���� �<��� �� 2���. �����
A&�$ �� ���. ����)� ������ ������� ���/ ��� $�%���%�
��%����� �� ��������� -��� %%� �&� �%�� �� � ��%�#
-�� �%� ��;�����% $��� �� ��- ��������� ��������#
���� �� � ��%�3�� �� $�$�� � �� ��� @,<6 �$�%�
�2�3�&� �� ���. ����. ����)� , ���%�-������ �%���� �� � �#
�����%� ���%����� ��;������ �� @,<6 �$�%� $�$�� �
��--���� ��� ��� @,<6 �$�%� �������� �� ���� % ���%�#
-������ ���- ���� �@� ����� �� ���. ����� <���$�� �� ���.
����� A&�$ �� ���. ����� 2�#8�� � �� 6� >��. �����
2�#8�� � �� ���. �"" )� *�� �%���� %�� ��--���� ��� $��#
��%��%%� �%��� @,<6 �$�%� $�$�� � ��� �%��� ���%�#
���� � �%�������� /��� ��� ���� �� ��� ���� -��
� �$ ���-%� ���- ��� �� ��� �$�%�. � ���$�%�?�� ��
&��/� ,,*� � /�%% � @,<6$�$�� � ��� � ����%��� ��
���% ������������ ���-� � D). %����-� ��� @,<6 �$�%�
%�� ������� ���- ��� ���������- �� $�$�� � ���
��%�3� ��� ���� �?����� �� $����%��%%� �� �%��� $�%�#
��%�� �@� ����� �� ���. ����� 67,� � �� ���. ����� <���$��
�� ���. ����)� E� ��$� �%�� �������. ��� $�%���%� $%���%#
���� �� ���������� $� �� ������� �� ��� ����� ��
$%���%� ���� �� ���%� �� ��%�3��- ����������� $%#
���% � ���� �� �� ��$�%�. ��������� ��$%���%����.
/���� �� ����%��� �� ��� ������������ �� ��� 5�/� ��-$���
�� ���������� � �� �� �� ��� ������$�$). �� ��
��%�3�� �� ���-%� ��3�$�. ����������� �#0 �� �.�� �#0#
��$%���%� ���� �� �6$��*�). /���� ��%�3�� ��� ���#
�������� $%���%���� �� ��� �� �� �� ��������� �� ����#
������� �#0#-%������� �� ��� � �� �2�3�&� �� ���. ����)�
*��� ��3�$� �� �%��� ���%�-������ �%�������� /��� ���
�� �#0#$���$%���%� ���� ��� �� ���-��� �%��� �����
6$��*�. 2���*�. �� 6���*� ��� ��-� � D)� E� ���
%�-�� �� ����� ���� ������. �� /� � ���$�� ��� 2�D�*�
����%� %�� �� $�$�� �� ��� ,,* ���- ���. � /� ���
��� �� 2�D�*� �� %% ���� ,,*��
6� ��- ��� ��� �� �� �� ��$�%�-�#���� �� ��� ��
����� �6A, ��� ������� 2�D�*�. /� �����%%� ���%���
�6A,. �� $�� ����'!� �1��@�& ,�������� ��$��
,4� �!�D)� *��� �6A,� ���$�%� ������� �,,*./����
������� $��� ��� ��;����� �������� $����� �9� ��
���/�� D�: �������� �� ��� 2�D�*� ��;������ *��
2�,*��� ��������� � �# �$��� ��%� ���� �� �6A,
��� �� %�� ����%��� �� �%����� ������������ /� ��-�%�
��%�&�%� ������ /� �� � ������%� ������?�� ��� �# �#
$��� ��%� ���� �� �6A, ���.��. 1��@�& ,��������
��$�� ,4�"D!�"� �����%����� ���%��� ��� %�� ��-� � D)�
, A� ��� � �%�� �%���� �� ��� ����% ��� ������ �� ����
�6A, �� �1 ������� ���%�� ��� �� /� �����?�%%�
��� ����� �� ��� ��-$����� � -�� �� ��� �%�� ������#
%����� ���%��). � /� ���� ��� �� ��%*��� �6A,. �$�%�#
��- ��� ����'!� $� ������ 2�D�*�� <�/��� . ���
���$����� 2�,*��� ��� ����� �� �1 �� ��%%� ���/��
�� D�*� �������. �� ��� D�*� ������� �� �1 �������
5�/� � /� ��� ��#� ��������� /��� ��� ��%��%��% ���#
2�,*��� ��������� ������%����� ���%��)� +����;����%�.
/� ����%���� ��� ��� ����'!� ��� ��� ������ 2�D�*��
0� ���� ������ � %�� ����� �� ��-�. �� /���� 2�D�*�
/� �� �?�� � �$ �1 ������� 5�/� �. ��� � ��% $���
��� ��;������ /� � ���� $����. �� ��� �6A, ���
������� � ����� ��������%� �� D�*� ������� /� ���#
%���� ,� ���%�. /� ������?�� �6A, �����- �� ��/
@,<6 $�$�� ����-�'. /���� � �$ � �� ���� � %�&��
$���� � �� �� ��%� �� � %�/ ��$�% ��� �� ����� �� ����
&��/� ,,*�� 0� ����%���� ��� ��� ����-�' �6A,
������� 2�D�*� �� ��� ���� �� ��� ��%%�/��- ���� �#
�����B ��) ��� ��� ����� 2�,*��� ���/�� D�*� �������.
� ������- �%����� � �$ $%���%#+�, �� $�����$%�#
��%�%������ ���) ��� ��3�$��� � ��� ���� �� ��� ���$��#
��� 2�,*���. ���� � $�%���% $��. &������ � $��� �
/��� ������ �� D�*� �������. ��% ������ �����?����.
��% ���� �����?����. �� ������ �� D�*� ������� ��$��%
���� � ���$��%�. /� � �%���%� �%��� �� ����� �� �����
2�D�*� �� �?�� � �$ �1 ������� 5�/� �� ����) ���
�����#���� � ��� ��� %���% �� 2�D�*� /� ��� ��-����
�� ��%%� ��-$����� 5�/� � �� ��-� �� �� ���� . ���
���� ��� ���� �� �� ��� ��$�� % �� ����% ��� �������
�� ��%*��' /� � �� �%��� /��� ��� � ���� ���� ��� ��
��%*���� *���. ��%*��' ��� ������ ����%� �� �%���%�
�%��� �� �%����� ������������ �� ��� �%�� 5�/� .
%����-� ��� ���%�-��% ��-��?���� �� ��� ��� ������ ��
��%*��� �� ��%*��' �� /���� �%�� 5�/� � �$��� ��
�� �% �?��� �� ���) ��� D�*� ������� �� ��� �1 �������
5�/� � /� ��#� ��������� /��� ��%��%��% ���#2�,*���
E-1�
, ���%�-������ �%���� ��--����� ��� 2�D�*�
��2�,*���) /� $� � �%��� �� @G,* �� ���� ��?�� � �$
���- ��� �� ��� @,<6 �$�%� ���������- �� $�$�� � ���
��%�3� ��� ���� �?����� �� $����%��%%� �� �%��� $�%�#
��%�� ��$� �� /��� ,,* ���-� � �)� 6������ ��� ���%�-�#
����� ��������. 2�D�*� ���/�� �� ��������� ��� $� ��
�%��� �� ����� �� ��� @G,*# �%���$�$�� � �� ��� �$�%�.
����� � �� /� ��$����� 8%�� ������� ����%� ������
��$� ��� @,<6# �%��� -���� �� ���� -���$��. � ���#
������ �� ��� ���% -���$� ��;����� �� ���� ��� � ����
��� *�� �$�-�� ��� ���� � ���� �� ���%����� � ������
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
���� ) ���,� ��,�� �� %�
![Page 8: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/8.jpg)
�� ����� @,<6# �%��� -����. ���%���- �� ��� ���� ��?�#
���� �� @,<6 $�$�� � �� ��� ������ � $����%��$�
,%����-� @,<6 $�$�� � /��� ��$�% ������$��% ����#
���� $� ��� ���%� ���%��� � �$ ��� �$� ���- ��� ��
��� �$�%�. ���� $� %�� ��� ���%��� � �$ ����� ���
���- ��� � /�%%. ���%���- �� ��� ��������% �� ���%��� ��
��� @,<6 �$�%�. �� 2�D�*� $�-�� �� ����� ���� �
��$�%�� *��� ���%� %�� �� �%%��� ��� �� ��� ����� ����#
��?����� �� @G@*. /���� �� @,<6 $�$�� �� 71 ���3�� .
� ���% �%�� ����� �� +%��� ��� E� ���� �%�� �������.
����� @,<6$�$�� . @G,*. ��$��%� ��������%� �� ���
� �������� �� 5� % ��%��%� ���3�% ������ @G@* �� %��
���%� �� ��%�3��- ��� � �������� �� ���3�% ���3���.
�%��� ��%��%� ���� � ,%����-� ���� � ���� ����%��� �� ���
� �������� �� $����%��%%� �%��� ��$������. @G@* ��
@G,* � ������%� �%��� �� ��� ���� �� ���� ���%�-���
���-� � D)�
*�� �%����%� %�/ ��%���� ��$������� �� 2�D�*� ��
����/� ���� *�� ��� �� ���C+$ �%��� �� 2�D�*� /� �
��%� %��� ��� ��: �� ��� ��� ��� �%��� �� ���� ,,*�
�A&�$ �� ���. ����)� �� ��$�%�. ��� �%��� �� ����
,,*� �� ���� � ���$�� ������%�-��% ����� ��� � �
��%%�/�B �� 2�D�*�. ���. !� ������ �� ���C+$. ��! �����
$��� �� ��� ��% ���� �� !! ����� $�
�� �� ��� ��%
������ �2�3�&� �� ���. ����)� �� 6���*�. ���. !�� �������� ���C+$. � ����� $�
�� �� ��� ��% ���� ��
�DD ����� $��� �� ��� ��% ������ �2�3�&� �� ���.
����)� *��� ���� ����� %�� � %%�%� ��� ���� ��� &�������
�� @G@*. /���� $� �� �� ��� �$� ����� ��� � @G,*
/��� %�/� ��� �� ���C+$ �%��� �� ����%#+�,� *&��-
����� �� ���� ������ ��-���� /��� ��� ��� ��� 2�D�*�
���%� $� � ���%� ���� -� � ����� ����������� ���� ���
������� ���� ����%��). �� �� %�&�%� ��� 2�D�*� /��%� ��
��� M�$�� ����7 �� � ,,* /��� ������ ���%�-������
�%�������� /��� ���� ,,*�� E� �� �%����%� ���. �� ���
�1 ������� �%��. ��� %�/ ��%���� ������� �� 2�D�*�
$� �� ��$������� �� � ������� ��%*��' ��� ��#
����./���� �� �/� �� ?�� ��$�� ��-�� ��� ��� �� 2�D�*��
83��������� ���������
/��� ����� ���� ������ �� �� ���� ����
�%�/� � ����9��D �$) �� �����%� ������ �� %�� �-� ��1 ���� ���). �� ����� � �$ %��% $ &�� �� 2����. ��. /� ���%%����� �� ��� �� � � ��+ ����% ����� *�� �1 ������� �%������ �� ��� �%���� �� ��� ��$�� % �� ����% ��� ������� ����� ��%*��' �� ��%*��� -���� /� � ������� � �$ %��%$ &�� �� ���3&�. ��� 2%�����. $�����$%���%�%�����.�� ���� ���������� /� � ���%��� �� �� �?�� � �$ �� %���-� 5�/� � ����- � ����%����� � ����� � �2�3�&� �� ���. ����)�� ���� � �������� �$�%�� ��� ���? $���� �� ���� �� ��#�� �� �� ���� �$���% �%����� �#F����% �� ���3�%%����% /� ��� ����� � �$ A�%� *��;��. K����. ��� ,����%#+�,. ���#3��%#+�,. $%���%#+�,. �������%#+�,. �� $����%$%���%#+�,
/� � ��� � ������ �� 2�-$. 2� >����. �F. L2,� �#+��$ ��%#+�, �� ������%#+�, /� � ������� � ���� ���� � ������%� ����(�/ �� ��� ��""")�
�,��� �� ���� ������
E� ��� ���� �� D�*� �������. ��� ���� � ������ $���� ����� �%) ��������� �� �� $� �������$ ��������. �< !��.�� �� $%���%#+�,. ��� �� $�����$%���%�%�����. ����3�$�� ,��� ��������� � ���+ �� �� $��. ��� ������ /��� $����� �� ����- ��� �% �� ���#��%� ��D: ��C�) � �5�� ���������� ,���������� �� ��� ���%���- $���� � /� � �%�3�� �� ��� ���#���� <8>+ ����- ��� 6��$� �����$ ������ E��� �#$���� +��. 0��� �. �,. L2,) /��� � ,����& F68#D� �G��%�$� �2��&�. *�&��. ��)� *�� �%���� � ������ /� � ��������� D�� �$ ���� �%����% ���������� ���� ���� � ������%� ��2�3�&� �� ��� �����)� @G,*. @G@*. �� 2,,* ��������� /� � ������ ���� ���� � ������%� �� ,� ��� �� ��� �����). 67,� � �� ��������). �� 6�� �� �� ��� ��"" )� 8 ����� /� ;����?�� �� ���$����� ���� ���� �� @ ��� � ��"!�) ����- @��#�� 8 �����,��� &�� �@��#��. <� ��%��. +,. L2,) /��� ������ �� �$ %��$��� ��� ���� ��
/�� � ��� � ��%*��' ��� 2� ��%������ ��3���
,%% ��� ����� /� � �� �� $�� � ��+� , �������$ ������������� . �< !��. ��������- �� $��#$� ���������% ��� $�� 8@@)/� ���� � ��� ���� � ����� �� ��-���� ��� ��3�$� �� �?�#����� �1 ������� 5�/� � ���� &-) /� � ��$�-���3�� �� 0 ��-�%���� /��� D��� $% �� ��� $� 8@@ ��������- D $� G6*,.��D $� �����%$����%��%����% 5�� ���. �� D: �/C�) ��%�����%��#%��� �%�����. ��%%�/�� �� ���� ���-���� � "��� � �� �� $��� *������ ���� ����� $%) /� �&�� �� �� D�: ��� ���� /��� $$�#���$ ��%���. �� ��� ���%���- � �������� /� ��%%����� �� ���#� ���-���� � "��� � �� �� $��� *�� � �������� /� �����%��� ����� $% �� ��� �$� ����� � 8�%�����%���$��� /� ���� �� �����3�$� ��%����� �� ?�% ������� ���� �� ���: �/C�). ��%%�/�� ������ ���-���� � "��� � �� �� $�� �� �$��� ���%��� ����� *������ ���� /� ���������%� ��%�3�� -���� �� $� 8@@� *����3�$� ��%����� ���� $%) /� ��%��� �� ������%$������%�6G,G)92��� ��� ��%�$� ���� $%. ,$� ��$@���������. 8����#/�. A. L2,). /���� �� ���� � ������%� �;��%�� ��� /����� $� 8@@. ����- � G���� �����$ �@��#��)� ,��� ���������%�/����- ��� ��%�$� /��� �� $� 8@@. ��� ��3�$� /� �%���� � 5�/ �� �� � $% $���� /��� %��� - ����� ��� D�� $��) �� �9� �
A+% �� �� $� 8@@� ,����� � ������ �D� $%) /� � ��$�����. �&���� �� ��: ��� ���� /��� $$����$ ��%���. �� �$$�����%���%��� �� �����%92��� ��� �%�/#���) ��%�$� ��� $%.,$� ��$ @���������) �;��%�� ��� /��� �� $� 8@@ ��������-$$����$ ��%��� � ��: ��� ���� � 5�/ �� �� � $% $����
����- ��� � ����� %�;��� �� �$��- ��� ��8>+) �����$ �,$� #��$ @���������)� *�� 5�/#�� ��-� � ������ ��� ����������3�$� ������� /� � ��$����� �� ��%��� �� �����%92��� #��� ���-�#���) ��%�$� ��� $%. ,$� ��$ @���������) �;��%�� ���/��� ��� �$� ����� � 5�/ �� �� � $% $���� ����- � �8>+�����$� ,��� /����- ��� ��%�$� /��� ��� �$� ����� . �����3�$� /� �%���� /��� � ���#%��� - ����� ��� ��� $��) ���9D�: ��C�) ����%���-%���% �� ��9�: ��� ���� �� $$����$��%��� �� �� $� 8@@� *�� ��3�$� ��%����� ��! $%) /� ��%�3��-���� �� $� 8@@ ��������- ���: �/C�) +<,82 ��#N��#���%$�#��� ���%)#��$����%$$����O#�#� ������%�����) �� ���� ���#(����� �� �8>+ �� +<*#E ��� �������� ��%�$� �D $%. @��#��)�;��%�� ��� /��� ��� �$� ����� � *�� ��3�$� ��%����� /�
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
2��� � ��� �� ��������� ,�� � � ��� ������ ��������������� ��� 2� ��%������ ��3��� ����
![Page 9: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/9.jpg)
��%��� �� ��� ��%�$� � 5�/ �� �� ��� $% $����� ,��� �����%�$� /� /���� /��� �� $� 8@@ ��������- ���: �/C�)+<,82. ��� ��3�$� /� �%���� /��� %��� - ����� ������ $��) �� ��9��� $� 8@@ ��������- ���: �/C�) +<,82� *������� � ������ ��� $%) /� � ��$�����. ������� ��� �� �� $% ���%� ?%� ����. �� ���(����� �� �8>+ �� <�>�� ��C�� 2��� ������ �- ��%�$� �,$� ��$ @���������) �;��%�� ��� /����� $� 8@@ ��������- ���: �/C�) +<,82 �� ���D � A+%� *����%�$� /� ����%���� /��� ��� �;��%�� ���� ����� � 5�/ ���� � $% $����� *�� ����� � ������ /� � ��$�����. ��%�3��-���� �� $� 8@@ ��������- ���: �/C�) +<,82. �� ��%����� ����H<� ��C�� ��%�$� �,$� ��$@���������) �;��%�� ���/��� ��� �$� ����� � 5�/ �� �� ��� $% $���� ����- � �8>+�����$� ,��� /����- ��� ��%�$� /��� ��� �$� ����� . �����3�$� /� �%���� /��� %��� - ����� ��� ��� $��) �� �9� �
A+% �� �� $� 8@@ ��������- ���: �/C�) +<,82�
��4� �� �
, �� �� ��-��� �� �%�-����%������ � �$� �. D�#**�*C+)+*E#1,�*C+)+,�,C1)+,�*C+)1*E1*E,,#�� �� D�#*1E,+++,E1+�*C+)*+�,C1C*),*E++#�� �E. �������). /� � ����-��� �� ��� ������ ��� � ��% $��� ��� ��;������ �� ��� �� �?�� ��3�$����� $���� � ���� ���� � ������%� ���� ����%��)� *��% �A,/� ���%��� � �$ �1 ������� 5�/� � ����- ��� �A��� 8%������ K�� �H�-��. <�%���. 1� $��) �� ���� �� ��� ���%���� ����%��,)� �A, ����- F%�-����*�#�*�� 2��� K�� ������ 6�-���#����. ������$. 1� $��)� 0��� ��� � �$� � �� ��� ��%��,)��A, � ��$�%��. � �*#8+� /� �� �� $�� ����- HE,1GAF��2��� �*#8+� K�� �H�-��)� *�� $% ���%��- ���������� /� �� ��%%�/�B *�� �*#8+�$���� � /� �������� � D��+ �� �� $���� ��� �� � ��� ������ �� ���� � "D�+ �� �D $�� �� ����������� �� 6A, ��%�$� �� �� ��� ���������� �� ��� ��� ��� �����. ��%%�/�� �� �D ���%�� �� 8+� ���� ���%� �������� ��"��+ �� �� ���. D��+ �� �� ���. �� !��+ �� � $��). �� ?�%%��������� � !��+ �� �� $��� *�� $�%�?�� � -$��� �� &��) /�6E1 ���-���-����)#%��%�� ����- ��� 8+� 6E1 8 ��� 2�������� K�������� 6�-�������)� 0��� ��� 6E1#%��%�� $�%�?�� � -$��� � � ���. ��� �6A, %�� � �� �1 ������� 5�/� �. �� ���$��%���� ��� �%;���. /� �� ����� � ���� ���� � ������%� ��2�3�&� �� ��� �����)� *�� �6A, �� �������� �%���� /� ����%�������� ��� �@K#+�J ��-�$�� ����� ��%%�/��- ���$������ � 7����� ������� �� ���(����� �� 6A, ��;������- ����- 6��#*� $���� +��%� 2�;������- K�� �@��&$� +��%�� . ��%%� ���.+,. L2,) /��� +GH ���� 6A, �%���� �����$ �@��&$�+��%�� )�
)�������� �5�����
*�� ��%%#%��-�� ����# ����- � $� �� ��� ����-�' �6A, /�$�%�?�� �� 8+� ����- ��� � �$� � D�#11,*++,*1,,*,*+,,+#+,,,*+#�� �� D�#11*,++**,+1,+,,,,,*,,+**1#��. ����� ����� �/� ��� ������ �����. D�#���<E �� ��#+�E. /���� ���$$�����%� ��%%�/�� �� �� � ����� �� � ������ �� ���������. ���������%�� *�� $�%�?�� � -$��� /� �%���� ���� �+��@%���#*F8F ����� �� ��;������ �� ���? $ ��� ������ ��8+� � � �� *�� � -$��� /� ��-����� /��� ���<E �� +�E ������ %�-��� /��� �HG#�� ����� �H�-��) ��� �� � ������%����� ��-����� /��� ���<E �� +�E� *�� ���%��� �%�$�� /����� �� � ���� $ �1 �� ���" ��%%�� *�� ���$����� 2�,*���/� ��� ����� �� ��� � ���� $�� ��%%� �� �� �?�� �� �� �����$�-������. �������%%� � ���� ���� � ������%� �� 2�3�&� �� ��������)�
/������� � �� ����-�' �� �� ��
����� /���� ���$%�) ����� /� � �$$���3�� /��� ��� ���#����� �� �� $ �� 2�,*��� ���� ����%��) �� ��� �� $% ��(�������� ��� �$$���-�� � $�%���%� ����� ��� ���- �� ���� � � ���#��%� �J���&����. �" �)� *�� �����% ��(������ /� �$����� ��� ����$�%��� � ����7� ,�(���� /��� %% �����;���� �$$���3�����������) �� ����$�%��� � ����7� ,�(����� *�� ��%%����� �� �$/� ���(����� �� $$����$ ��%��� � ���������. �� ��� � �#������� � �$ �9D�: ��� ���� � ����� /� �����%��� �� D $% �� �� $� �����$ �������� ����� . �< !��� *�� � ����� ��%����� /���%��� �� 8 ����� ,92��� ��� ��%�$� �� $%. ,$� ��$@���������) ��� �� ���� �;��%�� ��� /��� ��� �$� ����� � ,��� /����- ��� ��%�$� /��� ��� �$� ����� . E-1 /� �%���� /��� ��� � �����$ ��� �� ����� . �< ���� *�� �%��� ��������- E-1 /��$$�����%� ��%�3�� -���� �� $� �����$ �������� ����� .�< !���
���:/��� �� ;����� ���� �
2����$ ������% ��%���9��%�� �%$��� -�% �%��� ���� ���� /�� ��� ��� � ���� ���� �� >�$$%� ��"!�)� *�� � ������ �� ���-�%� /� � ����%�3�� �� ��%�� ������- ��C� ������- /��� +��#$���� @ �%%��� @%��� �� 0���� � �%�����- �%����. � ������ ����� 26298,1G -�% /� � � ���� �� �� � E$$���%��#8 $�$#� �� ���%%��� �. @�%%� ��. �,. L2,). /���� /� ���� �%��&��/��� ��� ���$$����� ��%����� �� �%��&��- �-��� �,$� #��$ @���������) � ��$ ��$�� �� � �� � �� *�� �%��� /� �� ���� /��� � B ���� ��%����� �� ��� � �$ � ���#2�,*��� E-1� ����) �� � B D��� ��%����� �� ��� ������ � ���&�� ��� ����E-19�� �� ���� �� ������ ���(�-��� *�� �$$��� ��$#�%���� /� � ����%�3�� �� $��� �� �� ������#��%�3�� ���#$�%�$��������� ������ ����- � G+> 0���� � �%�����- &���,$� ��$ @���������) ��%%�/��- ��� $������ � 7� ���$#$���������
2������� � ���
J ���- $����� �� ��� �� �?�� ���#2�,*��� E-1 ��9��� �-) �������� �� �$ %��$�� ����9� �-) /� � ���� �� ��� � ��� ��� ���� �1 ������� 5�/� �� ��� ���% $���� �� ��� ���� � ������/� ?��� � ��� �-� *�� $���� �� �?�% ��%�$�. ��� �%) /� ��������� � ��+ �� �� �. ��%%�/�� �� ���� ���-���� �� �� $��� � ��� �. �� ��� ���%���- ���� ����� /� � ����� �� D�*� �� D�*� ���������� *�� ���%�� � � ������� � ����� -� �� ��� ����������� ���� �$���� /��� �2G��
6��� ��� �� ���� � �� /78
*��% �A,/� � �� �� � �$ ��� ��������% � -�� �� � �1 ���� ��� �%�� ����- ��� �A��� 8%�� ���� K�� �H�-��)� *�� ��%*��'�� ��%*��� � ��� ���� �� ��� �- �� ���% �A,/� � ;����?�� ��;��������� �%#��$� 8+� /��� ��� ��%*��'#�����?� � �$� ��D�#*11,+1,,11*1**1,*1#�� �� D�#+,+1*+1,,,,+++*,#*1#��) �� ��� ��%*���#�����?� � �$� � �D�#1,,111,1,1,#1,,*+,+#�� �� D�#+,*+11***+*++,,*+,+#��). ���������%����%#��$� 8+� /� � ��� ��� ����- ��� >�-��+��%� H���& 2����$$���% ��� ������ 6�-�������) �� ��� H����*��� 24@� 1 ����*#8+� K�� �H�-��)� *�� $% ���%��- ���������� /� � D��+ �� �� $�� �� ���� "D�+ �� �D $��. ��%%�/�� �� �� ���%�� �� "D�+ �� �D ���. DD�+ �� �� ���. �� !��+ �� �� ���� *�� ���%�� � � �#������ � ��� �� -� �� ��� ����������� ���� $������� /����2G��
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
���� ) ���,� ��,�� �� %�
![Page 10: Identification and characterization of a novel anthocyanin malonyltransferase from scarlet sage (Salvia splendens) flowers: an enzyme that is phylogenetically separated from other](https://reader036.fdocuments.net/reader036/viewer/2022071714/575064a81a28ab0f079e9fba/html5/thumbnails/10.jpg)
;���������
+���� +- "�� �� =-,- .��������� �->- � ��� �����) E�����?�#���� �� ��� 2,,* -��� ����%��� �� �� /�� � 5�� ���-�������� ��� �� 6A, $�� � ��� /��� 7���. �&. ��!9����
.����� '-'- ��"!�) , ��� �� ��������� $����� �� ��� ;��#������� �� $�� �- $ ;�������� �� � ����� ���%�3��- ��� � �����%��� � �����#��� ������-� ���1 � ����1 ?&. �� 9�D��
.������� "- "��������� .-"- �� ;������� �- �����) , ��/�%�� �� 4#��� �������$��%� ���� ���� 8� �?�����. �%����-.�� ��� ������ �� � %�� -$���� ���$ ��%� ���� �� �G+��������)� &1 � �1 7���1 &?:. ��"�"9��"�!�
/!+��� >-,- ,��� <- �� @�������� 8- �����) +� ��� �3���� ��� ��%� ���� �� ���%� �� ��������3��- ���3�%���3��� ������ ��%��%� ���� � �� 5�/� � �� �$-�� %���� �� 7���� ����3�� � /��� /��� �1 �9A. ���9�!��
/����� %- /!+��� >-,- %� "-�- ;��� ;-+- �� @�������� 8- ��"" ) ,����%#+�,B���3�%%����% ����%� ���� ��B ���3�$� ����%��� �� 5� % ����� � �������� �� 7���� � ���3�� �/��� &1 �1. �"!9����
<�B��� �- *�� )- )�����(����$� "- <������('� �(��� '- %� '- <���� )- )������ '-(+- +������ *- ��"����� *- ��""") �6A, �%����-. -��� ��� ������. �� �����%#%�% %��%�3���� �� ��������� D# �$��� ��%� ���� �� � �$��� �� �� 9��� /��� &1 �2. ���9����
C���� *- =�� ;- �� "����� *-'- �����) ��%���% �� ��� #�3���� �� ��� �%�� �����% !#0#����%� ���� �� ����%��� ��$� ����� ������������ �� ����$ ����� /������ �� ������&1 � �1 7���1 &?2. ��!�!9��!���
������ =- '��� �- '�� <- C����� @- �� =����� '-�����) 8� �?�����. �%����-. �� � ��� ���� �� � ��%� ���� ������ �%%��- ���&�$�� �� ;����� ���� ���� $������ �� ���#��%� ������ $����%��$� &1 � �1 7���1 &?:. "D9����
��� *- �� ��� %- �����) ������ � �- ��� �� ��� ���$��� � ����%���%��� ���������� � 5�/� ��%� ��-$����� )���� ������. 02. ���9�"��
=����� D-"- ��"!�) +%��-� �� �� ���� % � ������ �� ��- ������$�%� �� ��� ��� �� ���� ����-� *��4�����. &&?. � �9� D�
%��� *- �� ��� �- �� %����� *- �����) ,�����������%� ���� ���B �����?������. $������$. ���%�-�������. ����%�������� &1 *�1 7��1 � �,���� �. &9. ��!9����
��(@����� .- �� /� =�� E- �����) G��%����� �� ��%� ���� ��-����B � �-�� �� ���� ��?����� �� ��� @,<6 ���� �$�%� ��
��%� ���� ��� ����%��� �� ������ � $����%��$� E� ���� � � *����� � /���3��� ���$��. �*�. ���)� ,$��� �$BG%����� . ��� � D9��D�
��(@����� .- =���� @- +��� +-('- �� /� =�� E- ��"" )*�� �� $��%0#����%� ���� �� ����%��� �� �����%��� ��������#���� ��?��� ��/ �%�� �� � ������ ��������%� �� ����3�$� ,#��������� ��% � ���� � /��� &1 �1. !��9!���
�� ��� �- %��� *- )�����(����$� "- <���� )- %���� %- %� '- *�� )- )������ '-(+- "����� *- �� %����� *- �����) �%���%#+�,B���������D#0#-%�������#�� � �#0#$%���%� ���� �� � �$ �� %�� �-������ � �������) 5�/� �� &1 � �1 7���1 &?2. �"���9�"��"�
�� ��� �- %��� *- )�����(����$� "- <���� )- %���� %- )������ '-(+- *�� )- "����� *- ��%����� *- �����) �6A, �%����-. ���� �%�-��� ��� �������. ����������% �� ��� �3���� �� $%���%#����3�$� ,B��������#��� �#0#-%�������#��#0#$%���%� ���� �� � �$ ��%� 5�/� ��/��� /��� �1 �9A. ����9��D��
�� ��� �- %��� *- )������ '-(+- �� %����� *- �����)�6A, �%����- �� �� ��� �3���� �� �/� ���������� ��� �� �� ��������� $%���%� ���� ��� /��� ����� �����������% ���������� /��� �� 1 �22. "9"��
E�������� >-=- ��" �) 8 �������� �� ����� /��� �$%% ����� ���$$���-��B $�%���%� ��� �� $% ��(�������� *���1 �,���1?9. ��9D��
#���� "- �� ,���� ;- �����) ��%���% �%����- �� ��#������%������ EEE#��#0#����%� ���� �� �6A, � �$ ��5���� ��������% ��� ������ �� ������ �� � �� � /��1 4���1 ����1�� 1 ���. F?. D �9D !�
#���� "- �� ,���� ;- ������) *��% ������������B $�%���% �%����- �� ���3��%#+�,B���� �#0#���3��%� ���� �� �6A,� �$ ��5�� �� ��������% ��� ������ �� ������ �� � �� � /��14���1 ����1 �� 1 ���. F?. ��D"�9��D"��
#���� "- �������� +- �� ,���� ;- �����) ��%���% �%��#��- �� ��#� ���).�� ���) #����#D#�%#0#����% � ���� �� �6A,� �$ *��� �� ��������% ��� ������ �� ������ �� � �� � ����1� ����1 � ����1 9?1. �!�9� ��
)�� G- ;������ "- ������ 8- �� '���� D- ��""!) +� ��� #�3���� �� ���� �%�-��� ��� ������ �� ��� �������$��%C���#3��%#+�,B��� ��%�� 4#��� �������$��%C���3��%� ���� ��� �$ �%������ ��%% ��%�� �� �� � �����. � ����� ������������/��� *�1 � �1 90. !!!9! "�
*�� ���%������ ��;������ ��� ��� �� ���� ��� ��� ���� ���$����� �� 1��@�&*� /��� ,�������� ��$�� � ,4� �!�� ���
��%*��'). ,4� �!�D ��� ����'!�). �� ,4�"D!�" ��� ��.��)� E� $��� �� ������� ��� ��� ���%������ ��;����� ���������
���� 1��@�& ,�������� ��$�� @6��D��! �� ���� ����-���� � ��*��'� *�� ��*��' �� @,<6 ��$�%�- �� ��&��/�
�������� �� �1 ������� �� �� ����� ��� � �$ ��%*��'�
� @%�&/�%% 8��%�����- >��. ��� /��� &����. �����). 9:. ""�9����
2��� � ��� �� ��������� ,�� � � ��� ������ ��������������� ��� 2� ��%������ ��3��� ����