I giornata della ricerca Dipartimento di Biomedicina e

Prevenzione13 maggio 2013

I microRNA come modello I microRNA come modello di regolazione post-di regolazione post-

trascrizionale nei tumori trascrizionale nei tumori solidisolidi

Silvia Anna Ciafrè Maria Giulia Farace Barbara Fazi Silvia Galardi

Nome Cognome, qualifica: Silvia Anna Ciafrè, P.A. SSD di afferenza: BIO 13 (Biologia Applicata)Patologie di maggior interesse:

glioblastoma

Altre Patologie di interesse: adenocarcinoma prostatico, neuroblastomaArgomenti generali di interesse:

regolazione post-trascrizionale dell’espressione genica, microRNA, lncRNA, cellule “staminali” cancerose, cellule staminali neurali, biomarcatori

Metodiche di laboratorio: PCR, RT-PCR, RQ-PCR, WB, NB, IF, ChIP, EMSA, saggi in vitro di proliferazione, migrazione, invasione, angiogenesi, modelli murini di crescita tumorale sottocutanea

Collaborazioni (ambito): •Proff. G. Maira e A. Mangiola, Istituto di Neurochirurgia, Università Cattolica del Sacro Cuore di Roma, (glioblastomi)

•Prof. G. Pelicci, IFOM-IEO Milano, (glioblastoma e CLIC1)•Dott. G. Finocchiaro, Istituto neurologico C. Besta, Milano (cellule staminali neurali di topo e cellule “staminali” di glioblastoma)

•Dott. S. Nasi, CNR-IBPM, Roma (Omomyc e cellule “staminali” di glioblastoma)

•Dr. J. Benard, IGR Villejuif, Francia (neuroblastoma e microRNA)• Dr. I. Groisman, CNRS FRE 3377 "Epigénétique et Cancer“, Gif-sur-Yvette, Francia (regolazione post-trascrizionale di p27 nel cancro)

Da: Nana-Sinkam , Croce Non-coding RNAs in cancer initiation and progression and as novel biomarkers Mol.Oncol. 5 (6) 2011 483 - 491

Diverse classi di RNA non Diverse classi di RNA non codificanti e loro codificanti e loro contributo alla contributo alla

regolazione regolazione dell’espressione genica dell’espressione genica

nel cancronel cancro

Prima analisi completa di Prima analisi completa di espressione dei microRNA in espressione dei microRNA in

campioni di glioblastomi umanicampioni di glioblastomi umani

miR-221 e miR-222

Definizione dei meccanismi di azione e Definizione dei meccanismi di azione e dei fattori che regolano di miR-221/222 dei fattori che regolano di miR-221/222 nel glioblastoma e in altri tumori solidi nel glioblastoma e in altri tumori solidi umaniumani

Studio del profilo di espressione di Studio del profilo di espressione di mRNA ed RNA non codificanti mRNA ed RNA non codificanti

(SAGE) in campioni di glioblastoma (SAGE) in campioni di glioblastoma umanoumano

Ricerca di una “molecular signature” in grado di distinguere tessuti di pazienti lungo-sopravviventi da quelli di pazienti a sopravvivenza breve

Ricerca di RNA, codificanti e non, la cui espressione sia modulata, oltre che nel tessuto tumorale, anche nelle zone peritumorali, comunemente sede di recidiva, e probabile luogo di fenomeni precoci di trasformazione Analisi del significato funzionale delle molecole così identificate, in modelli in vitro di linee cellulari e cellule “staminali” di glioblastoma

• Capacità di migrazione, invasione, adesione

Caratterizzazione degli effetti molecolari e Caratterizzazione degli effetti molecolari e funzionali di un dominante negativo di c-funzionali di un dominante negativo di c-

myc in cellule staminali cancerose di myc in cellule staminali cancerose di glioblastomaglioblastoma

BT168

-dox +dox

Self-renewal

0

20000

40000

60000

80000

100000

120000

140000

160000

180000

200000

0 gg 1 gg 2 gg 3gg 4 gg

BT 168omomyc -DoxBT 168omomyc+ DoxBT 168GFP -DoxBT 168GFP +Dox

Proliferazione

• Profilo di espressione dei microRNA e analisi del coinvolgimento dei miRNA modulati negli effetti funzionali • Profilo di espressione dei lncRNA e studio dei meccanismi regolativi

Differenziamento