"Há dois tipos de pessoas: As que fazem as coisas, e as que dizem que fizeram as coisas. Tente...
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"Há dois tipos de pessoas: As que fazem as coisas,
e as que dizem que fizeram as coisas. Tente ficar no
primeiro tipo. Há menos competição."
Indira Ghandi
DUPLICAÇÃO DO DNA
POSSÍVEIS MECANISMOS (HIPÓTESES)
CONSERVATIVA SEMI-CONSERVATIVA
DISPERSIVA
MESELSON E STAHL (1958)
TÉCNICA: ULTRACENTRIFUGAÇÃO EM GRADIENTE DE CLORETO DE CÉSIO (CSCL)
3. DNA EXTRAÍDO DE BACTÉRIAS CULTIVADAS POR 1 GERAÇÃO EM MC COM N14, APÓS 14 GERAÇÕES EM MC COM N15
4. DNA EXTRAÍDO DE BACTÉRIAS CULTIVADAS POR 2 GERAÇÕES EM MC COM N14, APÓS 14 GERAÇÕES EM MC COM N15
1. DNA EXTRAÍDO DE BACTÉRIAS CULTIVADAS EM MC COM N14
2. DNA EXTRAÍDO DE BACTÉRIAS CULTIVADAS EM MC COM N15
KORNBERG (1956): DNA ATUA COMO MOLDE PARA SÍNTESE DAS CADEIAS COMPLEMENTARES
DESCOBRIRAM ENZ. DNA POLIMERASE (DE E. COLI) QUE DIRIGE A SÍNTESE DE
DNA IN VITRO: POLI I DESOXIRRIBONUCLEO-TÍDEOS TRIFOSFATADOS
+ DNASEMENTE (MOLDE)
DNASEMENTE +
DNA SINTETIZADO IN VITRO +
PIROFOSFATO ESTUDOS POSTERIORES: ALÉM DA POLI I, HÁ + 2 POLIMERASES EM BACTÉRIAS:
POLI II E POLI III.
DNA DE BACTÉRIAS: CIRCULARPARA SE DUPLICAR DESENROLAMENTO DA DUPLA HÉLICE (EXPOR AS CADEIAS MOLDE)
PROTEÍNAS DNAa: SEPARAM AS CADEIAS DE DNA NOS PONTOS DE ORIGEM DA DUPLICAÇÃO.
PROTEÍNAS DE DESEMPARELHAMENTO (= HELICASES): SEPARAM AS CADEIAS AO LONGO DA MOLÉCULA DE DNA, FORMANDO A BOLHA DE REPLICAÇÃO.
PROTEÍNAS SSP: MANTÉM CADEIAS DE DNA SEPARADAS
PROTEÍNAS DE RELAXAMENTO (TOPOISOMERASES): QUEBRA UMA DAS CADEIAS, PERMITINDO QUE ELA REALIZE UMA SÉRIE DE GIROS SOBRE A OUTRA CADEIA.
A DUPLICAÇÃO PROGRIDE EM AMBOS OS SENTIDOS ATÉ OS CHAMADOS PONTOS DE TÉRMINO. EM E. COLI: - 1 PONTO DE ORIGEM
- 1 PONTO DE TÉRMINO
EM E. COLI: DNA COMPORTA-SE COMO UMA UNIDADE DE DUPLICAÇÃO (REPLICON).
MOLÉCULAS ENVOLVIDAS NA DUPLICAÇÃO DO DNA
DUPLICAÇÃO:•SEMICONSERVATIVA•BIDIRECIONAL•SEMI-DESCONTÍNUA•ASSINCRÔNICA: REGIÕES DE DUPLICAÇÃO TARDIA E DE DUPLICAÇÃO PRECOCE – FAMÍLIA DE RÉPLICONS (REPLICON CLUSTERS)
DECIFRAÇÃO DO CÓDIGO GENÉTICO
QUAL A RELAÇÃO ENTRE SEQÜÊNCIAS ESPECÍFICAS DE NUCLEOTÍDEOS E SEQUÊNCIAS DE A.A.?
4 NUCLEOTÍDEOS 20 AA
GEORGE GAMOW (FÍSICO - 1954): HIPÓTESE: CADA A.A. SERIA CODIFICADO POR UM CONJUNTO DE 3 NUCLEOTÍDEOS (= TRINCA = CODON)
4 BASES 20 A.A. (X) 16 COMBINAÇÕES DE DUPLAS DE BASES 20 A.A. (X) 64 COMBINAÇÕES DE TRINCAS DE BASES 20 A.A.
CRICK E COL. (1961) CONFIRMARAM A HIPÓTESE USANDO FAGO T4:
A LEITURA DA MENSAGEM INICIA-SE NUM EXTREMO E DESLOCA-SE EM BLOCOS
CONSECUTIVOS DE 3 BASES, SEM PONTUAÇÃO.
TABELA DO CÓDIGO GENÉTICO1ª posição 2ª posição 3ª posição
extremidade 5’ U C A G extremidade 3’ UUU-Phe UCU-Ser UAU-Tyr UGU-Cys UU UUC-Phe UCC-Ser UAC-Tyr UGC-Cys C UUA-Leu UCA-Ser UAA- * UGA- * A UUG-Leu UCG-Ser UAG- * UGG-Trp G CUU-Leu CCU-Pro CAU-His CGU-Arg U
C CUC-Leu CCC-Pro CAC-His CGC-Arg C CUA-Leu CCA-Pro CAA-Gln CGA-Arg A CUG-Leu CCG-Pro CAG-Gln CGG-Arg G AUU-Ile ACU-Trh AAU-Asn AGU-Ser UA AUC-Ile ACC-Trh AAC-Asn AGC-Ser C AUA-Ile ACA-Trh AAA-Lys AGA-Arg A AUG-Met** ACG-Trh AAG-Lys AGG-Arg G GUU-Val GCU-Ala GAU-Asp GGU-Gly U
G GUC-Val GCC-Ala GAC-Asp GGC-Gly C GUA-Val GCA-Ala GAA-Glu GGA-Gly A GUG-Val GCG-Ala GAG-Glu GGG-Gly G
*: códons de terminação**: códon de iniciação
CÓDIGO GENÉTICO
Códon Código universal Código mitocondrial Mamíferos Drosophila Leveduras Plantas
UGA TERM TRP TRP TRP TERM
AUA ILE MET MET MET ILE
CUA LEU LEU LEU THR LEU
AGA AGG ARG TERM SER ARG ARG
SÍNTESE PROTÉICA (PROCARIONTES)
ENVOLVE OS 3 TIPOS DE RNA 1 - LIGAÇÃO DO A.A. AO SEU RNAT ESPECÍFICO
SÍNTESE PROTÉICA (PROCARIONTES)
ENVOLVE OS 3 TIPOS DE RNA 1 - LIGAÇÃO DO A.A. AO SEU RNAT ESPECÍFICO 2 - INICIAÇÃO FORMILAÇÃO DA METIONINA A.A. QUE INICIA A SÍNTESE FORMAÇÃO DO COMPLEXO:
RNATA.A + RNAM + RIBOSSOMO
SÍNTESE PROTÉICA (PROCARIONTES)
ENVOLVE OS 3 TIPOS DE RNA 1 - LIGAÇÃO DO A.A. AO SEU RNAT ESPECÍFICO 2 - INICIAÇÃO FORMILAÇÃO DA METIONINA A.A. QUE INICIA A SÍNTESE FORMAÇÃO DO COMPLEXO:
RNATA.A + RNAM + RIBOSSOMO 3 - ELONGAÇÃO CRESCIMENTO DO POLIPEPTÍDEO
SÍNTESE PROTÉICA (PROCARIONTES)
ENVOLVE OS 3 TIPOS DE RNA 1 - LIGAÇÃO DO A.A. AO SEU RNAT ESPECÍFICO 2 - INICIAÇÃO FORMILAÇÃO DA METIONINA A.A. QUE INICIA A SÍNTESE FORMAÇÃO DO COMPLEXO:
RNATA.A + RNAM + RIBOSSOMO 3 - ELONGAÇÃO CRESCIMENTO DO POLIPEPTÍDEO 4 - TERMINALIZAÇÃO CODON DE TERMINAÇÃO NO SÍTIO A
+ FATOR DE TERMINALIZAÇÃO (RF)
+ GTP
LIBERAÇÃO
- ÚLTIMO RNAT - POLIPEPTÍDEO - SUBUNIDADES DO
RIBOSSOMO - RNAM