Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay 72460 - 20 72460

КАЧЕСТВЕН ТЕСТ ЗА ПОТВЪРЖДАВАНЕ И ДИФЕРЕНЦИРАНЕ НА ОТДЕЛНИ АНТИТЕЛА КЪМ HIV-1 И HIV-2 В КРЪВ, СЕРУМ И ПЛАЗМА

883601 - 2013/01

Съдържание 1. ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ ....................................................................................................... 1 2. КРАТКО ОПИСАНИЕ И ОБЯСНЕНИЕ НА ТЕСТА .................................................. 1 3. ПРИНЦИП НА ПРОЦЕДУРАТА ................................................................................... 1 4. РЕАКТИВИ ........................................................................................................................ 2 5. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ ......................................................... 3 6. ПРОБИ ............................................................................................................................... 4 7. ПРОЦЕДУРА .................................................................................................................... 5 8. ОГРАНИЧЕНИЯ НА ТЕСТА ........................................................................................ 12 9. РАБОТНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ ................................................................................. 13 10. Библиографични препратки. ...................................................................................... 18

1

1. ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ

Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay на Bio-Rad е еднократен имунохроматографски тест за потвърждаване и диференциране на отделни антитела срещу Човешкия имунодефицитен вирус тип 1 и 2 (HIV-1 и HIV-2) във взета от пръста кръв или взети от вена кръв, серум или плазма.

Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay е предназначен за употреба като допълнителен тест за потвърждаване на наличието на антитела срещу HIV-1 и HIV-2 в проби, които реагират повторно при скрининг.

2. КРАТКО ОПИСАНИЕ И ОБЯСНЕНИЕ НА ТЕСТА

Открит през 1983 г., Човешкият имунодефицитен вирус (HIV) е ретровирус, определен като причинител на Синдрома на придобитата имунна недостатъчност (СПИН). СПИН се характеризира с промени в популацията на Т-лимфоцитите, които играят много важна роля в имунната защитна система. У заразения индивид вирусът причинява намаляване на един от видовете Т-клетки, наричани Т-хелпери (помощници), което прави тези пациенти податливи на различни инфекции и някои злокачествени заболявания. Основните пътища на предаване са чрез сексуален контакт, заразяване чрез кръв или кръвни продукти и предаване от майката на новороденото. Към края на 2010 г. в света имаше около 34 милиона носители на HIV/СПИН, което е със 17% повече спрямо 2001 г.

През 2010 г. имаше 2,7 милиона [2,4–2,9] нови случая на заразяване с HIV, от които около 390 000 [340 000-440 000] деца. Това беше с 15% по-малко, отколкото през 2001 г. и 21% по-малко нови заразени в сравнение с пика на заразата през 1997 г.

Вирусът HIV се състои от молекули на РНК на генома, защитени с капсид и обвивка, като обвивката на HIV е основната цел на реакцията на хуморалните антитела. Присъствието на вируса у пациента кара имунната система да реагира чрез произвеждане на антитела срещу HIV. Отчитането на тези антитела може да се използва за диагностика.

Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay е бърз имунохроматографски тест, чието ползване е много лесно. Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay използва обездвижени антигени за откриване на антитела срещу HIV-1 и HIV-2 в серум, плазма или кръв.

3. ПРИНЦИП НА ПРОЦЕДУРАТА

Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay използва свързващ се с антителата протеин А, свързан с частици колоидна златна боя като конюгат, и антигени на HIV-1 (p31, gp160, p24, gp41) и HIV-2 (gp36, gp140), които са свързани с твърдата фаза на мембраната. Пробата се слага в чашката за SAMPLE + BUFFER. Когато пробата и буферът се пренесат върху тест лентата, в чашката за BUFFER се добавя още буфер. Буферът улеснява страничното изтичане на освободените продукти и ускорява свързването на антителата с антигените.

Ако пробата е положителна, антителата срещу HIV се улавят от обездвижените в зоната TEST (ленти от 1 до 6) антигени: колоидният златен протеин А се свързва с уловените антитела и образува розово-пурпурни черти.

Ако няма антитела срещу HIV, в зоната TEST не се образуват розово-пурпурни черти.

И в двата случая пробата продължава да се пренася по мембраната и образува розово-пурпурна черта в зоната CONTROL (C), където се фиксира протеинът А.

Имуноглобулинът G от пробата се свързва с протеина А, фиксиран в зоната (C) на твърдата фаза на мембраната, и образува една розово-пурпурна черта.

Тази контролна черта доказва, че пробата и реагентите са поставени правилно и са се пренесли през устройството.

2

Касетата на Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay съдържа контролна лента (C) и шест (6) тест ленти, номерирани в касетата и съответстващи на следното: Лента 1: gp36 (HIV-2, пептид на обвивката) HIV-2 ENV Лента 2: gp140 (HIV-2, пептиди на обвивката) HIV-2 ENV Лента 3: p31 (HIV-1, пептид полимераза) HIV-1 POL Лента 4: gp160 (HIV-1, рекомбинантен протеин на обвивката) HIV-1 ENV Лента 5: p24 (HIV-1, рекомбинантен протеин на ядрото) HIV-1 GAG Лента 6: gp41 (групи M и O) (HIV-1, пептиди на обвивката) HIV-1 ENV

Контролна лента (CTRL): Протеин A

4. РЕАКТИВИ

4.1 Описание Означение на етикета Описание Представяне Device

Нитроцелулозна мембрана, съдържаща антигени HIV-1 и HIV-2 в зоната TEST, протеин A в зоната CONTROL и колоиден златен протеин A в зоната на чашката за BUFFER

20 x 1 Готов за употреба

Buffer Гутатор за буфер с консервант (натриев азид < 0,1%, гентамицин сулфат 0,125%, стрептомицин сулфат 0,125%)

1 x 5 ml Готов за употреба

Microtubes 15 µl 15 µl микротръбички капилярни пластмасови пипети (без антикоагулант, за вземане от пръста)

1 x 20 Готов за употреба

4.2 Изисквания за съхранение и транспортиране Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay (устройство и буфер) се съхранява при температура от 2°C до 30°C до изтичане на срока на годност, посочен на опаковката. Да не се замразява. Пликът да не се отваря до извършването на теста. Буферът е стабилен до изтичане на срока на годност след първото практическо използване.

3

5. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ

За in vitro диагностика. За професионално използване в здравеопазването.

5.1 Предпазни мерки за здравето и безопасността

• С този тест трябва да работят само адекватно обучени лица. Да се носи подходящо предпазно облекло, ръкавици и защита за очите и лицето, и да се работи при спазване на задължителните Добри лабораторни практики.

• Тест комплектът съдържа компоненти от човешка кръв. Не е известен метод, който да гарантира пълното отсъствие на заразни вещества. Затова всички човешки кръвни продукти, реактиви и човешки проби трябва да се считат за потенциални преносители на инфекциозни болести, като се спазват предпазните мерки, предписани от местната, регионална и национална нормативна уредба.

• Биологични разливи: Разлетите материали от човешки произход да се считат за потенциално заразни.

Разливи, които не съдържат киселини, трябва да се почистват незабавно, като се почисти цялата зона, материалите и замърсените повърхности или оборудване с подходящ химически дезинфекционен препарат, действащ ефикасно срещу потенциалните биологични рискове, свързани със съответните проби (обичайно се използва обикновена белина, разредена 1:10, 70-80% етанол или изопропанол, който е йодофор [напр. 0,5% Wescodyne™ Plus и др.), и се подсуши с кърпа.

БЕЛЕЖКА: Не поставяйте разтвори, съдържащи белина, в автоклава

• Всички проби и материали, използвани за теста, следва да се изхвърлят като съдържащи заразни вещества. Лабораторните, химически и биологично опасни отпадъци се използват и изхвърлят в съответствие с действащата местна, регионална и национална нормативна уредба.

• За съвети относно рисковете и предпазните мерки, свързани с някои от химическите съставки на теста, прегледайте пиктограмите на етикетите и прочетете информацията в края на настоящата инструкция за употреба. Информационният лист за безопасност се предлага на www.bio-rad.com.

5.2 Предпазни мерки, свързани с процедурата

5.2.1 Подготовка • Прочетете цялата листовка на продукта, преди да използвате теста. Следвайте

инструкциите стриктно, защото в противен случай може да получите неточни резултати от теста.

• Използването на теста с проби, различни от изрично одобрените за това устройство, може да доведе до неточни резултати от теста.

• Тестът следва да се извърши при температура от 18°C до 30°C. Ако тестът се съхранява в хладилник, изчакайте поне 30 минути реактивите да се стабилизират при стайна температура.

• НЕ ИЗПОЛЗВАЙТЕ теста, ако в плика с устройството няма пакетче със сикатив. Изхвърлете устройството и използвайте ново, извадено от плик, съдържащ сикатив.

• НЕ ИЗПОЛЗВАЙТЕ теста, ако пликът с устройството е повреден.

• Устройствата за тест са за еднократна употреба.

• Не използвайте устройството и комплекта реактиви след изтичане на срока на годност. Преди извършване на теста проверете срока на годност.

4

• Не смесвайте реактиви от различни партиди.

• За разчитане на резултатите от теста е необходимо подходящо осветление.

• Ако тестът се съхранява при температура, извън диапазона от 2°C до 30°C, или се използва извън работния диапазон от 18°C до 30°C, използвайте контроли за потвърждаване на HIV 1 и 2 Geenius™ с код: 72329, за да осигурите правилното извършване на теста.

5.2.2 Обработка • След отваряне на запечатания плик устройството трябва да се използва до 60

минути. • Не променяйте реда за извършване на теста.

6. ПРОБИ Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay може да се извърши с венозна или взета от пръста кръв, серум или плазма.

6.1 Типове проби Венозна кръв

Изтеглете кръв, като следвате лабораторната процедура, за да получите венозна кръв. Сложете пробата в епруветка, съдържаща цитрат, хепарин или етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA). Разклатете епруветката с кръв добре, преди да вземете проба. С помощта на лабораторна пипета изтеглете 15 µl кръв. Направете теста незабавно съгласно инструкциите за Процедура на теста.

Кръв от пръста

Почистете пръста на тестваното лице с антисептична кърпичка. Изчакайте да изсъхне или подсушете пръста със стерилна марля. С помощта на стерилен ланцет пробийте кожата точно до средата на пръста и избършете първата капка със стерилна марля, като не стискате пръста, за да ускорите изтичането, тъй като това може да разреди кръвта с много течности от тъканите. Вземете 15 µl проба от втората капка, като я допрете с включената в комплекта еднократна микротръбичка, докато пипетата се напълни съгласно следващата процедура.

Направете теста незабавно съгласно инструкциите за Процедура на теста.

Серум или плазма

Изтеглете кръв, като следвате лабораторната процедура, за да получите проби от серум или плазма. Съберете пробите от серум в епруветки, съдържащи съсирващ агент, в които няма антикоагулант (серум). Сложете пробата от плазма в епруветка, съдържаща антикоагулантите цитрат, хепарин или EDTA. Съберете пробата в чист съд, като следвате нормалните лабораторни процедури. Разклатете епруветката със серум или плазма добре, преди да вземете проба. С помощта на лабораторна пипета изтеглете 5 µl от пробата. Направете теста незабавно съгласно инструкциите за Процедура на теста.

6.2 Боравене с пробите Кръвта, взета от пръста, трябва да се тества незабавно след вземането.

Пробите от венозна кръв могат да бъдат тествани незабавно или съхранени при 2°C до 8°C до 3 дни след вземането, преди да бъдат тествани.

НЕ ЗАМРАЗЯВАЙТЕ НЕОБРАБОТЕНА КРЪВ.

Пробите от серум и плазма могат да бъдат тествани незабавно или съхранени при 2°C до 8°C до 7 дни след вземането, преди да бъдат тествани.

5

За дългосрочно съхранение пробите от серум и плазма трябва да се замразят (на -20°C или по-ниска температура).

Пробите не трябва да се ползват, ако са били замразявани и размразявани повече от 5 пъти. След размразяване разбъркайте пробите старателно и изчакайте да достигнат стайна температура.

Не е доказано повлияване при проби, съдържащи до 200 mg/l билирубин, при липемни проби, съдържащи до 33 g/l триолеин или хемолизирани проби, съдържащи до 2 g/l хемоглобин. Анормално висока албуминемия или протеинемия (120 g/l) също не повлиява резултатите.

6.3 Превоз на проби Ако пробите се превозват, те трябва да се опаковат в съответствие с наредбите за транспорт на етиологични вещества.

Пробите от венозна необработена кръв трябва да се превозват охладени с охлаждащи пакети или мокър лед.

Проби от серум и плазма трябва да се превозват замразени в сух лед.

7. ПРОЦЕДУРА

7.1 Необходими материали

Предоставени материали • Устройство (20 бр.), гутатор за буфер (1 x 5 ml) и микротръбички 15 µl (1 x 20) в

един набор. • Вижте § 4.1 Описание.

Необходими материали, които се доставят отделно • Контроли за потвърждаване на HIV 1 и 2 Geenius™ с код: 72329.

Необходими материали, които не се предоставят • Стенен или ръчен часовник или друго устройство за измерване на време. • Пипетори, осигуряващи проби по 5 µl (серум или плазма) и по 15 µl (венозна кръв). • Ръкавици за еднократна употреба. • Съдове за биологично опасни отпадъци.

7.2 Подготовка на реактивите Всички компоненти на Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay се доставят готови за употреба.

7.3 Процедура на теста

ПРОЦЕДУРА за необработена кръв

1.

Извадете устройството на Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay от плика и го поставете на равна повърхност (не е необходимо да изваждате сикатива от плика). БЕЛЕЖКА: Ако в плика няма пакетче със сикатив, НЕ ИЗПОЛЗВАЙТЕ ТЕСТА. Изхвърлете тестовото устройство и вземете ново. Сложете на тестовото устройство етикет с името или идентификационния номер на пациента (вижте Фигура 1 по-

Фигура 1

6

долу). Отбележете, че устройството на Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay има шест (6) сини черти в зоната Тест (в зоната Контрол няма сини черти); ако липсва една от тези 6 цветни черти, НЕ ИЗПОЛЗВАЙТЕ. Изхвърлете тестовото устройство и вземете ново.

7

Венозна необработена кръв Вижте приготвянето на пробите в § 6.1 Типове проби. Кръв от пръста Вижте приготвянето на пробите в § 6.1 Типове проби.

Стъпка 1:

Дръжте микротръбичката от 15µl хоризонтално и докоснете капката кръв с върха ѝ. Капилярното действие автоматично ще изтегли пробата до белега за напълване и ще спре.

Стъпка 2:

За да извадите пробата, изравнете върха на тръбичката с мястото за поставяне и стиснете балона. Ако пробата не излиза, дръжте тръбичката вертикално и плъзнете пръста си по отдушника. След това изравнете върха с мястото за поставяне и стиснете балона.

2.

Сложете 15 µl необработена кръв в центъра на Ямка 1 SAMPLE + BUFFER на устройството (вижте Фигура 2 по-долу). За венозна необработена кръв използвайте лабораторна пипета. За необработена кръв от пръста следвайте протокола с микротръбичка 15 µl от набора (вижте стъпки 1 и 2 по-горе). Фигура 2

3

Непосредствено след поставянето на пробата с помощта на Гутатора за буфер добавете 2 капки буфер в Ямка 1 SAMPLE + BUFFER (вижте Фигура 3 по-долу).

Фигура 3

8

4.

Изчакайте 5-7 минути, докато 6-те сини черти ТЕСТ изчезнат от правоъгълната зона TEST. Ако чертите не изчезнат, изхвърлете тестовото устройство и повторете процедурата с ново. БЕЛЕЖКА: По мембраната може да остане малко синьо-зелен цвят, но самите цветни черти не трябва вече да се виждат.

С помощта на Гутатора за буфер добавете 5 капки буфер (бяла капачка) в Ямка 2 BUFFER (вижте Фигура 4 по-долу).

Фигура 4

5.

Отчетете резултатите от теста от 20 до 30 минути след добавянето на буфер в Ямка 2 BUFFER

Не отчитайте резултатите след 30 минути

Отчетете резултатите на добре осветено място.

БЕЛЕЖКА: Изхвърлете използваните накрайници на пипети, тестовото устройство и останалите тестови материали в съд за биологично опасни отпадъци.

ПРОЦЕДУРА за серум или плазма Вижте приготвянето на пробите в § 6.1 Типове проби.

1.

Извадете устройството на Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay от плика и го поставете на равна повърхност (не е необходимо да изваждате сикатива от плика). БЕЛЕЖКА: Ако в плика няма пакетче със сикатив, НЕ ИЗПОЛЗВАЙТЕ ТЕСТА. Изхвърлете тестовото устройство и вземете ново. Сложете на тестовото устройство етикет с името или идентификационния номер на пациента (вижте Фигура 1 по-долу). Отбележете, че устройството на Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay има шест (6) сини черти в зоната Тест (в зоната Контрол няма сини черти);

Фигура 1

9

ако липсва една от тези 6 цветни черти, НЕ ИЗПОЛЗВАЙТЕ. Изхвърлете тестовото устройство и вземете ново.

2.

С помощта на лабораторна пипета сложете 5 µl серум или плазма в центъра на Ямка 1 SAMPLE + BUFFER на устройството (вижте Фигура 2 по-долу).

Фигура 2

3

Непосредствено след поставянето на пробата, с помощта на шишенцето с гутатор за разредител добавете 2 капки буфер в Ямка 1 SAMPLE + BUFFER (вижте Фигура 3 по-долу).

Фигура 3

4.

Изчакайте 5-7 минути. 6-те сини ТЕСТ черти трябва да са изчезнали от правоъгълната зона TEST. Ако чертите не изчезнат, изхвърлете тестовото устройство и повторете процедурата с ново. БЕЛЕЖКА: По мембраната може да остане малко синьо-зелен цвят, но самите цветни черти не трябва вече да се виждат.

С помощта на шишенцето с гутатор за разредител добавете 5 капки буфер (зелена капачка) в Ямка 2 BUFFER (вижте Фигура 4 по-долу).

Фигура 4

5.

Отчетете резултатите от теста от 20 до 30 минути след добавянето на буфер в Ямка 2 BUFFER

Не отчитайте резултатите след 30 минути

Отчетете резултатите на добре осветено място.

БЕЛЕЖКА: Изхвърлете използваните накрайници на пипети, тестовите устройства и останалите тестови материали в съд за биологично опасни отпадъци.

10

7.4 Контрол на качеството

7.4.1 Вградена контролна функция Контролната черта служи като вграден вътрешен контрол и дава потвърждение за добавяне на пробата и правилно извършване на теста. Ако тестът е извършен правилно и устройството работи нормално, в зоната CONTROL (C) ще се появи розово-пурпурна черта (Моля, вижте: Интерпретиране на резултатите от теста).

7.4.2 Външен контрол на качеството Контроли за потвърждаване на HIV 1 и 2 Geenius™ с код: 72329 се предлагат отделно за използване с Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay. Препоръчително е контролите за потвърждаване на HIV 1 и 2 Geenius™ да се използват при следните обстоятелства:

• При отваряне на нова партида набори за тест. • При получаване на нова пратка набори за тест. • Ако температурата в помещението за съхранение на тестовете е под 2°C или над 30°C. • Ако температурата в помещението за извършване на тестовете е под 18°C или над

30°C. • Периодично, на интервали, посочени от използващото заведение.

7.5 Критерии за валидиране на теста

Реакция на ЛЕНТИТЕ Всички видими ленти, дори най-бледите, се считат за положително реагирали.

Критерии за валидиране ВАЛИДЕН: Тестът е валиден само ако в зоната CONTROL (C) се появи розово-пурпурна черта, независимо дали в зоната TEST се е появила черта. (Контролната лента трябва да е ярка: не се допуска бледа лента в Контролната лента) НЕВАЛИДЕН: Ако в зоната CONTROL (C) не се е появила отчетлива розово-пурпурна черта (дори бледа лента), тестът е НЕВАЛИДЕН. НЕВАЛИДЕН тест не може да бъде разчитан. Трябва да се повтори тестването на пробата с ново устройство.

7.6 Разчитане на резултатите Следващите дефиниции описват критериите, използвани от Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay за определяне присъствието или отсъствието на антитела срещу HIV-1 и/или HIV-2. След това потребителят трябва да анализира комбинираните типови лентови профили за всеки тест според критериите, изброени в таблицата за Разчитане на резултатите по-долу.

7.6.1 Критерии за разчитане

Критерии за разчитане на HIV-1 Разчитане Критерии на Bio-Rad

ПОЛОЖИТЕЛЕН 2 ленти от 4-те черти за тест на HIV-1, с най-малко 1 ENV – gp160 (Лента 4) или gp41 (Лента 6)

ОТРИЦАТЕЛЕН Няма лента

11

НЕОПРЕДЕЛЕН

1ENV (Лента 4 или 6) 1GAG (Лента 5) 1POL (Лента 3) 1GAG и 1POL (Ленти 5 и 3)

Критерии за разчитане на HIV-2 Разчитане Критерии на Bio-Rad

ПОЛОЖИТЕЛЕН Трябва да има 2 ленти за HIV-2: gp36 и gp140 (Ленти 1 и 2)

ОТРИЦАТЕЛЕН Няма лента

НЕОПРЕДЕЛЕН 1 ENV: gp36 (Лента 1) или gp140 (Лента 2) само gp36 (Лента 1) само gp140 (Лента 2)

ГЛОБАЛНИ критерии за разчитане на HIV-1/HIV-2 В следващата Таблица за разчитане на резултатите са описани критериите, по които Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay разчита комбинираните типови профили на ленти, наблюдавани за всеки отделен тест.

РЕЗУЛТАТ HIV-2 РЕЗУЛТАТ HIV-1 ГЛОБАЛНО РАЗЧИТАНЕ НА ТЕСТА

Отрицателен Отрицателен HIV ОТРИЦАТЕЛЕН

Неопределен Отрицателен HIV-2 НЕОПРЕДЕЛЕН

Отрицателен Неопределен HIV-1 НЕОПРЕДЕЛЕН

Неопределен Неопределен HIV НЕОПРЕДЕЛЕН

Отрицателен Положителен HIV-1 ПОЛОЖИТЕЛЕН

Неопределен Положителен HIV-1 ПОЛОЖИТЕЛЕН

Положителен Отрицателен HIV-2 ПОЛОЖИТЕЛЕН

Положителен Неопределен HIV-2 ПОЛОЖИТЕЛЕН

Положителен

Положителен случай 1 = 1 ENV HIV-1 (gp 160 или gp41) + GAG или POL случай 2 = 2 ENV HIV-1 (gp 160 и gp41) +/- GAG и/или +/-POL

HIV-2 ПОЛОЖИТЕЛЕН (с кръстосана реакция на HIV-1)

HIV ПОЛОЖИТЕЛЕН НЕОПРЕДЕЛЕН ТИП

12

8. ОГРАНИЧЕНИЯ НА ТЕСТА

8.1 Общи ограничения 1. Визуалното отчитане може да предизвика известни различия в окончателното

заключение между двама лаборанти или два теста: разликите може да се дължат на субективното визуално разчитане.

2. При положителен резултат, яркостта на тест чертите не е непременно пропорционална на количеството антитела в пробата.

3. Приема се, че лице, за което е потвърдено HIV-1 положително или HIV-2 положително, е заразено с вируса, но и лице, което е участвало в проучване на HIV ваксина може да развие антитела към ваксината и може да е или да не е заразено с HIV.

4. Възможно е заразени с HIV-1 и/или HIV-2 лица, подложени на много активна антиретровирусна терапия (HAART) да покажат фалшиви отрицателни резултати.

5. Променливостта на вирусите HIV-1 (група M и група O) и HIV-2 не изключва възможността за получаване на фалшиви отрицателни резултати. Не е известен метод, който да гарантира напълно отсъствието на вируса HIV.

6. Липсата на реакция не изключва възможността лицето да е носител на HIV или да е заразено с HIV. Достигането на нива на антитела, които могат да бъдат отчетени след скорошно заразяване може да отнеме месеци. През първата фаза на заразяването може да има положителен скрининг тест и отрицателен тест за потвърждаване; следователно, отрицателният резултат сочи, че тестваната проба не съдържа антитела срещу HIV, които могат да бъдат отчетени от Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay. Този резултат обаче не изключва възможността от скорошно заразяване с HIV-1 или HIV-2. По-късно трябва да се тества нова проба.

7. Неопределеният резултат не изключва възможността лицето да е носител на HIV или да е заразено с HIV. Достигането на нива на антитела, които могат да бъдат отчетени след скорошно заразяване може да отнеме месеци. През първата фаза на заразяването може да има положителен скрининг тест и неопределен тест за потвърждаване; следователно, неопределеният резултат сочи, че тестваната проба може да съдържа антитела срещу HIV, които могат да бъдат отчетени от Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay. Този резултат обаче не изключва възможността от скорошно заразяване с HIV-1 или HIV-2. По-късно трябва да се тества нова проба.

8. Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay е предназначен да служи като помощно средство при диагностицирането на HIV-1 и/или HIV-2. Заболяванията, свързани с HIV и СПИН, са клинични синдроми и могат да бъдат диагностицирани само клинично.

9. Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay трябва да се използва САМО с капилярна кръв, необработена венозна кръв, серум или плазма. Използването на други проби или тестването на необработена венозна кръв, взета в епруветка, съдържаща антикоагулант, различен от цитрат, хепарин или EDTA, може да не даде точни резултати.

10. Geenius™ HIV 1/2 Confirmatory Assay трябва да се използва в съответствие с инструкциите от листовката на продукта, за да се получат точни резултати.

11. Отчитането на резултатите от теста по-малко от 20 или повече от 30 минути след добавянето на течен буфер в Ямка 2 BUFFER може да покаже грешни резултати.

8.2 Ограничения за разчитането на теста „Неопределеният“ профил не изключва един от следните случаи: сероконверсия или кръстосана реакция с други ретровируси. Хомологията между вирусите HIV-1 и HIV-2 може да доведе до кръстосана реакция между антителата срещу HIV-1 и HIV-2, както към HIV-2, така и към HIV-1. Пробите, които отговарят на критериите за HIV-1 положителни резултати, в някои редки случаи могат да покажат кръстосана реакция на някоя от лентите за обвивката на HIV-2. В повечето случаи профил, който потвърждава заразяване само с HIV-1, не изключва в много редки случаи възможността за вторична сероконверсия на HIV-2 (суперинфекция).

13

Пробите, отговарящи на критериите за HIV-2 положителни резултати, могат да покажат реакция на една или повече ленти за HIV-1. В повечето случаи, неопределен резултат за HIV-1, в съчетание с положителен резултат за HIV-2, потвърждава заразяване само с HIV-2. Това обаче не изключва вероятността за вторична сероконверсия на HIV-1 (суперинфекция). Проби, които отговарят едновременно на критериите за положителна реакция на HIV-1 и HIV-2, обикновено са HIV-2 положителни проби, показващи кръстосана реакция на HIV-1, когато са само с една отчетена лента за обвивка (gp160 или gp41). Такива профили не изключват рядката вероятност от едновременно заразяване с HIV-1 и HIV-2. Проби с неопределен тип HIV, в които са отчетени и 4-те ленти за обвивки (всички HIV-1 env и HIV-2 env) в повечето случаи са HIV-2 положителни проби с реакция на HIV2, която не може да се различи визуално от реакцията на HIV-1. Такива профили не изключват вероятността от едновременно заразяване с HIV 1 и 2. Проби, които отговарят едновременно на критериите за положителна реакция на HIV-1 и HIV-2, в много редки случаи са HIV-1 положителни проби, показващи кръстосана реакция на HIV-2.

9. РАБОТНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ

9.1 Изследване на точността

Беше изследван набор за прецизност (N=6), съставен от 3 проби серум и 3 проби необработена кръв с различен HIV статус (HIV отрицателни, HIV-1 положителни, HIV-2 положителни). За всяко изследване на точността и всяка единица от набора беше определен коефициент на съвпадение според броя правилно определени реакции спрямо статуса на пробата.

9.1.1 Повтаряемост Бяха тествани 10 набора за прецизност по едно и също време. Беше установена повтаряемост със съвпадения на 100% за HIV отрицателни, HIV-1 положителни и HIV-2 положителни.

Единица от набора

Повтаряемост за серум Повтаряемост за необработена кръв N ОТР. НЕОПР. ПОЛ. съвпадение N ОТР. НЕОПР. ПОЛ. съвпадение

HIV ОТР. 10 10 0 0 100% 10 10 0 0 100%

HIV-1 ПОЛ. 10 0 0 10 100% 10 0 0 10 100%

HIV-2 ПОЛ. 10 0 0 10 100% 10 0 0 10 100%

9.1.2 Междинна прецизност Единична и дневна прецизност Бяха тествани по два набора за прецизност със серум в единичен опит, по 2 опита на ден, в продължение на 10 дни, и по три набора за прецизност с необработена кръв, по 2 опита на ден, в продължение на 3 дни. Беше установена прецизност по опити и по дни със съвпадения на 100% за HIV отрицателни, HIV-1 положителни и HIV-2 положителни проби.

Единица от набора

Прецизност по опити и по дни за серум Прецизност по опити и по дни за необработена кръв

N ОТР. НЕОПР. ПОЛ. съвпадение N ОТР. НЕОПР. ПОЛ. съвпадение HIV ОТР. 40 40 0 0 100% 18 18 0 0 100%

HIV-1 ПОЛ. 40 0 0 40 100% 18 0 0 18 100% HIV-2 ПОЛ. 40 0 0 40 100% 18 0 0 18 100%

Прецизност по партиди и оператори

14

Бяха тествани два набора за прецизност с 2 партиди реактиви от 3 оператори, по 1 опит дневно, в продължение на 3 дни. Беше установена прецизност по оператори и по партиди със съвпадения на 100% за HIV отрицателни, HIV-1 положителни и HIV-2 положителни проби.

Единица от набора

Прецизност по партиди и по оператори за серум

Прецизност по партиди и по оператори за необработена кръв

N ОТР. НЕОПР. ПОЛ. Съвпадение N ОТР. НЕОПР. ПОЛ. Съвпадение HIV ОТР. 36 36 0 0 100% 36 36 0 0 100%

HIV-1 ПОЛ. 36 0 0 36 100% 36 0 0 36 100%

HIV-2 ПОЛ. 36 0 0 36* 100% 36 0 0 36 100% * 2 набора показаха кръстосана реакция на HIV-1

9.2 Клинични характеристики

9.2.1 Специфичност на диагнозата

Кръводарители В една кръвна банка бяха тествани 400 проби (серум, плазма и венозна кръв), взети от 300 неподбрани, утвърдени донори и такива, даващи кръв за пръв път, с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay. 398 проби бяха отрицателни, а 2 – неопределени Тъй като нямаше положителни проби, общата специфичност на тези 400 проби беше 100,0% (400/400) с интервал на доверителност при 95% от [99,1–100,0] и 0,5% (2/400) неопределени резултати. Специфичност у кръводарители

Общ брой проби Отрицателен Неопределен Положителен Специфичност

(%) 95 ИД

(%) Серум

(SSTII Gel сеп.) 100 98 2 0 100,0 (100/100) [96,4–100,0]

Плазма (*) (EDTA-K2) 100 100 0 0 100,0

(100/100) [96,4–100,0]

Необработена венозна кръв

(EDTA-K2) 200 100 0 0 100,0

(200/200) [98,2–100,0]

ОБЩО 300

кръводарители 400 398 2 0 100,0

(400/400) [99,1–100,0]

(*) пробите от плазма и от необработена венозна кръв са взети от едни и същи 100 кръводарители

Хоспитализирани пациенти и бременни жени Бяха тествани 508 проби от 326 хоспитализирани пациенти с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay в 2 различни обекта. От тези пациенти, при 99 бяха взети проби само от серум, от 100 бяха взети проби само необработена кръв, от 72 бяха взети проби от серум и от кръв, от 30 пациенти бяха взети проби от серум, плазма и необработена кръв, и от 25 бяха взети проби от серум, плазма и капилярна кръв. Бяха тествани и 30 проби серум от бременни жени от 2 обекта. Пробите необработена венозна кръв и плазма бяха взети в епруветки с EDTA-K2, а тези от серум – в SSTII с епруветки с разделящ гел. При вземането на капилярна кръв не беше ползван антикоагулант. 529 проби се оказаха отрицателни, а 9 бяха неопределени. Тъй като нямаше положителни проби, общата специфичност на тези 538 проби беше 100,0% (538/538) с интервал на доверителност при 95% от [99,3–100,00] и 1,7% (9/538) неопределени резултати. Тъй като бяха получени едни и същи резултати от пациенти, от които бяха взети 2 или 3 вида проби, специфичността по пациенти беше 356/356 със 7 неопределени резултата.

15

Обект Пациенти Свеж серум (SSTII Gel)

Свежа плазма

(EDTA-K2)

Свежа венозна кръв

(EDTA-K2)

Свежа капилярна кръв

Общо проби

Обект 1 99 99 / / / 99 Обект 2 227 / / 100 / 100

72 / 72 / 144 30 30 30 / 90 25 25 / 25 75

Общо 326 226 55 202 25 508 Отрицателен 221 54 201 25 Неопределен 5(*) 1(*) 1(*) 0 Положителен 0 0 0 0 0 Специфичност

(%) 100,0 (226/226)

100,0 (55/55)

100,0 (202/202)

100,0 (25/25)

100,0 (508/508)

95 ИД (%) [98,6–100,0] [93,5–100,0] [98,2–100,0] неприложимо

(**) [99,4–100,0]

Бременни жени

Замразен серум

Общо 30 30 Отрицателен 28 Неопределен 2 Положителен 0 Специфичност

(%) 100,0 (30/30)

95 ИД (%) неприложимо

(**)

(*) 1 пациент показа 1 неопределен резултат както за серум, така и за венозна кръв и плазма (**) неприложимо при популация N<30

Кръводарители, показали фалшиво положителни резултати при скрининг Общо 275 проби серум, взети от кръводарители, показали фалшиво положителни резултати от скрининг с тест за HIV ELISA, бяха тествани с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay в два клинични обекта. 258 проби се оказаха отрицателни, а 17 бяха неопределени. Тъй като нямаше положителни проби, специфичността на тези 275 проби беше 100,0% (275/275) с интервал на доверителност при 95% от [98,7–100,0] и 6,2% (17/275) неопределени резултати. Специфичност

у кръводарители

Общ брой проби Отрицателен Неопределен Положителен

Специфичност (%)

95 ИД (%)

ОБЩО 275

кръводарители 275 258 17 0 100,0

(275/275) [98,7–100,0]

9.2.2 Чувствителност на диагностиката

Пациенти, заразени с HIV-1 Общо 599 проби от 263 доказано заразени с HIV-1 пациенти от 2 обекта (155 пациента от обект 1 и 108 пациента от обект 2) бяха тествани с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay В обект 1 бяха тествани 108 проби от свеж серум и свежа плазма, 5 проби от свеж серум и 50 генотипни щама HIV-1 (2 CRF01, 5 CRF02, 1 CRF05, 1 CRF06, 2 CRF09, 1 CRF11, 1 CRF12, 1 CRF13, 1 CRF14, 1 CRF15, 1 CRF18, 1 CRF19, 1 CRF22, 1 CRF27, 1 CRF30, 1 CRF36, 1 CRF42, 4 подтип A, 5 подтип B, 2 подтип C, 2 подтип D, 2 подтип F, 2 подтип G, 2 подтип H, 2 подтип J, 1 подтип K, 5 група O). Във втория обект, измежду 108 пациента от 82 бяха взети проби необработена кръв, серум и плазма, от 20 бяха взети проби от необработена кръв, капилярна кръв, серум и плазма, а от 6 бяха взети проби капилярна кръв, серум и плазма. Пробите необработена венозна кръв и плазма бяха взети в епруветки с EDTA-K2, а тези от серум – в SSTII с епруветки с разделящ гел.

16

Всички 599 проби бяха HIV-1 положителни, което дава обща чувствителност 100,0% (599/599) с интервал на доверителност при 95% от [99,4–100,0]. Чувствителността към HIV-1 у пациентите беше 100% (263/263). От всички 599 проби, 3 бяха установени като HIV от неопределен тип вместо HIV-1 положителни и затова способността за диференциране на HIV-1 на GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay беше 99,5% (596/599) с интервал на доверителност при 95% от [98,5–99,9].

Обект Пациенти Свеж серум (SSTII Gel)

Генотипен серум

Свежа плазма

(EDTA-K2)

Свежа венозна кръв

(EDTA-K2)

Свежа капилярна кръв

Общо проби

Обект 1 100 / / 100 100 / 200 N= 155 5 5 / / / / 5

50 / 50 / / / 50 Обект 2 82 82 / 82 82 / 246 N= 108 20 20 / 20 20 20 80

6 6 / 6 / 6 18 Общо 263 113 50 208 202 26 599 HIV-1

Положителен 113 49 207 201 26

HIV неопределен

тип 0 1 1(*) 1(*) 0

Чувствителност (%) 100,0

(113/113) 100,0

(50/50) 100,0

(208/208) 100,0

(202/202) 100,0

(26/26) 100,0

(599/599) 95 ИД

(%) [97,8–100,0] [98,2–100,0] [98,2–100,0] неприложимо (**) [99,4–100,0]

(*) пробите от плазма и от венозна кръв са взети от едни и същи пациенти, заразени с HIV-1 (**) неприложимо при популация N<30

Пациенти, заразени с HIV-2 Общо 283 проби от 172 доказано заразени с HIV-2 пациенти (серум, плазма, венозна кръв и капилярна кръв и някои двойни проби, взети от едни и същи пациенти) бяха тествани с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay в три клинични обекта. 66 проби серум бяха получени от два клинични обекта за вземане на проби. Всички други проби бяха взети от пациентите непосредствено преди теста. Пробите необработена венозна кръв и плазма бяха взети в епруветки с EDTA-K2 или EDTA-K3, а тези от серум – в SSTII с епруветки с разделящ гел. 281 проби бяха HIV положителни, а 2 показаха неопределени резултати за HIV-2, което дава обща чувствителност 99,3% (281/283) с интервал на доверителност при 95% от [97,5–99,9]. Двата неопределени резултата за HIV-2 (не е открит gp140) бяха получени от серум и необработена кръв, взети от един и същи пациент, който е отрицателен за gp105, с тест за потвърждаване на HIV I/II с маркировка CE. 172 проби от 283 бяха правилно отчетени като HIV-2 положителни (с или без кръстосана реакция на HIV-1) или HIV-2 неопределени, а 111 HIV от неопределен тип, т.е. способността за диференциране на HIV-2 на GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay беше 60,8% (172/283) с интервал на доверителност при 95% от [54,8–66,5].

Обекти Пациенти Свеж серум (SSTII Gel)

Замразен серум

Свежа плазма (EDTA-K2)

Свежа венозна кръв

(EDTA-K2 или K3)

Свежа капилярна кръв

Общо проби

Обект 1 5 5 / 5 2 3 15 16 / 16 / / / 16

Обект 2 50 / 50 / / / 50 Обект 3 101 101 / / 101 / 202

Общо 172 106 66 5 103 3 283

HIV-2 Положителен 33 15 3 28 3

HIV-2 положителен с реакция на

33 19 1 35 0

17

HIV-1

HIV неопределен

тип 39 32 1 39 0

Неопределен 1* 0 0 1* 0 Чувствителност

(%) 99,4 (171/172)

100,0 (5/5)

99,0 (102/103)

100,0 (3/3)

99,3 (281/283)

95 ИД (%) [96,8–100,0] неприложимо** [94,7–

100,0] неприложимо** [97,5–99,9]

(*) пробите от плазма и от венозна кръв са взети от един и същ пациент, заразен с HIV-2 (**) неприложимо при популация N<30

Пациенти, заразени едновременно с HIV-1 и HIV-2 Общо 22 проби от 15 доказано заразени едновременно с HIV-1 и HIV-2 пациенти (13 серум, 2 плазма и 7 двойни венозна кръв, взета от едни и същи 7 пациенти) бяха тествани с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay в два клинични обекта. Шест проби серум и 2 проби плазма бяха получени от един клиничен обект за вземане на проби, а седем двойни проби серум и необработена венозна кръв бяха наскоро взети от пациенти в друг клиничен обект. Общата чувствителност беше 100% (22/22) (серум и необработена венозна кръв) без неопределени резултати. На пръв поглед, всички проби бяха правилно определени като HIV от неопределен тип (HIV-1 положителни с отчитане на две обвивки и HIV-2 положителни), с изключение на една проба необработена кръв и една проба серум. Необработената кръв беше неправилно определена като HIV-2 положителна поради скорошна суперинфекция. След контрола няколко седмици по-късно, същият пациент беше правилно определен като HIV от неопределен тип. Серумът беше неправилно определен като HIV-2 положителен с реакция на HIV-1 вместо HIV от неопределен тип, но беше също така неправилно определен като HIV-2 положителен (без реакция на HIV-1) с няколко диференциращи теста за HIV с маркировка CE. 21 от 22 проби бяха правилно определени като HIV от неопределен тип след контрол на един пациент. В тази връзка, способността за диференциране на HIV-1+2 на GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay беше 95,5% (21/22).

Проби със сероконверсия на HIV-1 Чувствителността на GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay беше оценена с помощта на 32 набора със сероконверсия (154 проби). 41,6% (64/154) бяха положителни при GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay, докато 12,3% (19/154) бяха положителни с тест Уестърн блот (Western Blot) с маркировка CE. Отчитането на първата положителна точка на кървене беше по-бързо средно с 1,4 (44/32) времеви точки на набор с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay.

При тестване на 83 проби с ранна сероконверсия (отрицателни или неопределени при Уестърн блот), 10,8% (9/83) бяха положителни с Geenius™ HIV1/2 Confirmatory Assay.

Въз основа на 10 проби със сероконверсия, тествани в клиничен обект, и сравнение със същите проби, тествани с Уестърн блот, Geenius™ HIV1/2 Confirmatory Assay се оказа по-чувствителен за отчитане на антитела срещу gp41 и имаше сравнима чувствителност за отчитане на антитела срещу gp160.

Geenius™ HIV1/2 Confirmatory Assay съответства на съвременните изисквания по отношение на чувствителността, оценена чрез набори от проби със сероконверсия на HIV.

9.3 Аналитична специфичност

9.3.1 Кръстосана реакция 251 проби с потенциална кръстосана реакция, представляващи 29 различни заболявания или състояния и показали положителен резултат за следните маркери, бяха тествани с GeeniusTM HIV 1/2 Confirmatory Assay в различни клинични обекти.

18

HTLV I/ II (20), хепатит C (10 HCV), хепатит B (10 anti-HBS) и хепатит A (10 HAV IgG); цитомегаловирус (10 CMV IgG), Епщайн-Бар (10 EBV IgG), херпес симплекс (10 HSV), Рубеола IgG (10), Токсоплазмоза IgG (5), Сифилис IgG (10), Кандида (10), Малария (26), Денга (2), Лейшманиоза (2), Ваксиния (10), грипна ваксина (5 Flu), Dialysis (10), HAMA (10), ревматоиден фактор (10), мултитрансфузия (10), миелома (5), хемофилия (10), автоимунни заболявания като системен лупус еритематозус (12 SLE), склеродермия (2), синдром на Шьогрен (2), синдром на Шарп (2 MCTD), противоядрени антитела (3 ANA), рак (5), цироза (5) и жени, раждали повече от един път (5). От общо 251 трудни проби, 245 проби дадоха отрицателен резултат, а 6 бяха неопределени (те бяха неопределени за HIV-1 с Уестърн блот и положителни за малария). Специфичноста беше 100,0% (251/251) с интервал на доверителност при 95% от [8,5–100,00] и 2,4% (6/251) неопределени резултати. 9.4 Прозон ефект Вероятността за прозон ефект беше изследвана чрез тестване на 2 проби HIV-1 и 2 проби HIV-2 с висок титър, чиста и разредена. Не бяха наблюдавани нито отрицателни резултати, нито такива с понижена интензивност при чистите, положителни на HIV-1 и HIV-2 проби с висок титър, в сравнение с техните разредени форми (1:10 до 1:100 000). Равностойността на резултатите от неразредени и разредени проби доказва липсата на прозон ефект.

10. Библиографични препратки.

1. Barre-Sinoussi, F., Chermann, J.C., Rey, F., et al.: Isolation of T-lymphotropic retroviruses from a patient at risk for acquired immune deficiency syndrome (AIDS). Science 1983, 220:868-871.

2. Gallo, R.C., Salahuddin, S.Z., Popovic, M., et al.: Frequent detection and isolation of cytophatic retrovirus (HTLV-III) from patients with AIDS and at risk for AIDS. Science 1984, 224:500-503.

3. Clavel, F., Guetard, D., Brun-Vézinet, F.: Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS. Science 1986, 233:343-346.

4. Rey, F., Salaun, D., Lesbordes, J.L. et al.: Evidence for HIV-1 and HIV-2 double infection in Central African Republic. Lancet, II, 1986, 1391-1392.

5. Gnann, J., McCormick, J.B., Mitchell, S., Nelson, J., Oldstone, M.: Synthetic peptide Immunoassay distinguishes HIV Type 1 and HIV Type 2 Infections. Science 1987, 237:1346-1349.

6. De Cock, K.M., Brun-Vézinet, F., Soro, B: HIV-1 and HIV-2 infections and AIDS in West Africa. AIDS 1991, 5(Suppl 1):S21-28.

7. Simon, F., Souquiere, S., Damond, F., Kfutwah, A., Makuwa, M., et al.: Synthetic peptide strategy for the detection of and discrimination among highly divergent primate lentiviruses. AIDS Res Hum Retroviruses 2001, 17:937-952.

8. Rouet, F., Ekouevi, D.K., Inwoley, A., Chaix, M.L., Burgard, M., et al.: Field evaluation of a rapid human immunodeficiency virus (HIV) serail serologic testing algorithm for diagnosis and differentiation of HIV type 1 (HIV-1), HIV-2, and dual HIV-1-HIV-2 infections in West African pregnant women. J Clin Microbiol 2004, 42:4147-4153.

9. HIV-2 Infection surveillance-United States, 1987-2009 MMWR 2011, 60(29):985-988. 10. Ciccaglione, A.R., Miceli, M., Pisani, G., et al.:I mproving HIV-2 detection by a combination of

serological and nucleic acid amplification tests assays. J Clin Microbiol 2010, 48(8):2902-2908.

11. Association of Public Health Laboratories, HIV testing algorithms: A status report. http://www.aphl.org/hiv/statusreport. Accessed 4 August 2010

12. Update on HIV Diagnostic Testing Algorithms. J Clin Virol 2011, 52(1).

19

EUH 208: съдържа гентамицин. Може да предизвика алергична реакция.

20

Bio-Rad т9 3, Boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette France Тел.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Факс: +33 (0) 1 47 41 91 33 2013/01

www.bio-rad.com 883601