UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SAN LUIS POTOSÍ

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

INSTRUCTIVO DEL LABORATORIO DE BIOFARMACIA

Aprobado por H. Consejo Técnico Consultivo

NOVENO SEMESTRE

CARRERA:

QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

M.C. MA. ESTHER FLORES MORENOM.C. LORENA LOREDO HERNÁNDEZ

QFB. CRISTIAN JAZMÍN RODRÍGUEZ PINALDRA. ROSA DEL CARMEN MILÁN SEGOVIA

SEMESTRE ENERO – JULIO 2014

CONTENIDO

Página

Objetivos 1

Programa general. Calendario de contenidos teóricosy sesiones prácticas del curso de Biofarmacia

2

Material didáctico, actividades programáticas y evaluación 6

Indicaciones generales de observación en el laboratorio 7

Instrucciones de seguridad e higiene 8

Bibliografía 9

Validación de métodos analíticos 11

Determinación de fármacos en fluidos biológicos por HPLC

Tabletas de Ácido acetilsalicílico

17

19

Semivida de los salicilatos 22

Modelo Farmacocinético “in vitro” 29

BIOFARMACIA SEMESTRE ENERO - JULIO 2014

OBJETIVOS GENERALES DEL CURSO:

Al finalizar el curso el alumno será capaz de:

Aplicar sus conocimientos, habilidades y actitudes adquiridos para participar en estudios biofarmacéuticos y farmacocinéticos durante el desarrollo o aplicación de un fármaco de aplicación terapéutica y su influencia en la administración medicamentosa.

Determinar diferentes parámetros farmacocinéticos de importancia en el diseño de regímenes de dosificación, en la monitorización de fármacos y en el uso racional de los medicamentos promoviendo con ética su función como integrante de un equipo de salud.

OBJETIVO GENERAL DEL LABORATORIO:

Al final del curso el alumno será capaz de obtener e interpretar parámetros farmacocinéticos para conocer su aplicación en la terapia medicamentosa para la prevención y tratamiento de enfermedades.

Aplicar los procedimientos y criterios de calidad que especifica la FEUM y la NOM- 177-SSA1-1998 para demostrar que los medicamentos cumplan con los requisitos sanitarios para uso humano.

Fomentar en el alumno una actitud de disposición y colaboración para trabajar en equipo con profesionales de otras áreas de la salud.

Aplicar los procedimientos para tratar los desechos químicos generados durante la práctica, así como las medidas básicas de seguridad e higiene, haciendo conciencia de su compromiso profesional para el cuidado ambiental y de la salud.

UNIDADES PROGRAMÁTICAS:

.- BIOFARMACIA.

.- FARMACOCINÉTICA MONOCOMPARTIMENTAL III.- FARMACOCINÉTICA BICOMPARTIMENTAL Y NO COMPARTIMENTAL.

IV.- FARMACOCINÉTICA CLINICA.

1

UNIDAD PROGRAMÁTICA IBIOFARMACIA

Objetivo particular:

El alumno relacionará los aspectos fisicoquímicos y cinéticos con los requerimientos biofarmacéuticos de los medicamentos de acuerdo a la normatividad vigente.

CONTENIDOS TEÓRICOSFECHA

Enero 20 a Febrero 20

SESIONES PRÁCTICASFECHA

Enero 21 a Febrero 20

Presentación del curso

Introducción a la Biofarmacia y a la Farmacocinética.

NOM-177-SSA1-2013

Procesos de liberación y disolución de fármacos. Teorías de la disolución.

Cinéticas de disolución. Orden cero y uno.

Prueba de disolución farmacopeica. Resolución de problemas.

Biodisponibilidad y bioequivalencia y biocomparabilidad.

Evaluación de la biodisponibilidad, bioequivalencia y biocomparabiliad de productos medicamentosos.

Requerimientos estadísticos.

Interpretación de estudios de BD, BE y BC.

Actividad y dinámica de equipos: búsqueda de información en internet y revisión de artículos científicos

EXAMEN.

Enero20

20 y 21

21

22

23

27 y 28

29 y 30

Febrero4 a 6

10 a 13

17 y 18

19

20

No.1 Validación de un método

analítico.

Primera parteRevisión

Validación de Métodos Analíticos.

(NOM-177-SSA1-1998)Taller de validación.

Segunda partePrecisión del sistema, linealidad,

exactitud y repetibilidad del método.Práctica.

Tercera parteReproducibilidad del método.

Práctica.

No. 2Cuantificación de fármacos en fluidos biológicos por HPLCDemostración y revisión de

artículos

Enero21 y 2328 y 30

Febrero4 y 6

11y 13

18 y 20

2

UNIDAD PROGRAMÁTICA IIFARMACOCINÉTICA MONOCOMPARTIMENTAL

Objetivo particular:

Al finalizar la unidad el alumno aplicará procedimientos de farmacocinética compartimental para el cálculo e interpretación de los principales parámetros farmacocinéticos de importancia clínica.

CONTENIDOS TEÓRICOSFECHA

Febrero 24 a Abril 1

SESIONES PRÁCTICASFECHA

Febrero 25 a Abril 3

Revisión de examen de la Unidad .Modelos fisiológicos y modelos farmacocinéticos. Conceptos.

Modelos compartimentales.

Farmacocinética lineal y no lineal.

Modelo monocompartimental.

Administraciones intravasculares.

Cálculo de parámetros farmacocinéticos con datos plasmáticos. Resolución de problemas.

Datos Urinarios.

Cálculo de parámetros farmacocinéticos. Resolución de problemas.

Administración extravascular.

Cálculo de parámetros farmacocinéticos con datos plasmáticos y urinarios. Resolución de problemas.

Factores que afectan los parámetros farmacocinéticos

Actividad y dinámica de equipos: búsqueda de información en internet y revisión de artículos científicos

EXAMEN.

Febrero24 y 25

25

26 y 27

Marzo3 a 5

6

10 y 11

12 y 13

18 y 19

20 y 24

25 y 26

27 y 31

Abril 1

5

No. 3Tabletas de ácido

acetilsalicílico

Primera parteElaboración y discusión de plan

de trabajo.

Segunda parte y tercera parteRealización de las actividades correspondientes a cada rol

asignado

Cuarta parte:Presentación y discusión de

resultados

No. 4Tiempo de semivida de los

salicilatos

Primera parteAnálisis clínicos

Entrega de resultados

Certificado médico

Segunda parteAdministración oral de una

tableta de ácido acetilsalicílico.Preparación de material y

soluciones

Tercera parteAnálisis de muestras urinarias y

análisis de resultados.

Febrero25 y 27

Marzo4 y 6

11 y 13

18 al 20

21

24 al 28

29

Abril1 y 3

3

UNIDAD PROGRAMÁTICA III FARMACOCINÉTICA BICOMPARTIMENTAL Y NO COMPARTIMENTAL

Objetivo particular:

Al finalizar la unidad el estudiante reconocerá la importancia y aplicación de la farmacocinética bicompartimental y no compartimental en la estimación de los principales parámetros farmacocinéticos.

CONTENIDOS TEÓRICOS FECHAAbril 2 a 30 SESIONES PRÁCTICAS

FECHAAbril 8 a Mayo 8

Revisión de examen de la Unidad II.

Modelos bicompartimentales.

Cálculo de parámetros farmacocinéticos. Resolución de problemas.

Bases de la farmacocinética no compartimental.

Administración intravenosa y extravasal. Tratamiento no compartimental.

Momentos estadísticos. Tiempo medio de residencia. Parámetros farmacocinéticos: semivida y área bajo la curva.

Resolución de problemas.

Abril 2

3 y 7

8 y 9

10

28

28 y 29

30

No. 5Modelo farmacocinético

“in vitro”Práctica

No.6Programas Farmacocinéticos

Centro de Cómputo

Abril8 y 10

Mayo6 y 8

4

UNIDAD PROGRAMÁTICA IV FARMACOCINÉTICA CLÍNICA.

Objetivo particular:

El estudiante adquirirá las bases farmacocinéticas para aplicaciones en el diseño de regímenes de dosificación y la monitorización de fármacos en la clínica.

CONTENIDOS TEÓRICOSFECHA

Mayo 5 a 28 SESIONES PRÁCTICAS FECHAMayo 6 al 22

Cinética de dosis múltiple.

Resolución de problemas.

Monitorización de fármacos..Resolución de problemas.

Tópicos de farmacocinética clínica.

Actividad y dinámica de equipos: búsqueda de información en internet.Actividad individual: Manejo de Excel para cálculos farmacocinéticos.

EXAMEN.

Mayo 5 a 8

8 a 13

14 a 19

20 y 21

22

26

27

No.7Cálculos Farmacocinéticos.Revisión y presentación de

artículos.

No. 8Dosificaciones múltiples y

programa PKSCentro de Cómputo

Mayo6 y 8

20 y 22

5

MATERIAL DIDÁCTICO:

Bibliografía básica. Publicaciones recientes. Diapositivas ppt, videos y software

ACTIVIDADES PROGRAMÁTICAS:

Elaboración de reportes de prácticas. Resolución de ejercicios, problemas y tareas. Revisión y discusión de artículos. Revisión de monografías de fármacos. Asistencia a conferencias, seminarios, congresos, etc.

EVALUACIÓN DE ACUERDO AL REGLAMENTO INTERNO DE LA FACULTAD.

La calificación parcial de cada Unidad comprenderá la calificación del exámen, tareas y revisión de artículos y trabajos.

En el caso de que el promedio de calificaciones parciales sea igual o mayor a 6.0 (seis), éste se ponderará en la evaluación final como el 90% y el otro 10% corresponderá a la calificación final de laboratorio.

Si el promedio de calificaciones parciales es menor a 6.0 (seis) no se considerará esta ponderación, siendo ésta la calificación final del curso.

El laboratorio se calificará en base al promedio de la calificación de las prácticas.

La práctica se evaluará en dos partes: La primera parte, un 50% corresponde al desempeño del alumno durante la sesión de laboratorio. La segunda parte, un 50% es la calificación del reporte. Para la primera parte, el 50% se dividirá como sigue: 30% evaluación previa al desarrollo de la práctica en cuestionario oral o escrito. 20% evaluación durante el desarrollo de la práctica.

Para que una práctica sea ACEPTADA deberá tener una calificación mínima de 6.0 (seis). Una práctica será NO ACEPTADA en el caso contrario.

NOTA: En el caso de las sesiones prácticas que comprenden varias partes para su realización, se calificarán cada una de estas partes como una práctica individual.

Para ACREDITAR el laboratorio se necesita que el alumno tenga aceptadas al menos el 75% del total de las prácticas y un promedio de calificación igual o mayor a 6.0 (seis).

Un alumno NO ACREDITARÁ el laboratorio cuando reúna más del 25% del total de prácticas como prácticas NO ACEPTADAS o un promedio de calificación menor a 6.0 (seis).

La calificación final del curso integrará los conocimientos, habilidades y actitudes adquiridos y demostrados por el alumno.

6

INDICACIONES GENERALES DE OBSERVACIÓN EN EL LABORATORIO

Asistir puntualmente con una tolerancia de 5 minutos de retardo. Después de ese tiempo se permitirá la entrada al alumno hasta 10 minutos de retardo en cuyo caso se sancionará con 10 % menos en la calificación del reporte.

La duración estimada de cada sesión práctica es de 3 horas. El alumno asistirá la práctica con el manual de laboratorio o con el protocolo de la

práctica a realizar. Cada alumno deberá trabajar con su propia calculadora durante el procedimiento de las prácticas.

Durante la sesión no se permitirá la entrada o salida de alumnos, excepto con previa autorización del maestro. No se permiten visitas de alumnos ajenos a la práctica.

Antes que el alumno abandone el laboratorio deberá entregar los resultados solicitados por el maestro.

Se deberá entregar el reporte de la práctica realizada, en la siguiente sesión de laboratorio. La elaboración y presentación del reporte deberá reflejar la formación y criterios académicos del alumno adoptados durante toda su formación académica, por lo tanto no deberá complacerse en cuanto a preferencias de estilo. La calificación del reporte principalmente es de FONDO y no de FORMA.

El reporte deberá entregarse perfectamente LIMPIO y ORDENADO. En la portada del reporte deberá indicar los siguientes datos: nombre de la práctica, nombre(s) del alumno(s), día de laboratorio, horario y número de equipo.

El reporte deberá contener cada una de las secciones solicitadas en el manual incluyendo las referencias bibliográficas las cuales deberán ser citadas de acuerdo al Sistema Vancuver.

La elaboración de gráficas deberá ajustarse a los conocimientos bien definidos que el alumno ha adquirido durante su formación académica.

En el laboratorio existe bibliografía disponible para que los alumnos la consulten durante los horarios de asesoría.

7

INSTRUCCIONES DE SEGURIDAD E HIGIENE

El uso de bata limpia y abotonada, lentes de seguridad, guantes y cubre boca es obligatorio durante las prácticas donde se manejen reactivos CRETI.

El laboratorio cuenta con el siguiente equipo y áreas de seguridad: regadera, extintor, botiquín equipado con medicamentos y material clínico para emergencias médicas, campana de extracción para la preparación de reactivos corrosivos, ácidos y solventes y salida de emergencia.

No se permitirá la ingesta de bebidas y/o alimentos dentro del laboratorio. No se permitirá que el alumno pipetee cualquier sustancia con la boca. En caso de cualquier contingencia durante el manejo de sustancias farmacológicas y

reactivos químicos, se deberá dar aviso inmediato al maestro y atender a las indicaciones necesarias.

En caso de derrame químico se deberá:o Despejar el área.o Utilizar guantes de hule. o Colocar los desechos generados en bolsa de plástico y etiquetados señalando el

nombre de laboratorio, tipo de desechos, cantidad y fecha.o Mantener en resguardo, en un área designada del laboratorio, desechos de forma

provisional y entregar en los tiempos programados por la Comisión de Seguridad e Higiene a la empresa designada para su posterior tratamiento.

o En caso de ácido o álcali antes de recoger, rociar con agentes neutralizantes, y limpiar el área del derrabe con papel adsorbente haciendo movimiento circular de afuera hacia adentro. Desechar el papel a la basura común.

o Lavarse las manos con jabón y abundante agua.o En caso de derrame de fluidos biológicos, rociar con una solución de hipoclorito

de sodio al 5 %. Dejar actuar el desinfectante por unos minutos y proceder a recoger con papel adsorbente y con movimiento circular de afuera hacia adentro. Limpiar el área del derrame y desechar el papel a la basura común.

o En caso de ruptura de material de vidrio despejar el área. Utilizar recogedor y escoba solo para recoger el vidrio roto y depositarlo en un contenedor rígido destinado a la recolección de vidrio roto.

Al término de la sesión la mesa de trabajo deberá limpiarse con detergente y un trapo húmedo en agua, el material utilizado se entregará limpio y en orden.

Si hubiese ruptura de material de cristalería del laboratorio, las piezas punzo cortantes se depositarán en un contenedor rígido para vidrio. Los alumnos responsables deberán reponer el material roto.

Antes de abandonar el laboratorio el alumno deberá lavarse las manos con jabón y agua.

8

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Y ELECTRÓNICAS.

BIBLIOGRAFÍA BÁSICA

1. ABBOTTBASE; Pharmacokinetic System (PKS); Laboratorios Abbott; EUA, 2000.2. Base de Datos Medline-PubMed de la Biblioteca Nacional del Congreso de los EUA

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/.3. Cárdenas Rodríguez, Hilda Lilia; Aspectos biofarmaceúticos de la evaluación de

medicamentos; Universidad Autónoma Metropolitana; México, 1996.4. Clark, Bruce; Introducción a la farmacocinética; Acribia; España, 1989.5. Dipiro, Joseph T.; Blovin, Robert A; Concepts in clinical pharmacokinetics: a self

instructional course; 2a. Edición; American Society of Health System Pharmacocist Product Development Office; USA, 1996.

6. Dipiro, Joseph T.; Blovin, Robert A; Concepts in clinical pharmacokinetics: a self instructional course; 3a. Edición; American Society of Health System Pharmacocist Product Development Office; USA, 2002.

7. EBSCO Industries; EBSCO Information Services. (Cinta de datos electrónicos: www.ebsco.com); EBSCO Industries; USA, 2007.

8. Gibaldi, Milo; Farmacocinética; Reverté; España, 1982.9. Gómez Almaraz, Liztli; López Arellano, Raquel; Bioequivalencia; 1ª. Edición; Universidad

Nacional Autónoma de México. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán; México, 2005.10. Goodman & Gilman; Las bases farmacológicas de la terapéutica; 11a. Edición; McGraw-

Hill Interamericana; México, 2007.11. Guía de Recursos de Farmacia, Farmacología y Toxicología THE “VIRTUAL”-

PHARMACY CENTER Martindale’s Health Science Guide – 2003 http://www.sci.lib.uci.edu/HSG/Pharmacy.html#PRACTICE.

12. Jung Cook, Helgi; Problemas de Biofarmacia; UNAM; México, 2002.13. Katzung, Bertram G; Farmacología básica y clínica; 9a. Edición; El Manual Moderno;

México, 2005.14. Kenneth R. Thomson; Thomson MICROMEDEX: Healthcare Series. (Cinta de datos

electrónicos: www.thomsonhc.com); Thomson Healthcare; USA, 2007.15. Labaune Pierre, Jean; Manual de Farmacocinética; 1a. Edición; Masson; España, 1991.16. NOM-177-SSA1-1998. Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un

medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas; Secretaría de Salud; México, 1999.

17. Secretaria de Salud. Comisión permanente de Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 8ª. Edición; Secretaría de Salud; México, 2004.

18. Shargel, Leon; Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics; 4a. Edición; McGraw-Hill; USA, 1999.

19. Skoog, Douglas A; Análisis instrumental; 4a. Edición; McGraw-Hill; Madrid, 1994.20. Thompson, Judith; Práctica contemporánea en farmacia; McGraw-Hill; México, 2006.21. United States Pharmacopeial Convention; Farmacopea de los Estados Unidos de América.

Formulario Nacional; 29a. Edición; United States Pharmacopeial Convention; USA, 2006.

BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA

9

1. Banker, Gilbert S; Modern pharmaceutics; 2a. Edición; USA, 1990.2. Beers, Mark H; El manual Merck de diagnóstico y tratamiento; 10ª. Edición; Harcourt;

España, 1999.3. Birkett, Donald J; Pharmacokinetics made easy; McGraw-Hill; USA, 2002.4. Boroujerdi, Mehdi; Pharmacokinetics: principles and applications; McGraw-Hill, 2002.5. Bourne, D. W. A; Mathematical modeling of pharmacokinetic data; Technomic, 1995.6. Consejo de Expertos; Farmacopea de los Estados Unidos de América. Formulario

Nacional; 29a. Edición; United States Pharmacopeial Convention; USA, 2006.7. Council of Experts; The United States pharmacopeia. The national formulary; 25a.

Edición; United States Pharmacopeial Convention; USA, 2001.8. Chamberlain, Joseph; The analysis of drugs in biological fluids; 2a. Edición; CRC; USA,

1995.9. Chow, Shein-Chung; Enciclopedia of biopharmaceutical statistics; 2ª. Edición; Marcel

Dekker; USA, 2003.10. Flores, Francisco Javier; Castañeda, Gilberto; Biodisponibilidad y bioequivalencia en los

medicamentos genéricos; Asclepius XXI; México, 2002.11. Gibson, Mark; Pharmaceutical preformulation and formulation: a practical guide from

candidate drug selection to commercial dosage form; CRC / Interpharm; USA, 2004.12. Klaassen Curtis, D; Casarett & Doull manual de toxicología : la ciencia básica de los

tóxicos; 5ª. Edición; McGraw-Hill Interamericana; México, 2001.13. Martindale, William; The extra pharmacopoeia; 30a. Edición; The Pharmaceutical

Gran Bretaña, 1993.14. McCabe, Beverly J; Handbook of food-drug interactions; CRC; USA, 2003.15. Rosenstein Ster, Emilio; Diccionario de especialidades farmacéuticas; 51ª. Edición;

Thomson PLM; México, 2005.16. Schoenwald, Ronald D; Pharmacokinetic principles of dosing adjustments: understanding

the basic; USA, 2001.17. The Pharmaceutical Society of Grant Britain. Departament of Pharmaceutical Sciences;

Clarke's isolation and identification of drugs : in pharmaceuticals, body fluids and post - mortem material; 2a. Edición; The Pharmaceutical; Gran Bretaña, 1986.

18. Vogel, Arthur I; Química analítica cualitativa; 6a. Edición; Kapelusz; Buenos Aires, 1983.19. Wagner, John G; Farmacocinética clínica; Reverté; España, 1983.20. Weiner, Murray; Adverse reactions to drug formulation agents : a handbook of excipients;

Marcel Dekker; USA, 1989.21. WinNonlin; WinNonlin. Versión 4.0; Pharsight Corporation; California, 2003.22. Winter, Michael E; Farmacocinética clínica básica; Díaz de Santos; España, 1994.23. Zucchero, Frederic J; Evaluations of drug interactions; First DataBank; USA, 1999.

10

Sesión No 1.VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

PRÁCTICA

INTRODUCCIÓN:

Para la cuantificación de un fármaco en fluidos biológicos es imprescindible la utilización de un método analítico que permita cuantificar el principio activo. Para asegurar confiabilidad, los métodos analíticos se someten a un proceso de validación, mediante el cual se comprueba si el método es lo suficientemente confiable y si los resultados previstos se obtienen dentro de las condiciones prefijadas.

Así, la validación de un método analítico se define como el proceso por el cual se establece por medio de estudios de laboratorio, que un método es apropiado para el uso propuesto.

En la NOM-177-SSA1 se señalan los principales atributos para validar un método analítico en fluidos biológicos.

OBJETIVO:

Validar el método analítico de Trinder para cuantificar salicilatos en orina como parte de un estudio de farmacocinética.

DINÁMICA DE TRABAJO:

La práctica está dividida en tres partes.Primera parte: Taller de validación. Segunda parte: Precisión del sistema, linealidad, exactitud y repetibilidad. Tercera parte: Reproducibilidad intralaboratorio o Precisión intermedia.

Primera parte.Taller de validación.

) Se desarrollará un taller para demostrar el cálculo de los diferentes parámetros de validación estadística de un método analítico.

11

Segunda parte.Precisión del sistema, linealidad, exactitud y repetibilidad del método.

MATERIAL:- Solución de Trinder - Espectrofotómetro UV/VIS - Tubos de ensaye de 10 mL- Ac. fosfórico al 85% - Centrífuga - Pipetas serológicas

- Vortex - Pipetores- Micropipetas - Gradillas

PROCEDIMIENTO:

1) Para todo el grupo de laboratorio, se deberá traer aproximadamente 100 mL de orina libre de fármacos.2) Se determinarán los principales parámetros de validación para el método analítico de Trinder para salicilatos:

Precisión del sistema. Realizar seis lecturas analíticas de un estándar de concentración intermedia de la curva de calibración para salicilatos.Selectividad. Obtener el espectro de absorción en el UV aplicando un “barrido” a una alícuota de un estándar de AS en orina para verificar las longitudes de onda de máxima absorbancia. Linealidad. Analizar por triplicado una curva de calibración de estándares de AS en orina. Precisión del método.

Repetibilidad. En un mismo día analizar por quintuplicado estándares de concentración baja, media y alta respectivamente, diferentes a la curva de calibración. Reproducibilidad Intralaboratorio o Precisión Intermedia. Analizar por triplicado durante dos días las mismas concentraciones de estándares empleadas para la repetibilidad del método.Exactitud. Realizar cálculos con los datos de linealidad y precisión empleando tres concentraciones de estándares.

Método analítico de Trinder para Salicilatos.

1) Solución patrón de AS en agua. Preparar una concentración de 1000 g/mL.2) Estándares de calibración en orina. A partir de la solución patrón de AS preparar las siguientes concentraciones de AS en orina:

Curva de calibración Estándares controlesEstándar

No.Concentración

(g/mL)Estándar

No.Concentración

(g/mL)1 50

1 1002 2003 400

2 5004 6005 800

3 9006 1000

12

3) Blanco de orina. Colocar en un tubo de ensaye 0.125 mL de orina, 0.125 mL de ácido fosfórico al 85 %, 1mL de agua y 1mL de reactivo de Trinder. Mezclar perfectamente en vortex.

4) Análisis de la curva de calibración y de las muestras problema. En un tubo de ensaye colocar 1mL de agua destilada y añadir 0.15 mL del punto de la curva de calibración o de la muestra urinaria. Mezclar en vortex y añadir 1mL de reactivo de Trinder. Mezclar perfectamente y dejar reposar. Las muestras problema se analizarán por duplicado.

5) Leer la absorbancia de la curva de calibración y de las muestras tratadas a 540 nm empleando el blanco de orina.

RESULTADOS:Tabla 1.1

Precisión del sistema.

Equipo: _________________________ Fecha: ________________________

Nombre del analista: ________________________________________________

Concentración del estándar de AS analizada: _____________________________

Lecturas espectrofotométricas para la precisión del sistema

Lectura Absorbancia =_______

123456

X = __________DE = __________CV = __________

Observaciones:

Tabla 1.2

13

Elaboración de estándares de AS

Equipo: ____________________________ Fecha: _____________________

Nombre del analista: ___________________________________________________

Preparación de la solución patrón Pureza del estándar de AS: _________

Preparación de los estándares y controles en orina a partir de la solución patrón.

Curva de calibración:

Estándar No. Vol. medido de la solución stock (l o mL)

Vol. de aforo final(mL)

Concentración final(g/mL)

Precisión: (Repetibilidad y Reproducibilidad)

Estándar control No.

Vol. medido de la solución stock (l o mL)

Vol. de aforo final(mL)

Concentración final(g/mL)

Observaciones:

14

Tabla 1.3Linealidad del método.

Equipo: _____________________ Fecha: ______________________________

Nombre analista 1: ___________________ Nombre analista 2: ____________________

Absorbancia =________

Concentracióng/mL

A1 A2 A3 Promedio DE %CV

r =r2 =m =b =

Tabla 1.4Repetibilidad y reproducibilidad del método

Concentración (μg/mL)100 500 900

1ª repetición2ª repetición3ª repetición4ª repetición5ª repetición

Media aritméticaDE

%CV

Concentración (μg/mL)100 500 900

1ª repetición2ª repetición3ª repetición

Media aritméticaDE

%CV

Observaciones:

Tercera parte.

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Reproducibilidad del método (día 2).

MATERIAL:

Indicado previamente.

PROCEDIMIENTO:

1) Se aplicará el método de Trinder.

2) Precisión del sistema. 6 lecturas de un mismo estándar de la curva de calibración de estándares empleado el Día 1. 3) Reproducibilidad del método (Día 2). Análisis por triplicado de los estándares control empleados en el Día 1 y los mismos analistas. Para conocer las concentraciones del análisis de cada punto, se partirá de una curva de calibración elaborada el mismo día.

RESULTADOS:

Anotar los resultados en las tablas ya conocidas (precisión del sistema, elaboración de estándares).

REPORTE:

Demostrar la validez estadística del método analítico presentando tablas de datos, gráficas y toma de decisiones. Archivo en Excel.

Resumir en una tabla todos los criterios de validación obtenidos y emitir un dictamen general de la validez estadística del método analítico. Esta tabla debe presentarse en una sola hoja y diseñada en computadora. Deberá estar firmada por los miembros del equipo indicando los nombres de los analistas que realizaron la validación.

Sesión No.2

CUANTIFICACIÓN DE FÁRMACOS EN FLUIDOS BIOLÓGICOS POR HPLC.

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DEMOSTRACIÓN Y REVISIÓN DE ARTÍCULOS

INTRODUCCION:

La cromatografía puede definirse como una técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por la fase móvil (líquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que contienen la fase estacionaria, la cual puede ser líquida o sólida. Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.

En la figura se muestra cómo se separan los analitos en la muestra. “C” tiene más afinidad por la fase móvil que “A” y “B”, por lo que eluye con mayor rapidez de la fase estacionaria, finalmente “A” que tiene más afinidad por la fase estacionaria, eluye al final. Los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y cuantitativamente. En cromatogragía de líquidos de alta resolución (CLAR, o HPLC por sus siglas en inglés High Performance Liquid Chromatographic), la separación de los componentes de una muestra se observa en forma de un cromatograma. Las abcisas indican el tiempo de retención del compuesto. Las ordenadas corresponden a la señal analógica proveniente del detector (absorción, índice de refracción, fluorescencia, etc.). La altura de la señal indica la intensidad de la respuesta, en general es proporcional a la concentración del soluto (se evalúa por medición del área bajo la curva o altura de pico).

La distribución de los componentes de una muestra se debe a la interacción específica entre moléculas de la muestra y las fases estacionaria y móvil, debido a varios tipos de fuerzas intermoleculares. Algunos tipos de cromatografía son: adsorción, partición, exclusión, intercambio iónico.

La cromatografía de partición está basada en el reparto de los componentes de la muestra entre una fase móvil líquida y una fase estacionaria también líquida inmiscible, fijada en un soporte sólido inerte siendo las diferencias de solubilidad la causa de la discriminación de los solutos. Según la naturaleza de la fase móvil y la fase estacionaria, en cromatografía líquida pueden distinguirse dos tipos:

A B C

17

Cromatografía líquida “normal”: en ella la fase móvil es de naturaleza no polar, mientras que la fase estacionaria es fundamentalmente polar. Se denomina así por ser la modalidad que se desarrolló en primer lugar.

Cromatografía líquida en “fase invertida o reversa”: modalidad en que la fase móvil es polar y la estacionaria no polar. Actualmente tiene mayor importancia pues más del 85 % de las aplicaciones en CLAR se basan en esta alternativa.

Su universalidad se basa en el hecho de que todas las moléculas orgánicas tienen regiones hidrofóbicas más o menos amplias en su estructura y son capaces de interaccionar con la fase estacionaria.

Cromatografía en fase normal

Cromatografíaen fase reversa

La fase móvil puede ser: Composición constante durante el proceso cromatográfico (modalidad isocrática), o formación de un gradiente de composición de la fase móvil durante el proceso de separación (modalidad de gradiente).

Un equipo HPLC debe contar con inyector, reservorio para solventes, bomba, precolumna y columna, detector, registrador de datos, colector de desechos, entre otros accesorios.

El tratamiento previo de una muestra biológica dependerá de la naturaleza de ésta antes de inyectarla en el sistema cromatográfico.

OBJETIVO:

Observar y discutir el análisis cromatográfico de fármacos en una muestra biológica previo al tratamiento y extracción de los analitos de interés. Analizar artículos de análisis cromatográfico y la validación del método analítico.

DINÁMICA DE TRABAJO:

1 Se realizará una demostración del proceso de análisis de muestras biológicas que contienen fármacos, desde su procesamiento previo hasta su separación en el cromatógrafo.2 Se discutirán dos artículos científicos específicos del tema.

REPORTE:

Se elaborará de acuerdo a las indicaciones del profesor.Sesión No.3

Polaridad de fase móvilApolar Polar

ApolarPolar

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TABLETAS DE ÁCIDO ACETILSALICÍLICO.PRÁCTICA

INTRODUCCION:

Las distintas formulaciones medicamentosas y los métodos de fabricación pueden alterar las características de disolución, de absorción y de biodisponibilidad del principio activo originando diferencias en la magnitud de su actividad terapéutica.

La calidad farmacopeica es uno de los primeros requisitos que debe cubrir un medicamento para su uso en la clínica. En la FEUM están descritos todos los estudios y pruebas, así como las especificaciones técnicas que los preparados farmacéuticos deben cumplir antes de su salida al mercado.

OBJETIVO:

Determinar el control de calidad y los parámetros biofarmacéuticos "in vitro" de tabletas de ácido acetilsalicílico (AAS) y verificar si el producto cumple las especificaciones oficiales para posteriormente realizar un estudio "in vivo".

DINÁMICA DE TRABAJO:

En esta práctica de laboratorio se aplicará el aprendizaje condicional cooperativo bajo la siguiente estructura.

1. Aportación del laboratorio al perfil del egresadoAplica sus conocimientos, habilidades y actitudes en el análisis farmacopeico de tabletas de aspirina para determinar su calidad.

2. Habilidades, actitudes, valores y competencias a desarrollar en el estudianteii. Competencias:

Aplica metodologías para analizar medicamentos.iii. Habilidades:

Plantea objetivos claros y alcanzablesConsulta y analiza información bibliográficaPlanea y desarrolla la metodología de investigaciónManeja material de laboratorioEmplea recursos computacionales e informáticosElabora reportes e informes.

iv. Actitudes:Se compromete con su equipo de trabajo.Posee sentido de actualización continua.Cumple en tiempo y forma con sus deberes.Se interesa por los problemas de salud relacionados con medicamentos.

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Actividades del estudiante1. Comprender el sistema gerencial y asignación de roles2. Consultar bibliografía básica y actualizada para decidir el tipo de análisis a

aplicar 3. Plantear los objetivos4. Proponer el plan de trabajo y la metodología que permita determinar el

cumplimiento de los requisitos farmacopeicos de un producto medicamentoso (más adelante se describe con mayor especificidad), para lo cual contará cona. Recursos humanos, equipo y materialesb. Producto farmacéutico a analizarc. Bibliografíad. Preparación de soluciones a utilizar en su experimento.e. Aplicación de metodología

1. Obtención de resultados2. Análisis y discusión de Resultados3. Conclusiones y campo de aplicación

Actividades del instructora. Aplica un examen rápido con preguntas específicas del temab. Describe y explica el problema a resolverc. Explica el sistema de trabajo con asignación de roles y responsabilidades de

cada estudianted. Da un tiempo de 300 min para que el equipo de estudiantes discutan como

realizarán el protocolo de la prácticae. Es mediador en todas las etapas de la prácticaf. Observar y registra a través de rubricas de desempeño g. Realiza preguntas que estimulen la reflexiónh. Evalúa: calificación obtenida en el examen escrito antes de la práctica, tabla

de cotejo del desempeño del estudiante y presentación oral del protocolo y resultados con discusión

La práctica estará organizada en cuatro partes para su realización. Cada equipo elegirá un líder para supervisar las actividades propuestas y para mantener una permanente comunicación con el profesor del grupo.

Primera parte: Elaboración y discusión de plan de trabajo. Segunda y tercera parte: Realización de las actividades

correspondientes a cada rol asignado, de manera cooperativa.

Cuarta parte: Presentación de ResultadosPrimera parte.

Elaboración y discusión de plan de trabajo.

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1) Cada equipo revisará la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (última edición disponible), para analizar y discutir la aplicación de las principales pruebas farmacopeicas que determinen la calidad de un lote de tabletas de AAS. 2) Se consultará otras fuentes de información farmacológicas y toxicológicas para elaborar una monografía del AAS con los aspectos más relevantes que debe conocerse acerca de éste fármaco que posteriormente será administrado a un voluntario sano.3) Con la información del análisis farmacopeico y los aspectos farmacológicos y toxicológicos, se elaborará un protocolo de trabajo que se desarrollará experimentalmente en las sesiones posteriores.

Segunda y tercera parte.Realización de las actividades correspondientes a cada rol asignado.

MATERIAL:El que cada equipo de alumnos indique en su protocolo.

PROCEDIMIENTO.1) Cada equipo preparará una guía de trabajo, diagrama de procesos y organización de la práctica.2) Realizarán las actividades correspondientes a cada rol asignado, pero de manera cooperativa.3) Tomarán las decisiones requeridas, medirá tiempos invertidos, movimientos realizados. Identificará la influencia de los factores no considerados en el desarrollo de sus actividades.4) Registrarán datos, cálculos y resultados. Discutirán sobre la pertinencia de resultados y aplicarán sus criterios para toma de decisiones.5) Prepararán el reporte y la presentación de resultados.

Cuarta partePresentación de Resultados

PROCEDIMIENTO.1 Cada equipo de alumnos realizará una presentación en power point acerca del trabajo realizado, los datos, cálculos y resultados obtenidos, así como el dictamen de los mismos. Seguirá las recomendaciones del líder y del profesor.2 Se realizará la discusión global en todo el grupo y se decidirá sobre la calidad farmacopeica del lote de tabletas de AAS analizado.3 Cada equipo entregará un informe escrito de la práctica de acuerdo a las instrucciones del profesor. La evaluación será aplicada bajo los conceptos de competencias aplicadas y desarrolladas.

Sesión No. 4TIEMPO DE SEMIVIDA DE LOS SALICILATOS

PRÁCTICA

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INTRODUCCION:

Un fármaco administrado por la vía oral después de desintegrarse y disolverse en los fluidos gastrointestinales, se absorbe hacia al torrente circulatorio y de ahí se dirige a ocupar la biofase para producir su efecto farmacológico y finalmente eliminarse. La intensidad del efecto farmacológico o tóxico que produce se relaciona con frecuencia con la concentración del fármaco en los receptores localizados generalmente en los tejidos celulares. Debido a que la mayoría de los tejidos están muy perfundidos por los fluidos biológicos, se puede determinar indirectamente la intensidad y la duración de la respuesta farmacológica al conocer la variación de los niveles plasmáticos o urinarios del fármaco con el tiempo.

La farmacocinética aplica modelos matemáticos para estudiar el curso temporal de las concentraciones de un fármaco y/o sus metabolitos en los diferentes fluidos biológicos, tejidos y excreciones del organismo. Su estudio permite determinar parámetros farmacocinéticos de gran utilidad en terapéutica como por ejemplo el tiempo de vida media (t 1/2), el cual indica el período que debe transcurrir para que una cantidad de concentración de fármaco se reduzca a la mitad; este parámetro indica con qué velocidad se remueve un fármaco en el organismo mediante mecanismos de biotransformación y excreción. El valor del t1/2 es un parámetro primordial en el diseño de regímenes de dosificación en terapéutica.

OBJETIVO:

Determinar el tiempo de semivida de los salicilatos por el método de excreción urinaria después de la administración oral de 500 mg de AAS en tableta.

DINAMICA DE TRABAJO:

Este estudio se ha dividido en tres partes:Primera parte: Análisis e historia clínica.Segunda parte: Administración oral de una tableta de AAS.

Preparación de material y soluciones.Tercera parte: Análisis de muestras urinarias y de resultados.

Primera ParteAnálisis clínicos y certificado médico.

Participantes: Un voluntario sano por cada equipo.

PROCEDIMIENTO:

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1) Por cada equipo participará un voluntario sano, al cual se le administrará por vía oral una tableta de 500 mg de AAS del lote previamente analizado.

2) El voluntario deberá mostrar un estado de salud normal y no deberá mostrar reacciones alérgicas a los medicamentos. El estado de salud normal se verificará previamente con análisis clínicos y certificado médico.

A) Cada equipo realizará, interpretará y reportará los siguientes análisis clínicos del voluntario: general de orina, biometría hemática, química sanguínea y depuración de creatinina. Esta fase del estudio se trabajará con el Laboratorio de Análisis Clínicos de la Facultad.

B) Los resultados y la interpretación de los mismos deberán entregarse ANTES de proceder a la toma de la tableta, dado que se requieren como base del certificado médico del voluntario. Esto se realizará en el Centro de Salud Universitario.

RESULTADOS:

Los resultados de los análisis clínicos se entregarán en el Laboratorio de Bifarmacia en la fecha establecida. Deberán firmarse por los integrantes del equipo que realizaron los análisis en el laboratorio de Química Clínica y con el Vo. Bo. de uno de los profesores de dicha materia.

Segunda parte.Administración oral de una tableta de 500 mg de AAS.

Preparación de material y soluciones.

MATERIAL:- Tabletas de 500 mg de AAS - Probeta de 250 ml- Tubos de ensaye de 10 ml - Papel indicador de pH

PROCEDIMIENTO:

1) La práctica comenzará a las 7:45 a.m. y la toma de la tableta por parte del voluntario será a las 8 a.m. El resto del equipo proveerá el material necesario para la recolección de muestras urinarias y preparará la dieta que consumirá el participante.

2) El participante deberá atender las siguientes indicaciones y firmar su consentimiento.

Indicaciones para el estudio de Vida Media de los Salicilatos en orina.

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1.- Mostrar un estado de salud normal mediante la realización de análisis clínicos y certificado médico.

2.- Evitar tomar alcohol, té, café, bebidas de cola, medicamentos y de fumar 48 horas antes y durante el estudio.

3.- Abstenerse de ingerir alimentos después de las 23:00 hrs. del día anterior al estudio y antes de las 12:00 a.m. del día de la toma de la tableta.

4.- Tomar 100 mL de agua natural en los siguientes tiempos: - 2, -1 hrs. y 75 mL de agua a las 1, 2, 3 h. La hora cero (0) tomar la tableta de AAS de 500 mg con 100 mL de agua.

5.- Recolectar la totalidad de orina a los siguientes tiempos: 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 22, 24, 26, 28 y 30 horas.

6.- Medir el volumen total y el pH de la orina excretada en cada tiempo de muestreo. Anotar los datos en la Tabla 4.1.

7.- Guardar aproximadamente 3 mL de cada muestra de orina en un tubo de ensaye y taparlo.

8.- Colocar en el refrigerador los tubos perfectamente etiquetados.

9.- Guardar reposo preferentemente durante el estudio sobretodo durante el período de toma de muestras.

10.- Tomar un refrigerio ligero a las 12 a.m. del día del estudio: 2 sandwiches sin grasas, irritantes ni picantes, fruta de la temporada, agua de frutas ad libitum y gelatina. Consumir una comida ligera a las 16:00 p.m. El resto de las comidas se harán normalmente.

3) Cada equipo preparará el material y soluciones que se necesitan en la fase analítica de las muestras urinarias recolectadas.

Laboratorio de Farmacología y Biofarmacia.

Facultad de Ciencias Químicas. UASLP

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Carta de consentimiento informado

Yo,__________________________________________________________de _______ años de edad, estudiante del 9 semestre de la carrera de QFB y alumno(a) del curso de Biofarmacia, en pleno uso de mis facultades, declaro participar voluntariamente, en la realización de la práctica de laboratorio titulada VIDA MEDIA DE LOS SALICILATOS.

Como alumno del curso mencionado, he estudiado los procesos de liberación, absorción, distribución, metabolismo y eliminación de fármacos. Conozco los objetivos y procedimientos de la práctica en la que participaré, así como la naturaleza farmacológica del ácido acetilsalicílico, informando además que no soy alérgico(a) a este fármaco.

Previamente he realizado los principales estudios farmacopeicos de control de calidad de tabletas de aspirina, de las cuales se me administrará en ayuno una tableta por vía oral y recolectaré muestras de orina durante 30 horas para cuantificar los salicilatos excretados y determinar su tiempo de vida media de eliminación.

Tengo conocimiento de que este estudio no representa un daño a mi salud y que puedo retirar mi consentimiento de participar como voluntario en el momento que yo desee sin que ello represente sanción alguna.

San Luis Potosí, S.L.P., a________de_________________de 20____.

Nombre y firma del voluntario __________________________________________

Nombre y firma de la Maestra __________________________________________

Nombre y firma del Testigo __________________________________________

Nombre y firma del Testigo __________________________________________

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RESULTADOS:

Tabla 4.1Hoja de datos de recolección de orina.

Equipo: _____________________ Fecha: ________________________

Nombre del voluntario: ___________________________________________________

Edad: _________________ Estatura: _______________ Peso: _____________

Horadel día

Tiempo(h)

Volumen de orina (ml)

pH

8:00 0 Toma de Tableta

9:00 1

10:00 2

11:00 3

12:00 4

14:00 6

16:00 8

18:00 10

20:00 12

22:00 14

6:00 22

8:00 24

10:00 26

12:00 28

14:00 30

Observaciones:

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Tabla 4.2Preparación de soluciones para el análisis de muestras por el método de Trinder.

Equipo: __________________ Fecha: _______________

Solución de Acido fosfórico

Solución de Trinder 

Observaciones:

Tercera parte.Análisis de muestras urinarias y de resultados.

MATERIAL:- Solución Trinder - Espectrofotómetro -Tubos de ensaye de 10 ml

- Centrífuga -Pipetas volumétricas de 1, 5 y - Vortex 10 ml- Micropipetas -Gradillas- Pipeteador

PROCEDIMIENTO:

1) Analizar las muestras por duplicado por el método de Trinder previamente validado para determinar la concentración de fármaco en orina a los diferentes tiempos. Se requerirá de aproximadamente 100 ml de orina libre de fármaco aproximadamente para la elaboración de la curva de calibración.

2) Elaboración de la curva de calibración de estándares de salicilatos en orina. Emplear el formato de tabla ya conocidas.

RESULTADOS:

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Tabla 4.5Absorbancias de las muestras de orina a los diferentes tiempos después de la

administración de una tableta de AAS.

Equipo: _____________________ Fecha: __________________

Tiempo (h)

Dilución A1

C1 A2 C2Cprom ( DE)

Observaciones:

REPORTE:

1.- Incluir los análisis clínicos y el certificado de salud.2.- Añadir la hoja de consentimiento firmada.3.- Elaborar todos los cálculos en excel, tablas y gráficas para calcular

a) la cantidad total en mg de salicilatos excretados en la orina en el intervalo de 0 a 30 horas. Relacionar este dato con la dosis de aspirina administrada.

b) la semivida de los salicilatos por el método de velocidad de excreción urinaria. Encerrar en círculos los puntos de la gráfica que se empleen para el cálculo de la constante de eliminación y semivida biológica.

c) Comparar el t½ AS obtenido en este estudio con el de la bibliografía y discutir los resultados.4. Entregar archivos de Excel, Word y hoja impresa de resumen de resultados de acuerdo a las instrucciones de las maestras.

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Sesión No. 5MODELO FARMACOCINÉTICO “IN VITRO”

PRÁCTICA

INTRODUCCIÓN:

La utilización de modelos en farmacocinética supone al organismo dividido en diferentes regiones, unidas entre si, en las cuales el fármaco se distribuye después de su entrada al torrente circulatorio. Los modelos farmacocinéticos describen el organismo de forma simplificada, permitiendo cuantificar la velocidad de los procesos LADME mediante la utilización de funciones matemáticas sencillas. En estos modelos el sistema biológico está representado como una serie de zonas o compartimentos que se encuentran conectados entre sí de forma reversible.

Un compartimento no es una región fisiológica o anatómica real, sino que representa un tejido o conjunto e tejidos con flujo sanguíneo similar y con la misma afinidad por el fármaco. Dentro de cada uno de los compartimentos se asume distribución uniforme e instantánea. Los modelos son sistemas abiertos, existiendo transferencia de fármaco entre dicho compartimento y el exterior. El modelo más simple es el llamado modelo abierto de un compartimiento. El término "abierto" se refiere al hecho de que existe un sentido unidireccional de entrada y salida (absorción y eliminación). El modelo abierto de un compartimiento supone al organismo como un todo homogéneo en el cual se distribuye el fármaco en forma semejante y casi instantánea. Este tipo de compartimiento estaría formado principalmente por el volumen sanguíneo y los tejidos altamente irrigados, tales como el hígado, los pulmones, los riñones, etc. Este modelo supone también que las velocidades de intercambio entre las diferentes partes del mismo compartimiento, por ejemplo, desde la sangre hacia el hígado, así como el proceso inverso, serían idénticas.Por otra parte, es posible visualizar también modelos de dos o más compartimientos, representados por tejidos u órganos en los cuales el intercambio es más lento. Estos constituyen los compartimientos periféricos, formados por el tejido adiposo, los tegumentos, los huesos, etc., tejidos donde el intercambio de fármacos con la sangre no se realiza a la misma velocidad que con los del mismo compartimiento. En otros casos, la sangre engloba, ella misma, dos compartimientos diferentes: la fracción proteica, susceptible de fijar rápidamente el medicamento, y el líquido plasmático. Se ha comprobado que una inmensa mayoría de los fármacos se pueden ajustar adecuadamente a modelos con uno o dos compartimentos. Incluso cuando se administran dosis múltiples y se alcanza el equilibrio dinámico, salvo contadas excepciones se utiliza el tratamiento monocompartimental.

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OBJETIVO:

Utilizar un sistema hidráulico para demostrar la farmacocinética monocompartimental y sus cálculos a través del empleo de un colorante.

MATERIAL:

- Bolsa de nutrición parenteral de 1000 mL - Jeringa de 3 mL- Parrilla de agitación - Barra de agitación magnética- Soporte universal - Probeta- Matraz Kitasato de 500 mL - Micropipetas- Matraces volumétricos - Cronómetro- Vasos de precipitado - Jeringas de insulina

PROCEDIMIENTO:

Se empleará el azul de metileno para estudiar el modelo monocompartimental. Esta simulación consiste en observar la disminución de la coloración a diferentes tiempos. El sistema tiene un dispositivo que representa la vía de excreción urinaria, de la cual se tomarán muestras a diferentes tiempos para los datos urinarios; para los datos plasmático se tomarán muestras con pipeta serológica directamente del matraz.

En un soporte se coloca una bolsa de nutrición parenteral la cual contendrá agua en su interior. La sonda se introduce en el matraz Kitasato (el cual simula el compartimento del organismo) para alimentarlo con el agua de la bolsa de nutrición parenteral a una velocidad de 20 mL/min. Este matraz se coloca sobre una parrilla con agitación constante en el nivel 3. El sistema hidráulico se mantendrá en equilibrio antes de proceder a la administración del colorante, para tal efecto se deberá mantener en 900 o 1000 mL el nivel de agua en la bolsa.

La administración del colorante se realizará por inyección rápida (directamente al contenido acuoso del matraz). La dosis a administrar será de 2 mL medidos a partir de una solución de 1 mg/mL.

Se tomarán muestras sanguíneas y urinarias a los tiempos indicados en la tabla 5.1.

El volumen de muestra de sangre será de 2 mL en cada tiempo programado y en el caso de la orina se medirá el volumen total excretado en un intervalo de 2 minutos de muestreo. Solamente conservar 2 mL para su análisis.

Cada muestra de sangre y orina se analizará al espectrofotómetro a λ = 665 nm contra una curva de calibración de azul de metileno.

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La curva de calibración se preparará a partir de una solución cuya concentración será de 25 µg/mL. Esta dilución podrá obtenerse de la solución stock de 1000 µg/mL. Para cada estándar de la curva se prepararán 5 mL.

RESULTADOS:

Tabla 5.1 Datos de muestras sanguíneas

T(min)

Abs Concµg/mL

0.525101525304560

Tabla 5.2 Datos de muestras urinarias

T Conc(min) Abs µg/mL1 - 34 - 69 - 1114 - 1624 - 2629 - 3144 - 4659 - 61

REPORTE :

1. Presentar en archivo excel la curva de calibración del colorante y sus datos de linealidad.

2. Realizar los cálculos correspondientes a los parámetros farmacocinéticos obtenidos de un MAUC con datos plasmáticos y urinarios. Graficar e interpretar cada uno de ellos y discutir resultados.

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