Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

36
Please note that this is an author-produced PDF of an article accepted for publication following peer review. The definitive publisher-authenticated version is available on the publisher Web site 1 Developmental & Comparative Immunology Volume 31, Issue 9, 2007, Pages 859-873 doi:10.1016/j.dci.2007.01.005 © 2007 Elsevier Ltd All rights reserved Archimer, archive institutionnelle de l’Ifremer http://www.ifremer.fr/docelec/ Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas during ontogenesis Ana Tirapé a , Coralie Bacque a , Raphaël Brizard b , Franck Vandenbulcke c and Viviane Boulo a,* a UMR5171, IFREMER, CNRS, UMII, Génome Populations Interactions Adaptation (GPIA), Université de Montpellier II, 2 Place Eugène Bataillon, CC80, 34095 Montpellier Cedex 5, France b IFREMER, Laboratoire de Génétique et Pathologie, La Tremblade 17390, France c Laboratoire d’Ecologie Numérique et d’Ecotoxicologie, EA 3570, Université de Lille 1, Cité Scientifique, Bâtiment SN3, 59655 Villeneuve d’Ascq Cedex, France *: Corresponding author : [email protected] Abstract: The work presented here reports the expression of immune-related genes during ontogenesis in the oyster Crassostrea gigas. Expression patterns of 18 selected genes showed that RNAs detected in oocytes and 2–4 cell embryos are of maternal origin and that gene transcription starts early after fertilization. The expression patterns of 4 genes (Cg-timp, Cg-tal, Cg-EcSOD and Drac3) suggested that hemocytes appear in the gastrula-trochophore stages. The localization of Cg-tal expression suggested that hematopoietic cells were derived from vessels and/or artery endothelia cells. Moreover, a bacterial challenge affected the level of expression of genes. Indeed, a change in expression levels was observed for Cg-LBP/BPI, Cg-timp, Drac3 and Cg-MyD88 genes in larval stages upon exposure to non-pathogenic bacteria. In early juveniles, a modulation was also observed for Cg-LBP/BPI, Cg-timp, Cg-MyD88 and for Cg-tal, according to the concentration of bacteria. Altogether, the results showed that studying the appearance of immunocompetent cells through their ability to express immune-related genes is a tool to gain insight the ontogenesis of the oyster immune system. Keywords: Bivalve mollusk; Hemocytes; Mollusk immunity; Hematopoiesis; Cell proliferation; Rel/NF- κB pathway

Transcript of Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

Page 1: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

Ple

ase

note

that

this

is a

n au

thor

-pro

duce

d P

DF

of a

n ar

ticle

acc

epte

d fo

r pub

licat

ion

follo

win

g pe

er re

view

. The

def

initi

ve p

ublis

her-a

uthe

ntic

ated

ver

sion

is a

vaila

ble

on th

e pu

blis

her W

eb s

ite

1

Developmental & Comparative Immunology Volume 31, Issue 9, 2007, Pages 859-873 doi:10.1016/j.dci.2007.01.005 © 2007 Elsevier Ltd All rights reserved

Archimer, archive institutionnelle de l’Ifremer http://www.ifremer.fr/docelec/

Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas during ontogenesis

Ana Tirapéa, Coralie Bacquea, Raphaël Brizardb, Franck Vandenbulckec and Viviane Bouloa,* a UMR5171, IFREMER, CNRS, UMII, Génome Populations Interactions Adaptation (GPIA), Université de Montpellier II, 2 Place Eugène Bataillon, CC80, 34095 Montpellier Cedex 5, France b IFREMER, Laboratoire de Génétique et Pathologie, La Tremblade 17390, France c Laboratoire d’Ecologie Numérique et d’Ecotoxicologie, EA 3570, Université de Lille 1, Cité Scientifique, Bâtiment SN3, 59655 Villeneuve d’Ascq Cedex, France *: Corresponding author : [email protected]

Abstract:

The work presented here reports the expression of immune-related genes during ontogenesis in the oyster Crassostrea gigas. Expression patterns of 18 selected genes showed that RNAs detected in oocytes and 2–4 cell embryos are of maternal origin and that gene transcription starts early after fertilization. The expression patterns of 4 genes (Cg-timp, Cg-tal, Cg-EcSOD and Drac3) suggested that hemocytes appear in the gastrula-trochophore stages. The localization of Cg-tal expression suggested that hematopoietic cells were derived from vessels and/or artery endothelia cells. Moreover, a bacterial challenge affected the level of expression of genes. Indeed, a change in expression levels was observed for Cg-LBP/BPI, Cg-timp, Drac3 and Cg-MyD88 genes in larval stages upon exposure to non-pathogenic bacteria. In early juveniles, a modulation was also observed for Cg-LBP/BPI, Cg-timp, Cg-MyD88 and for Cg-tal, according to the concentration of bacteria. Altogether, the results showed that studying the appearance of immunocompetent cells through their ability to express immune-related genes is a tool to gain insight the ontogenesis of the oyster immune system.

Keywords: Bivalve mollusk; Hemocytes; Mollusk immunity; Hematopoiesis; Cell proliferation; Rel/NF-κB pathway

Page 2: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

������� ����!4�

�!��

&������-�+����.�.��-����++����.A.-�+��.���.�������������-��.A.-�+�H�@�I>�������-�����!��

��:��.��+������.+.��������.��-���-������@+����-���������+����+������.+.<��-���.�����+��!��

�����.��1�A�����-�-��-���-�������-����-����������.��A��..����-���?�-����+��A-�.�?�����!!�

��� -���+���� �++�����+�-��-�����.� H!@%I>�F�+��A-������-���.������������+����.�.������!$�

����� -��� .��C��-� �:� �6-��.���� .-����.���-� -��� ��������-�����:���+�-����-��� .�-�/.0� �+���/.0�!7�

����-���>� ���� 1������A� ����-��� �����:� �.� -��-� ��+��A-�.� �.�� :�+� ��::���-��-���� �:�!%�

������-����-�..�������.�H$I>��!3�

���1���� ��.�1�-� ��-�� -��� �++�����.��.�� ����A.-�.��1���+���������.�����������!5�

�������������-���:���.�������++�������-���1���.����������������-���������������������$4�

��>�'.�����.�H3I�����#��-�1�����H5I��.���-������������-������-?���-���.���&DD�/�A.-��$��

&G�� ����.�� ����� �-���0� �����@����� ?����� .���� .-��-���� ���� :���-������ ��-��.� ?�-��$��

���+��-.��:�-������B(�@G���-�?�A������-���-�.������������� ����H�4���I>�#�������-����$��

����-�������J(�.��:�-������B(�@G���-�?�A�?����.���-�����������1�-������-���-���.���$!�

#AJ33����' )&�����������H5���I>���.��������+���1A�?�-��-������B(�@G���-�?�A����$$�

��.��-.��-���:���-�����:�-������B(�@G���-�?�A�����A.-�.�+�A�.����-���1���-��1���.�-��-����$7�

��������� ��� ����-�� ��:��.�� ���B�� ������+��-� H�4���I>� �� -��.��-���� :��-��� ����B) 8��$%�

�����1��1� -�� -��� -��.��-���� :��-�� ���..� �:� �F8F� /��.��� ����6@���@����60�� ��.� �����$3�

�����-������������.������.��?��-�����.���:�����A��6�..����������-��A.-����+��A-�.�H�!I>�$5�

#������� .������ �::��-�.� ����� ����� .-������ :�� -���� �-��-���� �������+��-� ��� -��� �A.-��74�

�++�����.��.����>1>����� ����-�..���������-���:�+�-�����-����.��H�$I��-��-��.��6�..���7��

.���:�����A������+��A-�.������.������������:-�����-������������1������.�������+�1�>����� �7��

+�A� ��� ��� �+�-��-� :��-�� �+����� ��� ��:��.�� +������.+� ���� ��� ?����� ������1� ����� ���7��

��-���-�.� H�7I>� �� .������ �::��-�� �.� �@������� ��� �6-��������� .���6���� ��.+�-�.��7!�

Page 3: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

!

?������.�������������8,)@������1�����?������.���.��.���:�����A��6�..��������+��A-�.�H�%I>�7$�

&�� ����-������@�� ���@�� �!� ���� �@�� �"� ��� ��-�+�������� �-���.� /��:��.��.0� �.���-���77�

:�+� +��-��� ��1�� ���� ��+��A-�.�� �.��-����A� H�3��5I>� ���� � .��?��� ��� ���::��-���7%�

�6�..����:����?��1������-������������1���?����.��@�� �"��6�..����?�.��::��-��>�73�

K������-����++�����.��.����.�����������-������:��-����A.-������-��.��:�������1�75�

��-�1���.�.���A���--��� �.����?�>��-�-����������� �������'�.-���H�4I���.������-����.������:�%4�

��1��A-��� ����.� /�:���� �.� �����+��A-�.0� ��� -��� ��.����� ����-A� �:� ����1�� ������ ���%��

������������ #�$��>� #������� '�.-��� ���� 8������-�� H��I� ��.����� +�-���� ��1��A-�.�%��

���-�����1����-�����:�1+��-.����-�����.���������-A�������������-����6-�.�����:��������-�%��

��1��A-�.� -���1��-�������+�����A.-�� ������/��#�$��������%���0>��-� -���+��������%!�

����������A�F����H�����I���.�����-�:�������������-������-���-��.:�+��1�1�?-��:��-��L�%$�

/�*��L0�.��:�+��A�-��-��������.������+���1���-����-���.�/�#,.0����-����.�/�@�8��0�%7�

���� �*�@� L� ��$�&� ������>� ���.�� �::��-�.� ?���� ��A� �� ��A� ���� ��� ��+���.� �����1�����%%�

���..�.���������1����A��+�A�����������+��-������++�����1���-���>�%3�

&��-��.������3�1���.��-��-����A��������������++����.A.-�+��������-��A.-���������%5�

�-��� �1���.+.� ?��� .����-��� ��� ���� -�� .-��A� -��� �++���� .A.-�+� ����1� -��� �A.-��34�

������+��->� ���� �6�..���� �--��� �:� ����� 1���� ?�.� ����A���� ��� �����.� ������+��-�3��

.-�1�.� �:� ������������ ��>� ���� �6�..���� ������ �:� .����-��� 1���.� ?�.� ��.�� .-������3��

:����?��1�����6��+��-������-������������1�>�3��

3!�

Page 4: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

$

���������������������3!�

3$�

"%!%����������#��� ��$����������37�

MA.-�.� �-� �����.� ������+��-��� .-�1�.� ?��� ������� �-� -��� &��'#'�� ��-���A�� 8��3%�

��+������/�����0��:�+�+�-����A.-�.�/$�:�+���.�������+���.0�������-����-�-����A.-����.�33�

���#�����.@M�������A>�)������1���-�.�?����.���-��-����������-��A.-��1���-�����������-A�35�

�-� ����-���� ������ ���� ���.�����-�A� -�� +���+���� ����������� ��������-A� H�!��$I>� M��� ����54�

�:-��:�-�����-������+�A�.�?�����������-���$4�8�-���.��-������.�-A��:��44��+�A�.B8>�����5��

.-�.� �:� :�-�����-���� ���� ����1� ?��� �:�+��� ��� 4>�� N+@:��-���� .��?�-�� �-� ��O � ����5��

���-������������������1>���������������-�.�?�.�?����:�+��>��5��

���� :����?��1� .-�1�.� ?��� ����-�:���� +���.�������A� ���� ������-��<� ���A-�.� ��:���5!�

:�-�����-������@!������.-�1���+�A�.��+���������.-�����1�.-�����-���������������J@���1���5$�

�����������1����������������1����:�%����������A.��.-@:�-�����-������+�-�+���.��1�������57�

����.�-�/��1>��0>����-�-����(���6-��-���������+�����������������.�?���������:�+����A-�.�5%�

-�� J@���1��� ������ .-�1�.E� ?����.� :�� -��� ��-�� ������+��-��� .-�1�.� ���A� �$4�444�53�

����������.�?��� ������-��>� ��� -��� .�-�� -�-����(�� :�+� -���� �1���.+.�?�.� �6-��-��� ���55�

����������.>��44�

��4��

"%"%��' ����$����(��������������$���4��

����� ���@�-��1����� ���-����� .-���.� /)(��� �����$�$���� )%� �$&����&�� �����4��

��������&�� �&��&�0� ?��� 1�?�� .���-��A� �����1�-� �-� �4@�$O � ��� .������ �-���� ?�-���4!�

/�-�����$1B8�E�(� ���$1B80�:��)(���.-���.�����-��4O ����8���@��-����+����+�:���%��4$�

�&��&�>�'6��+��-������-������������1�.�?�����������-��A��++�.��1�-����44�444��+�A�.��47�

�� ������ :�+��� ���������-������-��� :�-�����-���.�� ����>$�8�������+�:������?�-�� :��-�����4%�

.��?�-�� �-� �4O � ����� ��� �������1>� ���� �6��+��-��� �6�.��� ?�.� �:�+��� ?�-�� ���43�

Page 5: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

7

+�6-������-�����1�-���-����.-���.��-��>�4%���������-���B8>�(����6�.����+�A�.������������45�

?����.����.�-������������1������-��.>�)�+��.�?���������-����4������!����.-@�������1����4�

:�� �(�� �6-��-���>� ��� .�-.� �:� ��+��-�.� ����� $4� ����������.� �� �6��+��-��� �����-��������

?����.��>�'6��+��-����6�.���?�.���������-��A��++�.��1����A�C���������A.-�.�����4�����

8�.��?�-�� -���.�?�-��-������-�����+�6-�����.������������/�>�4%�����$>�4

3����-���B80>�&������

��������.�+��.�-.�?�����-��6�.��������.����.����-��.>�)�+��.�?���������-����!����:-����!�

���-������������1��-�������..���:���(���6-��-���>���$�

���7�

"%�%�*+,��'������$��$����#��������$��� ��$���%�

��-��� �(�� ?�.� �6-��-��� �.��1� ��&����#� ���1��-� /&���-�1��0� �������1� -�� -�����3�

+���:��-��P.��-����>��:-��-�-����(��-��-+��-�?�-��J(�.��&�/�"��&���-�1��0����.��������5�

��&���� �6-��-���� ?�.� ��������� -�� ����-���-�� J(�.�>� ���� -�-��� �(�� ������-�-���.� ?�����4�

��-�+������A�MJ�74�+��.��+��-.����� -����(����-�1�-A�?�.����������A�����-����.�.>�����

�?��N1��:�-�-����(���6-��-���:�+������������+��-���.-�1��?������.��-��.�������.��1�����

�44� ���-.� �:� #@#8�� ���.�� -��.��-�.�� /&���-�1��0� �������1� -�� -��� .����P.�����

��.-��-���.>���!�

���$�

"%-%��$���&���(��.���$�/��01����7�

����.�+��.�?���:�6��������.���-�������-�����1��$Q�:�+�����A����!4Q��-�����������Q���%�

�++����+��A��6���>��:-�����A��-��������+��.�?����+����������,����.-�����.���-��%���3�

N+�.��-���.�?�����-��+���-��������A@8@�A.�������-��� .����.�� ����.-�����-�!O ���-����.�>���5�

J�1�6�1�����/J&*0@"�,@�������������H�$)I"�,@�����������-�@.��.������.��.��������.�?�����4�

1����-���:�+�����������J(����.+��.��A� $�#���� -��.��-�����.��1��(����������1���-.������

��� ���� �%� �(�� ��A+��.�� /�����0� ���� H�$)I"�,� /�+�.��+0>� J&*@��������� ������.�����

Page 6: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

%

/!4R�44��1B.����0������$)@���������������.�/�4

7��>>+>���.����0�?����A�����������-�..�������

.��-���.��������1�-��-��������.�A�����������-�����H�7I>���!�

���$�

"%2%���$#�$��$�����A+��.�����������-����/��*1���7�

,�+�� .�������.�� ��.�1���� ?�-�� �+�� �� .�:-?��� /�--<BB:���>?�>+�->���B�1�@��%�

���B�+��B�+��S???>�1�0�?���.����-���-���+��:A�����-.����-���.������1���:���$�-����3�

�5���>�,�+��.�������.����.��?�������������>�, ��?����:�+����.��1���::��/��+#���5�

#1 ��0�� �(�,.� /4>!� +#� �:� ����0�� �+�.� /4>�� N#� �:� ����0�� �� ���-� �:� ���� ��A+��.���!4�

/,�+�1�0�� :�.-� .-���� �J(�� .�+��� /4>$� N�0�� ����?�-�>����� ���-���.�?��� �:�+��� ����!��

�$N�� ����+�� ��� �� ,� @�44� ,�1�++����� ���+��� ��-����� /#T� ��.������ &��>0� :�� �$��!��

�A���.>� '���� .�+��� ?�.� �+��:���� -?���� :�+� ����� ���������-� .�?�.>� ���� N�� �:� -����!��

�+��:���-��������-.�?�������������1��.��1���/�>$Q0>���������1�-����:��-���U�/���3��!!�

!40��J(��H�%I�?�.��+��:����:�����A�.�+����.����.�-�������-���:��, �>��!$�

��!7�

"%5%�6&�$����#�������������*���!%�

V���-�-�-���� ���@-�+�� , �� /V@, �0� ����A.�.� ?��� �:�+��� �.��1� -��� 8�1�-�A�����!3�

.A.-�+� ��.���� �>$� /������ #�������� ������+����.0� ?�-�� -��� 8�1�-�A���@��.-)-�-� J(���!5�

#�.-�� )W��� *���� &� /������ ������ )������0>� V@, �� ���-���.� ?��� ��������� :�� !4��$4�

�A���.�����4N������+��?�-��:�����������-�-�����X�8�1�-�A���@��.-)-�-�J(��#�.-��)W����$��

*����&�/��+#�#1 ��0���+�.�/4>$�N#��:�����0�����:�.-�.-�����J(��/4>$�N�0>������+���$��

.�������.�� ��.�1����?�-�� �+�� �� .�:-?���� ���� �����-���.� ��� ��.-��� ��� ������ �>�#��-��1��$��

����� ����A.�.� ?�.� �:�+��� ?�-�� ���-�����.� :����.������ �����.�-���� /7$� -�� 5$O � �-� ���$!�

-�+��-��� -��.�-���� �-�� �:� 4>4$O B.0� -�� ��-�+���� -��� �+��:���-���� .���:���-A>��$$�

�+��:���-���� �::��������.� /'0� ?��� �������-��� �������1� -�� -��� :����?��1� ����-���<� 'Y�4/@

�$7�

�B.���0�H�3I>��$%�

Page 7: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

3

���� ���-�����6�..���� �������:������1��������1� -����A.-����-�1���.�.�?�.��������-����$3�

:���44�����.��:�-������.������1�1����/���3�!40��A��.��1�-���:����?��1�:�+���<���$5�

(�Y��44�6��/ -�3�!4�R� -�-�1�-�1���0

�H�5I>���74�

���-����������1���������+��-���.-�1�.��-������-�����������:�-�1�-�1�����6�..����?�.��7��

��.��� ��� �� ��+��-���� +�-���� H�3��4I>� ���� ���-���� ����-�:���-���� ������ �:� .�+�����7��

��+�������-��-������3�!4�1����/��-��������-��0��������-����-��-������������1���.�+�����.��7��

�6�..����.��@∆∆ -

��?����∆ -�Y�/ -�/-�1�-�1���0�R� -�/�3�!40�����∆∆ -�Y�∆ -�/�������1����7!�

.�+��0�@�∆ -�/���������1���.�+��0>���7$�

��77�

"%7%������������$��������7%�

J�-��?�������A�����.��1��(M�������)-����-P.�-@-�.-�������::�����.�?������.�������73�

.-�-�.-�����A�.�1��:����-��-� Z4>4$>������.��-.������.��-����.�+����[�.-��������>��75�

��%4�

"%�%��������$�� ���&$�����������$����%��

&������-�����������-�����-���-��.��-�����:��++���@���-���1���.�����1�������+��-��%��

����>�����?�����������A.���-����6�..�����:��3�1���.����.���:�+����%����')������A��%��

H��I�� ����-�:���� �A� JJ@��@, �� /��::���-���� ��.��A� ���.�� -��.��-���� , �0� H�!��$I� ���%!�

��������A�, ���.��1���1����-����+�.�H5I>�*���.�?���.����-����������1�-��-�����-�-�����%$�

:���-�����.�����.�-�����+����-���������-�+���������.��.������.�1�����1��-�?�A.��������������%7�

���:��-�����������������A����/�������0>��%%�

��%3�

�� �� ����%5�

��34�

�%�!%��' �����$� �����$�� �!����&$�����������$����&�$���������$���$������3��

Page 8: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

5

��.-���������-�-����.������1��A�, ��?�.��:�+���������� -���6�+���� -����6�..�����3��

�--��.��:� ����� .����-���1��������1�������+��->�����������-�-�-���� .������1��A�V@, ���3��

?�.� �:�+��� :�� %� 1���.>� ���� �.��-.� :�� ��-�� , �� ����V@, �� ����A.�.� :�+� -��� -�����3!�

���������-�.�?�.�����-���������������.�-.�������-�.��?�.�1��:����-���::�����.�+�����1��3$�

-��-�-���1���-�����������-A��:�1���-�.�������-��::��-�-����.��-.>��37�

V����-�-���� , �� ?�.� �:�+��� ?�-�� -�-��� �(�� �.���-��� :�+� ��� ������+��-� .-�1�.��3%�

/���A-�.�� �@!� ����� �+�A�.��+������ ���.-����� 1�.-����� -�������� �������J@���1��� ��������33�

����1��������/������%���A.0���������1��������/�����A.0�����.�-E��������0>������:�������35�

1������@�3�!4��?�.��+��:�����������.-�1�.��������-���-�������������-��6��+��-.>����.��54�

�@�3�!4�1����?�.��.����.������-��>��5��

����, ���.��-.����������-���������-���.����-���1���.���������.-�.�/�������0��������1�-���5��

-��.��-� ��-��-���� ����1� ������+��->� &�� -��� :�.-� ���.-��� ��������1� -������� � /+��-��0���5��

���� �"� /��+��A-�0����� ���$��1���.����� -��.��-���-��-����?�.���.�����?��-���� -����5!�

������+��-��� .-�1�>� &�� -��� .���������.-��� ��������1� -���4�"��������(&�$���������������5$�

������� ���� � �$�� �����$� �� 1���.�� -��� -��.��-.�?��� ��?�A.� ��-��-��� ��� ���A� .-�1�.��57�

/���A-�.� ���� �@!� ����� �+�A�.0� ���� ��� ����� .-�1�.� /-�������� -�� .�-0>� J�-��-���� �:��5%�

-��.��-.�?�.������������+���������.-��������1�.-����.-�1�.>�&��-���-�������.-���-��.��-.��53�

?���.A.-�+�-�����A���-��-���:�����A�1��������1�����������+��-���.-�1�.>�&��-��.�1����!��55�

��+����-.������1�-��.�1���� -��.���-�����-�?�A.�� %�%�����������������8����8*,3���44�

���������>�����$��-��.���+�.���-�����������������������*$�����$�����#�#�1���.>��4��

V���-�-�-���� , �� �6�..���� �--��.� ?��� �:�+��� :�� %� 1���.� /�����������������4��

�� �� ����������� ��������� �������� ���� �����$� �0� ����1� �����.� .-�1�.� �:��4��

������+��->����.��1���.�?������.��������.��-��A������.��-�-�����:�-������.-�.����������4!�

�����.�A���.������/��1>��0>�#�������-��.��1���.��������������������-��++�����.��.���4$�

�.��-��.��������-��/���� 1���.����1��-�������-�.��A�������1�-�������A.��������������47�

Page 9: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�4

.�����������1���.����-���+��������.�:����-��-�11������.-��++�����.��.��/������������4%�

�����������������$��0���.��-���.���������������������:��-����/���������������0�������43�

�.��-���.��:�.�1�����1��-�?�A.�/�������1�/�������0>���45�

�� -��.��-� ������ �����.�� �:� ������� ������� ���� � ���� �����$� �� /���.-�� �0�� ����4�

��������� �������� ���� �������� /���.-�� �0� ?��� ��.����� ��� +������ ���.-���� ��������

1�.-����.-�1�.�/��1>��0���+����-�������.�.-�1�.�/���A-����@!�������+�A�0>�����������������

����-��.��-�����������.�1��:����-�A������.���/ Z4>4$0����-���-����������������+��������

-�� 1�.-���� .-�1�� �6�..���� �����.>� ��+� -���J@���1��� ������ -�� -��� .�-��?����� -�����������!�

-��.��-������������.���.�1��:����-�A�/ Z4>4$0���-���-����:�+�A��-���������-��.��-���������$�

�����.����1�..����A�����.�1��:����-�A� / Z4>4$0� /��1>��0>����� � -��.��-� ������ /��1>��0���7�

�����.����$@:���� ��� -����������1�� ������/ Z4>4$0���+��-����A� -��J@���1��� �����>����.���%�

�����.��?�.�:����?����A���.�1��:����-������.���:�-������������.�-�/ Z4>4$0>� �������1�����3�

��������� -��� ��+��� �:� -��.��-.� �����.��� .�1��:����-�A� :�+� -�������� ������ -�� .�-���5�

/ Z4>4$0>� ��� ��������� -��.��-� ������ �����.��� .�1��:����-�A� / Z4>4$0� :�+� J@���1�����4�

������ -�� �������1�� �����>� ���� ��1��.-� ������ �:� �6�..���� ?�.� ��.����� ��� -�������

+�-�+���.��1� �����>� ������A�� ��-�� :�� �������� ���� �����$� �� �::��-�.�� -��.��-�����

��+��.�.-��1�A������.������+�-�+���.��1�����������.�->�&��-��.������.-�1�������.�.�����

�:��%%@:��������$4@:����?���.����:�������������������$�����.��-����A>���!�

���$�

�%�"%������.���$�� ����� �������������������$���������' �����$����7�

&�� ���� -�� ����-�:A� -��� �-��-���� .�-�� �:� ��+�-����.�.� ���� -�� ��--�� ����.-���� -�����%�

�++���� �.��.��� -��.��-.� �:� !� 1���.� /���� �� ��������� ������� ���� �����1� ?�����3�

��-��-��1��.��1�$���&��A������-����/&)F0����!�������.-�1�.�/J@���1��������������1����������5�

/������%���A.0���������1�������0��������.�->����4�

Page 10: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

(����������1�?�.���-������?��-����-���������.-�1�.�����-�����������1�+�-���.�/J&*@"�,�����

�� H�$)I�"�,0� :�� -���!� -�.-���1���.��?������������������+��A-�.�?�����?�A.���.����>� &������

.�-����.-��1��A������-����.�1����?�.���.�����:�����������������������A�/��1>��0>�������

�������A������-����.�1����?�.����������������+��A-�.��--������-����������..�������-�����+����!�

��� ������-��1� ��+��A-�.� ���� ��� ��:��-�-��1� ��+��A-�.� ��� 1���.��+��-��� ���� ��1�.-���� 1����>���$�

������ �A������-���� ��������1� ?�.� ��.����� ���A� ��� ��+��A-�.� �--������ -�� ������ ��..�����7�

����-�����+>����%�

���3�

�%� �%�*����#�� 9&�$� ����$� � � ��&$���������� �$�� �' �����$� � ���� �� (�������� ������$����5�

�&�$���#��� ��$���!4�

�����+��-��:����-�����������1��?�.�.-�������A�������-��1�-�����::���-�����6�..�����:��!��

-���%�1���.�.-��������������>�>����������������������� ���������������������������!��

���� �����$� �>� ���� -��.��-� �����.� �:� -��.�� 1���.� ?��� ����-�:���� �A� V@, �� ��� !��!��

������+��-� .-�1�.� /1�.-����� J@���1��� ������� ����1�� ������� �������1�� �����0>� (���!!�

�6�..���� ��::������ ?�.� ��.����� :�� ���3�!4� ��-?���� ���������1��� ���� �������1����!$�

���+��.� /��-�� ��-� .��?�0� :�� ���� ������+��-��� .-�1�.>� F������ ���3�!4� ?�.� �.��� -���!7�

��+������-���-��.��-������.>���!%�

���� ��?� �����.� �:� �6�..���� �6����-��� �A� �������� ���� �����$� �� 1���.� ����1��!3�

������+��-�/��1>��0�?�.����::��-����A�-������-������������1��/��-����-�.��?�0>�&-��������!5�

-��-� -��� -��.��-���+����:������� �����.�� ���J@���1�����������1�� ���������?���� -��.���$4�

��::�����.�?�����-�.-�-�.-�����A�.�1��:����-�/��1>�!0>���$��

����������-��.��-����������������.��.�1��:����-�A�/��:����� Z4>4$0��������1���������$��

�!����.-� .-�+���-���� ��+��-����A� -�����������1������+��.>����.�� �.��-.� ������ -��-����$��

�������� �6�..���� �.� +�����-��� �A� -��� ���-����� �������1�� �������1� -�� ������+��-����$!�

.-�1�.�/��1>�!0>���$$�

Page 11: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

���� � ���-���� �6�..���� ��� -��� J@���1��� ������ �!� �� �.-� .-�+���-���� /��1>� !0� ?�.��$7�

+���-����3�:������1���-�������-������-���/ Z4>4$0>�&������1�����������.�1��:����-������.���$%�

�:�-������� �-��.��-�������/!�:����� Z4>4$0�?�.���.������4����.-�.-�+���-���>����� ��$3�

�6�..����?�.��::��-����A�-������-������������1�>���$5�

��.�1��:����-������.���:�-������-�����6�..�����:�������/ Z4>4$����1>�!0�?�.���.������74�

��-�� ��� J@���1��� ������ ���� ��� ����1�� ������ /�� ���� �>!� :����� �.��-����A0� �4� �� �.-��7��

.-�+���-���>� &���������1�� ��������� .�1��:����-� �����.���:� -������-�����6�..����/�>!�:������7��

Z4>4$0� ?�.� ��-������ �!� �� �.-� .-�+���-���>������� ?�.� -��� ���A� 1���� -�� ��� .�1��:����-�A��7��

��������������������1���������+��1�����-���1���.�-��-�?���-�.-��>����.���.��-.�.��?������7!�

������ -��.��-� ������ �����.�� �4� �� �.-� .-�+���-���� ��� ���A� ������ .-�1�.�� ?����.� ����7$�

�������1�� ������� C�.-� ��:��� -��� +�-�+���.�.�� -��� �����-���� -���� +��� -�+�� .����� -����77�

-��.��-������������.����:-���!�>���7%�

�����������-�����6�..�������J@���1���������?�.�+���-����7��������:������1����4��73�

�������!����.-�.-�+���-������.��-����A���+����-�����������1������+��.�/ Z4>4$����1>�!0>��75�

&������1���������-���-��.��-�������?�.�.�1��:����-�A���1���/ Z4>4$0�����������1������+��.��%4�

��+����-�����������1������.�/�$�:���0>�������������-��.��-�����������?�.�.-��1�A��%��

�����.������J@���1�����������1��������:����?��1����-�����.-�+���-���>��%��

��%��

�%�-%�*����#��9&�$� ����$�� ��$���' �����$�$�� ���� ������(��������������$���%!�

�������.-�1�-�� -����..����� �����-�����-A������������+��-� ��� �++�����.��.���:���������%$�

��������� �����$� ��� ���� �� ������� ���������� ���� �������� ��� .�-�� ���-�����%7�

�6�..���� �:� -��.�� 1���.� ?��� +���-���� �.��1� V@, �� ��� ?����� �������1��� �����%%�

���������1�������������.>�����-��.��-�����������?�.�+��.�����!����:-���6�.���/��1�$0>��%3�

������� �������� ���� �����$� �� 1���� �6�..���.� ?��� ��-� �::��-��� �A� ���-������%5�

.-�+���-���.>����� ����������������������-��.��-������.�?���.�1��:����-�A���1���/�>����34�

Page 12: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

����>��:�����.��-����A�� Z4>4$0�����������1���.�-.�#�����������1���.�-.�:����?��1��6�.����3��

-��$>�43����-���B8>������������-�����6�..���������������1������+��.��?�.�+���-�����>%��3��

����!�:������1���?�-���>�4%�����$>�4

3����-���B8��.��-����A��-����������������1������+��.��3��

/ Z4>4$0>�F�?��������-�����6�..����?�.�.�1��:����-�A���?��?�������+��.�?����6�.���-���3!�

�>�4%����-���B8�-�������-�����6�..����+��.����������+��.��6�.���-��$>�4

3����-���B8�/�>$��3$�

:���0>����.���.��-.�������-��-����.�-���6�..�����:�.�+��1���.�?�.��::��-����A�-������-������37�

�������1������-��-�-���+�1��-����?�.��������-����-���������-�-�����:�-������-���>���3%�

�33�

Page 13: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�!

!�"��� �����33�

��35�

&�� �A.-�.�� ��::�����.� ��� -��� .�.��-�����-A� -�� �-��1��.� ��� ��.����� ��-?���� ��������54�

C�������.���������-.>�K�����.�+��.-����.��:� �++���-A� ����A.-������-.������������:�+����5��

H����I��.��:�����--����.����?������-�-����++����.A.-�+���-�1���.�.�H�����I>�&��-��.�.-��A�?���5��

����.-�1�-���-����6�..�����:��3�1���.���-��-����A��������������++���-A�����1�������+��-��5��

�:�-������:����A.-������.-������-����+��-��:������-������������1�>��5!�

'6�..�����--�������A.�.�����-�����..�:A�-����3�1���.���-��-�������.-�.�/�������0>�#�.-��5$�

-��.��-.�?�����-��-���������A�.-�1�.�/���A-�.������@!�������+�A�.0���-���-������-��.-�1�.��57�

�.�+������ ���.-��������1�.-���� .-�1�.>��..�+��1� -��-� �+�A����� -��.��-���� ���#����.�.��5%�

���A� .-�-.� �-� -��� ��+��-��� +����� .-�1�� H��I�� -��.�� �.��-.� .�11�.-� -��-� -��� -��.��-.��53�

��-��-��� ����1� -��� :�.-� -?�� ������+��-��� .-�1�.� /���A-�.� ���� �@!� ����� �+�A�.0� ��� ��-��55�

������� �A� -��� �+�A�� �-.��:� ��-� ��� �:� +�-����� ��1��>� �(�.� �:� +�-����� ��1��� ����44�

�����A���1����� ��� -��������.-�1�.��6������1�-��������.�.���.��������+���������.-�����4��

���� 1�.-���� .-�1�.>� ���� ���A� ������+��-� �:� ���+��.� �.� �1�++��� �A� +�-�����A��4��

.A�-��.������(�.������-���.�-��-�������������-��-�����������1����A-���A�-���+�-���H�!I>��4��

�����.�� -��� .��.�����-� ��.�.� �:� �+�A�1���.�.� ������ ����-.� �������� �A� �A1�-�����A��4!�

.A�-��.����� -��.��-�� -��.�� +�-����� �(�.� ��� ����A� ��1����� ��-� -���� .-�����-A� �.��4$�

�1���-��� ��� .���� �.� ?���� �.� ��� -�+�>� ���� ��+��-�� ��1���-���� �:� -��.�� -��.��-.� �.��47�

�����������::���-�A��������1�-��-���.����.�H�$��7I>�)������+�.-������A�-���+������.+.�-��-��4%�

�1���-��-��.��-�.-�����-A���������-������A����.������������+�-�����H�7I���-��.��..�+���-��-��43�

+�-������(��+�1�-�����1���-��������.�+����?�A�����A.-�.>���45�

F�+��A-�.�� ?����� ��� -��� �++�����+�-��-� ����.� �:� -��� �A.-�� ������������ ������4�

�-����-�� ��� �� ����-A� �:� :���-���.� H$I>� ��� ����.-�1�-�� -��� �-�-���� .�-�� �:� ��+��A-������

1����-���� ����1� ������+��-�� ?�� ����-�:���� -��� �6�..���� ���� ���������� -��� �6�..��������

Page 14: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�$

.�-�.� �:����� ����������������� ���������>� ���.�� 1���.�?��� .����-��� �����.�� ��� -�������

����-� �A.-�� -��A� ��� .���:�����A� �6�..��� ��� ��+��A-�.� ���� ���� -���:���� ���.������ �.���!�

��+��A-�� +���.� H5��!��$��%I>� J���1� �A.-�� ������+��-�� ���� �� ������ �$�� ��������$�

-��.��-���������.������.��:�+�-���-��������.-�1�>����.���.��-.�.�11�.-�-��-���+��A-�.���7�

���1����-����-�-���1�.-���@-��������.-�1�.�����-����A����A��:-��:�-�����-����/�4@����0>���%�

�-� -����������� ������� �-���.������.��?�� -��-���+��A-�.������1��A-�������.��--������ -�� -�����3�

.�:���� �:� ��.����� ����-A� ��� ����1�� ������ H�4I>� &����.�.� �:������� ���������� �6�..������5�

�����.�?�����.��������-��������.-�1��/��1>��0>����.���.��-.�.�11�.-�-��-���+�-����.�.���4�

��.��������-���-������������������-����������.���:���+��A-�����.���������+��������.������

�������������������.���:�����A�+���.��:�-�����+��A-�����.������.>�)�.�+���������>������

H�%I�.��?����������� ����-��-��������.��..��-����:����+��A-����::���-��-��������������@����

���+�1��2�������>�� H�!I���+��.-�-��� -��-������� �����1.� -�� -�������B) �� :�+��A��?����� �.���!�

�������:��-���1����-�����:���+�-����-�������.�������A��+�A�.�H�3@!4I>�#�������������.���$�

���� �:� -��� �����.-� +���.� �:� +�++������ ��+�-����-��� ������+��-� %�>� �-.� �6�..������7�

�����.�-���:�+�-�����:�-�����+�-����-���.�-�.����+��.��H!�I>����%�

J���1�������+��-�����A��������������������6�..����.�-�.�?��������A���.�������3�

��� .����� .��-���.� :�+� .�-�� .�11�.-��1� -��-� -��� &)F� +�-���� �.� ��-� .�::�����-�A� .��.�-���>���5�

J�-��-���� ?�-�� &)F� �.� ��?���� �������-� ��� -��� -��.��-� ��+��� �� ����>� ���.� ��������4�

�6����� -��� ������:���-��-�����:� -��.��-.�:��.�+��1���.�������A�������+��-���.-�1�.>�������

.-��1����������.�-����&)F�.�1����?�.���.��������������-��1�������:��-�-��1���+��A-�.�����

-���1���-� -��� ���+��>��������� .�1����?�.� ���������� ���A� ��� ��+��A-�.� �--������ -�� ����������

��..�������-�����+>�(����������������?�.���-��-������������-����-�..��>��A������1A�?�-��-�����!�

���B) 8� ���� ��� ��+�-����.�.� ��� �-��� �1���.+.�� -��.�� �.��-.� .�11�.-� -��-� ��+�-����-�����$�

����.���������-���.��:�+���::���-��-�����:�������-����-�..�������.��.�.�11�.-��������.�A�H$I���7�

��-� ������ �-��� ������ :�+� -��� ��..��� �B���� �-�A� ����-������ ����.>� �����-�A�� �-� ?�.���%�

Page 15: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�7

��+��.-�-������+��.�����+����������������+�A�.�-��-���-�������-����������.�������.��1������3�

�.��-����+�-����-�������.�H!�@!!I>����5�

���� ����-�:���-���� �:�������� ������� ��������������� � ������������ -��.��-.��!4�

:����?��1� �� ���-����� �������1�� .��?��� -��-� -��.��-���� �:� -��.�� 1���.� ?�.� ��-���-����!��

�������1�-��/�0� -���������+��-���.-�1���/��0� -���-�+���������-?����.-�+���-������1�����1��!��

��������-�:���-���������/���0�-����+���-��:����-�����.���:���������1�>����.�.�11�.-.�-��-�-��.���!��

1���.� ��� ��������� ��� �-��-���� �1���.-� ���-���� ����1� ������+��->� &�� -��.� .-��A�� -����!!�

�����.�� ��� ������ -��.��-���� ��.����� �:-�� ���-����� .-�+���-���� ��� J@���1���� ����1���!$�

����������.�-�������+����-��-����+�-����.�.�?�.���-���-����������-���-���-�������.��-����!7�

��+����:���+��A-�.>����.������.������������6�..����?�.������+�-��-�-��-��-��:������>��!%�

)������������.��..��-����:����+��A-����::���-��-������������ ����H�%I��-��.���.��-.�.�11�.-��!3�

-��-� ���-����� .-�+���-���� ������ ��-���-�� ��+��A-�� ��::���-��-���� :����?��1� ���:��-���>��!5�

#�������.�������+��A-�.�����A.-���++�����+�-��-�����.���������:����@.��:����1��-�����$4�

����?���� ��-�+�������� �::��-�.� ���������� H��$I�� -�������:��-�������������-���-�� -���$��

���:����-����++�����.��.���1���.-����-��������A.-�>�������+��A-�����:��-����.�������$��

����������������++�����.��.�����J�.������H!$�!7I�������.-������H!%�!3I>��$��

�������������-���1�-�-����A���.�1��:����-��������-��.�����1���������.�1����:�+�8,)��$!�

����-��.�������������-����++�����.��.��H!5�$4I>�J���1��A.-��������+��-�������������$$�

-��.��-.�?�����-��-����������.-�1�.��������1�..���������.���������������-��.��-�����$7�

?�.���.�����:�+�J@���1���������-��.�->�&��-����������-�����.�����+�..���.�-?���+����-��$%�

��+����-.<� -��� ����+� ���� -��� :����@:������ �����+��� ����-A� ���-�����1� -��� ��.����� �1��.��$3�

H$�I>� �����.� ��-������� �.������A� ��� -��� ����+� ���� -��� +��-��� ���.-�-�-�� -��� :�.-� ������$5�

�1���.-� ���-����� ����.���>� ���� �1�..���� �����.�� ������������� -��.��-���� .��+.� -���74�

���.����-��-������-�����:����������-�����>����.���.��-.�.�11�.-�-��-�����������1�����7��

�������-����-����-����A����-���:�.-�������:���:��.������1�������+��-�������.��-��������-���7��

Page 16: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�%

�++���� �.��.�� :����?��1� �� +�������� ��:��-���� .����� ���������� -��.��-���� ?�.��7��

��-���-��� ��� ������ .-�1�.� �:-�� �� ���-����� �������1�>����������� -��.��-���� ��1��� �4� ���7!�

[email protected]�+���-�������������.����-��!��>����.�+�A��.��-�:�+�����+��A-�����:��-������.���.���7$�

.�.-�������A�-��������������������6�..���������.�.>���77�

����+� �.� �� +�+��� �:� -��� -�..��� ������-�� +�-�����-��.�� :�+��A�� ?����� -��� +�.-��7%�

?����A� ���1������ ��-���� �.� ������-���� �:� +�-�6� +�-�����-��.�.� /##,.0>� ���.�� 1���.��73�

�1���-��-����-��������.��6-���������+�-�6���+��.-�.�.�������?������1���:��A.����1������75�

���..�.�-��-����������+�A�����������+��-��������-����-�..����+������1��?�����������1���%4�

1��������+���1���.�.�������1��1���.�.�H$�I>�&��-��.�.-��A�������$������ �-��.��-.��%��

?�����-��-���:�+�-���1�.-����-��-��������A.�������.�11�.-��1�-��-�������������������-?�����%��

##,.������&#,.���������� .�-� ������1� -����A.-��������+��->����� .-��1� �����-�����:��%��

���� �?�.� ��.����� ��� ����1�� ���� �������1�� ������ C�.-� ��:���+�-�+���.�.>�J���1��%!�

+�-�+���.�.�� ��.-���+�����1����� ����1�.� �::��-� -��� .���:��� ������ �1��.� H$�I>����.���%$�

�.��-.����:�����������+��-���-������-����.-��A��:�#��-�1����������>��H��I�����.�11�.-�-��-��%7�

���� ���A.�����+�-��-��������-�..����+������1�����1�-����A.-��+�-�+���.�.>�8�����%%�

��� ����-.� H�$I�� ���� � -��.��-���� ��� J@���1��� ������� ����1�� ������ ���� ��� .�-� ?�.��%3�

��-���-���+�����1� -��-����� � -��.��-���� �.� ���������� ��� ����������?������-����-�� ����%5�

��.-���:��.��+������.+>�&������-���-�+����6�..����?�.���-������5�-��������.-@�������1���34�

?����.� ���J@���1���������� -����-�+����6�..����?�.���.������!����.-@�������1�>����.��3��

������ �.��-� :�+� -��� -�11�� �:� ��+��A-�� ���:��-���� ���� .�11�.-.� -��-� J@���1��� �������3��

�++����.A.-�+�+�A���-������+��-��A�+�-��>��3��

���������.��6�..����������������+��-�.-�1�.�/�������0����-��6�..�����������+���.��3!�

���-����A� ��?����� -��� �����.����.����� ���+�-�+���.��1� ������ �.�+����-�>����������3$�

?����� ��� ��������� ��� �1���-���� �:� 1���.� ��������� ��� ������+��->� &������� ��� :�$� &����37�

X#AJ33��-���� :���-���� �.� ������� :���6�.� :�+�-����H$!I����� �������� �����#AJ33��.��3%�

Page 17: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�3

�+����-��� ��� -��� ��.��@���-��� �--��� �:� �+�A�� H$$I>� &�-��.-��1�A�� -��.��-���� �������33�

�����.���.-��1�A��:-�����-������������1���������������.-�1�.��������.�->������+����-������35�

�:�#AJ33������.-�����-���++���-A�������:��++�-������.������.-��������������.���-���-�.��54�

���� ����-���-�.� .����.� H$7@$3I>� M�� �.��-.� ������-�� -��-� �������� +�A� ��� �� ��A��5��

��+����-��:�-����++�����.��.�������.���:��-.��������-������B(�@G��.�1����-��.���-�����5��

�-�?�A�H5I>� �+����-.��:�-��.��-�?�A���.��-������-���-���.�.�����.�' )&����������5��

�&DD��&G��H3�5I������-�����.�+����-����������8�B&8@��.�1������1��::��-�.��������� �����5!�

����+�++��.� �.��-����A� H��I>� &��J�.������ ����+�++��.�� ����� �����8�B&8�� �-�?�A.��5$�

�1���-�� -��� �6�..���� �:� +��A� 1���.� ��������� ��� �����.� +������.+.� �:� -��� �++�����57�

�.��.��H$5I>���5%�

���������.�?����A��6�..�������1�������+��-��6��-����+�-�+���.��1������������53�

��� .�-�� ?���� �-� �.� .-��1�A� �6�..��� /��1>� �0>� ���.� 1���� ?����� ������.� ��� �6-����������55�

.���6������.+�-�.���?�.����A���-��-��������+��A-�.���-���������-.�H�%�74I���������1����A�!44�

.-�1�.>�#������� -��� -��.��-� ������ ?�.� ���::��-��� �A� ���-����� �������1�>� ���.�� �.��-.�!4��

.�11�.-� -��-��������� �.� ���.-�-�-����A� �6�..��� ���� �.� �-� �:� ��:����.� �1���.-� ���-����!4��

�6A1���.����.�/�M)0������.������A�.���6����������H7��7�I>��!4��

��-�1�-���� -��� �.��-.� .��?��� -��-� .-��A��1� -��� �������� �:� �++�����+�-��-� ����.�!4!�

-���1��-���������-A�-���6�..��++���@���-���1���.��.���-����-��1������.�1�-�-�����-�1���.�.�!4$�

�:� -����A.-�� �++����.A.-�+>���.-��?��.��?���-��-�?�����-��.��-�����:��++����1���.����!47�

�+�A�.��.����-��-�������1�-�����+��-���+�����.-�1����-��+��������?����1�.-��������?�.�!4%�

���::��-���:����?��1������-������������1�>����.�+�A��������-��-���:��-�-��-��++����.A.-�+��.�!43�

���+��-�A� ���� �++�-��� ��� ���A� �+�A����� .-�1�.>� )������� -���+�C��+�-��-���� ����-.�!45�

������1�-���++�����+�-��������������-?����J@���1�����������������1�������>��-�-��.��!�4�

.-�1�.�� ��+��A-�� 1����-���B���:��-���� ���� �����-���� �:� �++���� ���-��� 1���.� ���!���

�����+�-��->�F�?����� ��� �������1�� ������� ���A������� -��.��-���� ������?�.� �����.��>�!���

Page 18: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�5

���.� .-�1��� ?����� �.� -��� ��.-� .-�1�� �:� �A.-�� ����-����� ��:��� ���.���.� -�� ���-�+��� ����!���

�A.����1�����-��.������1�.�?���������������.��.�����:��-���������������-A��:�������-��!�!�

�.���� -�� ���-����� ��:��-���>������� -�1�-���� -��.�� �.��-.� ������ �6����� -�����������-A� �:�!�$�

.�.��-�����-A�-����:��-���.�����1�������+��->��!�7�

!�%�

Page 19: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�4

��#�$���������!�%�

!�3�

���� ��-��.� ��� 1�-�:��� -�� ���� .-�::� �:� -��� ��-���A� �-� &��'#'�� ��� 8�� ��+������ :��!�5�

������1� �A.-�.� ���� ����1� ������ ���� ,>� ������ ���� >� 8����1� :�� ���.���� �:� .�+��!�4�

.�+��.>� K�� -����� '>� ����2��� J>� J�.-��+���6@*����� ���� T>� ��� 8�1����� :�� -����!���

��++��-.� ���� .�11�.-���.� ��� -��� +���.��-�� �>� ���K�-� :�� -��� '�1��.�� ���.���� ����#>�!���

8��A� ���� T>� �����-� :�� -��������� �..�.-����>� ���.�?���?�.� .��-��� �A� -���#���.-A� :��!���

:���1���::��.��:�-���������*����+��-�����&��'#'�>�!�!�

�!�$�

!�7�

Page 20: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

��������!�7�

H�I� �������'��*��1����W��*��������#�����8�1����T��*�����T����+�.-�����>�&�.�1�-.�!�%�

��-�� -��� ��-�@+�������� ��:��.���:�+����� ����-���-�.<� -���������� .��+.����� -���!�3�

�A.-����������������>�&++����>����>��44!E�53<�!5@73>�!�5�

H�I� ���.�� 8�� *����� *�� *������� #�� ,����� >� ���-���@��+��A-�� ��-���-���.� ����!�4�

��1��A-�.�.� ��� +����� �������.>� #���.��A� ��.����� ���� ���������� �44�E$%�!���

/70<!75@%7>�!���

H�I� #�--��*�����������������������,>�M�1������������+��-��:���-�+���������-���.����!���

+�..�������-���++���-A>��'�)�8�--�.��444E!37�/�0<�3$@54>�!�!�

H!I� F���� ,#>� ���� ��-�@���-���.��.� �:� �������� ���+��A-�.>� ��.�� \� )����:�.��!�$�

&++�����1A��555E5�/$0<�7%@3$>�!�7�

H$I� ���1�� >��������.>������+���,�..��8��������53�>�!�%�

H7I� JAA���� '�� ,��� ��� ��-���::�� (>� )��@����-���.� �:� ���+��A-�.� ��� -��� ����-� ����!�3�

��������1�+�����+�..��������&����&��������-�:�����A��.���:�+������������-������.>�!�5�

������..�����.>��55%E�35�/�0<$�%@�7>�!!4�

H%I� *���.���]��T��.��T>�#����.�����++������:��.�.>����>�&++����>����>�'6>��55%E!$�!!��

/�@�0<�!5@$$>�!!��

H3I� '.�����.�T@#������-�8��#��-�1����� ��F���)��J����6� �������,>�MA.-��&DD@�����!!��

�-���� .���.� .-��-���� ���� :���-������ ��-��.�?�-�� �-.�+�++������ ��+���1��.>�!!!�

�'�)�8�--�.��555E!$��/�0<�5�@3>�!!$�

H5I� #��-�1����� �� D���� �� �������-� T#�� '.�����.� T#>� 1@����� -��� :�.-� ���B(�@!!7�

H���I����+���1� �����-������ ��� ��+����.��� -���,���:��� �A.-����������������>�!!%�

�'�)�8�--�.��44!E$7��/�@�0<%$@3�>�!!3�

H�4I� )����+���(��#����-�.� �>�(�@����� .�1�����1� �-�?�A.� ���+�++������ ���� ��.��-�!!5�

����-���++���-A>�*���.�\�J�����+��-��44�E�$�/�30<����@!�>�!$4�

Page 21: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

H��I� F�::+���� T��� �������-� T#>� J�.������ ����-�� �++���-A<� ��� �����-����A�!$��

�.��-���>�(�-���&++�����1A��44�E��/�0<���@7>�!$��

H��I� *��1����W�� ����-�T,�����+��-�J�������@���+�1����� ��*����-��@8��*�����T��!$��

F����������������'��'.�����.�T#>�&++����1������.����A��A��6�..���.��������!$!�

-�1.�1����-��� :�+���+��A-�.��:� -������-���@�������1����A.-�����������������>�!$$�

*�����44�E�4�<��5@!$>�!$7�

H��I� 8�+��-�����#��.-��#��*������)��*��1���,��)-�?�������������-� T#��F�::+����!$%�

T�>�����-����������A.�.������1���-�����:���������+�-��:���.�������1�-����++����!$3�

�.��.�����J�.�����>�'#�M�T�������55$E�!�/�0<$�7@!$>�!$5�

H�!I� �����@���+�1����� �� #��-�1����� �� '.�����.� T@#>� ����-����-���� �:� ��!74�

���B) 8@�����-��.��-����:��-�����-������:����A.-����������������>�J��>� �+>�!7��

&++����>��44�E�%�/50<%5�@344>�!7��

H�$I� #��-�1����� �� 8�����6� ��� ��-��� ��� '.�����.� T@#>� 1@�&#,�� ��� ���������� -�..���!7��

������-�� �:� +�-�����-����.�� :�+� -��� ,���:��� �A.-�� ������������ ��� ?�-�� ��!7!�

�-��-�����������?�����������1�������:��.��+������.+.>��'�)�8�--�.��44�E$44�/�@!7$�

�0<7!@%4>�!77�

H�7I� *�+��� J'�� ����.�� J��� W�.��C�� F�� ���1��..��� ",>� ��..��� ������-�.� �:�!7%�

+�-�����-����.�.<� .-��-���� �1���-���� ���� �����1����� :���-���.>� '������ T������!73�

M:� ���������1A��55%E%!�/�0<���@��>�!75�

H�%I� *��������#����+�.-������������-�T��F���-����8���-�#@ ��*��1����W���������'>�!%4�

'������������A.-���:�����.+���6-���������.���6������.+�-�.��?���������.�8,)>�!%��

������+�������������A.�������.����� �++�����-���.��44$E��3�/�0<�435@5%>�!%��

H�3I� *��1���� W�� F���� ��� ��+���.� ��� *����� T�� �����-� T�� '.�����.� T@#�� ����-� ,��!%��

*��������#��8����1� ��������,���������'>� ����-����-�����:���J�:��.���:�+�-���!%!�

Page 22: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

MA.-�� ������������ ��<� ����+�����-� ����-����� :�����1�� .���-���� .-��-����!%$�

��-�+����������-���-��.������1�����6�..���>�T>�����>� ��+>��447E�3��/�0<���@��>�!%7�

H�5I� *�������� #�� *��1���� W�� J�..��� *�� ��� 8�1���� T�� ��+�.-���� ��� ������� '>�!%%�

#�������������-����-�����:�-?���.�:�+.��:���:��.���:�+���+��A-�.��:�-����A.-��!%3�

��������������>�J�����+��-���\� �+��-����&++�����1A>��44%E��/!0<���@5�!%5�

H�4I� '�.-�����>�����-���������-�+A����.-���1A�������-�.-��-����:�-���.�:-�-�..��.��:�-���!34�

������ �+������ �A.-��� ������������ #�$��>� ,��>� (�-�>� )����:�.�� �..���!3��

�534E%4<7$@5�>�!3��

H��I� '�.-��� ���� 8������-�� 8>� ,�-��1���.�.� �:� �6��+��-��� �����.�.� ��� ������ �+������!3��

�A.-�.��������������#�$��>� ��>�T>���.�>�����->�)��>��534E�%<57!@%3>�!3!�

H��I� F���� ��� ������ ,�� �����1��+� >� *���� .-��-��� ���� �6�..���� �:� �1@�8���� ��!3$�

-A�� &� ��-����@����� ���-�� :�+� -��� �������� +����.�� ������������ ��>� *����!37�

�44�E�4��/�@�0<��@�4>�!3%�

H��I� F������� 8����1� �������������.�� �#�� ������ ,�� �����1��+� >� )-��-���� ����!33�

:���-������ ��������.� :�� �� -A�� �� �*�@H��-�I� .��.�� .-��-�� ���-�� ��� -���!35�

����-��������� ������������ ��� .�11�.-� ���.����� +�������� +������.+.�!54�

���-�����1� +�.���+��� �--����1� ���..� ����-���>� #������.+.� �:� J�����+��-�!5��

�44$E����/$0<75$@%4$>�!5��

H�!I� 8��*��F��1������J>�*���-�����-��1����-A����-��-����A�, ��)) ,���+��1�.�+��.��:�!5��

������,���:����A.-�.�/��������������0�.��-.�-����A�-��.�.��:���1�������������!5!�

�����-����.����..>� ��>�T>���.�>�����->�)��>��553E$$<�4�$@��>�!5$�

H�$I� '�1��.�� 8T�� #�1���� *��� K��� �J>� *���-��� ����-���� �:� ?���� ���� ��-���A�!57�

����-���.� �:� -��� ,���:��� �A.-��� �..�.-��� 1�1�.� /������10�� ��� ��.-����>�!5%�

�������-����444E�3%�/�@!0<�3�@53>�!53�

Page 23: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�!

H�7I� #�����#��������������� ��� )������� J�� ������� '>� '6�..���� ���� ��.-���-���� �:�!55�

��������� ��-�+�������� �-���.� ��� �1���-��� �A� ���+��A-�� ���-���.� ���+��������$44�

�������1���.��+>�'�>�T>�������+>��44�E�75�/��0<�7%3@35>�$4��

H�%I� #��-�1����� �������T �����8�1����T��V��������#�����������'.�����.�T#>���.-�$4��

��������� �:� -��� ��-���-���� �:� 1@-�+�� ��� �++���� �.��.�� ��+����-� �:� ���:���$4��

�A.-�.�� -���1�� �� ��+�1�@�..����-���+�������� �--��� �-�?�A>�J�����+��-���\�$4!�

�+��-����&++�����1A>��44%E��/�0<�@��>�$4$�

H�3I� ,:�::��#K>��� ��?�+�-��+�-�����+����� :�� ���-���� ����-�:���-���� ��� ���@-�+����@$47�

, �>�(���>�����.���.>��44�E�5<�44�@%>�$4%�

H�5I� ����-����8����1� ��J���.�#@,�� �.-���D��������,>�#��������������1��:���+����.����$43�

1�����-���@����.��1� ��+���� ���-�� �-����1��� .���:�����A� �6�..��� ��� -���$45�

1����>� ������+���� �-� ����A.���� ��-�� /���0� @� *���� )-��-��� ���� '6�..����$�4�

�44$E�%�4�/�0<�3%@5$>�$���

H�4I� 8�����DT�� )��+�--1����J>�����A.�.� �:�����-����*����'6�..����J�-��".��1�����@$���

��+�� V���-�-�-���� , �� ���� -��� �@HJ��-�IHJ��-�I �� #�-���>� #�-���.� �44�E�$�$���

/!0<!4�@3>�$�!�

H��I� )������� ������2��'>���������1���+��.>��������-����447E�$7�/�@!0<�@�!>�$�$�

H��I� #��-�1����� �������������������'.�����.�T#>�����-?�� 1@-�+�+�(�.��6�..���$�7�

����A.-����+��A-�.����1����-����A� -?��1���� :�+����.�������::���-����A��6�..���$�%�

����1���-�1���.�.>�J�����+��-���\� �+��-����&++�����1A��44$E�5�/�40<3��@5>�$�3�

H��I� T���A�#T��K�� *K�� ���1?���� �F�� ���-��1�� J��� ��+��� �K>� ��1���-���� �:�$�5�

+�-����-��������1���.����-����+�������A.-��/������������#�$��0<�M�-�1��A�����$�4�

��::���-�����6�..��������.��.��-����::���-�.-�..�.>�*�����447E�%5<�$7@7$>�$���

H�!I� J����.���'>�*������-���-A�������A�������+��-���537>�$���

Page 24: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�$

H�$I� ��.�����������F��.����)�� ���.-�������D����#��D���.����.������.���K�����K��$���

F�+��-��� T�� '-���� 8�� 8�.��-�� F>� T���-� ��-���� �:� -?�� �(�� ��1���-���� �-�?�A.�$�!�

���-��.� -��� -�+��1��:�+�-����� -��.��-����+���-�����-� -���+�����.-���� -��.�-���� ���$�$�

����� ��������$������>�'#�M�T>��555E�3�/50<�7�4@�4>�$�7�

H�7I� ��.�������� ��� ���.-���� ��� 8�.��-�� F>� )�-���� ���� -�+���� ���-��� �:� �(��$�%�

.-�����-A>�,���(�-�������)����44�E53�/��0<%4�$@3>�$�3�

H�%I� )�.�+������D���A�.������D�C�+��)��V���-��F��M�A��W��#�.���&��F�--��W>�#��������$�5�

������1����������-����-�����:�J�.������1���.��������1�.+����*�,�.�.��:�-������$�4�

�������:�+����.>�#��>�*���*���->��55%E�$!�/$0<!37@5!>�$���

H�3I� *�����>�F��+�-����.�.>�#�.-���1���-����+�.���>�(�-����557E�3��/774�0<$%$@%>�$���

H�5I� ��1��A� *�� *���� ��>� ���� ) 8� 1���<� ��+� ��.�� ��-� -�� ��-����� ��+�-����-���$���

�1���-�>��������555E5��/50<�%74@%4>�$�!�

H!4I� 8���� ' �� ,�?� �F�� M�-�.� � �� ,�--� )T�� ,�.-��-�?��-� TF�� ]��� 8&>� ) 8B���@��$�$�

-��.��-����:��-����-.���?�.-��+��:��������-��.���:A���+�-����-���������.�����$�7�

�1���-�.��������:�.�>�*���.�J��>��553E���/$0<7��@7>�$�%�

H!�I� ,����� �� )?�-� K�� ����?���� D�� ��C�?��� W�� ��-� �K�� M���� )F>� ���� �� ����$�3�

8����+���M����-����) 8B-��@��&.�'..��-����:��J�����+��-��:�����F�+�-����-���$�5�

8����1�.>� �����557E37�/�0<!%@$%>�$!4�

H!�I� ��� ���C�� #����� #�� X�� ������ �� M--�.����� D�� )������� #@T�� J������� '>�$!��

F�+�-����-���)-�+� ���.�8��������-��-���'���-������� ����8�A�����-���#��1�.-�-����$!��

#��.����-�>�&++���-A��44�E�7�/$0<7%�@3�>�$!��

H!�I� M������ '�� ������� #�� ����.��� &�� ,����-� �>� �����@:�+��1� �-��-���� �:� ��.�����$!!�

����-�����+����-�����+����+�A�>�J�����+��-��44�E��5�/�%0<!�!%@$%>�$!$�

Page 25: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�7

H!!I� T�::�������������-�D��)�1�A�+��J��*��-������J����� >������1�-�����+��1�����.-�$!7�

����1� �+�A�1���.�.<� ������+��-��� ���-���.��.� ��-?���� ����-������� ����$!%�

��+�-����-�������.>�&�-�T�J�������>��44$E!5�/�@�0<�75@%%>�$!3�

H!$I� '���.� T��F�-��.-�����������C���">������������������<� � ��.�����#������.+.�$!5�

���J�.������������-���-��F�+�-����.�.>�J�����+��-��� �����44�E$�/$0<7%�@54>�$$4�

H!7I� #��.-��#>�����������.��:�J�.�����<�����������1�.��������������.-���:����>� ���-�$$��

M���������&++�����1A��44!E�7�/�0<�4@$>�$$��

H!%I� )�������� &�� ���1A������� '�� #�A�� )�� )�������� D>� F�+��A-�� ����-���� ����$$��

+�-��-���� ��� ��� ����-���-�� ���+��E� ���:��-���� ���� 1���� �6�..���� ���$$!�

��+�-����-���.-�+�����.��:�,���:�.-���.� �����.����.>�J�����+��-���\� �+��-����$$$�

&++�����1A��44�E�%�/30<77�@%�>�$$7�

H!3I� )��������&��D�+�W@���T����������.���,��8���)@W��)��������D>����������-������:��$$%�

��,�����-�����J�+�������&���-���-��F�+�-����.�.�T�&++������44$E�%!�/�40<7�$�@$$3�

74>�$$5�

H!5I� '�.����� ,��K��..� T>� ����� �:� -��� ���-�������B�+������-A@�����.��1� �-���� ��� ��.-�$74�

��:����>� ���-�M���������&++�����1A��553E�4�/�0<!$@5>�$7��

H$4I� &��1�?��F��F��������D������ ��(�.����?�����W�.�����W��(�����.������W���+����$7��

W�� )�+�� *@&>� �����1� ���� ����-����-���� �:� -��� F�+���1� �:� #�++������$7��

8����A.��������@������1�,�-�����������-��������,�+������-A@&����.��1�,�-����$7!�

���������?����-�M����A����.�+A��..>�T>�&++����>��44�E�73�/��0<$7�3@!!>�$7$�

H$�I� '�.-����>�F���-��+���1�+��-��������+��-�������.-���1A��:�.�����A.-�.>�8���.�����$77�

")�<�����K�����������-���)����-A���555>�$7%�

H$�I� �?.-��� �'>� #�-�����-����.�� ������-�.� ���� -��� ����-���� �:� ������-���� -�..���$73�

������?�>�,��+�����1A�\�������-��.��557E%4�/�0<�7�@3�>�$75�

Page 26: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�%

H$�I� ��A����>�*�?-������-�������A��:�+�-�+���.�.��:�-����������:�����&����&���/8>0>�$%4�

M�������57$E�<�@!%>�$%��

H$!I� ,�-�+���� �� �+.-��1� (T�� ��� ��K>� ���� ����B&8@�� ���-�� ������1� �-����$%��

#AJ33��.��������:��X����.��6�.�:�+�-���>�#������.+.��:�J�����+��-��444E5%�$%��

/�@�0<3$@5�>�$%!�

H$$I� #��.�-�� J�� ����.��� D�>� )�1�����1� �-�?�A.� -��-� �.-����.�� -��� ��.��@���-���$%$�

�--����:�-���J�.�������+�A�>�������������?�M:�*���-��.��55$E�5<�%�@55>�$%7�

H$7I� ������� ��� D����� F�� F����� &�� )��-�@����� ��� '���� #�� ����� �>� &���-�:���-���� ����$%%�

�����-����-���� �:� ��+A������ ��::���-��-���� :��-�� 33� /#AJ330� �J(������ 1���� ���$%3�

T����.�� :�������� ������������ ��#���&�>� J�����+��-��� \� �+��-����$%5�

&++�����1A��447E�4�/50<34%@�7>�$34�

H$%I� #�����-������,�.-��@F����-�,��D��'��)-��������� ���� ��*��.��)��T���?�A�T��$3��

�>� >� #AJ33� &.� ��� ���-�� ,�-���� ��� -��� �����B&8@�� ����-�� ��+��A� )�1�����1�$3��

,�-�?�A.>�#�������� �����553E��/�0<�$�@3>�$3��

H$3I� K�.���� F�� F������ KT�� )������1��?� K�� 8�� )�� ��� ]>� #AJ33<� ��� ���-�� ���-�$3!�

�����-.�&��D�-��-���&8@������-�� �+��6>�&++���-A��55%E%�/70<3�%@!%>�$3$�

H$5I� ,���� F8>� ��-���-�.� ���� -�1�-� 1���.� �:� ���B(�@H���I�� -��.��-���� :��-�.>�$37�

M���1�����555E�3�/!50<73$�@77>�$3%�

H74I� F���-� ��� F���� ��� J�1�+��-� 8�� 8�������� W�� )�+���� T��� �����1��+� >� ����$33�

����-�:���-���� �:� 1���.� :�+� -��� �A.-�� ������������ ��� -��-� ��� ��::���-����A�$35�

�6�..��� ��� �1��A� �6����-��1� ��.��� .�.��-�����-A� -�� .�++�� +�-���-A>� *����$54�

�44!E�!��/�0<���@�4>�$5��

H7�I� ��������� &>� )���6���� ������� ���� .���6���� ��.+�-�.�.>� ������� �����?� M:�$5��

������+�.-A��55$E7!<5%@���>�$5��

Page 27: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�3

H7�I� ]����� &(��������T>�)������)�� -��.��-���� :��-�.�+����-�� -����.-�-��� �@��������$5!�

������.����6�..�����:��6-���������.���6������.+�-�.�>������������������1A�����$5$�

#���������44!E�%�/30<��$7@%�>�$57�

$5%�

Page 28: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�5

$5%�

%��#���� �����&���������

'����

�������������

(��� )����� ���*

+���������� ���,�� )���*

"������ ���,�� )�!�*

-������ ���,�� ).����*

�� ��

�/

��

%���,������ ���,�� )������*

0

�>��@!����� �+�A�. /��0

�>�#�����/��0

!>����.-����/��0�

1>�*�.-����/7�0

�+�A���� .-�1�.

����

)&������2����0

3

.

4

��1����

%��#���� �����&���������

'����

�������������

(��� )����� ���*

+���������� ���,�� )���*

"������ ���,�� )�!�*

-������ ���,�� ).����*

�� ��

�/

��

%���,������ ���,�� )������*

0

�>��@!����� �+�A�. /��0

�>�#�����/��0

!>����.-����/��0�

1>�*�.-����/7�0

�+�A���� .-�1�.

����

)&������2����0

3

.

4

%��#���� �����&���������

'����

�������������

(��� )����� ���*

+���������� ���,�� )���*

"������ ���,�� )�!�*

-������ ���,�� ).����*

�� ��

�/�/

����

%���,������ ���,�� )������*

0

�>��@!����� �+�A�. /��0

�>�#�����/��0

!>����.-����/��0�

1>�*�.-����/7�0

�+�A���� .-�1�.

�����

)&������2����0

33

..

44

��1����

"���������,��)�!�*

Page 29: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�4

�$5%�

$53�

��������

M��A-�.

�@!�������+�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8>

)�-

$4

�44

�$4

�44 �������

�A��+

���:�-�1�-1���.B�44�

����.��:� 1@�

3!4

��������

������

��

��

M��A-�.

�@!�������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

�����

����

��

��

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

����

���������

��

��

��

M��A-�.

� @! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8 >

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

����������������

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1���8

>

����1��8>

,�� �����1��8>

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

�������

�����$��

��

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

�����$ �

������

��

��

��

M��A-�.

�@!�������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8

>

����1��8>

,�� �����1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

������

�A��+���:�-�1�-1���.B�44�����.��:� 1@�

3!4

��������

M��A-�.

�@!�������+�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8>

)�-

$4

�44

�$4

�44 �������

�A��+

���:�-�1�-1���.B�44�

����.��:� 1@�

3!4

��������

������

��

��

M��A-�.

�@!�������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

������

��

��

M��A-�.

�@!�������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

�����

����

��

��

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

����

��

��

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

����

���������

��

��

��

M��A-�.

� @! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8 >

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

���������

��

��

��

M��A-�.

� @! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8 >

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

����������������

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1���8

>

����1��8>

,�� �����1��8>

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

�������

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8

>

J@���

1���8

>

����1��8>

,�� �����1��8>

#�-�+�

��.��1�8

> )�-

�������

�����$��

��

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

�����$��

��

��

M��A-�.

�@! �������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1�� �8

>

����1��8>

,�������1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

�����$ �

������

��

��

��

M��A-�.

�@!�������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8

>

����1��8>

,�� �����1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

������

��

��

��

M��A-�.

�@!�������+

�A�.

#����

���.-���

*�.-���

���������8>

J@���1���8

>

����1��8>

,�� �����1��8>

#�-�+���.��1�8

> )�-

������

�A��+���:�-�1�-1���.B�44�����.��:� 1@�

3!4

Page 30: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

��

F

��

F�

�//5�

��

F

��

�/5�

��������

�$53�$55�

Page 31: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

�744�

�74��

�74!�

�747�

�743�

�7�4�

�7���

�7�!�

�7�7�

�7�3�

�7�4�

�7���

�7�!�

�7�7�

�7�3�

�7�4�

�7���

�7�!�

�7�7�

�7�3�

�7!4�

�7!��

�7!!�

�7!7�

�7!3�

�7$4�

�7$��

�7$!�

�7$7�

�7$3�

�774�

�77��

�77!�

�777�

�773�

�7%4�

�7%��

�7%!�

�7%7�

�7%3�

�734�

�73��

�73!�

�737�

�733�

�754�

�75��

�75��

�75��

�75!�

��� ���

*�.-����� J@���1���������� ����1�������� �����A.�������

����-�����6�..���

�����

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6�..���

,�������1� ����������� ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��

������+��-�� .-�1�

���������1��

�����

��

��

���

���

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6

�..���

,�������1� �����

������ ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��������+��-�� .-�1�

���������1��

�����

��

��

���

���

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6�..���

,�������1� ����������� ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��

������+��-�� .-�1�

���������1��

,�������1� ����������� ������������������������ ������������������������� ������������������������ � -�+� �.- �������1��

������+��-�� .-�1�

���������1��

���������

��

��

���

���

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6�..���

,�������1� �����

���������1��

������ ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��������+��-�� .-�1�

�����

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6�..���

,�������1� �����,�������1� ����������� ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��

������+��-�� .-�1�

���������1��

�����

��

��

���

���

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6

�..���

,�������1� �����,�������1� �����

������ ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��������+��-�� .-�1�

���������1��

�����

��

��

���

���

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6�..���

,�������1� �����,�������1� ����������� ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��

������+��-�� .-�1�

���������1��

,�������1� ����������� ������������������������ ������������������������� ������������������������ � -�+� �.- �������1��

������+��-�� .-�1�

���������1��

���������

��

��

���

���

*�.-��� J@���1��������� ����1������� �����A.������

����-�����6�..���

,�������1� �����,�������1� �����

���������1��

������ ������������������������ ������������������������ ������������������������ � -�+� �.- �������1��������+��-�� .-�1�

�������

Page 32: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

��

�757�

�753�

�%44�

�%4��

�%4!�

�%47�

�%43�

�%�4�

�%���

�%�!�

�%�7�

�%�3�

�%���

�%�$�

�%�%�

�%�5�

�%���

�%���

�%�!�

�%�$�

�%�7�

�%�%�

�%�3�

�%�5�

�%!4�

�%!��

�%!��

�%!��

�%!!�

�%!$�

�%!7�

�%!%�

�%!3�

�%!5�

�%$4�

�%$��

�%$��

�%$��

�%$!�

%$$�

��������

"���� 6����(�" 7������4 6��+��� 6��+�� 6��'%� 6����"44

�����,����������

���������1��

����������� ���� �� ���������������� ���� �����������������

���������1��

����������� ���� �� ���������������� ���� �����������������

Page 33: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�!

&�� ��������%$$�

�%$7�

��1>� �>� ���� ��:�� �A���� �:� -��� �A.-�� ������������ ��>� �<� ��-������� ���A-�.�� �>� �@!� �����%$%�

�+�A�.�� �>�#������ !>����.-����� $>�*�.-����� 7<���������� �������%<�J@���1��� �������3<�%$3�

����1�� ������� 5<� ,�������1�� ������� �4<�)�-� ������<�����->� )-�1�����-���� ���������1��A�%$5�

����������������1����-�+��-����:����.��A�������-���:��-�.>��%74�

��%7��

��1>��>�'6�..�����������:��++���@���-���1���.�����1���-�1���.�.��������������������A�%7��

����-�-�-��������-�+��, �>�'�����������.�-���+����[�.-����������:��+�A�������������.�%7��

:�+�-����.�?�.�����-���������������.�-.>�8<������>��%7!�

�%7$�

��1>� �>�J�-��-�����:��������� ����������+�(�.� ��� .�-��:���������������� �A� $� ��&�%77�

�A������-���>� �<� �������� $� ��&� �A������-���� �.��1� ��-�@.��.�� ���� .��?��� �.�-����%7%�

.�1���.� ��� ��:��-�-��1� ��+��A-�.� /��?.0� ��� ��1�.-���� 1����� /�0�� 1���� /�0>��<�������� $� ��&�%73�

�A������-�����������������.�?����--������-����������..�������-�����+�/$0��-���.��������-���%75�

��������-���� �:� -��� �.�-���� ����.� ������ ��+��A-�.� /��?.0>� ��-��� ���.�.-��� �:� .��-���.�%%4�

�A��������?�-��.��.������������������1�?�.���.�����/������!0>��%%��

�%%��

��1>� !>� ����-���� �6�..���� �:� ������� ����������� ���� �� ������ ���� �������� ���%%��

1�.-����/7����.-@:�-�����-���0��J@���1���������/�!��0������1��������/����A.0������������1��%%!�

������/�����A.0��:�����������������A�����-�-�-��������-�+��, ���������1�-��8����������%%$�

)��+�--1���+�-���� /�44�0�� �:-�� �� ���-����� �������1�� /�>�4%� ���-���B80>� '���� ������ �.� -���%%7�

+����[�.-����������:��+�A�������������.�:�+������������-������-���:�-�����-���.>�%%%�

�4� �� ���� � � �!� �� �.-� .-�+���-���E� � )�1��:����-� ��::������ ?�-�� ��-� �������1��� ���+��.�%%3�

/ Z4>4$0>�����<�����-�����6�..�����:�-������������1������+��.>�%%5�

Page 34: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

�$

�%34�

��1>�$>�����-�����6�..���� ������������������ .�-��:����������������������$������%3��

�� ��������������������������������:����?��1������-������������1���A�����-�-�-��������%3��

-�+�� , �� �������1� -�� 8������ ���� )��+�--1��� /�44�0� +�-���>� '���� ������ �.� -��� +���� [�%3��

.-����������:�-���������������.�-.��-��!���[email protected]�+���-���>����<��>�4%����-���B8�����<�$>�4

3�%3!�

���-���B8�� � )�1��:����-� ��::������ ?�-�� ���������1��� .�+��.� / Z4>4$0>� � � � � � <� ����-����%3$�

�6�..���� �:� -��� ���������1��� .�+��.>� ���.�� �.��-.� ?��� ���:�+��� ?�-�� -?�� +���%37�

���������-��6��+��-.>��%3%�

Page 35: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

� �

�7

�������>�)���:����+�.�������������1������-���.��:�.-�������++���@���-���1���.��.���-�����������-������, �>�

��

*������+

��*��������

��?

����+��/$P^

�P0�

����.���+��/$P^

�P0�

�+���������������1�

����

����

.����/�0�

/O 0�

�3

!�

������477�

,����.����H�%I�

���44�

$4�

���

� �

�T$7$!55�

,����.����H�3I�

��5%�

74�

���

� �"�

JV!44�4��

,����.����H�5I�

���$�

$$�

��

�$��

�V!�73%$�

**���*� ��� �*�* �*��

�*���� *� �*��� *�

�5��

$��

��"

�����

���

(&�

$��

�V!�7%54�

�*�***� ���**��*�*��*�

� ��� �*** �**� ��*��

�$5�

$3�

��

���

�V!�77$��

� �� ���*� �***�**��*�

�*� �*** ��� � � � �

�77�

$$�

���

����

�V!�%4���

*������*�* *� **�*�*�

�� �* ��� �**� �� �

�3!�

$$�

���

���

�W4�57$4�

,����.����H�!I�

���!�

74�

���

� �

������%5�

,����.����H�$��%I�

�$���

$3�

���

��$

��

�V!�%4$!�

�**��*��*��� �**� �**�

�* �*����*�� �� � � *�

�%��

$3�

���

��

���

���W�7$4!4�

�*� ��** *� **� �*��*�*�*� � ������ ����� �*��� �

�55�

$$�

���

�����

JV$�47�5��

�**�� ** �*�*��� *��

�� ��� * � ��*� �*�

��5�

$��

���

���8

��V!�%�5��

� �� ***��� � � �����

*�* *�*** �����*�*���*�

��%�

7$�

��8

*,

3��

�V!�7%!7�

�* �* ������ � �*� �

*������� �* �* ��*�**�

�!%�

7$�

���

���

�W4�57!3�

,����.����H5I�

�!45�

7$�

���

���

��

JV4�4!�4�

,����.����H�%I�

��74�

$3�

*$

���

�V!�7744�

�* �*� � �� � � �*�

��*** ��*��*����� �

�%4�

$3�

��$

��V!�%�5��

**�* ��*� ���*�**�

�*� ��� �*� �� �* �

�%��

$$�

#�#�

�V!�%�$$�

��*�� � �*�* �� � �* �

� �*� �** ��*� �*��*�

�55�

$3�

� ��������>�)���:����+�.�������������1������-���.��.���-��+

��.���-����6�..�����:��+

+���@���-���1���.��A�����-�+��, �>�

*������+

��*��������

��?

����+��/$P^

�P0�

����.���+��/$P^

�P0�

�+���������������1�

, ���

����

����

.����/�0�

/O 0�

�::������A�

�3

!�

������477�

,����.����H�%I�

��44�

7��

�>5!�

���

����

�V!�%4���

*������*�* *� **�*�*�

�� �* ��� �**� �� �

�3!�

7��

�>54�

���

���

�W4�57$4�

,����.����H�!I�

���!�

7��

�>55�

���

� �

������%5�

,����.����H�$��%I�

��44�

7��

�>54�

���

��

���

���W�7$4!4�

�*� ��** *� **� �*��*�*�*� � ������ ����� �*��� �

�55�

7��

�>44�

���

�����

JV$�47�5��

�**�� ** �*�*��� *��

�� ��� * � ��*� �*�

��5�

7��

�>44�

���

���

��

JV4�4!�4�

,����.����H�%I�

��74�

74�

�>55�

���

��$

��

�V!�%4$!�

�**��*��*��� �**� �**�

�* �*����*�� �� � � *�

�%��

7��

�>5!�

Page 36: Expression of immune-related genes in the oyster Crassostrea gigas ...

� �

�%

�������>�'6�..�����--��.��:�.����-��@�++���@���-���1���.���-������:�+��+�A�.��������������.��A�������-������

, ������A.�.>�

��

��

��

�*���.�

'6�..����.�-���

����-���������..�:���-������

M��A-�.�

�@!�������

#�����

���.-����

*�.-����

����������

J@���1��������1������1��

,�������1��

)�-�

��

�������-��A.-�.�

��

�+�A�.�

��

��

�����A.�

%���A.�

�����A.�

�1�

�3

!��

������-��.�

���.��-��������1�-����:��-��H�%I�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

�_�

��

��

� ��

+��-���

&++���-A<���-�+���������-����H�3I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

���

� �"�

��+

��A-�.�

&++���-A<���-�+���������-����H�5I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

$���

���

&++���-A<�8��-���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

�4�"

�����

���

(&�

$��

���

&++���-A<�,�-��.��&�����-��

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

����

���

&++���-A<�,�-��.��

���

���

�����

�����

�����

���

���

���

���

���

���

��

���

�����

��+

��A-�.�

�����A���������@���+�1��2���

�.>���++>�

���

���

���

���

�����

���

���

���

���

���

���

��

��

���

��+

��A-�.�

&++���-A<� ����������:��-����H�!I�

���

���

�����

�����

���

���

���

���

���

���

���

��

��

� �

��+

��A-�.�

&++���-A<�,�-��.��&�����-��H�$���I�

���

���

�����

�����

���

���

���

���

���

���

���

����

��$

��� ��

���

&++���-A<�8��-���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

��

��

���

����+

��A-�.B��-������&+

+���-A�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

��

�����

���

)�1�����1�,�-�?�A.�H5I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

��

���8

����

)�1�����1�,�-�?�A.�H5I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

�8

*,

3��

���

)�1�����1�,�-�?�A.�H5I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

���

���

������-��.�

)�1�����1�,�-�?�A.�H5I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

��

��

���

��

��+

��A-�.�

&++���-A�H�%I�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

�*

$���

���

�����A����

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���$

�����

�����A����

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

�#�

#��

���

&++���-A�

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

���

� *���.�:�+�-���')������A�H��I>��1<����.������1�1�������<���-���-�+�������_<�J�-��-����A�, ���_B@<�8�?���-��-����@<�"���-��-����

��

��

� � � �