Évaluation des activités anticancéreuses de quelques plantes utilisées dans le Département de...

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ParTAGNE SIMO Richard ( 03S305)

Master en Biochimie

Soutenance de Thèse en vue de l’obtention du diplôme de Doctorat/Ph.D en Biochimie

Laboratoire de Biochimie des Plantes Médicinales, des Sciences Alimentaires et Nutrition (LABPMAN)

UNIVERSITE DE DSCHANG

FACULTE DES SCIENCES

THEME

Evaluation des activités anticancéreuses de quelques

plantes utilisées dans le Département de la Vina

(Adamaoua-Cameroun)

2

Plan

Introduction

I- Inventaire des plantes médicinales et évaluation du potentiel anticancéreux des plus citées

II- Evaluation de l’impact du fractionnement sur l’activité anticancéreuse des extraits choisis et caractérisation du mode d’action des fractions les plus activesIII- Evaluation de l’effet du traitement par les fractions les plus actives sur le stress induit par le naphtalène chez le rat

Conclusion et perspectives

Introduction

3

Facteurs Chimiques:Tabac, Alcool, arsenic,

amiante, hydrocarbures aromatiques…

Facteurs PhysiquesRayon X, UV, Radioactivité…

Facteur ViralEpstein Barr, V. Hépatite B ou C, Herpès Virus, Papilloma Virus…

Facteur génétiqueFacteurs endogènes

CANC É

ROGEN

È SE

4

Introduction

Relation entre stress et cancerStress oxydatif

5

En 2012 Incidence = 14 millions (OMS, 2014)

Sur la même période, les décès devraient passer

d’environ 8,2 millions à 13 millions par an (OMS, 2014 ;

Globocan, 2012 ; Enow et al., 2012)

Introduction

Au Cameroun, l’incidence annuelle est de 15 000

Prévalence estimée à 25 000 malades (OMS, 2014 ; Enow et al., 2012)

Age moyen des patients au diagnostic est de 45 ans

Plus de 80% des cas sont diagnostiqués tardivement

6

Les progrès réalisés pour guérir le cancer sont indéniables

Thérapie génique Ciblée

Immunothérapie

Chirurgie

Radiothérapie

Hormonothérapie

Chimiothérapie

Trai

tem

ents

Traitements localisés

Traitements systémiques

Introduction

7

Introduction

Vomissements Effets secondaires Pertes de cheveux

Il est unanimement avéré qu’au Cameroun, la plupart des malades n’ont accès ni à un diagnostic précoce, ni au traitement moderne

Ceux qui peuvent suivre un traitement moderne font face

Mort de certaines cellules

La difficulté d’accéder facilement à un traitement efficace motive certains patients à faire recours à la phytothérapie

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Introduction

C’est dans ce même contexte que s’inscrit ce présent travail

Exploitation des pharmacopées traditionnelles

Base de bien de progrès dans les traitements du cancer

Cas de la Vincristine et de la Vinblastine

Kueté et al. (2012, 2013, 2014, 2015), Tamokou et al. (2013)

Travaux sur certaines plantes des Régions de l’Ouest, du Littoral et du Nord-Ouest.

Possibilité de fabrication des phytomédicaments.

9

Le criblage des plantes des Régions du Cameroun où la flore reste encore peu exploitée quant aux plantes ayant une activité anticancéreuse pourrait ouvrir des perspectives nouvelles dans le combat contre le cancer.

Certaines plantes médicinales de ces régions contiendraient des constituants qui outre leur effet antiprolifératif, pourraient neutraliser l’excès de radicaux libres lié à une intense prolifération.

Hypothèses

10

Etudier les propriétés antiprolifératives et antioxydantes des extraits

de quelques plantes médicinales traditionnellement utilisées dans le

Département de la Vina.

Objectif général

11

Inventorier les plantes médicinales utilisées dans le Département de la vina contre le cancer, puis évaluer le potentiel antiprolifératif des plus citées ainsi que l’activité antioxydante in vitro de celles-ci

Objectifs Spécifiques

Evaluer l’impact du fractionnement des extraits choisis sur l’activité anticancéreuse puis caractériser le mode d’action des fractions les plus actives tout en recherchant leurs principes actifs grâce à une purification bio-guidée

Etudier l’effet du traitement par certaines fractions actives sur un stress induit par le naphtalène chez le rat

12

Partie 1Inventaire des plantes médicinales et évaluation du

potentiel anticancéreux des plus citées

13

Enquête ethnopharmacologique

14

Fiche d’enquête

Espèce de plante et les parties utilisées dans le traitement du cancer

Méthode de préparation de l’extrait et le solvant utilisé

Autres usages traditionnels des espèces citées


15

Enquête Les phytothérapeutes rencontrés assimilaient le cancer à la plante parasite appelée Gui d’Afrique

L’étude a montré que ces phytothérapeutes prescrivaient différents modes de préparation des potions aux patients

Les entretiens se sont déroulés dans l’ensemble en langue locale (Fufulde). Toutes les espèces végétales recensées ont été récoltées, puis identifiées.

Des 23 espèces obtenues, 12 ont été retenues pour la suite de nos travaux


16

Ekebergia senegalensis

Ziziphus mauritiana

Eremomastax speciosa Cissus populnea


17

Costus spectabilis

Protea elliotii

Vitellaria paradoxa Senna siamea


18

Terminalia macroptera

Centella asiatica

Lannea kerstingii

Gardenia aqualla


19

Prélèvement des parties ciblées de chaque plante

Broyage jusqu’à l’obtention de fines poudres

Après chaque 24 heures, le mélange obtenu a été filtré et le filtrat obtenu a été concentré dans un évaporateur rotatif

Nettoyage et séchage à température ambiante

1000 g de chaque poudre ont été mis à macérer à température ambiante dans 3 L de méthanol

Les extraits résultant ont été séchés et les poudres obtenues ont été conservées jusqu’à leur utilisation.

Préparation des extraits

20

Extrait Classes de métabolites

Alcaloïdes Flavonoïdes Anthraquinones Tanins Triterpènes Saponines

Senna siamea + + + + + +

Centella asiatica + + + + + +

Cissus populnea + + + + + +

Costus spectabilis + + + + + +

Ekebergia senegalensis + + + + + -

Eremomastax speciosa + + - + + +

Gardenia aqualla + + + + + +

Lannea kerstingii + + + + + -

Protea elliotii + + - + + +

Terminalia macroptera + + + + + +

Vitellaria paradoxa - + + + + -

Ziziphus mauritiana + + + + + +

Les travaux de laboratoire, guidés par les usages vernaculaires ont pour but de constater le bien-fondé de l’usage d’une plante donnée

TABLEAU 1.1: Composition phytochimique des extraits

21

Evaluation du potentiel antiprolifératif des extraits de plantes sélectionnées

22

NCI-H460 MCF-7 PC3 HeLa

3T3

LIGNEES CELLULAIRESMatériel et méthodes

23

Matériel et méthodes

24

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A

B

C

D

E

F

G

H

.

Milieu de culture + extrait de plante (ou anticancéreux de référence) Milieu de culture + cellule + extrait de plante (ou anticancéreux de référence) Milieu de culture + cellule + RPMI

RMPI


25

. Fixation des protéines par le TCA

Rinçage 5 fois avec le PBS

Ajout de 100µL de sulforhodamine B + 5 Rinçages avec l’acide acétique 1%

Ajout de 100µL de tampon Tris + agitation pendant 5 mins

Mesure de l’absorbance de chaque puits à 515 nm


26


Paramètres antiprolifératifs

% croissance= [(E - Z) / (C - Z)] x 100

La CI50 (concentration d'extrait qui inhibe 50 % de la croissance cellulaire)

% inhibition = 100 - % Croissance

27

Tableau 1.2: Effets des extraits de plantes sélectionnées sur la prolifération Cellulaire

Extrait Activité antiproliférative CI50 (µg/mL)

NCI H460 MCF-7 PC3 HeLa 3T3

Lannea kerstingii >250 >250 >100 >100 >250

Cissus populnea >100 >100 >100 >100 >100

Centella asiatica >250 47,00±1,60*** 45,00±0,81*** >100 >250

Gardenia aqualla >100 87,00± 0,73*** 97,00± 0,88*** >100 >100

Senna siamea 87,00±1,60*** 97,00±1,30*** >100 >100 >100

Eremomastax speciosa 98,00 ±0,77*** 44,00±0,77*** >100 >100 >250

Costus spectabilis 13,00±0,80*** 20,00 ±0,80*** 22,50±0,81*** 10,30±0,26*** 6,72±0,05***

Ekebergia senegalensis 20,00 ± 0,04*** 13,50± 1,04*** 16,18±1,34*** 17,86±0,74*** 28,84±0,10***

Protea elliotii 24,44±0,90*** 87,00 ±1,22*** 47,00±1,33*** 66,46±0,37*** 81,6± 0,70***

Terminalia macroptera 31,00±1,50*** 31,00±1,50*** 42,37±0,31*** 68,46±018*** 64,42±1,30***

Vitellaria pradoxa 27,00±0,90*** 27,00±0,90*** 67,00±0,09*** 66,46±0,37*** 30,67±0,50***

Ziziphus mauritiana 16,00±0,59*** 29,00±0,90*** 39,87±0,19*** 37,10±0,47*** 42,53±0,48***

Doxorubicine 0,02± 0,001 0,22 ±0,053 0,29±0,120 0,62 ±0,150 0,70 ±0,19

Résultats et discussion

***P < 0,001 par rapport à la substance de référence (Doxorubicine)

28

L’effet antiprolifératif présenté par certains des extraits peut être lié à leur richesse en métabolites secondaires

Les variations observées au niveau de l’efficacité pourraient être attribuées soit à la constitution génétique des différentes lignées cellulaires considérées

L’absence d’activité observée pourrait être attribuée: Manque de connaissances spécifiques sur le cancerLe composé présent dans ces extraits pouvait avoir besoin d’une transformation métabolique in vivo, nécessaire à son activation


29

Tableau 1.3 : Indices de sélectivité des extraits de plantes sélectionnées

Extraits de : NCI-H460 MCF-7 PC3 HeLa

Lannea kerstingii / / / /

Cissus populnea / / / /

Centella asiatica / / / /

Gardenia aqualla / / / /

Senna siamea / / / /

Eremomastax speciosa / / / /

Costus spectabilis 0,51 0,33 0,29 0,65

Ekebergia senegalensis 1,44 2,13 1,77 1,61

Protea elliotii 3,33 0,93 1,73 1,22

Terminalia macroptera 2,07 2,68 1,52 0,94

Vitellaria paradoxa 1,13 1,27 0,45 0,46

Ziziphus mauritiana 2,65 1,46 1,14 1,06

Doxorubicine 35,00 3,00 2,41 1,12


30

Un extrait antiprolifératif et antioxydant permettrait de combattre efficacement le stress oxydatif chez le patient.

Production du monoxyde d’azote

Rôle majeur dans la physiologie cellulaire (Valko et al., 2007)

Sa forte concentration observée devient délétère pour les cellules

31

Evaluation du potentiel antioxydant in vitro des extraits de plantes sélectionnées

5 μL des solutions d’extraits ou de solution d’acide gallique

95 μL d’une solution éthanolique de DPPH

Incubation pendant 30 min à l’obscurité

L’absorbance a été mesurée à 515 nm

% d’activité = [(Abs Contrôle–Abs échantillon) / Abs Contrôle] x100

32

Evaluation du potentiel antioxydant des extraits de plantes sélectionnées: potentiel anti-DPPH


(Kumari, 2013)

Le potentiel anti-NO : Hemayet et al. (2012)

Chélation du fer: Le et al. (2007)

150 µL (Extrait + tampon + nitroprussiate de sodium )

150 minutes d’incubation à 25 ° C

50 µL de réactif d'acide sulphanalique

50 µL de N-(1-naphtyl) éthylène diamine


% d’activité anti-radicalaire = [(Abs Contrôle–Abs échantillon) / Abs Contrôle] x100

100 μL (5 µL d’extrait +35 µL de FeCl2 +60 µL de Ferrozine).

agité à 25 °C pendant 10 min


% d’activité chélatrice= [(Abs Contrôle–Abs échantillon) / Abs Contrôle] x100

33

Evaluation du potentiel antioxydant des extraits de plantes sélectionnées


34

Tableau 1.4: Activité anti-DPPH et anti-NO des extraits de plantes sélectionnées

Extrait de:Test anti oxydant

DPPH CI50 (µg/mL) NO CI50 (µg/mL)

Centella asiatica ND ND

Costus spectabilis ND /

Eremomastax speciosa 454,00±2,54** /

Senna siamea 236,70±3,80** ND

Gardenia aqualla 105,90±2,10** 278,00±1,56**

Lannea kerstingii 34,4±2,20** 253,00±2,00**

Ekebergia senegalensis 15,83±0,40** 299,00±3,00**

Protea elliotii 14,20±0,27** 306,00±2,50**

Cissus populnea 15,72±1,20** 409,00±2,00**

Terminalia macroptera 19,90±0,70* 205,00±0,90

Vitellaria paradoxa 22,14±0,39 290,00±2,04**

Ziziphus mauritiana 19,05±0,5* 361,00 ±3,00**

Substance de référence 22,67±0,40 108,00±2,00


35

Figure 1.1: Chélation du fer par les extraits de plantes sélectionnées

Il est connu que les composés phénoliques à l’instar des flavonoïdes peuvent fonctionner comme capteurs de radicaux libres, agents complexant des pro-oxydants, des métaux et des agents réducteurs d’espèces réactives de l’oxygène, ce qui protège le corps contre les maladies métaboliques telles que le cancer (Geronikaki et al., 2013)

Seuls les extraits de Cissus populnea, Ekebergia senegalensis, Protea elliotii et Ziziphus mauritiana semblent présenter l’activité chélatrice importante

EDTA

E sen

egale

nsis

Z mau

ritian

a

C populnea

P ellio

tii

V paradoxa

T macr

optera

L kers

tingii

S siam

ea

E speci

osa

G aquall

a

C spect

abilis

C asiati

ca0

20

40

60

80

100

** *

*

** *

***

**

**

** *

*** *

***

Extraits de plantes et substance de référence

Pour

cent

age

d'ac

tivité

Ché

latr

ice

du F

e2+(

%)


**P < 0,01 par rapport à la substance de référence (EDTA) avec le test de Dunnet

36

Partie 2Fractionnement des extraits, caractérisation du mode d’action des fractions les plus actives et

recherche bio-guidée des principes actifs

37

Extraits choisis

Ziziphus mauritiana

Protea elliotii



38

Figure 2.1: Partitionnement des extraits

F-MoH (28,71 g)

F-BuOH (15,39g) Résidu Aqueux

Séchage à 40°C

1,5 L BuOH (3 fois)

F-Ac (12,10 g) Résidu Aqueux

1,5 L ETO AC (6 fois)

F-DCM (10,74g) Résidu Aqueux

Extrait au méthanol de Ziziphus mauritiana (150g) + solubilisation dans 500 ml d’eau distillée

F-Hex (1,2mg) Résidu Aqueux

1,5 L DCM (6 fois)

1,5 L Hexane (6 fois)


39

Tableau 2.1: Activité antioxydante des fractions de plantes sélectionnées

Nom de la plante Fraction testée Activité antioxydante (DPPH)% d’activité à

500µg/mL CI50 µg/mL


Hexane NA N ADichlorométhane 61,81±1,50** 366,60±2,90**

Acétate d’éthyle 95,45±1,90 14,00±0,20**

n-Butanol 94,63±0,30** 19,12±0,50*

Méthanol 93,41±0,80** 20,16±1,30Protea elliotii Hexane 91,92±1,23** 122,00±4,30**

Dichlorométhane 92,74±0,90** 104,30±1,80**

Acétate d’éthyle 94,64±2,01** 24,10±0,18n-Butanol 94,71±1,44** 16,50±0,70**

Méthanol 96,05±0,79 15,30±0,20**

Ziziphus mauritiana Hexane 39,00±1,33** N DDichlorométhane 60,62±2,30** 274,70±3,75**

Acétate d’éthyle 95,41±1,55 14,6±0,29**

n-Butanol 96,66±0,66 16,70±0,40**

Méthanol 93,51±1,11** 17,00±0,80**

Acide gallique 96,67±0,80 22,67±0,40


40

Tableau 2.2: Effets des fractions de plantes sélectionnées sur la prolifération cellulaire

Plantes Fraction testée Activité anticancéreuse CI50 (µg/mL) NCI-H460 MCF-7 3T3Ekebergia senegalensis

Hexane 30,00± 0,10*** 10,00± 0,80*** 45,00 ± 0,22***

Dichlorométhane 12,00 ± 0,50*** 19,00 ±0,90*** 32,00 ± 0,15***

Acétate d’éthyle 30,00±1,66*** 25,00±1,33*** 40,00±1,88***

n-Butanol 32,00±0,37*** 40,00±0,77*** 52,00±0,31****

Méthanol 44,00±0,74*** 34,00±0,44*** 44,00±0,54***

Protea elliotii

Hexane >100 >100 >100Dichlorométhane 3,50±0,18*** 10,00 ±0,55*** 50,00 ±0,12***

Acétate d’éthyle 70,00±0,26*** 60,00±0,46*** 80,00±0,86***

n-Butanol 13,00±0,47*** 15,00±0,37*** 55,00±0,76***

Méthanol 12,00±0,10*** 92,00±0,80*** 48,00±0,50***

Ziziphus mauritiana

Hexane 18,00±0,09*** 96,00 ±0,01*** 66,00±0,93***

Dichlorométhane 3,80±0,50*** 5,00±0,88*** 54,00 ±0,99***

Acétate d’éthyle 20,00±1,11*** 16,00± 2,17*** 46,00±1,44***

n-Butanol 18,00±0,05*** 21,00±0, 60*** 36,00±0,36***

Méthanol 16,00±0,48*** 27,00±0,72*** 52,00 ± 0,25***

Standard Doxorubicine 0,02± 0,001 0,22 ±0,05 0,70 ±0,19


Formation de la mono-couche (24h)

Ajout des fractions et medicament standard (48h)

Trypsinisation + 1ml de milieu de culture

Centrifugation dans le tampon phosphate

Ajout de l’éthanol à 4°C

Rnase (30min) + Iodure de propidium (30min)

42

Evaluation de l’effet des fractions les plus actives sur le cycle cellulaire


0

10

20

30

40

50

60

70

*

*

*

**

**

**

G0/G1 Series7 Series14

Pour

cent

age

de C

ellu

les

(%)

Contrôle 1 µg/mL 3,5 µg/mL 25 µg/mL Doxorubi-cineTraitement

0

10

20

30

40

50

60

70

**

**

**

**

**

**

G0/G1 Series7 Series14 S Series21

Pour

cent

age

de c

ellu

les

(%)

Contrôle 1 µg/mL 5 µg/mL 25 µg/mL Doxorubi-cineTraitement

43

Figure 2.2: Effets de la fraction au dichlorométhane de Ziziphus mauritiana sur le cycle cellulaire

Inhibition en phase S pour NCI-H460 et en G2-M pour MCF-7

NCI-H460 MCF-7


0

10

20

30

40

50

60

70

**

**

**

**

**

**

G0/G1 Series7 Series14 S Series21

Pou

rcen

tage

de

Cel

lule

s (%

)

Contrôle 1 µg/mL 4 µg/mL 25 µg/mL DoxorubicineTraitement

0

10

20

30

40

50

60

70

*

**

**

**

**

**

G0/G1 Series7 Series14

Pour

cent

age

de C

ellu

les

(%)

Doxorubicine30 µg/mL10 µg/mL5 µg/mLContrôle

Traitement

44

Arrêt de la progression en S (Protea) Arrêt de la progression en G2-M ( Ekebergia)

Figure 2.3: Effets de la fraction au dichlorométhane de Protea elliotiiet à l’hexane de Ekebergia senegalensis sur le cycle cellulaire

NCI-H460 MCF-7


45

Fractions issues du partitionnement

Sélection de la ou des fraction(s) active(s)

Réalisation des sous-fractions

Evaluation des activités antiproliférative et anti-oxydante des fractions

Chromatographie sur colonne des fractions

Evaluation des activités antiproliférative et anti-oxydante des sous-fractions

Sélection de la sous-fraction active et réalisation de la chromatographie jusqu'à l’obtention de la ou des molécules

Purification bio-guidée

Des chromatographies préliminaires sur couche mince ont été menées


46

Les sous-fractions pures ont été soumises à des études spectroscopiques

Structures des composés

Déterminées par une équipe de collaborateurs de ICCBS (Pakistan)

Confirmées par comparaison sur CCM avec des composés disponibles au laboratoire et de structures connues

Purification bio-guidéeRésultats et discussion

47

Composés isolés de Ziziphus mauritiana

Lupéol

HO

Acide bétulinique

Catéchine Epigalocatéchine

HO

COOH

O

OH

OH

OH

OH

HO O

OH

OH

OH

OH

OH

HO


48

Acide bétulinique

cytotoxique sur de nombreuses lignées de cellules cancéreuses (Prasad et al., 2008)

Mécanisme moléculaire: induction de l’apoptose perméabilisation de la membrane mitochondriale externe

LupéolInduit de l’apoptose

Arrêt du cycle cellulaire des cellules cancéreuses en phase G2/M par inhibition de la voie de signalisation des cyclines


49

Catéchine

Limite certains dommages au sein d’un organisme et retarde l’apparition de certaines maladies comme le cancer

Agirait par une modulation des voies de signalisation cellulaires, entraînant ainsi des changements dans l’expression des gènes au niveau cellulaire (Manach et al., 2005; Scalbert et al., 2005)

Epigallocatéchine

Possède une puissante activité anti-inflammatoire et antiproliférative et est capable d’inhiber sélectivement la croissance cellulaire

Induit l’apoptose dans les cellules cancéreuses sans affecter les cellules normales (Syed et al., 2007)


50

Partie 3Effet du traitement par les fractions les plus actives sur le stress induit par le naphtalène chez le rat

51

Evaluation du traitement par les fractions les plus antioxydantes sur le stress induit par le naphtalène

30 rats test

TestsContrôles

NAP+12,5 mg/kg

NAP+50 mg/kg

NAP+25 mg/kg

NAP+100 mg/kg

Contrôle nég: Huile +eau

distillée

Contrôle ref: NAP +

Ac Asc

Contrôle positif: NAP

+ Eau distillée

Gavage pendant 30 jours + Anesthésie +Sacrifice +collecte des organes


Akhter et al. (2008)

Préparation des homogénats tissulaires et dosages

52

Evaluation de l’activité de la SOD

Evaluation de l’activité de la catalase

Dosage du glutathion

Dosage du MDA


53

Tableau 3.1: Effets des fractions à l’acétate d’éthyle de Protea elliotiiet de Ziziphus mauritiana sur l’activité de la SOD

Groupes et traitements SOD (IU/mg enzyme)Foie Cœur Rein

Fraction à l’acétate

d’éthyle de Protea elliotii

CNe 13,98±1,25 15,64±1,13 15,22±1,27Cp 17,42±1,21 19,32±1,88 18,56±1,56Cr 15,24±1,38 15,86±1,40 15,61±1,31N+D1 17,77±1,65 17,47±1,82 16,53±1,68N+D2 15,68±1,83 15,77±1,88 16,23±1,68N+D3 17,82±2,31 18,67±2,16 16,80±2,52


d’éthyle de Ziziphus

mauritiana

CNe 13,98±1,25 15,64±1,13 15,22±1,27Cp 17,42±1,21 19,32±1,88 18,56±1,56Cr 15,24±1,38 15,86±1,40 15,61±1,31N+D1 17,13±2,01 16,20±2,11 15,51±1,89N+D2 19,72±1,27 20,16±2,20 22,79±1,28*

N+D3 21,44±1,33* 23,49±0,61* 20,06±2,21


*P < 0,05 par rapport au témoin négatif avec le test de Dunnet

54

Tableau 3.2 : Effets des fractions à l’acétate d’éthyle de Protea elliotii et de Ziziphus mauritiana sur l’activité de la catalase

Groupes et traitements Catalase (IU/mg enzyme)

Foie Cœur Rein


d’éthyle de Protea elliotii

Cp 25,91±2,41 22,47±0,83 24,26±1,62

Cp 27,24±2,13 26,22±2,41 27,79±1,38

Cr 25,08±1,15 23,28±2,50 25,61±0,93

N+D1 25,18±1,42 28,42±1,45 27,18±2,17

N+D2 25,70±2,35 27,95±3,49 31,64±2,35

N+D3 37,73±0,5**a 34,30±3,06* 36,98±2,47*Fraction à l’acétate

d’éthyle de Ziziphus

mauritiana

CNe 25,91±2,41 22,47±0,83 24,26±1,62

Cp 27,24±2,13 26,22±2,41 27,79±1,38

Cr 25,08±1,15 23,28±2,50 25,61±0,93

N+D1 24,73±2,74 30,67±3,47 29,78±5,84

N+D2 28,44±3,59 32,49±3,95 28,88±3,13

N+D3 33,99±2,10 34,57±2,11* 33,99±2,10


*P < 0,05 par rapport au témoin négatif, tandis que*aP < 0,05 par rapport au témoin positif avec le test de Dunnet

55

SODCatalase

Dans les études in vivo, l’évaluation du statut de stress oxydant le plus souvent se fait indirectement par l’évaluation des enzymes antioxydantes à l’instar de la SOD et la catalase.

La SOD dismute les anions superoxyde en eau oxygénée qui à son tour est décomposée en eau et en oxygène par la catalase

L’augmentation de l’activité de la SOD et la catalase observée pourrait suggérer soit l’augmentation de la biosynthèse des enzymes antioxydantes soit la neutralisation des espèces oxygénés activées par ces fractions (Sathishsekar et Subramanian, 2005)


0

0.5

1

1.5

2

a

*a **a * *a *

*

CNe Cp Cr Series7 ProteaZiziphus Series12 Series17

Tau

x de

Glu

tath

ion

hépa

tique

en

µmol

/g d

e tis

su

Contrôle N+D1 N+D2 N+D3

Traitement

0

0.5

1

1.5

2

a

*a

CNe Cp Cr Series7 Protea ZiziphusSeries12 Ziziphus Series17

Tau

x de

Glu

tath

ion

réna

le e

n µm

ol/g

de

tissu

Contrôle N+D3N+D2N+D1

Traitement

56

Figure 3.1: Effets des fractions à l’acétate d’éthyle de Protea elliotiiet de Ziziphus mauritiana sur le taux de glutathion hépatique et rénal

Hausse (P<0,05) du taux de glutathion hépatique et rénal.



0

0.5

1

1.5CNe Cp Cr Series7 Protea Ziziphus Series12Series17

Tau

x de

Glu

tath

ion

card

iaqu

e e

n µm

ol/g

de

tissu

Contrôle N+D1 N+D2 N+D3Traitement

57

Figure 3.2: Effets des fractions à l’acétate d’éthyle de Protea elliotiiet de Ziziphus mauritiana sur le taux de glutathion cardiaque

Glutathion

Le glutathion, antioxydant non enzymatique, constitue la première ligne de défense anti-radicalaire et joue un rôle multifactoriel dans le mécanisme de défense antioxydante

Les changements de son taux peuvent être considérés comme des indicateurs du stress oxydant


0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

a

**a

*a *a *a*a

CNe Cp Cr Series7Protea Ziziphus Series12 Series17

Tau

x de

mal

ondi

aldé

hyde

hép

atiq

ue e

n µM

/g d

e tis

su

N+D2N+D1 N+D3Contrôle

Traitement

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

a

a*

CNe Cp Cr Series7Protea Ziziphus Series12 Series17

Tau

x de

mal

ondi

aldé

hyde

rén

al e

n µM

/g d

e tis

su


Traite-ment

58

Figure 3.3: Effets des fractions à l’acétate d’éthyle de Protea elliotiiet de Ziziphus mauritiana sur le taux de malondialdéhyde (foie et rein)

Baisse significative du taux de malondialdéhyde hépatique et rénal



0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

CNe Cp Cr Series7 Protea Ziziphus Series12 Series17

Tau

x de

mal

ondi

aldé

hyde

car

diaq

ue

en µ

M/g

de

tissu


Traitement

59

Figure 3.4: Effets des fractions à l’acétate d’éthyle de Protea elliotiiet de Ziziphus mauritiana sur le taux de malondialdéhyde cardiaque

Malondialdéhyde

L’élévation traduit une augmentation de la lipo-peroxydation et des dommages tissulaires par la formation excessive des radicaux libres (Sanmugapriya et Venkataraman, 2006)

Par contre, l’administration simultanée des fractions de Protea elliotii ou de Ziziphus mauritiana avec le naphtalène induit une diminution du taux de malondialdéhyde


60

23 plantes présumées anticancéreuses ont été identifiées dans la Vina

Parmi elles, les extraits de Ekebergia senegalensis et Costus spectabilis ont présenté une forte activité antiproliférative

Les extraits de Terminalia macroptera, Protea elliotii, Vitellaria paradoxa et Ziziphus mauritiana par contre ont présenté une activité antiproliférative modérée.

Par ailleurs, les extraits de Protea elliotii, Terminalia macroptera, Lannea kerstingii Vitellaria paradoxa, Ekebergia senegalensis et Ziziphus mauritiana ont montré une activité antioxydante in vitro

Conclusion

61

Le fractionnement des extraits choisis a conduit à l’obtention de quelques fractions plus actives que les extraits ayant conduit à leur obtention.

L’un des modes d’actions anticancéreux des fractions serait le ralentissement ou l’arrêt du cycle cellulaire à l’une des phases

La purification bio-guidée de ces fractions a conduit à l’obtention du lupéol de l’acide bétulinique, de la catéchine et l’épigalocatéchine qui avaient des activités anticancéreuses prouvées.

Conclusion

62

Les fractions à l’acétate d’éthyle de Ziziphus mauritiana et de

Protea elliotii ont montré leur capacité à protéger les tissus

hépatiques, cardiaques et rénaux des dommages tissulaires

qui peuvent être causés par la production excessive des

radicaux libres

Conclusion

63

Evaluer les activités antiprolifératives et antioxydantes des autres plantes issues de l’enquête ethnopharmacologique

Evaluer l’effet du fractionnement sur les autres extraits ayant présenté l’activité antiproliférative et/ou l’activité anti-oxydante

Effectuer des études toxicologiques sur les extraits ayant présenté une bonne activité afin de vérifier leur innocuité

Perspectives

64

Richard Simo Tagne, Bruno Phelix Telefo, Jean Noel Nyemb, Didiane Mefokou Yemele, Sylvain Nguedia Njina, Stéphanie Marie Chekem Goka, Landry Lienou Lienou, Armel Hervé Nwabo Kamdje, Paul Fewou Moundipa, Ahsana Dar Farooq. 2014. Anticancer and antioxidant activities of methanol extracts and fractions of some Cameroonian medicinal plants. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. doi: 10.1016/S1995-7645(14)60272-8”.

Richard Simo Tagne; Bruno Phelix Telefo; Emmanuel Talla; Jean Noel Nyemb; Sylvain Nguedia Njina; Mudassir Asrar; Armel Hervé Nwabo Kamdje; Paul Fewou Moundipa; Ahsana Dar Farooq and M. Iqbal Choudhary.2015 Bio-guided fractionation of methanol extract of Ziziphus mauritiana Lam. (bark) and effect of the most active fraction on cancer cell lines. Asian Pacific Journal of Tropical Disease 5(4) 307-312.

Publications

65

Remerciements

Laboratoire de Biochimie des Plantes Médicinales, des Sciences Alimentaires et Nutrition (LABPMAN)

Tradithérapeutes qui nous ont orienté vers les plantes

Laboratoire de chimie de l’Université de Ngaoundéré

TWAS pour la bourse

Centre International pour les Sciences Chimiques et Biologiques du Pakistan (ICCBS)

Évaluation des activités anticancéreuses de quelques plantes utilisées dans le Département de...

Education

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