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Effect of Ozone Oxidative Preconditioning in Intestinal Injury Induced by Ischemia/reperfusion in Rats.

Efecto del precondicionamiento oxidativo con Ozono en el daño intestinal inducido por isquemia/reperfusión en ratas

Danae Basanta Fortes1, Zullyt Zamora Rodríguez 2, Yaima Martínez 2, Esmir Camps Calzadilla1, Mercedes Gámez Fonseca1, Víctor Rodríguez Sosa1, Daisy Ferrer Marrero1.

1 Institute of Medical Sciences “Victoria de Giron”, Habana , Cuba. 2 Ozone Research Center, Biomedicine Research Department, 230 Street and 15thAvenue,

Siboney, Playa, Havana City, Cuba. Tel: 2712324, Email: zullyt.zamora@cnic.edu.cu

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Resumen La isquemia/reperfusión intestinal constituye un fenómeno común en múltiples situaciones clínicas, tales como: la isquemia mesentérica, el shock hemorrágico y el trasplante de intestino, entre otras. La gran cantidad de alteraciones fisiopatológicas que lo acompañan contribuyen al daño irreversible del órgano. El ozono posee propiedades muy importantes, dentro de las cuales se destaca su capacidad antioxidante, razón por la cual se investigó si era capaz de proteger al intestino contra el daño causado por la isquemia/reperfusión intestinal. La investigación se realizó con ratas Wistar macho, adultos jóvenes, las cuales fueron pretratadas con ozono gaseoso por vía rectal, a diferentes dosis (0.45, 1.35 y 2.25 mg/kg de peso), durante quince días. Al final de esta se les provocó isquemia/reperfusión intestinal. Se realizaron pruebas de función, estudios histológicos y bioquímicos, indicadores de daño oxidativo y defensa antioxidante. Las ratas pretratadas con ozono, mostraron una mejor función absortiva, así como una mayor concentración de proteínas que las no tratadas, siendo esta diferencia estadísticamente significativa. La función digestiva relacionada con la actividad de la enzima sacarasa fue mayor en los grupos pretratados con ozono que en los no tratados, aunque sólo de manera perceptible. Histológicamente, también se demostró una mayor conservación de la integridad de la mucosa intestinal y sus vellosidades en los grupos pretratados, con respecto a los restantes grupos. Por su parte, las variables bioquímicas demostraron que el precondicionamiento con ozono es capaz de proteger al intestino contra el daño oxidativo e incrementar la capacidad antioxidante del mismo.

Palabras claves: Isquemia /reperfusion , Ozono, ratas, daño oxidativo.

Abstract Intestinal Ischemia/reperfusion constitutes a common event in many clinical disorders such as mesenteric ischemia, hemorrhagic shock and gut transplantation, among others. The great amount of physiological alterations that occurs contributes to the irreversible damage of the organ. Ozone has very important properties and one of them is its antioxidant capacity. Therefore, we investigated wether or not ozone is able to protect the gut against the damage induced by ischemia /reperfusion. The research was performed in male Wistar rats, which were pretreated with ozone by rectal route at doses (0.45, 1. 35 and 2. 25 mg/kg body weight) during 15 days. At the ends of this periods ischemia/reperfusion injury was induced, also were performed functional, histological and biochemical studies, indicators of oxidative damage and of antioxidant defense. The rats pretreated with ozone, showed significant a better absortive function as well as a greater protein concentration than those nontreated. Histologically was observed a better integrity of intestinal mucosa with respect to the groups pretreated with ozone. Also the biochemical markers demonstrated that ozone is able to protect against the oxidative damage and to increase the antioxidant capacity of the organ.

Key words: Ischemia/reperfusion, Ozone, Rats, Oxidative damage.

Introducción La isquemia es la disminución del suministro de sangre a una parte del cuerpo u órgano debido a la suspensión parcial o total del flujo de sangre arterial. La isquemia/reperfusión (I/R), es la interrupción del flujo de sangre al tejido por un período de tiempo, seguido por una restauración del flujo sanguíneo.1 El daño por isquemia/reperfusión intestinal es una

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condición grave resultante de la isquemia mesentérica aguda, de los estados hemorrágicos, de traumatismos y de algunos procederes quirúrgicos, incluyendo el trasplante de intestino delgado, cirugía de la aorta abdominal, luego de la descompresión del síndrome de compartimiento abdominal, hernias estranguladas, divertículos, entre otras.2 Este daño por isquemia/reperfusión intestinal no solo está circunscrito a entidades nosológicas propias del sistema gastrointestinal, sino que también está presente en otras condiciones en las que no está involucrado de manera primaria este sistema, como en las quemaduras severas, los estados de hipotensión y en las cirugías cardiovasculares, estados de shock séptico o de otra índole.

La lesión derivada del proceso de I/R tiene dos componentes fundamentales: la lesión por la isquemia debida a la falta de oxígeno, y la lesión por reperfusión provocada principalmente por la síntesis de diversos mediadores inflamatorios que son liberados al tejido y al torrente sanguíneo tras la restauración del flujo sanguíneo, 3 este proceso inflamatorio actúa a nivel sistémico, iniciando un círculo vicioso que conduce al deterioro fatal de la circulación. 3 Además, los leucocitos contribuyen a los efectos deletéreos más allá de la pared intestinal, evidenciándose por la infiltración leucocitaria de órganos de choque como los pulmones y el hígado.4,5 La disminución del flujo sanguíneo produce la necrosis de la mucosa intestinal a través de los extremos de las vellosidades. La reperfusión, tras un episodio isquémico, libera especies reactivas del oxigeno (EROs), que pueden acrecentar la extensión de la necrosis de la mucosa, comprometiendo aún más la capacidad de absorber líquido y permitiendo el pasaje hacia la luz del líquido intersticial y proteínas plasmáticas.6, 7 La disrupción de la membrana de la mucosa favorece la translocación bacteriana y permite la absorción de toxinas bacterianas y productos tóxicos intraluminales como consecuencia de una pérdida de la función mecánica de barrera de la mucosa intestinal.8

La mayor fuente de EROs en el intestino delgado parece ser la enzima xantina oxidasa, formada a partir de la xantina deshidrogenasa (XD).9

La ozonoterapia es reconocida por sus resultados beneficiosos tanto en modelos experimentales como en la práctica clínica, mediante los que se le ha comprobado su efectividad en el tratamiento de enfermedades donde media el daño producido por EROs, debido a su efecto restaurador del estado redox intracelular.10

Actualmente se reconoce que un estrés oxidativo moderado es capaz de inducir la activación de los sistemas de defensa antioxidantes. Esto ha permitido explicar como el precondicionamiento oxidativo con ozono (POO) es capaz de tener acciones farmacológicas beneficiosas en diferentes enfermedades mediadas por EROs.11

En modelos animales de I/R hepática, el POO aplicado por via rectal fue capaz de disminuir la producción de EROs y preservó y/o estimuló el sistema antioxidante endógeno.12 Enzimas antioxidantes como la catalasa (CAT) y la superóxido dismutasa (SOD), administradas por vía exógena pueden atenuar las EROs y disminuir su tiempo de vida media en la circulación.13

También se demostró que la ozonoterapia aplicada en ratas con síndrome de intestino corto, lograron una mejor adaptación del intestino y recuperación ante el proceder quirúrgico.14 Teniendo en cuenta las estrategias orientadas a estimular los mecanismos naturales de autoprotección celular son escasas, es por esta razón que nos ha motivado la búsqueda de tratamientos alternativos con los cuales podamos mejorar la calidad de vida de los pacientes con daño intestinal en los que media la liberación de radicales del oxígeno. Por ello, hemos encaminado nuestro trabajo a evaluar los efectos del precondicionamiento oxidativo con ozono en un modelo animal de daño intestinal agudo por I/R.

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Material y métodos Animales. Se utilizaron ratas macho de la línea Wistar, 180 a 250 g de peso corporal, provenientes del Centro para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB), Habana, Cuba. Estos animales fueron mantenidos durante todo el experimento en condiciones de temperatura y humedad controlados, incluyendo ciclos de luz-oscuridad, con alimentación y agua ad libitum. Este estudio fue aprobado por el Comité Ético para el trabajo con los animales de experimentación del Instituto de Ciencias Básicas Medicas” Victoria de Girón”.

Diseño experimental: Los animales fueron divididos en 6 grupos experimentales de 10 animales cada uno, el grupo uno fue seleccionado como control sin tratamiento; al grupo dos, se le produce la isquemia/reperfusión (I/R) intestinal; el grupo tres, se le aplicó precondicionamiento con oxigeno y se le indujo la I/R; grupo cuatro, recibe POO a la dosis de 0,45 mg/kg y se le indujo la I/R; grupo cinco, se le aplica POO (1,35 mg/kg) y la I/R; grupo seis, recibe POO (2,25 mg/kg) y la I/R.

Tratamientos El POO, se realizó mediante la insuflación rectal de la mezcla ozono/oxigeno (MOO) de un volumen de 9 mL para cada animal a las concentraciones de la mezcla de 10, 30 y 50 mg/L, lo que se corresponde con las dosis, según el peso de los animales, de 0,45; 1,35; 2,25 mg/kg para cada grupo experimental. Se realizó un total de 15 aplicaciones de la MOO una diaria, 24 h después de la última aplicación se induce la I/R intestinal.

Isquemia/reperfusión intestinal. La I/R se realizo según el método descrito por Shoenberg (1985). 9 Previo ayuno de 24 h, los animales son anestesiados con pentobarbital sódico (50 mg/kg) por vía intraperitoneal, se les realizó una incisión por planos en la línea media abdominal hasta llegar a la cavidad peritoneal. La arteria mesentérica anterior es localizada y disecada, se le colocó un microclamp vascular para ocluir su flujo por espacio de 30 minutos (tiempo de isquemia). Pasado este tiempo, se retiró el clamp restableciendo nuevamente el flujo sanguíneo durante 90 minutos (tiempo de reperfusión). En ambos tiempos, la herida abdominal se mantuvo cerrada mediante una pinza de mosquito y cubierta por torundas de gasa embebidas en NaCl al 0.9%.

Transcurridos los 90 min de reperfusión, se práctica la eutanasia a los animales mediante inyección intracardiaca de cloruro de potasio bajo ligera anestesia inhalatoria. Se extrajo una porción de intestino de 17 cm a partir de duodeno. Esta porción de intestino delgado se utilizó para las pruebas funcionales de absorción in vitro de glucosa mediante el ensayo de disacaridasas (sacarasa), determinación de proteínas totales, estudio histológico y las determinaciones del contenido de sustancia reactiva al acido tiobarbitúrico (SRATB), actividad enzimática de la superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT).

Determinación de la absorción de glucosa en intestino delgado in vitro: Esta técnica esta basada en la medición del paso de glucosa del gradiente de mayor concentración al de menor concentración, lo cual se aplicó a un segmento de yeyuno, siempre en la misma porción para todas las ratas. Se tomó 5 cm de yeyuno, a partir del ángulo de Treizt, se lavó con suero fisiológico, se colocó sobre un cristal y se realizó eversión del mismo, quedando la serosa por dentro y la mucosa por fuera. Se ató un extremo

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del intestino con hilo de seda 3.0 y posteriormente se inyectó en el interior del intestino, con una jeringuilla con catéter de polietileno, 1 ml de solución de glucosa 12,5 mM y se ató el otro extremo con hilo de seda 3.0. El intestino conteniendo la glucosa 12,5 mM en su interior fue introducido en un beaker que contenía 50 mL de solución de glucosa 25 mM, como solución de incubación y se incubó a 37º C durante una hora. Transcurrido ese tiempo el segmento es extraído de la solución, uno de los extremos es cortado y su contenido se vertió en un tubo graduado. Posteriormente se lavó el interior del mismo con 2 mL de agua destilada. Después se raspó la mucosa del intestino y se pesaron 110 mg de la misma. Se homogenizaron en 2 mL de NaCl al 0,9% y se centrifugó dicho homogenizado durante 10 minutos a 3 000 rpm.

Se tomó 1 mL de la solución de glucosa que se usó como medio de incubación y se diluyó hasta 20 mL con agua destilada. Posteriormente se añadió a diferentes tubos de ensayo: 1. 40 µL del segmento de lavado en un tubo de ensayo. 2. 40 µL del sobrenadante de mucosa. 3. 40 µL de solución de glucosa al 12.5 mM. 4. 40 µL de agua destilada señalada como blanco. Se aplicó 1 ml de Rapiglucotest a cada tubo, se incubaron durante 10 minutos a 37º C y se leyó el contenido de cada tubo a 505 nanómetros en un Espectrofotómetro. Se realizaron 3 lecturas y se tomó el valor medio. Una vez obtenidas las lecturas se aplicó la siguiente ecuación: T1 x 2 + T2 – T3 = Absorción neta de glucosa por el intestino. Las cantidades de glucosa absorbidas (mg) fueron calculadas a partir de una curva de concentraciones de glucosa conocido.

Determinación del contenido de proteínas La determinación de proteínas totales, se realizó mediante el método de Lowry. 15 Los resultados se expresaron en mg de proteínas/g de tejido. Se realizaron 3 lecturas y se tomó el valor medio.

Homogenado de tejido intestinal. La porción de intestino se homogenizó en solución de KCl 100 mM con EDTA 0,3 mM en proporción (1:10) peso/ volumen a 4º C, utilizando un homogenizador Ultraturrax T-25 Polytron durante 30 segundos. El homogenizado es centrifugado a 6000 rpm durante 60 minutos a 4º C y el sobrenadante fue utilizado para las determinaciones bioquímicas.

Determinaciones bioquímicas de parámetros de estrés oxidativo: La sustancia reactiva al acido tiobarbitúrico (SRATB), fue determinado espectrofotométricamente por una versión del método de Ohkawa y col. en 1978.16 La determinación de la actividad de la catalasa (CAT) se realizó de acuerdo al método de Evans y Diplock (1991). 17 Para la actividad de la actividad de la superóxido dismutasa (SOD) se utilizó una versión modificada del método de Minami y Yoshikawa, (1979).18

Estudio histológico de los cortes de Intestino Delgado. La porción de intestino extraído fue conservada en una solución de formaldehido al 10 %, posteriormente fue procesado y embebido en parafina y se empleo la técnica de tinción con Hematoxilina y eosina, además se realizó la técnica de tinción de mucopolisacáridos según PAS. Los análisis del tejido fue realizado a través de un microscopio óptico y se evaluaron las siguientes variables: Estado de necrosis, pérdida de integridad de la mucosa, congestión de la mucosa, atrofia de la mucosa, secreción de mucus según PAS.

Análisis estadístico. Para el procesamiento de las variables cuantitativas se utilizó el paquete estadístico SPSS. PC versión 10.0 Microsoft en el soporte Windows XP. Los resultados del análisis de las variables cualitativas fueron expresados en porciento. Estas variables son: Estado de

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necrosis, Pérdida de la integridad de la mucosa, congestión de la mucosa, Atrofia de la mucosa, Secreción de mucus según PAS.

Resultados y discusión. La figura 1 muestra el comportamiento de la capacidad de absorcion del intestino en los diferentes grupos experimentales, donde el grupo de animales control sometidos a I/R mustra una disminucion de la capacidad de adsorcion con respecto al control sin I/R, mientras que los grupos de animales que recibieron precondicionamiento con MOO a diferentes dosis, mostraron un incremento siginifcativo de la absorcion, el mayor valor de absorcion se alcanzó con la concentración de 30 mg/L al compararla con el control sin tratamiento. Mediante la técnica de absorción in vitro, se determina la capacidad de intestino de mantener su función principal a través del epitelio intestinal, la misma requiere habitualmente de un transporte activo. Este transporte activo requiere de un transportador que la introduce en el interior de la célula gracias al gradiente que mantiene la bomba Na+/K+ ATPasa. Por lo que para una adecuada absorción de glucosa se requiere un enterocito sano y energía para mantener el transporte activo. Durante los procesos isquemicos con la interrupción del flujo sanguineo por un periodo de tiempo, puede producir daño irreversible del tejido intestinal debido a la disminucion del ATP.9 La hipoxia tisular provocada durante la isquemia, conlleva a la obtención de hipoxantina, la cual se encuentra en exceso. Durante el período de reperfusión, al producirse la entrada masiva de oxígeno, ocurre la liberación de las EROs, que por su cantidad no pueden ser neutralizados por los antioxidantes endógenos y se produce la peroxidacion de sus membranas, todo lo cual afectaría la motilidad y los procesos de digestión y absorción intestinal de forma significativa.9 Como consecuencia de la lesión isquémica de la mucosa se liberan al torrente circulatorio: toxinas, citoquinas inflamatorias y enzimas proteolíticas que comprometen aún más el déficit circulatorio. A nivel de la membrana celular se producen alteraciones del potencial de acción, aumento de la permeabilidad y alteraciones de la bomba Na+/K+, lo que conducirá al edema y la consiguiente pérdida de la homeostasis.9

Lo anterior justifica la marcada disminución de la absorción de glucosa en el grupo con I/R sin tratamiento, contrario a los resultados obtenidos en los grupos pretratados con ozono, en los que se conservó la capacidad absortiva de la mucosa. Tal es así que como mencionamos anteriormente, en el grupo pretratado con la dosis media de ozono (1,35 mg/kg), se observó una diferencia significativa de esta variable con respecto a los restantes grupos de la muestra.

El ozono posee la propiedad de estimular determinados sistemas enzimáticos antioxidantes protectores contra la acción de los metabolítos del oxígeno.19 Existen reportes que plantean que la función del ozono como estimulante de los sistemas antioxidantes se debe a una importante activación de las reacciones dependientes del metabolismo oxígeno y del ciclo de Krebs, con la formación de grandes cantidades de protones necesarios para restaurar la capacidad buffer de los sistemas de defensa antioxidantes contra los radicales libres del oxígeno y los peróxidos. De esta forma el ozono produce un balance dinámico entre prooxidantes y sistemas antioxidantes, los cuales mantienen la estructura de la membrana y el metabolismo celular.20

El ozono actúa generando productos secundarios en su reacción con los dobles enlaces de los lípidos, enlaces bisulfuros y grupos sulfihidrilos de proteínas, presentes en las membranas celulares. Estos compuestos tienen la propiedad de activar mecanismos bioquímicos y actúan sobre la expresión de los genes. Se demostro en un modelo de I/R

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hepatica en ratas que el POO modulo la expresion de Factor nuclear (NF-κB), Factor de necrosis tumoral –α (FNT- α) y de la proteina de choque termico (HSP-70), biomoleculas reguladoras de la funcion celular.29

0

0,2

0,4

0,6

0,8

1

1,2

1,4

I Control  II‐ I/R III‐ Oxigeno IV‐ Oz (0,45 mg) V‐Oz (1,35 mg) VI‐Oz (2,25 mg)

Figura 1: Determinación de la absorción de glucosa en intestino delgado in vitro.

*Diferencia significativa con respecto al control con I/R, para p<0,05

El comportamiento del contenido de proteínas totales en el tejido intestinal, se muestra en la Figura 2. Se aprecia una disminucion significativa del contenido de proteinas en el grupo con I/R, mientra que en los grupos que reciienron Precondicionamiento con ozono se aprecia un restablecimiento del contenido de proteinas, principalmente para las dosis de MOO de 0,45 y 1,35 mg/kg con la que se obtuvo la concentracón mayor de proteinas, incluso mayores que las del grupo conrtol sin tratamiento. No comportandose de igual forma en el grupo de animales que recibió la dosis mayor de MOO.

Este hallazgo coincide con el comportamiento observado en la prueba de absorción in vitro de glucosa donde se observó un similar comportamiento en dicho grupo, lo cual nos hace inferir que se mantiene una relación directa entre la estructura y la función pues el grupo que muestra mayor concentración de proteínas es precisamente el que muestra mayor capacidad de absorción. Como dato significativo cabe señalar el comportamiento del grupo tratado con la dosis más alta de ozono, el cual mostró un marcado descenso en la concentración de proteínas del órgano.

*

Mg/mL

8 

 

4,6

4,8

5

5,2

5,4

5,6

5,8

6

6,2

6,4

I Control  II‐ I/R III‐ Oxigeno IV‐ Oz (0,45mg)

V‐Oz (1,35mg)

VI‐Oz (2,25mg)

Figura 2: Contenido de proteínas en el tejido intestinal. Letras diferentes, diferencias significativas para p<0.05.

En la figura 3 se observan las curvas que muestran el comportamiento de los valores del contenido de SRATB y la actividad de la CAT y la SOD para todos los grupos experimentales , el contenido de SRATB en el grupo de animales con I/R muestra un incremento significativo con respecto al control, lo cual ha sido igualmente demostrado por otros estudios en los que se induce I/R tanto en tejido renal 21 como hepático 22 entre otros trastornos oxidativos como los reportes en modelos de choque séptico23 y endotóxico,24 lo que confirma el daño intestinal estuvo mediado fundamentalmente por un incremento de las EROs. Por otra parte se demuestra que los grupos que recibieron POO manifiestan una disminución significativa del contenido de SRATB en el tejido intestinal respecto al grupo con I/R, lo que se encuentra en concordancia con reportes anteriores donde se demuestra que el POO le confiere protección al organismo mediante un restablecimiento del balance redox intracelular y esto lo confirman los curvas del comportamiento de la actividad enzimática de la CAT y la SOD, las cuales tiene un comportamiento inverso para cada uno de los grupos experimentales, como por ejemplo en el grupo de I/R cuando la CAT esta disminuida la SOD, se encuentra aumentada, esto esta determinado por la función de cada una de ella, puesto que la SOD como primera línea de defensa es la encargada de dismutar el anión superóxido, mientras que la CAT, actúa posteriormente catalizando la descomposición del peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno, por tanto como que el producto de una es el sustrato de la otra.

Similares resultados se obtuvieron en un modelo donde se utilizó el precondicionamiento oxidativo con ozono en un modelo de daño renal inducido por cisplatino, donde también se encontraron niveles significativamente reducidos de SRATB. 25

Las dosis de POO que muestran un incremento significativo en la actividad de la CAT es la de 1,35 mg/kg, la cual coincide con la disminución significativa de la actividad de la SOD. Resultados reciente han demostrado que el POO un modelo de daño agudo inducido por

Mg/g de tejido

da 

b 

a 

b c 

9 

 

cisplatino en ratas, fue capaz de proteger la célula renal mediado por el incremento de la actividad de la CAT. 25

En cuanto al comportamiento de la dosis máxima de POO, se obtuvo una actividad de la CAT semejante al del control con I/R, mientras que la actividad de la SOD, alcanzó valores similares a los del control sin tratamiento. De esta forma se demuestra que en la ozonoterapia, el establecimiento de la dosis es un elemento crucial, desde el punto de vista que si el estrés oxidativo generado es muy bajo, no es capaz de activar una respuesta biológica, produciéndose un efecto placebo y si las dosis de ozono es muy elevada, se puede producir un daño oxidativo de tal magnitud que no pueda ser contrarrestado por lo sistemas antioxidantes endógenos. En este sentido es importante señalar que tanto el umbral como el nivel tóxico, oscilan para cada individuo dependiendo del estado redox inicial, la edad, el sexo y la población a la que pertenece el individuo. 26

El análisis anatomopatológico del tejido intestinal, muestra en la figura 6 que en el control con I/R se observa la perdida de la integridad de las vellosidades, con marcada atrofia de la mucosa, focos de necrosis, hiperplasia linfoide y hemorragia del tejido célula adiposo, contrariamente en la Figura 7 se muestra el tejido intestinal de animales que recibieron POO, en el que se observa ligera congestión de la mucosa y la submucosa intestinal, conservación de las células caliciformes y pocos elementos de depleción y de pérdida de integridad de la mucosa y sus vellosidades.

En el análisis histopatológico del tejido intestinal se comprueba que existe una correspondencia entre los cambios morfológicos que ocurren en la mucosa con respecto a la función del órgano durante el proceso de daño por I/R. Los cambios observados en la mucosa de los diferentes grupos se corresponden además con los niveles de SRATB (MDA) encontrados, lo que corrobora el hecho de que la peroxidación lipídica juega un papel importante en la patogénesis de la I/R intestinal.

Estos resultados están en concordancia con los reportes realizados por Calunga 2009 22 en el cual se reporta que el POO revertió el daño estructural del tejido renal inducido por I/R.

Recientes reportes demuestran que el POO tiene efecto protector en el íleo mediante la disminución del daño oxidativo e incrementando el sistema antioxidante en un modelo experimental de daño intestinal inducido por metotrexate. 27

Muy recientemente se demostró que el POO interviene en la síntesis de proteínas, por lo cual fue capaz de preservar la función mitocondrial y el balance redox celular, lo cual contribuyó a la reducción del daño hepático inducido por I/R. 28

Conclusiones

Se concluye que el POO le confiere protección al tejido intestinal sometido a isquemia/reperfusión mediante la conservación de su capacidad funcional e integridad morfológica, determinado por un incremento de la actividad antioxidante enzimática del tejido.

10 

 

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

I-Control

II- I/R

III-Oxigeno

IV- Oz (0

,45 mg)

V-Oz (1,35 mg)

VI-Oz (2

,25 mg)0

5

10

15

20

25

30

SOD (UI/mg prot.)SRATB (mmol/mg prot.)CAT (K15/g tejido)

Figura 3. Comportamiento de parametros bioquímicos de estrés oxidativo (Niveles de SRATB, actividad dela SOD y CAT) en el tejido intestinal de ratas con I/R y precondicionadas con ozono. Letras diferentes: diferencias significativas para p<0.05.

Figura 4. Control con I/R, se aprecia la pérdida de la integridad de las vellosidades, con marcada atrofia de la mucosa, focos de necrosis, hiperplasia linfoide y hemorragia del tejido célulo adiposo.

 

 

CAT y  SRA

TB 

SOD 

11 

 

Figura 5. Grupo de animales precondicionados con la MOO (1,35 mg/kg), sometido a I/R intestinal. Se observa congestión de la mucosa y la submucosa intestinal, conservación de las células caliciformes y pocos elementos de depleción y de pérdida de integridad de la mucosa y sus vellosidades.

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